Auswirkungen von Cistanche Deserticola Deserticola und Kaempferol auf die Entwicklung von Granulosazellen in voraggregierten Hühnerfollikeln

Abstrakt:Um die Auswirkungen von Cistanche deserticola und Kaempferol auf die Follikelentwicklung von Hühnern zu untersuchen, analysierte das Experiment die Auswirkungen verschiedener Konzentrationen von Cistanche deserticola und Kaempferol auf die Aktivität vorklassifizierter Granulosazellen von Hühnern mithilfe der MTT-Methode und ermittelte die optimale Konzentration. Quantitative Echtzeit-Fluoreszenz-PCR wurde verwendet, um die Auswirkungen von Cistanche deserticola und Kaempferol auf das Proliferationszellkernantigen (PCNA), den Follikel-stimulierenden Hormonrezeptor (FSHR) und den Östrogenrezeptor von vorklassifizierten Granulosazellen des Huhns (ER) nachzuweisen Einfluss der mRNA-Expression; Die Auswirkungen von Cistanche deserticola und Kaempferol auf die Follikelentwicklung der Eierstöcke wurden durch In-vitro-Kultur von Eierstockgewebe analysiert. Die Ergebnisse zeigten, dass sowohl Cistanche deserticola als auch Kaempferol in einer Konzentration von 1 × At 10-4 mol/L , kann die Proliferation von Granulosazellen erheblich fördern und gleichzeitig die mRNA-Expression von PCNA, FSHR und ER in Granulosazellen fördern (P<0.01); Cistanche deserticola and Kaempferol significantly increased the number of follicles in ovarian tissue, and granulosa cells proliferated from monolayer to multilayer. Studies have shown that Cistanche deserticola and Kaempferol can promote the proliferation of aggregate granulosa cells, and promote FSHR and ER α MRNA expression promoting the development of pre-grade follicles towards grade follicles.

Schlüsselwörter: Cistanche deserticola; Kämpferol; Huhn; Körnige Zellen vor der Sorte; Eierstockgewebe

Chinesische Kräuter-Cistanche

Bei großen Legehennenbetrieben wirkt sich die Höhe der Eierproduktionsrate auf den wirtschaftlichen Nutzen aus, und die Entwicklung der Eierstockfollikel wirkt sich direkt auf die Produktionsleistung der Legehennen aus. Follikel werden entsprechend ihrem Funktionsstatus in drei Stadien eingeteilt: Primärfollikel, Sekundärfollikel und reife Follikel [1]. Jeden Tag wird ein Follikel ausgewählt, um sich bis zur Reife zu entwickeln, und die Eizelle wird in den Eileiter ausgestoßen, wobei sie durch den Trichter, die Vergrößerung, den Isthmus, die Gebärmutter und die Vagina gelangt und eine eiähnliche Struktur bildet [2-3]. Die Entstehung primitiver Follikel hängt mit der Entwicklung follikulärer Granulosazellen zusammen. Das follikelstimulierende Hormon (FSH) bindet an den follikelstimulierenden Hormonrezeptor (FSHR) auf Granulosazellen, induziert die Bildung des luteinisierenden Hormonrezeptors (LHR) und stimuliert die Synthese von Steroidhormonen [4-6]. FSH und luteinisierendes Hormon (LH) wirken synergistisch auf Granulosazellen, um die Follikelentwicklung und -reifung zu fördern und sind an der Auswahl dominanter Follikel beteiligt. Untersuchungen haben ergeben, dass Urfollikel, denen Granulosazellen fehlen, zwar aktiviert wurden, letztlich aber alle eine Atresie entwickeln [7]. Während der Follikelentwicklung kann Östrogen die Proliferation von Granulosazellen der Eierstöcke fördern, während es mit FSH und LH zusammenarbeitet, um die Proliferation und Differenzierung von Granulosazellen der Eierstöcke zu fördern. Wenn der Östrogengehalt im Plasma ansteigt, wird er über das periphere Kreislaufsystem negativ zum Hypothalamus zurückgeführt und hemmt so die Sekretion des Gonadotropin-Releasing-Hormons (GnRH) aus dem Hypothalamus. GnRH kann die Adenohypophyse dazu anregen, FSH und LH zu synthetisieren und abzusondern, um die Entwicklung der Eierstockfollikel zu fördern. Wenn die GnRH-Sekretion gering ist, kann sie die Sekretion von FSH und LH hemmen, was letztendlich zur Hemmung der Follikelentwicklung führt [8-9].

Frühere Studien ergaben, dass Cistanche deserticola und Cuscuta chinensis nach der Genesung eine gute Reparaturwirkung auf atrophische und beschädigte Eileiter hatten und die Legerate von Legehennen in niedrigen Legehennen verbessern konnten [10]. In der Tierproduktion kann der Einsatz von Flavonoiden die Produktionsleistung der Tiere erheblich verbessern, die Widerstandsfähigkeit der Tiere gegen Krankheiten verbessern und die Immunfunktion der Tiere verbessern.

