Auswirkungen von Cistanche deserticola auf akute Lungenverletzungen bei Ratten mit Sepsis

Kontakt: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-Mail:audrey.hu@wecistanche.com

[Zusammenfassung]Zielsetzung: Untersuchung der Wirkung vonCistanche deserticolaauf akutLungenverletzung(ALI) bei Ratten mit Sepsis. Methoden: Das Modell der Sepsis wurde durch Cecal-Ligatur und Punktion hergestellt. Die histopathologischen Untersuchungen wurden durchgeführt und die biologischen Marker von ALI wurden gemessen. Ergebnisse: Unter einem Lichtmikroskop in der Kochsalzgruppe gab es Ödeme vonLungenzwischenraum, eine große Anzahl von Erythrozyten und Neutrophilen und Plasmaprotein in den Alveolarhöhlen. DasLungeNass-/Trockengewicht, die Rate der Neutrophilen und der Proteingehalt in der pulmonalen Alveolarspülflüssigkeit pulmonale Gefäßpermeabilität und pulmonale Alveolarpermeabilität und MDA, SOD sowie MPO waren entsprechend signifikant erhöht. In der Gruppe mitCistanche deserticolaDiese ALI-Indizes waren signifikant niedriger als die in der Gruppe mit Kochsalzlösung.

Schlussfolgerung:Cistanche deserticolahat große Auswirkungen auf ALI bei Ratten mit Sepsis. Der therapeutische Mechanismus besteht möglicherweise in der Hemmung von Neutrophilen und oxidativen freien Radikalen.

【Schlüsselwörter】Sepsis; Akute Lungenverletzung; Cistanche deserticola

Sepsis ist ein klinischer Notfall und eine kritische Krankheit, und die Suche nach wirksamen Behandlungsmedikamenten war schon immer ein großes Problem in der klinischen und Grundlagenforschung. Die Pathogenese der Sepsis in der traditionellen chinesischen Medizin ist der Mangel an Rechtschaffenheit und der Überschwang des Bösen. Die Angriffstherapie für den bösen Wohlstand des Körpers ist eine der wirksamen Behandlungsmaßnahmen.Cistancheist eine traditionelle tonische chinesische Medizin. Pharmakologische Studien haben bestätigt, dass es Schutzfunktionen wie die Verbesserung der zellulären DNA-Synthese und die Resistenz gegen sauerstofffreie Radikale hat. Der Autor beobachtet experimentell die Wirkung vonCistanche über Lungenproblemschädenbei Sepsis, um eine effektive Erforschung der Behandlung von Sepsis zu ermöglichen.

Cistanche Echinacosid behandeln Lungenerkrankungen

1 Material und Methoden

1. 1TierGesundheit 40 männliche 5D-Ratten mit einem Gewicht von 200 ~ 250g, zur Verfügung gestellt vom Experimental Animal Center der Huazhong University of Science and Technology, Qualitätsinspektionsnummer: TJLA - 2008-1670 wurden zufällig in 3 Gruppen eingeteilt: 8 normale Kochsalzlösungsgruppe, Ig / Es gab 12 Ratten in der ml-Auberginenpastengruppe und 12 in der 5g / mlCistancheGruppe. Die Versuchstiere erhielten die entsprechenden Medikamente per Routineuntersuchung für 15 Tage, zweimal täglich (dieCistancheDeserticola-Extrakt wurde vom Vorbereitungsraum für traditionelle chinesische Medizin dieses Krankenhauses zur Verfügung gestellt), und die Dosierung von 200 mg / kg wurde in den Versuchstieren nach der Methode der Literatur U] 12 Minuten nach der Cecal-Ligatur und Perforation verwendet. Sammlung von Exemplaren.

1.2Histologische Untersuchung der Rattenlunge.Nehmen Sie eine kleine Menge des linken Lappens des TieresLungeaus jeder Gruppe, fixieren Sie es mit 10% Formaldehyd, paraffin-embed den Schnitt und HE-Flecken, beobachtet mit einem gewöhnlichen optischen Mikroskop, und nehmen Sie auf dieser Grundlage dieLungeProblem, 1mm3 für 25 herzustellen Es wurde in Glutaraldehydlösung fixiert, dann in 1% Tetroxidlösung fixiert, mit Ethanol und Aceton dehydriert, in Epon 81 eingebettet, ultradünne Abschnitte hergestellt, mit Uran-Blei angefärbt und mit dem Transmissionselektronenmikroskop beobachtet.

