Vergleich des Gehalts an Phenylethanolglykosiden in zwei verschiedenen Wirts-Cistanches Herba nach unterschiedlichen Trocknungsbehandlungen

Sie verglichen den Inhalt vonPhenylethanolglycosidein zwei verschiedenen WirtenCistanchesHerbanach unterschiedlichTrocknungsbehandlungenGAO Peiwen1, GUO Yehong1 *, ZHAO Fafa1, ZHANG Dan2, ZHANG Fangming11(Agronomy College, Gansu Agricultural University, Lanzhou 730070, China)2(State Key Laboratory of Aridland Crop Science, Lanzhou 730070, China)

AbstraktVergleich des Gehalts an 10-Phenylethanoidglykosiden in verschiedenen verarbeiteten Cistanches Herba von verschiedenen Wirten mittels Ultrahochleistungsflüssigkeitschromatographie-Triple-Quadrupol-Massenspektrometrie (UPLC-QQQ-MS). Die getrockneten Cistanches Herba wurden zerkleinert, durch ein 60--Maschensieb gesiebt und mittels Ultraschall mit 50 % Methanol extrahiert. Die Trennung wurde auf einer Agilent Eclipse Plus C18-Säule (2,1 mm × 150 mm, 1,8 μm) unter Verwendung einer Gradientenelution mit der mobilen Phase A (0,1 % wässrige Ameisensäurelösung) und B (Acetonitril) durchgeführt. Der Nachweis wurde im dynamischen Mehrfachreaktionsüberwachungsmodus unter Verwendung einer Elektrospray-Ionisationsquelle in UPLC-QQQ-MS durchgeführt.

Die Ergebnisse zeigten, dass erhebliche Unterschiede in der Zusammensetzung beobachtet wurden10 PhenylethanoidglykosideunterCistanches Herba werden auf verschiedenen Wirten kultiviertund verschiedenen Trocknungsbehandlungen unterzogen. Gefriergetrocknete Cistanches Herba zeigten bei beiden Wirtspflanzen den höchsten Gehalt dieser Verbindungen, gefolgt von einer Trocknung bei 80 Grad. Obwohl die Gefriertrocknung den maximalen Gehalt an 10 Phenylethanoidglykosiden in Cistanches Herba bewahrte, war das Trocknen bei 80 Grad für die Produktion im großen Maßstab kostengünstiger.

Schlüsselwörter:Ultrahochleistungsflüssigkeitschromatographie-Triple-Quadrupol-Massenspektrometrie; Cistanches Herba;Haloxylon ammodendron (CAMey.) Bunge; Atriplex canescens (Pursh) Nutt; Phenylethanoidglykoside; Trocknungsmethode

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Cistanches Herbaist der trockene, fleischige Stängel mit schuppigen BlätternCistanche deserticola YCMaoderCistanche tubulosa(Schenk) Wight. Es wurde erstmals in „Shen Nongs Materia Medica“ gesehen und zählt zur Spitzenklasse. Es handelt sich um eine wertvolle chinesische Kräutermedizin, die sowohl als Medizin als auch als Nahrungsmittel verwendet werden kann. Da es hauptsächlich in trockenen Gebieten wie der Inneren Mongolei, Xinjiang, Gansu und Ningxia wächst, ist es auch als „Wüstenginseng.“ Cistanche deserticola ist süß, salzig und warm und gelangt in die Nieren- und Dickdarmmeridiane; es hat die Wirkung vonnährendes Nieren-Yang, Auffüllung von Essenz und Blut, Befeuchtung des Darms und Abführmittel usw. und wird häufig zur Behandlung von Krankheiten wie zunzureichendes Nieren-Yang, Mangel an Essenz und Blut, Impotenz und Unfruchtbarkeit, UndSchwäche von Muskeln und Knochen [1 -4].Phenylethanolglycosidesind die Hauptwirkstoffe inCistanche Deserticola, und sie sind auch die am häufigsten berichteten Substanzen in der Forschung zu Cistanche deserticola [5]