Chinesische Arzneimittel wie Ginseng, Cistanche deserticola und Astragalus

Die gesamten Flavonoide von Cistanche deserticola können die Proliferation von follikulären Granulosazellen der Vorstufe und Klasse von Hühnern in vitro, das Transkriptionsniveau des steroidogenen schnellen regulatorischen Proteins (StAR), der mRNA des Cholesterin-Seitenkettenspaltungsenzyms (CYP11A1) und die Sekretion erheblich fördern von Progesteron. Der repräsentative Bestandteil der gesamten Flavonoide von Cistanche deserticola ist Cistanche deserticola. Sein Molekulargewicht ist gering und es hat den Vorteil, dass es die Blut-Hirn-Schranke passieren kann. Gleichzeitig hat es entzündungshemmende, tumorhemmende und östrogenähnliche Wirkungen [11]. Der wichtigste chemische Bestandteil von Cuscuta chinensis sind die gesamten Flavonoide von Cuscuta chinensis. Derzeit wurde aus Cuscuta chinensis eine Vielzahl von Flavonoiden isoliert, hauptsächlich Quercetin und Kaempferol, die eine hohe antioxidative Aktivität aufweisen.

Die Anwendung von Dodder-Samen-Flavonoidextrakt bei weiblichen Ratten zeigt eine östrogene Aktivität, die einen gewissen Effekt auf die Förderung der Verbesserung der ovariellen hCG/LH-Rezeptorfunktion hat; Es hat eine gonadotrope Wirkung auf junge Mäuse und kann die Entwicklung ihres Fortpflanzungssystems fördern [12-14].

In diesem Experiment haben wir follikuläre Granulosazellen von Hühnern ausgewählt und die fördernde Wirkung von Cistanche deserticola und Kaempferol auf die Proliferation follikulärer Granulosazellen von Hühnern und die damit verbundene Rezeptorexpression durch die Wirkung von Cistanche deserticola und Kaempferol auf die Follikelentwicklung von Hühnern untersucht. Bereitstellung einer theoretischen Referenz für die Forschung und Entwicklung sicherer, wirksamer und rückstandsfreier Futtermittelzusatzstoffe zur Verbesserung der Produktionsleistung von Legehennen.

Wirkung von Cistanche-Tonisierender Niere

1 Material und Methoden

1.1 Testmaterialien

Cistanche deserticola (Reinheit größer oder gleich 98 Prozent) wurde von Shanghai Jizhi Biochemical Technology Co., Ltd. gekauft; Kaempferol (Reinheit größer oder gleich 98 Prozent) wurde von Shanghai Aladdin Biochemical Technology Co., Ltd. gekauft.

1.2 Hauptreagenzien und Instrumente

Hauptreagenzien: Typ-II-Kollagenase und DMEM wurden von Thermo Fisher Technology (China) Co., Ltd. bezogen; DMSO wurde von Beijing Solebao Technology Co., Ltd. gekauft; Das M5 Super qPCR RT-Kit mit gDNA-Entfernungs-Reverse-Transkriptions-Kit wurde von Beijing Jumei Biotechnology Co., Ltd. gekauft. Hauptgerät: BCM-1300Eine Reinigungswerkbank, gekauft von Shanghai Boxun Industrial Co., Ltd. Medical Equipment Factory; Die Hochgeschwindigkeits-Gefrierzentrifuge AXTGL20M wurde von Hunan Hexi Instrument Equipment Co., Ltd. gekauft; Der Konstanttemperatur-Inkubator Heracell 150i GP wurde von Bingshan Songyang Biotechnology (Dalian) Co., Ltd. gekauft; LightCycle ® Das quantitative Fluoreszenz-PCR-Gerät vom Typ 96 und das Enzymmarkierungsgerät vom Typ DR-200BS wurden beide von Bole Life Medical Products (Shanghai) Co., Ltd. gekauft.

1.3 Isolierung und Extraktion von Granulosazellen aus Follikeln vor der Hühnerklassifizierung

Dreißig 150-Tage alte, gesunde Hailan-Braun-Legehennen (zur Verfügung gestellt von der Hebei Baoding Dingnong Company) wurden ausgewählt, durch Aderlass aus der Halsschlagader getötet und ihre Eierstöcke wurden aseptisch entnommen (In-vivo-Tierversuche erfolgten nach den von genehmigten Richtlinien). das Tierethikkomitee der Hebei Agricultural University). Vorgradige Follikel können in kleine weiße Follikel (SWF,<2 mm), large white follicles (LWF, 3-5 mm), small yellow follicles (SYF, 6-8 mm), and large yellow follicles (LYF, 9-12 mm). Collect granulosa cells from pre-graded follicles with a diameter of 6-8 mm and prior stages. The grading of follicles (see Figure 1). 

