Kontakt: Audrey Hu WhatsApp/hp: 0086 13880143964 E-Mail:audrey.hu@wecistanche.com

Yu Lixin Chen Xueqiang Wu Qunfeng Dong Weiqin Guo Songhua Yu Jian Feng Wei Yang Lei Fu Yifeng Li Junjie Luo Cheng

1 Das 98. Krankenhaus der Chinesischen Volksbefreiungsarmee, Huzhou, Zhejiang 313000

2 Zhejiang-Universität für Traditionelle Chinesische Medizin, Hangzhou, Zhejiang 310053

3 Fuyang Traditional Chinese Medicine Orthopedic Hospital, Stadt Hangzhou, Provinz Zhejiang, Hangzhou 311400, Zhejiang, China

Abstrakt

Ziel: Um die Wirkung von zu beobachtenCistancheWasserextraktüber die Heilung vonOsteoporoseFrakturen bei Ratten und deren Mechanismus zu erforschen. Methoden: Weibliche SD-Ratten mit SPF-Grad wurden nach dem Zufallsprinzip in Kontrollgruppe, Modellgruppe und Behandlungsgruppe eingeteilt und nach verwandten Methoden modelliert. 24 Stunden nach der Frakturmodellierung erhielten die Kontrollgruppe und die Modellgruppe eine Sondenernährung mit normaler Kochsalzlösung, und die Behandlungsgruppe erhielt eine SondenernährungCistancheWasserextrakt einmal täglich. Nach 2 Wochen und 6 Wochen Intervention wurde Blut aus der abdominalen Aorta entnommen, um Interleukine nachzuweisen. TP (IL-1 B) und Transforming Growth Factor-B l (TGF-8 1)-Spiegel, Frakturproben gleichzeitig sammeln, Mikro-CT-Scan nach Fixierung durchführen, R0 messen I Kallus-Knochen-Volumenfraktion (BV/TV) und andere verwandte Parameter Nach der Entkalkung, Dehydratisierung und Einbettung wurde es zur Verwendung zu Wachsblöcken verarbeitet. Ergebnisse: 6 Wochen nach Etablierung des Osteoporose-Modells war die Knochenmineraldichte der Ratten in der Modellgruppe und der Behandlungsgruppe niedriger als die der Kontrollgruppe (P<0.05), but="" there="" is="" no="" significant="" difference="" between="" the="" treatment="" group="" and="" the="" model="" group.="" although="" the="" bone="" density="" of="" the="" treatment="" group="" is="" still="" lower="" than="" that="" of="" the="" control="" group="" after="" 2="" weeks="" and="" 6="" weeks="" of="" intervention,="" it="" is="" significantly="" higher="" than="" that="" of="" the="" model="" group=""><0.05). micro-ct="" scan="" shows="" the="" treatment="" group="" bv/tv,="" tb.="" sp,="" tb.="" n,="" tb.="" th,="" smi="" was="" better="" than="" the="" model="" group="" at="" 2="" and="" 6="" weeks="" after="" the="" intervention,="" and="" the="" bv/tv,="" tb.="" sp,="" smi="" parameters="" of="" the="" control="" group="" and="" the="" treatment="" group="" were="" not="" different="" from="" those="" of="" the="" treatment="" group.="" obviously,="" the="" micro-ct="" parameters="" of="" the="" model="" group="" at="" 2-time="" points="" were="" inferior="" to="" the="" control="" group.="" after="" 2="" weeks="" and="" 6="" weeks="" of="" intervention,="" comparing="" the="" serum="" ilt="" b="" and="" tgf-p="" 1="" levels="" of="" the="" 3="" groups,="" it="" was="" found="" that="" the="" il-1="" p="" levels="" of="" the="" treatment="" group="" were="" lower="" than="" those="" of="" the="" other="" two="" groups="" at="" 2="" weeks.="" at="" 6="" weeks,="" the="" il-1="" p="" levels="" of="" the="" treatment="" group="" were="" higher="" than="" those="" of="" the="" other="" two="" groups.="" the="" control="" group,="" but="" still="" significantly="" lower="" than="" the="" model="" group=""><0.05); in="" terms="" of="" tgf-b="" 1="" level,="" the="" treatment="" group="" was="" higher="" than="" the="" model="" group="" and="" the="" control="" group="" at="" 2="" and="" 6="" weeks,="" and="" there="" was="" no="" statistical="" difference="" between="" the="" control="" group="" and="" the="" control="" group.="" significance.="" conclusion:="" according="" to="" the="" analysis="" of="" bone="" mineral="" density,="" micro-ct="" scan="" parameters,="" and="" serum="" il-1="" b="" and="" tgf-b="" 1="" levels,="" it="" is="" found="" that="" the="" aqueous="" extract="" of="">Cistanchekann die Heilung fördernOsteoporoseFrakturen, und sein Mechanismus kann mit seiner Hemmung zusammenhängenOsteoporoseFrakturen. Nach dem Rattenserum IL-1 B und fördern die Sekretion von TGF-8 1, was die Osteoporose verbessern und die Frakturheilung fördern kann.