Die traditionelle Wirtspflanze vonCistanche deserticolaist Haloxylon ammodendron (CAMey). Bunge aus der Familie der Chenopodiaceae. Allerdings wächst Haloxylon ammodendron langsam und hat einen geringen wirtschaftlichen Wert. Haloxylon ammodendron-Pflanzen, die jünger als 3 Jahre sind, lassen sich nur schwer für den Anbau von Cistanche deserticola verwenden. Um den Widerspruch zwischen Angebot und Nachfrage auf dem Arzneimittelmarkt für Cistanche deserticola zu mildern, erhöhen Sie die Produktion von Cistanche deserticola und erreichen Sie einen großflächigen und standardisierten Anbau von Cistanche deserticola. Wissenschaftliche Forscher haben erfolgreich Atriplex canescens (Pursh) Nutt in Gansu eingeführt, aber ob diese Baumart als neue Wirtspflanze für Cistanche deserticola verwendet werden kann und ob ihre Wachstumsleistung besser ist als die von Haloxylon ammodendron, ist zu einem heißen Thema geworden, das weit verbreitete Besorgnis erregt [6] . Ob Atriplex truncatula Haloxylon ammodendron beim Anbau von Cistanche deserticola vollständig ersetzen kann, muss noch durch breitere, umfassendere und tiefergehende Ergebnisse der Grundlagenforschung gestützt werden. Obwohl in meinem Land umfangreiche Untersuchungen zu Atriplex truncatula unter den Aspekten Einführung, Sämlingsanbau und Komponentenanalyse durchgeführt wurden [7-10], gibt es nur sehr wenige Berichte über die Inokulation von Atriplex truncatula mit Cistanche deserticola. In der Vergangenheit konzentrierte sich die Forschung hauptsächlich auf die Entwicklungs- und Nutzungseigenschaften von Cistanche deserticola [11-14]. Es wurde jedoch nicht über die Forschung zu den Wirkstoffen der beiden Wirtsarten Cistanche deserticola berichtet, insbesondere nicht über die beiden Wirtsarten Cistanche deserticola nach unterschiedlichen Trocknungsprozessen. Es gibt nur wenige Studien zu Unterschieden in der Wirkstoffretention.

Die Ultrahochleistungs-Flüssigkeitschromatographie-Triple-Quadrupol-Massenspektrometrie (UPLC-QQQ-MS) verwendet UPLC als chromatographisches Trennsystem und Triple-Quadrupol (QQQ) als Analysator in Reihe -komponentige komplexe Systeme und kann die komplexen Komponenten der traditionellen chinesischen Medizin schnell und genau quantitativ analysieren [15-16]. In diesem Experiment wurde die UPLC-QQQ-MS-Technologie verwendet, um 10 Phenylethanolglycoside, darunter Echinaceaside, Verbascosid, Isorbascosid und Anthocyanosid A, in den getrockneten Produkten von zwei Wirtsarten von Cistanche deserticola nach verschiedenen Trocknungsbehandlungen quantitativ zu analysieren. Der Vergleich der Gehalte dieser Komponenten in Cistanche deserticola unter verschiedenen Trocknungsmethoden und verschiedenen Wirten liefert eine theoretische Grundlage für die Entwicklung und genaue Verwendung von Phenylethanolglycosiden in Cistanche deserticola.

1 Materialien und Instrumente

Haloxylon ammodendron Cistanches und Cistanches tetrapterans wurden auf der Pflanzbasis Cistanche deserticola im Kreis Jingtai, Provinz Gansu, gesammelt. Die Erntezeit war März 2023. Professor Guo Yehong von der Gansu Agricultural University identifizierte die fleischigen Stängel von Cistanche deserticola mit schuppigen Blättern. Referenzstoffe Echinacea-Seite (C35H46O20, CAS-Nr.: 82854-37-3, Reinheit 98,30 %), Verbascosid (C29H36O15, CAS-Nr.: 61276-17-3, Reinheit 99,35 %), Tuberose A (C37H48O21, CAS-Nr.: 112516-05-9, Reinheit 99,74 %), Isomurascosid (C29H36O15, CAS-Nr.: 61303-13-7, Reinheit 97,77 %), Gardeniposid (C17H24O10, CAS-Nr.: 24512-63-8, Reinheit 99,11 %), 2 '-Acetylverbascosid (C31H38O16, CAS-Nummer: 94492-24-7, Reinheit 97,12 %), Salidrosid

(C14H20O7, CAS-Nr.: 10338-51-9, Reinheit 98,43 %), Mutterkraut (C15H24O9, CAS-Nr.: 52949-83-4, Reinheit 97,64 %), Cistancheside A (C36H48O20, CAS-Nr.: {{15} }, Reinheit 93,24 %), Angiosid B (C31H38O16, CAS-Nummer: 112516-04-8, Reinheit 98,57 %), Chengdu Pufeide Biotechnology Co., Ltd.; Methanol und Acetonitril sind chromatographisch rein, Shanghai Anpu Testing Technology Co., Ltd. Co., Ltd.; Ameisensäure, Tianjin Comeo Chemical Reagent Co., Ltd.; Wasser war hochreines Wasser.