Hinweis: SWF steht für kleine weiße Follikel, LWF steht für große weiße Follikel, SYF steht für kleine gelbe Follikel, LYF steht für große gelbe Follikel und F1, F2, F3, F4 und F5 stehen für fünf reife Follikel.

Die gesammelten Follikel wurden dreimal mit 75-prozentigem Alkohol und schließlich einmal mit PBS gewaschen. Die sterile Nadel wurde verwendet, um die Dotterflüssigkeit in PBS mit 3 Prozent Penicillin und Streptomycin freizusetzen, die Membranzellschicht zu entfernen und die körnige Zellschicht abzutrennen. 15 ml EP-Röhrchen wurden entnommen, um die geschnittene Granulosazellschicht der Follikel hinzuzufügen, und 4 ml 0,1 Prozent Typ-II-Kollagenase wurden hinzugefügt. Es wurde 3 Minuten lang bei 37 Grad in einem Shaker geschüttelt. Nachdem die Oszillation abgeschlossen ist, fügen Sie eine gleiche Menge Kulturlösung mit 0,5 Prozent FBS hinzu, um die Verdauung zu beenden. Filtern Sie mit einem 200-Mesh-Sieb bzw. einem 400-Mesh-Sieb. Zentrifugieren Sie das Filtrat 5 Minuten lang bei Raumtemperatur mit 1200 U/min und wiederholen Sie die Zentrifugation zweimal. Den Überstand verwerfen, das Kulturmedium hinzufügen, gleichmäßig ausblasen und absaugen, die Zellsuspension auf 5 × 106 Stück/ml verdünnen und gleichmäßig in eine Petrischale mit einem Durchmesser von 100 mm geben und bei 37 Grad und 5 Prozent CO2 kultivieren .

1.4 Auswirkungen von Cistanche deserticola und Kaempferol auf die Aktivität von Granulosazellen

Körnerzellen wurden routinemäßig in einem DMEM-Medium kultiviert, das 10 Prozent fötales Rinderserum enthielt. Zellen in der logarithmischen Wachstumsphase wurden entnommen und mit 2,5 g/L Trypsin verdaut. Die Zellen wurden gleichmäßig in Platten mit 96 Vertiefungen verteilt. Jede Platte wurde in 10 Gruppen mit 6 wiederholten Löchern in jeder Gruppe unterteilt. Geben Sie 200 µL PBS in die Löcher rund um die Kulturplatte und dienen als feuchtigkeitsspendende Pore. Die Konzentration von Cistanche deserticola ist auf 1 × 10-4 mol/L, 1 × 10-5 mol/L, 1 × 10-6 mol/L, 1 × 10-7 mol/L eingestellt. L, 5 × 10-8 mol/L, 1 × 10-8 mol/L, 5 × 10-9 mol/L, 1 × 10-9 mol/L, 1 × {{ 24}} mol/L. Legen Sie eine leere Kontrollgruppe fest. Nach 24-stündiger Co-Kultivierung der Zellen mit Cistanche deserticola fügen Sie 10 Prozent μL MTT zu jeder Vertiefung hinzu. Nach weiterer Kultivierung für 4 Stunden geben Sie 150 μL DMSO zu jeder Vertiefung hinzu und oszillieren 3 Minuten lang darin ein Schüttler mit konstanter Temperatur bei 37 Grad. Messen Sie die Absorption bei 450 nm. Das Experiment wurde dreimal wiederholt und der Prozess des Screenings der optimalen sicheren Kaempferol-Dosis für Granulosazellen war der gleiche wie oben.

Wüstenlebende Cistanche-Tonisierende Niere

1.5 Wirkungen von Cistanche deserticola und Kaempferol auf das proliferierende Zellkernantigen, den follikelstimulierenden Hormonrezeptor und den Östrogenrezeptor in Granulosazellen