1.3Bestimmung des Nass-Trockengewicht-Verhältnisses des Lungenproblems der Ratte, des Zellzahlverhältnisses in alveolärer Lavageflüssigkeit und des Proteingehalts Gewichtsverhältnis.Eine andere Gruppe von Ratten durchlief nach der Thorakotomie eine Alveolarspülung, und die Lavageflüssigkeit wurde unter dem Mikroskop einer Zellzählung und Zellklassifizierung unterzogen. Die Coomassie brilliant blue-Methode wird verwendet, um den Proteingehalt zu bestimmen und zu berechnenLungePermeabilitätsindex (alveoläres Lavageflüssigkeitsprotein/Plasmaprotein, LPI).

1.4Veränderungen der pulmonalen Gefäßpermeabilität (PVP) bei RattenNach der von Zhou et al. (2) eingeführten Methode unterzogen sich die Tiere jeder Gruppe nach der Verabreichung einer Cecal-Ligatur und Perforation, und es wurde eine Oberschenkelveneninjektion von 50 mg/kg Lanthan verwendet, um die Brust zu öffnen und die Lunge zu entfernen. Entfernen Sie die umgebenden Probleme, tränken Sie dieLungein der Formamidlösung (die Menge an Formamid beträgt 20 mg / 100 g Körpergewicht), die in einem 45-50T-Inkubator für 72 Stunden inkubiert wird, warten Sie, bis alle Pigmente in den Problemen ausgelaugt sind, entfernen Sie die Probleme, zentrifugieren Sie und nehmen Sie den Überstand, Verwenden Sie ein Ultraviolett-Spektralphotometer, um Kolorimetrie bei 620nm durchzuführen, und berechnen Sie den Ethanolgehalt gemäß der Standardkurve, um die Änderung des PVP zu bestimmen.

1.5Bestimmung von Malondialdehyd (MDA) bei Lungenproblemen bei RattenDie Thiobarbitursäure (TBA) -Methode wurde verwendet, um die MDA-Aktivität zu bestimmen. Fügen Sie 4 ml 1,67 mol / l Schwefelsäure hinzu. 0,541% Phosphonsäure auf 50 ml Prüfkörper, gut mischen, bei 3000 U / min für 10 min zentrifugieren und die Ausfällung wie oben erneut verarbeiten, dann 1 ml doppelt destilliertes Wasser, 1 ml TBA-Lösung, 95% wasserfreies Bad für 60 Minuten, Extraktion mit 5 ml n-Butanol, Tetraethoxypropan als Standard, die Endkonzentration von lnmol / L, Fluoreszenzspektrophotometer bei 532 nm zur Messung der Absorption hinzufügen.

1.6Bestimmung der Superoxiddismutase (SOD) bei Lungenproblemen bei RattenGemäß der Methode in der Literatur [4] wurde die SOD-Aktivität durch die Huangpuyin-Oxidase-Methode (Kit vom Nanjing Jiancheng Institute of Biological Engineering erworben) bestimmt.

1.7Bestimmung der Myeloperoxidase (MPO) bei RattenLungeProblem.Nehmen Sie Lungenproblem, um das Restblut so viel wie möglich in isotonischer Kochsalzlösung zu waschen, und legen Sie es in einen Phosphatpuffer, der 0,5% Cetyltrimethylbromid (PH6) enthält. 0) Machen Sie 5% des Homogenats und arbeiten Sie gemäß den Anweisungen des Kits.

1.8Statistische MethodenVerwenden Sie SPSS-Statistiksoftware und messen Sie Daten in (x±s) Form mit t-test und X2-Test.