Schlüsselwörter: osteoporotische Fraktur, Cistanche, Frakturheilung, Ratte

Osteoporose ist eine Krankheit, bei der die Knochendichte abnimmt, die feine Struktur des Knochengewebes zerstört und die Knochenbrüchigkeit erhöht wird. Patienten können im täglichen Leben unter leichter äußerer Krafteinwirkung Frakturen verursachen. Es ist eine häufige klinische Erkrankung und eine häufig auftretende Erkrankung. Darüber hinaus handelt es sich bei dieser Art von Fraktur hauptsächlich um ältere Patienten, die oft mit anderen Krankheiten assoziiert sind, und die meisten Frakturen sind zertrümmert, mit schlechter Stabilität, und manchmal tritt eine langsame oder nicht heilende Frakturheilung auf, und es gibt eine hohe Invaliditäts- und Letalitätsrate. Gegenwärtig erfolgt die Behandlung hauptsächlich durch Operation, manuelle Wiederherstellung und Anti-Osteoporose-Behandlung. Es fehlt an zielgerichteten Behandlungsmedikamenten für Patienten mitOsteoporoseFrakturen. Traditionelle Chinesische Medizin hat eine lange Tradition in der Behandlung von Osteoporose und hat eine positive Wirkung. Viele traditionelle chinesische Arzneimittel verbessern nachweislich die Knochen. Armut kann auch die Frakturheilung fördern. Rongrong wird allgemein als repräsentatives Medikament zur Ernährung des Nieren-Yangs verwendet und hat die Wirkung, Leber und Niere zu nähren. Die traditionelle chinesische Medizin glaubt, dass die Niere den Knochen regiert, und auch die Behandlung von Frakturen ist untrennbar mit der Niere und der Essenz verbunden. Die moderne Pharmakologie hat herausgefunden, dass Fleischasche auch eine gewisse östrogene Wirkung hat. Diese Studie beabsichtigt, Knochendichtemessung, Mikro-CT und Serum-Interleukin-13 (IL-10), Beobachtung des transformierenden Wachstumsfaktor-P KTGF-P 1)-Spiegels und Wasserextrakt aus Fleischhernienpaste zu verwenden Heilung vonOsteoporoseFrakturen bei Ratten

Cistanche

1Materialien und Methoden

1.1 Versuchstiere und Reagenzienausrüstung: 52 weibliche SPF-SD-Ratten mit einem Gewicht von 210~250g werden im Tierversuchszentrum der Zhejiang-Universität für Traditionelle Chinesische Medizin aufgezogen. Komplexes Jod, Hangzhou Lonzo Medical Disinfectant Co., Ltd., Chargennummer 20160720; Penicillin, North China Pharmaceutical Co., Ltd., Chargennummer F3117217; IL-18-Kit (Chargennummer: 20160715), TGF-8 1-Kit (Chargennummer: 20160722); Dual-Energy-Röntgen-Knochendichtescanner, 0STE0C0RE2; Mikro-CT, Skyscan1176O

1.2 Extraktion vonCistancheWasserextrakt: Boden einweichenZistanche(Zhejiang University of Traditional Chinese Medicine Pharmaceutical Factory) 10 mal hochreines Wasser für 0,5 Stunden, Bratpfannensud für 1,5 Stunden, Extraktion 2 Mal wiederholen und die gemischte medizinische Flüssigkeit Rotationsdampfer auf eine Konzentration von 1,5 g konzentrieren /ml und zur späteren Verwendung im Kühlschrank bei 4 Grad aufbewahren.