Der Effekt der mRNA-Expression wurde in Granulosazellen der logarithmischen Wachstumsphase beobachtet, die in drei Kulturschalen mit einer Zelldichte von 5 × 106 Stück/ml inokuliert wurden. Petrischalen wurden in eine leere Kontrollgruppe eingeteilt; Cistanche deserticola-Gruppe, d. h. nach 24 Stunden Zellkultur, 1 × 10-4 mol/L Cistanche deserticola hinzufügen; In der Kaempferol-Gruppe 1 nach 24 Stunden Zellkultur hinzufügen × 10-4 mol/L Kaempferol; Östrogengruppe, 5 nach 24 Stunden Zellkultur hinzufügen × Mit 10 bis 8 Mol/L Östrogen behandeln. Nach 24-stündiger Kultivierung das gesamte Kulturmedium verwerfen, mit PBS abspülen, 1 ml Pankreasenzym zur Verdauung hinzufügen und nach einigen Minuten die gleiche Menge Kulturmedium hinzufügen, um die Verdauung zu beenden. Zentrifugieren Sie die Zellsuspension 5 Minuten lang bei 1000 U/min, verwerfen Sie den Überstand und geben Sie das Trizol-Reagenz in eine Eisbox. Anschließend wurde Chloroform zugegeben und kräftig geschüttelt, etwa 3 Minuten lang in eine Eisbox gestellt und 10 Minuten lang bei 4 Grad und 12.000 U/min zentrifugiert. Übertragen Sie die RNA in ein neues EP-Röhrchen, fügen Sie ein gleiches Volumen Isopropanol hinzu, mischen Sie es vorsichtig gut und lassen Sie es 10 Minuten lang in einer Eisbox stehen. Nach 10-minütiger Zentrifugation bei 4 Grad und 12 000 U/min verwerfen Sie den Überstand und waschen Sie den Niederschlag mit 80-prozentigem Ethanol. Zentrifugieren Sie 5 Minuten lang bei 10 000 U/min und 4 Grad, verwerfen Sie das Ethanol, trocknen Sie es 5-10 Minuten lang an der Luft und geben Sie DEPC-Wasser zum Blasen und Absaugen hinzu, um den Niederschlag aufzulösen. Messen Sie die RNA-Konzentration mit einem UV-Spektrophotometer.

Verwenden Sie das M5 Super plus qPCR RT-Kit mit dem gDNA-Entfernungskit für die reverse Transkription, um cDNA zu erhalten. Nachweis von proliferierendem Zellkernantigen, follikelstimulierendem Hormonrezeptor und Östrogenrezeptor in Granulosazellen durch Echtzeit-Fluoreszenz-quantitative PCR-MRNA-Relativtranskription. Die Primerinformationen sind in Tabelle 1 aufgeführt. Die Primer wurden von Shenggong Biotechnology (Shanghai) Co., Ltd. entworfen und synthetisiert. Interne Referenzgruppe – Actin, das relative Transkriptionsniveau der mRNA für jedes Gen wird durch 2- bestimmt. ΔΔ Berechnet durch Ct.

Tabelle 1 Primerinformationen

1.6 In-vitro-Kultur und morphologische Beobachtung von Eierstockgewebe

Nehmen Sie das Eierstockgewebe von 30 40-Tage alten Hailan-Braun-Legehennen und spülen Sie es dreimal mit 75-prozentigem Alkohol aus. Schneiden Sie das Eierstockgewebe in einem ultrareinen Tisch in kleine Stücke von 1-2 mm3, mit einer Rate von 500 μL pro Vertiefung, die zu DMEM und ITS-Medium hinzugefügt werden (10 μG/ml Insulin, 5 μG/ml Transferrin). und 30 nmol/L Natriumselenit). Nach 72 Stunden Kultivierung im Inkubator entsprechend der Gruppierungssituation behandeln. Eierstockgewebe wurde in eine Blindkontrollgruppe, eine Cistanche deserticola-Gruppe, eine Kaempferol-Gruppe und eine Östrogengruppe eingeteilt. Nach 72-stündiger Kultivierung wurde das Eierstockgewebe mit 4 Prozent Formaldehyd fixiert und Gewebeschnitte routinemäßig für die Beobachtung unter einem optischen Mikroskop vorbereitet.

1.7 Statistik und Analyse

Die qPCR-Daten wurden mit der Software Biorad CFX Manager 2.0 und der Software Microsoft Excel analysiert, und die Software SPSS 21.0 wurde für die einfaktorielle ANOVA verwendet. Für mehrere Vergleiche wurde Duncans Methode verwendet. Die Ergebnisse werden als „Mittelwert ± Standardabweichung“ dargestellt und mit der Software GraphPad Prism 5.0 grafisch dargestellt. P<0.05 indicates significant differences, while P<0.01 indicates extremely significant differences.

2 Ergebnisse und Analyse

2.1 Auswirkungen von Cistanche deserticola und Kaempferol auf die Proliferation von Granulosazellen

Aus den Abbildungen 2 und 3 ist ersichtlich, dass sowohl Cistanche deserticola als auch Kaempferol die Proliferation von Granulosazellen fördern können. Bei 1 × 10-4~1 × Innerhalb eines Konzentrationsgradienten von 10-10 mol/L beträgt die Konzentration im Vergleich zur Blindkontrollgruppe 1 × 10-4 mol/L, 1 × {{ 9}} mol/L, 1 × 10-6 mol/L, 1 × Bei 10-7 mol/L war der Unterschied äußerst signifikant (P<0.01), with a concentration of 5 × The difference was significant at 10-8 mol/L (P<0.05).

