Bestimmung des Gehalts von fünf Verbindungen im Sperma von Rehmanniae und Bestimmung seines HPLC-Fingerabdrucks

Tabelle 3 Ergebnisse des Wiederherstellungstests (n=6)

2.4 Probenbestimmung

Die sechs gesammelten Rehmannia-Chargen wurden nach der Methode unter „2.2.2“ aufbereitet und gemäß den chromatographischen Bedingungen unter „2.1“ beprobt und bestimmt. Die Ergebnisse der Gehaltsbestimmung sind in Tabelle 4 aufgeführt. Die Ergebnisse zeigen, dass unter den fünf Komponenten der Gehalt an Rehmannia-Glykosid D am höchsten ist und zwischen 0,460 % und {{1} % liegt 0}}.730 %; Der Gehalt an Leonuri-Glykosid liegt an zweiter Stelle und liegt zwischen 0,100 % und 0,270 %, und der Gehalt der beiden Komponenten in Proben aus verschiedenen Produktionsgebieten unterscheidet sich nicht wesentlich. In Probe SX1 sind die Gehalte der anderen vier Komponenten, mit Ausnahme von Echinacosid, deutlich höher als die anderer Probenchargen; Die Gehalte an Echinacosid, Cistancheside A und Verbascosid in Rehmannia glutinosa aus verschiedenen Produktionsgebieten sind sehr unterschiedlich und unregelmäßig.

CISTANCHE-KRAUT MITGUTE QUALITÄTSKONSISTENZ

2.5 Etablierung und Ähnlichkeitsbewertung des HPLC-Fingerprints von Rehmannia glutinosa

Die Chromatogramme und Daten der Mehrkomponentengehaltsbestimmung in Rehmannia glutinosa wurden in die Software „Chinese Herbal Medicine Chromatographic Fingerprint Similarity Evaluation System (2012 Edition)“ importiert und das Chromatogramm der SX1-Testprobe ausgewählt als Referenzspektrum. Die Zeitfensterbreite wurde auf 0.10 min eingestellt und die Medianmethode wurde verwendet, um überlagerte Spektren und Referenzspektren zu erzeugen. Insgesamt wurden 23 gemeinsame Peaks identifiziert (siehe Abbildung 3). Die Ähnlichkeit zwischen den Fingerabdrücken der Rehmannia glutinosa-Probe und der Referenz betrug 0,904–0,950, was darauf hinweist, dass die Proben von Rehmannia glutinosa aus verschiedenen Produktionsgebieten und zwischen rohem Rehmannia glutinosa und gekochtem Rehmannia glutinosa ähnlich waren und eine gute Qualitätskonsistenz aufwiesen.

Tabelle 4 Ergebnisse der Gehaltsbestimmung von 5 Komponenten im Samen Rehmanniae/%

13. Rehmanniosid D; 17. Leonurid; 19. Echinacosid; 20. Castanosid A; 21. Akteosid

Abbildung 3 Überlagerung von HPLC-Chromatogrammen von 6 Chargen Semen Rehmanniae (SX1-SX4, HN1, HN2) und Referenz (R)

3 Diskussion

3.1 Auswahl der chromatographischen Bedingungen

In dieser Studie wurden vier mobile Phasensysteme untersucht: Acetonitril-Wasser, Acetonitril-0,1 % Ameisensäurelösung, Methanol-Wasser und Methanol-0,1 % Ameisensäurelösung. Die Ergebnisse zeigten, dass die fünf Komponenten gute Trenneffekte im Acetonitrilsystem hatten; Verglichen mit dem Acetonitril-Wasser-System der mobilen Phase waren die Peaks von Rehmannia glutinosa und Mutterkrautglykosiden in der mobilen Phase von Acetonitril -0,1 % Ameisensäurelösung schmaler und hatten eine gute Peaksymmetrie. Gleichzeitig variiert der Gehalt der Komponenten aufgrund der unterschiedlichen UV-Absorption der fünf Komponenten stark. Um den Gehalt jeder Komponente genauer zu bestimmen und sicherzustellen, dass die Absorptionsintensität der fünf Komponenten gleichmäßig im selben Chromatogramm verteilt ist, wird die UV-Absorption vonRehmanniaglycosid DMutterkrautglykosid, Echinakosid, Cistancheside A und Verbaskosid wurden analysiert und die Bestimmung mit variabler Wellenlänge ausgewählt, d. h. 0-24 min, das erste abgetrennte Rehmannia-Glykosid wurde bei 203 nm bestimmt und 24-40 min, Das abgetrennte Echinacosid, Cistancheside A und Verbascosid wurden bei 330 nm bestimmt. Darüber hinaus wurden in dieser Studie auch die Extraktionseffekte von Methanol, 70 %iger Methanollösung, 50 %iger Methanollösung und 50 %iger Acetonitrillösung als Extraktionslösungsmittel untersucht. Die Ergebnisse zeigten, dass eine 70-prozentige Methanollösung als Extraktionslösungsmittel die zu testenden Komponenten besser lösen kann und die extrahierte Probe weniger Verunreinigungen aufweist. Daher wählte diese Studie 70 % Methanol als Extraktionslösungsmittel, Acetonitril-0,1 % Ameisensäurelösung als mobiles Phasensystem und verwendete variable Wellenlängen, um den Gehalt der fünf Komponenten in Rehmannia zu bestimmen.

3.2 Analyse der Ergebnisse der Probenbestimmung

Aus den Bestimmungsergebnissen ist ersichtlich, dass nach dem Dämpfen bis auf einen leichten Anstieg des Gehalts an Echinacosid die Gehalte der anderen vier Komponenten deutlich reduziert waren, insbesondere der Gehalt an Leonurisid und Cistancheside A; der Gehalt an Rehmannia-Glycosid D und Cistanchesid A in Rehmannia glutinosa aus demselben Produktionsgebiet war leicht unterschiedlich, und der Gehalt an Leonurisid, Echinacosid und Verbascosid war deutlich unterschiedlich; Der Gehalt an Echinacosid in Rehmannia glutinosa aus dem Produktionsgebiet Henan war deutlich höher als der der Proben aus dem Produktionsgebiet Shanxi, und der Gehalt der anderen vier Komponenten unterschied sich geringfügig. Gleichzeitig betrug laut dem in dieser Studie ermittelten HPLC-Fingerabdruck die Ähnlichkeit zwischen den 6 Chargen von Rehmannia-Proben und dem Kontroll-Fingerabdruck 0,904~0,950, was darauf hinweist, dass es sich um die Hauptchemikalie handelt Die Bestandteile der 6 Chargen von Rehmannia-Proben vor und nach der Verarbeitung waren sehr konsistent.

Zusammenfassend lässt sich sagen, dass die in dieser Studie etablierte Methode zur Inhaltsbestimmung und der HPLC-Fingerabdruck genau, zuverlässig und von guter Spezifität sind. Sie können zur Charakterisierung der Veränderungen der Bestandteile und des Verarbeitungsgrads von Rehmannia glutinosa vor und nach der Verarbeitung verwendet werden und bieten technische Unterstützung für die Qualitätskontrolle von Rehmannia glutinosa. Diese Studie weist jedoch die Nachteile kleiner Probenchargen und einer unvollständigen Abdeckung der Produktionsbereiche auf, was eine weitere Analyse und Überprüfung erfordert.

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