1.3 Modellierungsvorbereitung: Die Punkte sind wie folgt.

1.3. 1 Osteoporose-Modell: Die Ratten wurden vor der Modellierung 1 Woche lang adaptiv aufgezogen und zufällig in Kontrollgruppe, Modellgruppe und Behandlungsgruppe aufgeteilt, mit 16 Ratten, 18 Ratten bzw. 18 Ratten, und jede Gruppe basierte auf dem Zeitpunkt von 2 Wochen und 6 Wochen. Jeder wurde in zwei Gruppen eingeteilt. Sowohl die Behandlungsgruppe als auch die Modellgruppe wurden mit 1 Prozent Pentobarbital-Natrium (0,4 ml/100 g) anästhesiert, die Haut wurde anästhesiert, desinfiziert, abgedeckt und die Haut wurde geschnitten. Die bilateralen Eierstöcke der Ratte wurden entfernt. Die Kontrollgruppe hatte nur einen Einschnitt. Unterlassen Sie

Entfernung der Eierstöcke

1.3. 2 Frakturmodell: 6 Wochen nach Anfertigung des Osteoporosemodells wird das Frakturmodell angefertigt. Nachdem die Ratten in jeder Gruppe anästhesiert wurden, wird die Knochenmineraldichte des mittleren Oberschenkelknochens gemessen. , Inzision, ein Modell der Querfraktur des mittleren Femurs anfertigen, mit 1 mm Kirschnerdraht fixieren, die Haut der Inzision sterilisieren und vernähen

1.4 Medikamentöse Intervention: Nach der Modellierung wurde eine Röntgendetektion des Femurs durchgeführt, Ratten, bei denen die Modellvorbereitung fehlschlug, wurden eliminiert und 80,000 Einheiten Penicillin wurden nach der Modellierung intramuskulär injiziert, um eine Infektion zu verhindern. 24 Stunden nach der Operation wurde der Behandlungsgruppe der Wasserextrakt aus Fleischbruchpaste (Konzentration 1,5 g/ml, lg/kg, einmal täglich) verabreicht. Der Kontrollgruppe und der Modellgruppe wurde das gleiche Volumen an normaler Kochsalzlösung verabreicht.

1.5 Probenentnahme: Rattenproben wurden 2 und 6 Wochen nach dem Eingriff gesammelt. Nach einer 1-prozentigen Pentobarbital-Natrium-Anästhesie wurden 5-10 ml Blut aus der abdominalen Aorta entnommen, um Serum herzustellen, und in einem -20 B-Kühlschrank gelagert. Ersatzteil. Dann wurden die Ratten getötet und die Femurfrakturproben wurden gesammelt und für 72 Stunden in 10 % neutrales Formaldehyd gelegt.

1.6 Testindikatoren: Die Punkte sind wie folgt.

1.6. 1 Knochenmineraldichte: Alle Ratten nach dem Osteoporosemodell wurden vor dem Frakturmodell anästhesiert, und dann wurde die Knochenmineraldichte des mittleren Femurs gemessen. Die drei Rattengruppen erhielten Proben nach 2 und 6 Wochen Intervention, und die Proben wurden für 72 Stunden fixiert und dann wurde die Knochendichte erneut gemessen.

1.6. 2 Mikro-CT: Mikro-CT-Scan wird durchgeführt, nachdem die Probe 72 Stunden lang fixiert wurde, mit 200 Bildern über und unter dem Frakturende als interessierender Bereich (R01), Scanwinkel 360 Grad, Strom 555 uA, Spannung 42 kV, Filter Al 0,2 mm, Auflösung 8,73 um, nach Abschluss der dreidimensionalen Bildrekonstruktion und Analyse des Kallus. Die Detektionsparameter sind wie folgt: Knochenvolumenfraktion BV/TV, Bone Trabecular Model Factor (Tb. Pf); struktureller Modellindex (SMI) usw."

1.6.3 Bestimmung von Serum-IL-1P und TGF-P1: Tauen Sie das Rattenserum aus dem Kühlschrank bei -20 Grad auf und führen Sie den Nachweis Schritt für Schritt gemäß der IL-13 durch. und TGF" 1 Bausatzanleitung.