Hinweis: „* *“ weist auf einen signifikanten Unterschied im Vergleich zur leeren Kontrollgruppe hin (P<0.01), and "*" indicates a significant difference compared to the blank control group (P<0.05), the same below.

Abb. 2 Absorptionswerte von Granulosazellen, die 24 Stunden lang Cistanche deserticola in unterschiedlichen Konzentrationen ausgesetzt wurden

Abb. 3 Absorptionswerte von Granulosazellen, die 24 Stunden lang Kaempferol in unterschiedlichen Konzentrationen ausgesetzt wurden

2.2 Auswirkungen von Cistanche deserticola und Kaempferol auf das proliferierende Zellkernantigen, den follikelstimulierenden Hormonrezeptor und den Östrogenrezeptor von Hühner-Pregranulosazellen. Der Einfluss von mRNA auf die relativen Transkriptionsniveaus

Aus Tabelle 2 ist ersichtlich, dass Cistanche deserticola- und Kaempferol-Gruppen Auswirkungen auf das proliferierende Zellkernantigen, den Follikel-stimulierenden Hormonrezeptor und den Östrogenrezeptor von vorklassifizierten Granulosazellen von Hühnern haben. Das relative Transkriptionsniveau der mRNA war signifikant höher als das der Blindprobe Kontrollgruppe und Östrogengruppe (P<0.05 or P<0.01), and the follicle-stimulating hormone receptor and estrogen receptor of chicken pre aggregate cells in the Kaempferol group α The transcription level of mRNA is the highest (P<0.01).

Tabelle 2 Auswirkungen von Cistanche deserticola und Kaempferol auf das proliferierende Zellkernantigen, den Follikel-stimulierenden Hormonrezeptor und den Östrogenrezeptor von Hühner-Pregranulosazellen. Der Einfluss von mRNA auf die relativen Transkriptionsniveaus

2.3 Histologische Beobachtung der Eierstöcke

Aus Abbildung 4 ist ersichtlich, dass im Vergleich zur Kontrollgruppe die Anzahl der Follikel im mit Cistanche deserticola und Kaempferol behandelten Eierstockgewebe deutlich zunahm und sich die Granulosazellen von einschichtig zu mehrschichtig vermehrten. Im Vergleich zur Östrogengruppe haben die Cistanche deserticola-Gruppe und die Kaempferol-Gruppe eine offensichtlichere Fähigkeit, die Reifung und Entwicklung des Eierstockgewebes zu fördern, und die Cistanche deserticola-Gruppe und die Kaempferol-Gruppe haben eine offensichtlichere Wirkung als die Kaempferol-Gruppe.

3 Diskussion

3.1 Wirkung von Cistanche deserticola und Kaempferol

Der gesamte Prozess der Follikelentwicklung geht mit der Vermehrung von Granulosazellen einher, die für die Follikelentwicklung von großer Bedeutung sind. Sie initiieren das Wachstum primitiver Follikel, indem sie günstige molekulare Mikroumgebungen schaffen. Während der Follikelentwicklung spielt die Apoptose von Granulosazellen eine wichtige Rolle bei der Regulierung des Follikelwachstums, der Eizellenreifung und der Östrogensekretion [15-16]. Cistanche deserticola, ein chinesisches Kräuterheilmittel, hat eine sexualhormonähnliche Wirkung, die die Entwicklung tierischer Follikel und die Spermienproduktion fördern, das normale Einsetzen der Brunst fördern, die Funktion und Aktivität der Eierstöcke verbessern und die Fortpflanzungsfunktion verbessern kann. Cuscuta chinensis hat als traditionelles nierenstärkendes chinesisches Arzneimittel antioxidative, reproduktive und Anti-Aging-Wirkungen, da sein wirksamer Bestandteil Flavonoide ist. Studien haben gezeigt, dass eine bestimmte Dosis Flavonoide aus Cuscuta chinensis eine proliferative Wirkung auf interstitielle Hodenzellen von Mäusen hat [17-18]. In diesem Experiment wurden Cistanche deserticola und Kaempferol als Hauptbestandteile der traditionellen chinesischen Arzneimittel Cistanche deserticola und Dodder ausgewählt, um ihre Auswirkungen auf die Expressionsfähigkeit von follikulären Granulosazellen von Hühnern und ihren zugehörigen Rezeptoren sowie Eierstockgewebe zu untersuchen und die Auswirkungen zu bestätigen von Cistanche deserticola und Kaempferol über die Entwicklung des Fortpflanzungssystems von Geflügel.