Cistanche

2 Ergebnisse

2.1 Vergleich des Nass-Trockengewicht-Verhältnisses vonLungeProbleme, Zellzahlverhältnis und Proteingehalt in alveolärer Lavageflüssigkeit in jeder Gruppe sind in Tabelle 1 dargestellt. DasLungeDas Nass-Trockengewichts-Verhältnis in der Salzgruppe war deutlich höher als das in derCistancheGruppe (P<0.05 or="" 0.01).="" the="" cell="" count="" ratio="" and="" protein="" content="" in="" the="" alveolar="" lavage="" fluid="" of="" the="">CistancheGruppe waren signifikant niedriger als die in der Kochsalzgruppe (P<0.05 or="" 0.01).="" 0.="" 01),="" and="" with="" the="" increase="" of="" the="" dose="" concentration,="" it="" shows="" a="" significant="">

Tabelle 1 Vergleich des Nass-Trockengewicht-Verhältnisses des Lungenproblems mit dem Zellzahlverhältnis und dem Proteingehalt in der Alveolarspülflüssigkeit von Ratten in jeder Gruppe (X ± S)

Im Vergleich zur normalen Kochsalzgruppe ist P<0.><001. below="" is="" the="">

2.2 Vergleich der morphologischen Veränderungen der Lungenprobleme der Ratten in jeder Gruppe. Allgemeine Bemerkung: DieLungein der Kochsalzgruppe waren signifikant vergrößert und dunkelrot, mit unterschiedlichen Stauungsgraden und Ödemen auf der Oberfläche und einer großen Anzahl von Lungeninfarkten am Rand; die Lunge in derCistancheGruppe waren hellrot mit einer Oberfläche Leichte Stauung und Ödeme, kein offensichtlicher Lungeninfarkt. Lichtmikroskopische Beobachtungen zeigten, dass es in der Kochsalzgruppe alveoläre und pulmonale interstitielle Stauung und Ödeme, eine große Anzahl diffuser neutrophiler Infiltration in der Alveolarhöhle, eine gewisse Abszessbildung und unterschiedliche Grade von Atelektase, Nekrose und kompensatorischem Emphysem gab. , Thrombus und ähnliche transparente Membranbildung. Die oben genannten Läsionen in der Cistanche-Gruppe waren signifikant reduziert. In der Kochsalzgruppe schwollen alveoläre Epithelzellen an, lamellare Blutkörperchen entleerten sich offensichtlich, große Vakuolen bildeten sich, kapillare Endothelzellen waren geschwollen, Endothelzellen wurden kontinuierlich verletzt, der Interzellularraum erweiterte sich, Kapillaren und alveoläre Basalmembranen waren locker und erweitert. Unregelmäßige Verdickung, ungleichmäßige Dicke. In der Cistanche-Gruppe waren die Alveolarepithelzellen nicht geschwollen, die Entleerung der lamellären Blutkörperchen war reduziert, die Anzahl der gebildeten Vakuolen war gering, die Verbindung zwischen den kapillaren Endothelzellen war nahezu normal und die Basalmembran war leicht locker und unregelmäßig verdickt. Im Vergleich zur Ig/niL-Cistanche-Gruppe hatte die 5g/ml-Cistanche-Gruppe einen kleineren Bereich morphologischer Veränderungen bei Lungenproblemen, und der Grad der Lungenverletzung war geringer.

2.3 Der Vergleich von LPI und PVP von Ratten in jeder Gruppe ist in Tabelle 2 dargestellt. Die LPI und PVP der Salzgruppe lagen deutlich über denen der Cistanche-Gruppe (PV0,05 oder 0,01). Der LPI und der PVP der Cistanche-Gruppe waren niedriger, was eine signifikante Dosis-Wirkungs-Beziehung aufwies.

2.4 Der Vergleich der Tätigkeit von MDA. GRASSODE. MPO in derLungeDie Probleme der Ratten in jeder Gruppe sind in Tabelle 3 dargestellt. Der MDA-Gehalt imLungeDas Problem der Salzgruppe war signifikant höher als das derCistanche-Gruppe, während die SOD-Aktivität und die MPO-Aktivität im Lungenproblem der Cistanche-Gruppe signifikant erhöht waren (F<0.05 or="">