1.7 Statistische Methoden: Verwenden Sie zur Verarbeitung die statistische Analysesoftware SPSS.19. Die Versuchsdaten sind als Mittelwert ± Standardabweichung (G ± s) und Knochenmineraldichte der drei Rattengruppen ausgedrückt. Mikro-CT-Parameter JL-1 P JGF- P 1-Pegel werden durch Einweg-Varianzanalyse gemittelt, und es werden paarweise Vergleiche zwischen Gruppen verwendet Inspektion, die Inspektionsstufe ist P<0.>

2 Ergebnisse

2.1 Knochendichte der drei Gruppen: siehe Tabelle 1.

Tabelle 1 Ergebnisse der Knochenmineraldichte im mittleren Femur jeder Rattengruppe (x ± s, g/cm²)

Hinweis: Im Vergleich zur Modellgruppe *P<0.05; compared="" with="" the="" control="" group.△=""><>

2.2 Zweidimensionaler Mikro-CT-Querschnitt: Der sagittale zweidimensionale Querschnitt wählt die Bilder der Längsachse des Femurs zu jedem Zeitpunkt in jeder Gruppe aus (siehe Abbildung 1), und der horizontale zweidimensionale Querschnitt Schnitt wählt das 100. Bild unter der Frakturlinie zum Vergleich (Abbildung 2) ), ist aus der Abbildung ersichtlich, dass der Kallus jeder Gruppe im Laufe der Zeit allmählich zunahm, aber 6 Wochen nach der Fraktur in unterschiedlichem Maße plastisch war; Gleichzeitig ist zu sehen, dass der Kallus in der Kontrollgruppe groß war und die Kallusrinde dick war und nach 6 Wochen über die Frakturlinie kroch, während der Kallus in der Modellgruppe weniger Knochen im Kallus aufwies 2 Wochen, und die Kallusrinde war nach 6 Wochen locker. Obwohl das Kallusvolumen in der Behandlungsgruppe nach 2 Wochen nicht groß war, war die Knochenmasse im Kallus größer als in der Modellgruppe. Der Kallus war nach 6 Wochen besser geformt. Und die Frakturlinie ist nicht offensichtlich.

Kontrollgruppe Modellgruppe Behandlungsgruppe

Abbildung 1 Der sagittale Querschnitt des mittleren Femurs jeder Gruppe

Abbildung 2 Horizontalschnitt des mittleren Femurs jeder Gruppe

2.3 Dreidimensionale Mikro-CT-Rekonstruktion: Die dreidimensionale Rekonstruktion des Kallus am gebrochenen Ende des Femurs ist in Abbildung 3 dargestellt. Aus Abbildung 3 ist ersichtlich, dass sich der Kallus entlang des Periosts an beiden Enden der Fraktur gebildet hat Linie 2 Wochen nach der Fraktur in jeder Gruppe waren die Frakturstränge in jeder Gruppe noch klar, insbesondere in der Modellgruppe und der Behandlungsgruppe, während der Kallus in der Kontrollgruppe 6 Wochen nach der Fraktur dick und dick war, meistens mit Platten . Die trabekulären Knochen waren vorherrschend und die Frakturlinie verschwand, während die Modellgruppe aus losen Knochen bestand und die Frakturlinie verschwommen war, aber die Behandlungsgruppe hatte mehr Kallusknochen, regelmäßige und dicke trabekuläre Knochen und die Frakturlinie war nicht offensichtlich.

Abbildung 3 Dreidimensionale Rekonstruktion des R0I-Kallus am gebrochenen Ende

2.4 Mikro-CT-Parameter: Verwenden Sie eine Software, um den Kallus am gebrochenen Ende zu analysieren. Siehe Tabelle 2 für zugehörige Parameter.

Tabelle 2 Vergleich der Mikro-CT-Parameter jeder Gruppe (x±s)

Kontrollgruppe Modellgruppe Behandlungsgruppe

Hinweis: Im Vergleich zur Modellgruppe *P<0. 05;="" compared="" with="" the="" control="" group.=""><0.>

2.5 Serum-IL-1 P .TGF-P 1 -Spiegel: siehe Tabelle 3.

Tabelle 3 Vergleich der IL-1 P JGF-0 1-Spiegel in jeder Gruppe G±s, n=8)

Hinweis: Im Vergleich zur Modellgruppe *P<0.05; compared="" with="" the="" control="" group,=""><0.05 0="" 3="">

In den letzten Jahren haben sich die traditionellen chinesischen Arzneimittel Yinyangdian, Drynaria Fortune und ihre Verbindungen (Qing-Pillen, Liuwei Dihuang-Pillen usw.) in der klinischen Praxis als signifikant zur Verbesserung der Osteoporose erwiesen. Diese Art der chinesischen Medizin und Verbindungen werden hauptsächlich zur Ernährung von Leber und Niere verwendet. Dies steht im Einklang mit dem Prinzip, die Niere zu ernähren und die Muskeln im mittleren und späten Stadium der Fraktur zu erneuern. "Zehn Tage. Die fleischige Gliederpaste wurde erstmals in "Shen Nong's Materia Medica" veröffentlicht. , Warm in der Natur, hat die Funktionen, die Niere zu nähren und Yang zu stärken, Essenz und Knochenmark wieder aufzufüllen, Blut zu nähren und Trockenheit zu befeuchten und angenehme Farbe und Verlängerung des Lebens.