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3.2 Proliferierendes Zellkernantigen, follikelstimulierender Hormonrezeptor und Östrogenrezeptor Die Rolle von

PCNA ist ein proliferierendes Zellkernantigen, das eine wichtige Rolle bei der Initiierung der Zellproliferation spielt und ein guter Indikator für die Zellproliferation ist. Daher bestätigte der Anstieg von PCNA in den Testergebnissen, dass Cistanche deserticola und Kaempferol tatsächlich die Zellproliferation fördern, wenn sie auf Granulosazellen einwirken. FSH ist das wichtigste Hormon, das die Follikelentwicklung fördert [19], und die Expressionsstelle des follikelstimulierenden Hormonrezeptors (FSHR) ist hauptsächlich im Eierstock und in den Follikeln konzentriert. FSH beteiligt sich hauptsächlich an den Fortpflanzungsaktivitäten von Hühnern, indem es die Entwicklung von Follikeln reguliert. Wenn die FSH-Sekretion zunimmt, kann dies den Anstieg von FSHR in Granulosazellen fördern, und die Kombination beider kann die Synthese von LHR durch Aktivierung der Aromatase induzieren. Das Huhn kann durch die synergistische Wirkung von FSH und LH den Eisprung auslösen [20-22]. Vor der Follikelselektion exprimieren Granulosazellen nur Grundmengen an FSHR, die zum Empfang von FSH-Signalen und zur Produktion geringer Mengen an zyklischem Adenosinphosphat zur Aufrechterhaltung der Zellaktivität verwendet werden. Wenn die Expression von FSHR in Granulosazellen eines Follikels vor dem Grad deutlich hochreguliert ist, deutet dies darauf hin, dass der Follikel als Gradfollikel ausgewählt wird [23-24]. In dieser Studie war die Expression von FSHR-mRNA in den Gruppen Cistanche deserticola und Kaempferol im Vergleich zur Kontrollgruppe signifikant erhöht, was darauf hindeutet, dass Cistanche deserticola und Kaempferol die Transkription von FSHR-mRNA fördern, die Sekretion von FSH erhöhen und die Selektion fördern können von Follikeln als Gradfollikel. E2 ist eine Art Steroidhormon, das von Thekazellen ausgeschüttet wird. Seine Funktion besteht darin, die Geschlechtsreife weiblicher Tiere zu fördern und das zweite Geschlechtsmerkmal zu zeigen. Unter der Wirkung von FSH wandelt die von Ovarialgranulosazellen produzierte Aromatase Androgen in E2 um, das durch zwei Östrogenrezeptoren (ER und ER) reguliert wird. Es hat Auswirkungen auf verschiedene Organe weiblicher Tiere und spielt eine wichtige Rolle bei der Fortpflanzung von Tieren, insbesondere in der physiologischen Aktivitäten wie die Follikelentwicklung. Während des Follikelwachstums ist Östrogen ein wichtiges intrazelluläres regulatorisches Molekül, das die Proliferation von Granulosazellen beschleunigt und die Wirkung von FSH und LH auf die Proliferation und Differenzierung von Eierstockzellen verstärkt. ER Die wichtigste Anpassung ist die negative Rückkopplung, ER Die Entwicklung der Follikel wird sowohl über interne als auch externe Wege des Eierstocks reguliert [26]. ER wird hauptsächlich in Geweben und Organen wie der Brustdrüse, der Gebärmutter und der Vagina von Tieren exprimiert, während ER hauptsächlich in den Hoden exprimiert wird , Eierstöcke, Prostata und Hypothalamus [27].

In dieser Studie wurden die Expressionsniveaus von Cistanche deserticola und Kaempferol in den Cistanche deserticola- und Kaempferol-Gruppen deutlich erhöht, was darauf hindeutet, dass Cistanche und Kaempferol positive Auswirkungen auf die Entwicklung, Reifung und den Eisprung von Hühner-Eierstöcken haben. Die Ergebnisse dieser Studie ergaben, dass das gemessene ER-Expressionsniveau relativ niedrig ist. Dies steht im Einklang mit den Forschungsergebnissen von Guo Miao [28], dass in der Embryonalentwicklung von Hühnern die Eierstöcke früher Hühner spezifische Bindungsstellen für ER aufweisen. In den weißen Follikeln, gelben Follikeln und Granulosazellen von Hühnern ist die Expression von ER deutlich höher als die von ER. Sojaflavonoide können als pflanzliches Östrogen die Eierproduktionsrate von Legehennen erhöhen, wenn sie dem Futter zugesetzt werden [29], was auf einen direkten Zusammenhang zwischen dem Östrogenhormonspiegel und der Eierproduktionsrate hinweist.