3 Diskussion

Mehrfachorganversagen ist die Hauptursache für die irreversible Erkrankung und die hohe Sterblichkeitsrate im Spätstadium der Sepsis (5). Der Schutz der Organfunktion ist von großer Bedeutung für die Verringerung der hohen klinischen Sterblichkeitsrate von Sepsis. Die Lunge ist das erste Organ mit multiplem Organversagen. 1/3 der Patienten mit Sepsis sterben an akuter Lungenverletzung (ALI) und akutem Atemnotsyndrom (ARDS). Der wichtigste pathophysiologische Mechanismus von ALI ist die Ansammlung einer großen Anzahl von Neutrophilen im Lungenproblem und Es aktiviert und haftet an vaskulären Endothelzellen. Gleichzeitig steigt die Konzentration der reduzierten Coenzym-II-Oxidase, die einzelne Elektronen überträgt, was zu Atemausbrüchen führt, eine große Menge an freien Sauerstoffradikalen erzeugt und durch starke Oxidation Schäden und Funktionen von Zellmembranen und Membranstrukturen verursacht. Hindernisse(6). Lipidperoxid spiegelt die Veränderung der freien Sauerstoffradikale im Problem wider und steht in direktem Zusammenhang mit dem Grad der Lungenverletzung (7). Im enzymatischen und nicht-enzymatischen antiradikalen Oxidationssystem des Körpers behält die Aktivität von SOD eine gute Korrelation mit dem Grad der Problemschädigung bei (7). Im Vergleich zur physiologischen Kochsalzgruppe zeigten die MDA- und SOD-Aktivitäten der Cistanche-Gruppe statistisch signifikante Unterschiede. Cistanche hat die Funktionen der Verbesserung der Immunfunktion, Anti-Aging und Verbesserung der Zell-DNA-Syntheserate. Die experimentellen Ergebnisse zeigten, dass der Lungenkoeffizient, die PLT, das Neutrophilenverhältnis der alveolären Lavageflüssigkeit und die pulmonale vaskuläre Permeabilität der Cistanche-Gruppe signifikant verringert waren, die MDA-Aktivität des Lungenproblems abnahm, die SOD signifikant zunahm und die MPO-Aktivität abnahm. Gleichzeitig zeigte die morphologische Beobachtung, dass der Grad der Lungenproblemschädigung signifikant reduziert war, die Infiltration von Neutrophilen reduziert wurde und die 5g/mL Cistanche-Gruppe weniger Lungenverletzungen aufwies als die Ig/mL Cistanche-Gruppe, und es gab eine gute Dosis-Wirkungs-Beziehung. Es deutet darauf hin, dass Cistanche eine signifikante schützende Wirkung auf ALI hat. Der Mechanismus kann sein: (1) Hemmung der Migration von Entzündungszellen in derLunge, reduzieren die freien Sauerstoffradikale, die von Neutrophilen und anderen aktivierten Zellen produziert werden, so dass der Biofilm geschützt ist; (2) Förderung der Nukleinsäure- und Proteinsynthese und Schutz vor Lungenverletzungen Wirkung; (3) Verbessern Sie die Immunfunktion von Phagozyten und reduzieren SieLungeProblemschäden durch Endotoxin. Die experimentellen Ergebnisse liefern eine experimentelle Grundlage für die Behandlung akuter Lungenverletzungen bei klinischer Sepsis durch Stärkung des Körpers und Stärkung des Mangels.

Referenzen

[1] Jin Huiming. Sepsis-Modell nach cecal Ligatur und Perforation [J]. Chinese Journal of Pathophysiology "990, 6 (2): 126 ~ 127.

[2] Zhou WG, Mc Collum MO, Levine BA, et al. Rolle des plättchenaktivierenden Faktors bei Pankreatitis-assoziierter akuter Lungenverletzung bei der Ratte [J]. Am J Pathol, 1992, 140: 971 -979.

[3] Wang Qian, Zhu Xiaofeng, Zhao Xilong. Experimentelle Methoden der modernen Medizin [M]. Peking: People's Medical Publishing House, 2007: 508.

[4] Zhang Xiuming, Li Jianzhai, Wei Mingjing. Moderne klinisch-biochemische Laborwissenschaft [M]. Beijing: People's Military Medical Press, 2008: 896.

[5] Luo Zhengyao. Schockstudien [M]. Tianjin: Tianjin Science and Technology Press, 2008: 345

[6] Xanthous CA, Halle JB. Samsel RW Endotoxin bei Erkrankungen beim Menschen, Teil 2Biologische Wirkung und klinische Bewertung von Anti-Endotoxin-Erkrankungen[J]