In dieser Studie war die Knochenmineraldichte der Behandlungsgruppe nach 2 und 6 Wochen Intervention höher als die der Modellgruppe (P<0.05). micro-ct="" scan="" bv/tv="" parameters="" showed="" the="" results="" and="" bone="" mineral="" density="" of="" the="" treatment="" group="" at="" two="" time="" points="" after="" the="" intervention="" the="" measurement="" results="" are="" consistent,="" and="" bv/tv="" is="" an="" important="" indicator="" for="" the="" evaluation="" of="">OsteoporoseFrakturheilung. Sie spiegelt direkt den Knochengehalt des Kallus wider. Dies zeigt, dass Rouganrong die Wirkung haben kann, die Osteogenese zu fördern. Die Analyse kann in der Fleischbruchpaste wirksam sein. Die Inhaltsstoffe haben die Wirkung, BMP2 hochzuregulieren, und BMP2 ist eines der Mitglieder der TGF-8-Familie. Und dieses Ergebnis wird auch durch andere Parameter des Mikro-CT-Scans bestätigt (Tb. Spjb. N, Tb. Th. SMI). Tb. Sp und SMI spiegeln die biomechanischen Eigenschaften von Kallus wider, und die Werte in der Behandlungsgruppe sind signifikant besser als in der Modellgruppe, dies deutet auch weiter darauf hin, dass Roudongrong die Wirkung hat, den Knochenverlust zu verbessern, die Osteogenese zu fördern und die Frakturheilung zu beschleunigen.

Hinsichtlich der IL-1B- und JGF-P 1 -Spiegel im Serum wurde nach 2 Wochen und 6 Wochen Intervention festgestellt, dass die IL-1P-Spiegel der Behandlungsgruppe niedriger waren als die der anderen beiden Gruppen nach 2 Wochen und nach 6 Wochen. Obwohl der IL-1 B-Spiegel der Behandlungsgruppe höher war als der der Kontrollgruppe, immer noch signifikant niedriger als der der Modellgruppe (『<0.05); while="" the="" tgf-p="" 1="" level="" of="" the="" treatment="" group="" was="" higher="" than="" the="" model="" group="" and="" the="" control="" group="" at="" 2="" and="" 6="" weeks,="" and="" there="" was="" no="" statistically="" significant="" difference="" from="" the="" control="" group="" the="" level="" of="" il-1="" p="" directly="" affects="" the="" differentiation="" and="" activity="" of="" osteoclasts.="" an="" increase="" in="" its="" level="" will="" promote="" bone="" resorption="" and="" inhibit="" the="" proliferation="" and="" differentiation="" of="" osteoblasts.="" jhtgf-p="" 1="" is="" closely="" related="" to="" the="" proliferation,="" differentiation,="" and="" migration="" of="" osteoclasts.="" it="" has="" the="" effect="" of="" promoting="" cartilage="" and="" bone="" callus="" formation="" ⑵="" and="" accelerating="" the="" shaping="" of="" bone="" callus.="" this="" suggests="" that="">CistanchekannKnochenabbau verbessern, fördern die Osteogenese und beschleunigen die Frakturheilung. Es kann den Spiegel von IL-13 reduzierenOsteoporoseFrakturen Ratten und hemmen Frakturen. Knochenzellaktivität wird erreicht; darüber hinaus kann es auch damit zusammenhängen, dassCistanchekann den TGF-B 1 -Spiegel in gebrochenen Ratten erhöhen, die osteogene Differenzierung und Kallusreifung und -formung fördern.

Zusammenfassend wurde basierend auf der Analyse der Knochenmineraldichte, Mikro-CT-Scan-Parametern und Serum-IL-1 P-, TGF"1-Spiegeln festgestellt, dass der wässrige Extrakt vonCistanchekannKnochenabbau verbessernundfördern die Heilung osteoporotischer Frakturen. Der Mechanismus kann damit zusammenhängen. Es kann bei Ratten die Sekretion von Serum-ILT 8 hemmen und die Sekretion von TGF-B 1 fördernOsteoporoseFrakturen, wodurch die Osteoporose verbessert und die Frakturheilung gefördert wird.

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