Abbildung 4 Eierstockgewebe nach HE-Färbung (10 ×）

3.3 Auswirkungen von Cistanche deserticola und Kaempferol auf das Eierstockgewebe

In diesem Experiment wurde durch Co-Kultivierung von Cistanche deserticola und Kaempferol mit Eierstockgewebe festgestellt, dass die Anzahl der Follikel im Eierstockgewebe, die von Cistanche deserticola und Kaempferol befallen waren, deutlich zunahm und Granulosazellen von einschichtigen zu mehrschichtigen Zellen proliferierten. Dies beweist erneut, dass Cistanche deserticola und Kaempferol aus histologischer Sicht die Entwicklung der Eierstöcke fördern können. Das proliferierende Zellantigen, der Rezeptor für follikelstimulierendes Hormon und der Östrogenrezeptor wurden in den Ergebnissen dieses Experiments gemessen. Die Änderungen der Indikatoren bestätigten, dass Cistanche deserticola und Kaempferol östrogenähnliche Wirkungen haben, was eine experimentelle Grundlage für die Erforschung des Ziels der Hauptkomponenten bietet aus Cistanche deserticola und Dodder.

4. Fazit

Diese Studie bestätigte, dass Cistanche deserticola und Kaempferol die Proliferation von Hühner-vorgradierten Granulosazellen fördern und PCNA, FSHR und ER erhöhen können. Das Transkriptionsniveau von mRNA kann die Entwicklung von Follikeln erheblich fördern.

Referenz:

［1］Yang Pengyun, Song Beibei, Ma Jinrui, et al. Die Rolle von Granulosazellen bei der Eibildung [J] Poultry Science, 2021 (11): 50-54

[2] HUO SY,LI YR,GUO Y,et al. Verbessernde Wirkung von Epimedi⁃ um-Flavonoiden auf die ausgewählten Fortpflanzungsmerkmale bei Legehennen nach der erzwungenen Häutung［J］. Geflügelwissenschaft,2020,99（5）: 2757-2765.

(3) HUO SY, LI YR, ZHANG S, et al. Funktionen von Epimedium auf zurückgebildete Eileiter und Follikel von zwangsgeschmolzenen Legehennen [J]. Journal of World′s Poultry Research,2020,10（2）:326- 335.

[4] RAJU GR, CHAVAN R, DEENADAYAL M, et al. Synergie zwischen luteinisierendem Hormon und follikelstimulierendem Hormon: eine Übersicht über die Rolle bei der kontrollierten Überstimulation der Eierstöcke［J］. Journal of hu⁃ man reproductive ences,2013,6（4）:227-234.

[5] SCHMIDT D. Der murine Winged-Helix-Transkriptionsfaktor Foxl2 ist für die Differenzierung von Granulosazellen und die Erhaltung der Eierstöcke erforderlich. Entwicklung,2004,131（4）:933-942.

[6] SULLIVAN MW, STEWART-AKERS A, KRASNOW JS, et al. Eierstockreaktionen bei Frauen auf rekombinantes follikelstimulierendes Hormon und luteinisierendes Hormon (LH): eine Rolle von LH in den Endstadien der Follikelreifung (J). Journal of Clinical Endocrinology & Metabolic, 1999,84（1）:228-232.

[7] GUO Y,LI YR,ZHANG S,et al. Die Wirkung der Gesamtflavonoide von Epimedium auf die Entwicklung von Granulosazellen bei Legehennen [J]. Geflügelwissenschaft,2020,99（9）:4598-4606.

[8] ZHANG WD,LI N,DU ZR,et al. Der IGF-1-Rezeptor ist an den regulatorischen Wirkungen von Icariin und Icaritin in Astrozyten unter Grundbedingungen und nach einer entzündlichen Belastung beteiligt. Europäische Zeitschrift für Pharmakologie,2021,906（5）:174269- 174278.

[9] FREDERIQUE RZ, MIGUEL F, GE Y, et al. Regulatorische Architektur der L-T2-Gonadotropzelle, die der Reaktion auf das Gonadotropin-Releasing-Hormon zugrunde liegt［J］. Grenzen der Endokrinologie,2018,9:34.

［10］ Huo Shuying, Kang Jingmin, Li Yurong, et al. Die Wirkung von „Yimu Powder“ auf die Reparatur von Eileitern und die Legeleistung bei Legehennen [J] Chinese Poultry, 2018, 40 (19): 4

[11] WANG S, WANG Q, WANG H, et al. Die Induktion von ROS- und DNA-Schäden-abhängiger Seneszenz durch Icaritin trägt zu seiner Antitumoraktivität in hepatozellulären Karzinomzellen bei. Pharmazeutische Biologie,2019,57（1）:424-431.