DESKTOP-T2G6S78\6460 Ultrahochleistungs-Flüssigkeitschromatographie-Triple-Quadrupol-Tandem-Massenspektrometer, Agilent Company of the United States; Elektronische Analysenwaage AL104, Mettler-Toledo Instruments Co., Ltd., Schweiz; Gefriertrockner LyoQuest-85, Unternehmen Telstar, Spanien.

2 Experimentelle Methoden

2.1 Vorbereitung von Cistanche deserticola-Proben mit verschiedenen Trocknungsverfahren

Frische Cistanche-Deserticola-Produkte von verschiedenen Wirten in 3 mm dicke Scheiben schneiden und wie folgt verarbeiten.

(1) Sonnentrocknung: Die Scheiben 5 Minuten lang dämpfen und dann zum Trocknen flach an einen sonnigen Ort legen. Überprüfen Sie die Veränderungen im Feuchtigkeitsgehalt. Wenn der Feuchtigkeitsgehalt weniger als 10 % beträgt, bewahren Sie sie zur späteren Verwendung auf.

(2) Trocknen: Dämpfen Sie die Scheiben 5 Minuten lang und legen Sie sie dann zum Trocknen in einen Ofen bei 40, 60 oder 80 Grad, bis der Feuchtigkeitsgehalt weniger als 10 % beträgt, und bewahren Sie sie zur späteren Verwendung auf.

(3) Vakuum-Gefriertrocknung: Legen Sie die Scheiben vor dem Vorkühlen 2 Stunden lang in einen Kühlschrank mit -80 Grad und legen Sie sie dann in einen Vakuum-Gefriertrockner (Vakuum 650 Pa, Gefriertemperatur -55 Grad). , 48 Stunden trocknen lassen und zur späteren Verwendung aufbewahren.

2.2 Chromatographische Bedingungen

Agilent Eclipse Plus C18-Säule (2,1 mm × 15 0 mm, 1,8 μm); Flussrate: 0,3 ml/min; Injektionsvolumen 1 μL; mobile Phase: Phase A ist 0,1 % wässrige Ameisensäurelösung und Phase B ist chromatographisches Acetonitril. Die Elutionsgeschwindigkeit der mobilen Phase A und B beträgt 0~1,5 min, 10 %~15 % B; 1,5–2 Zoll, 15–20 % B; 2–3 Minuten, 20–25 % B; 3–4 Minuten, 25–30 % B; 4–5 Minuten, 30–32 % B; 5–6 Min., 32–34 % B; 6–7 Minuten, 34–36 % B; 7–8 Min., 36 %–38 % B; 8–9 Minuten, 38–40 % B; 9–9,5 Min., 0–45 % B; 9,5–9,6 Minuten, 45–10 % B; 9,6–10 Min., 10 % B .

2.3 Optimierte Massenspektrometriebedingungen

Ionenquellentyp: elektronische Sprühionenquelle; Scan-Methode: Negativ-Ionen-Scanning; Ionenquellentemperatur: 350 Grad; Vernebler: 35 psi; Mehrfachreaktionsüberwachungsmodus und dynamischer Mehrfachreaktionsmodus zur Überwachung und Analyse jeder Verbindung. Die optimierten Bedingungen für die Massenspektrometrie von 10 Substanzen sind in Tabelle 1 aufgeführt.

2.4 Vorbereitung der Referenzlösung und der Standardkurvenlösung

Wiegen Sie die Standardpulver genau abEchinacosid,Verbascosid, Anorthosit A, Isolebascosid, Gardeniposid, 2'-Acetylverbascosid, Salidrosid, Leonin, Distanzen A und Anorthosit B., 50 % Methanol hinzufügen, um eine gemischte Referenzlösung mit 0,2 mg pro 1 ml herzustellen; Mit 50 % Methanol zu einer Standardreihe gemischter Lösungen von 40,96, 102,4, 256, 640, 1 600, 4 000 ug/L verdünnen, „ drücken. Die Bedingungen unter 2,2“ und 2,3“ werden nacheinander injiziert niedrige Konzentration zu hoher Konzentration, und dann wird die quantitative Software (Agilent Mass Hunter) verwendet, um die Detektionsergebnisse unter Verwendung der Standardkurve durch den Ursprung zu verarbeiten. Führen Sie eine lineare Regression mit der Substanzkonzentration X (ng/ml) als Abszisse und dem Ion durch Geben Sie den Antwortwert Y als Ordinate ein und berechnen Sie die Regressionsgleichung und den Korrelationskoeffizienten, wie in Tabelle 2 gezeigt. Innerhalb des Bereichs besteht eine gute lineare Beziehung zum Ionenantwortwert.

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