［12］ Wang Jianhong, Wang Minzhang, Wu Qinghua, et al. Die Wirkung von Flavonoiden aus Cuscuta chinensis auf die endokrine Funktion der Eierstöcke bei gestressten Ratten [J] Chinesische Kräutermedizin, 2002 (12): 46-48

［13］Miao Jiangxia Fortschritte in der Forschung zu aktiven Komponenten und Wirkmechanismen von Dodder-Samen bei der Regulierung der Fortpflanzung//Proceedings of Academic Conference on Pharmaceutical Phytochemistry and Sustainable Development of Traditional Chinese Medicine Resources (I), 2009: 323-325

[14] TAO CC,WU Y,GAO X,et al. Die Antitumorwirkung von Icari⁃-Zinn gegen Brustkrebs hängt mit Östrogenrezeptoren zusammen. Aktuelle Molekulare Medizin,2020,21（1）:73-85.

(15) MONNIAUX,DANIELLE. Förderung der Follikulogenese durch den Dialog zwischen Zyten und somatischen Zellen: Lehren aus genetischen Modellen［J］. The⁃ Riogenology,2016,86（1）:41-53.

[16] TAKASHI SHIMIZU A, NAOMICHI KOSAKA A, CHIAKIMU⁃ RAYAMA A, et al. Expression von Apelin- und APJ-Rezeptoren in Granulosa- und Thekazellen während verschiedener Stadien der Follikelentwicklung im Rinder-Eierstock: Beteiligung von Apoptose und hormoneller Regulation – Sciencedirect［J］. Tierreproduktionswissenschaft,2009,116（1-2）:28-37.

［17］ Lin Siwen, Chen Shaobo, Yin Changchang, et al. Östrogene Wirkung der Gesamtflavonoide von Cistanche deserticola deserticola auf die Förderung der osteogenen Differenzierung ［ J ］ Forschung und Entwicklung von Naturprodukten, 2020, 32 (3): 373-378

［18］ Tao Jinliang, Wang Xiao, Wei Yuanyuan, et al. Die schützende Wirkung von Flavonoiden aus Cuscuta chinensis auf BPA induzierte eine abnormale Sekretion männlicher Hormone in testikulären interstitiellen Zellen von Mäusen [J] Progress in Animal Medicine 2019, 40 (5): { {4}}

［19］ Wang Peng, Hou Deyu, Shi Liguang, et al. Danzhou Chicken FSH Study on Single-nucleotid polymorphism of gene ［ J ］ Heilongjiang Animal Husbandry and Veterinary Medicine, 2018, 10 (19): 19-22

[20] ZHANG M, SHI H, SEGALOFF DL, et al. Expression und Lokalisierung des luteinisierenden Hormonrezeptors im Fortpflanzungstrakt der weiblichen Maus. Biologie der Fortpflanzung,2001,64（1）: 179-187.

［21］ Li Qin, Wang Qigui TGF – Forschungsfortschritt und Aussichten von Familienmitgliedern, die die Follikelentwicklung bei Geflügel regulieren ［ J ］ Chinese Poultry, 2019, 41 (19): 1-5

［22］Guan Hongbin, Li Qingzhang Forschungsfortschritt zum follikelstimulierenden Hormon [J] Journal of Northeast Agricultural University, 2002, 8 (3): 306-311

［23］ Wu Xinpei, Wang Shuying Immunhistochemische Lokalisierung von FSHR und LHR in den Eierstöcken der schwarzen Laiwu-Ziege ［ J ］ Life Science Research, 2006, 25 (4): 367-371

(24) TISCHKAU SA, HOWELL RE, HICKOK JR, et al. Der Anstieg des lu⁃ teinisierenden Hormons reguliert die Genexpression der zirkadianen Uhr im Eierstock von Hühnern. Chronobiology International, 2011,28（1）:10-20.

[25]Tang Haifei, Wang Zhiwen, Zheng Xuesong, et al. Fortschritte in der Östrogenfunktionsforschung [J] Reproduktion und Empfängnisverhütung, 2019, 39 (4): 334-340

[26] Liu Lingbin Wirkung monochromatischer Strahlung auf den Östrogenrezeptor (ER, ER), Die Wirkung der Expression des Progesteronrezeptors (PR-A, PR-B) im Eierstockgewebe Ya'an: Sichuan Agricultural University, 2013

(27) COUSE JF, LINDZEY J, GRANDIEN K, et al. Gewebeverteilung und quantitative Analyse von Östrogenrezeptor-alpha (ERal⁃ pha) und Östrogenrezeptor-beta (ERbeta) Messenger-Ribonuklesäure im Wildtyp und ERalpha-Knockout-Maus［J］. En⁃ docrinology,1997,138（11）:4613-4621.

［28］Guo Miao ER im Eierstockgewebe von Legehennen Offensichtliche Regulierung dynamischer Veränderungen und Screening des Regulatorgens Tai'an: Shandong Agricultural University, 2017. [ Zhao Biqian Forschungsfortschritt bei der Anwendung von Daidzein in der Produktion von Legehennen [J ] Guangdong Feed, 2017, 26 (8): 31-33