Auswirkungen von Cistanche auf die Anti-Aging- und Immunfunktion von alternden Modellratten vor und nach der Verarbeitung

Kontakt: Audrey Hu WhatsApp/hp: 0086 13880143964 E-Mail:audrey.hu@wecistanche.com

Abstrakt: Ziel: Um die verschiedenen verarbeiteten Produkte von zu erkundenCistanchenherba in D-Galactose Anti-Aging-Funktion bei Ratten und Auswirkungen auf die Immunorganfunktion. Methoden: Wir haben die verschiedenen verarbeiteten Produkte von Cistanches herba extrahiert. SD-Ratten wurden zufällig in eine Blindkontrollgruppe, eine Alterungsmodellgruppe, eine Vitamin-E-Gruppe, Cistanche-Gruppen mit hoher, mittlerer und niedriger Dosis, Wein-Cistanche-Gruppen mit hoher, mittlerer und niedriger Dosis eingeteilt. Mit D-Galactose wurde ein alterndes Rattenmodell erstellt, nach der Behandlung detektierten wir die Gehalte an MDA, SOD und NO im Serum jeder Rattengruppe und zählten den Milzindex und den Thymusindex; und beobachteten dann die pathologischen morphologischen Veränderungen von Milzgewebe und mtDNA im Gehirn. Ergebnisse: MDA und NO im Serum von alternden Modellratten stiegen signifikant an (P<0. 01)="" and="" sod="" decreased="" significantly="" (fvo.="" 01).="" the="" model="" group="" had="" a="" tendency="" to="" decrease,="" thymus="" and="" spleen="" coefficient="" had="" obvious="" pathological="" spleen="" injury,="" and="" mtdna="" in="" the="" brain="" was="" missing.="" different="" processed="" products="" of="">Cistanchenherba kann MDA und NO(P<0. 01="" or="" p=""><0. 05).="" sod="" had="" a="" rising="" trend,="" improving="" the="" spleen="" index="" and="" thymus="" index,="" improving="" the="" pathological="" injury="" of="" the="" spleen.="" the="" mtdna="" in="" the="" brain="" of="" the="" high="" dose="" group="" and="" positive="" medicine="" group="" did="" not="" miss.="" and="" processing="" products="" were="" better="" than="" the="" raw="" cistanches="" herba.="" the="" high="" dose="" group="" was="" better="" than="" the="" low="" dose="" group.="" conclusion:="" different="" processing="" products="" of="" cistanches="" herbs="" have="" different="" anti-aging="" effects="" and="" immune="">

Schlüsselwörter: Cistanches herba; wird bearbeitet; Altern; immun

Die Traditionelle Chinesische MedizinCistanche DeserticolaYC Ma oderCistanche DeserticolaYC Ma oder C. tubulosa (Schenk) Wight ist der trockene, schuppige, fleischige Stamm vonCistanche Deserticola(Schenk) Wicht. Es ist warm in der Natur, süß und salzig im Geschmack und befindet sich im Nieren- und Dickdarmmeridian. Es ist wichtig für die Stärkung der Niere und die Stärkung des Yang. Die Medizin heißt „Wüstenginseng“ (2). Cistanche wurde erstmals in "Shen Nong's Materia Medica" veröffentlicht. Es wird als Bestnote geführt. Es hat die Wirkung, Essenz zu füllen und Mark zu nähren, die Niere zu nähren und Yang zu stärken, Farbe zu erfreuen und das Leben zu verlängern, Blut zu nähren und Trockenheit zu befeuchten usw. Es kann weibliche Unfruchtbarkeit, männliche Impotenz, bluttrockene Verstopfung, kalte Taille und Knie behandeln . Erkrankungen wie Schmerzen, Einklemmung, Blutsturz etc.! 3_5]o Die Ausgabe 2010 von "The Pharmacopoeia of the People's Republic of China" enthältCistanche tubulosaundCistanche E.

Mit zunehmendem Alter des Körpers kommt es zu einer gewissen Verschlechterung sowohl der physiologischen Funktionen als auch der morphologischen Struktur. Das nennen wir oft „Altern“. Seine Manifestationen sind hauptsächlich die Verschlechterung von Organen, Geweben und Zellen, wie z. B. die Abnahme der Gewebeelastizität, die Atrophie von Organen und die Abnahme der Anzahl von Zellen, was dazu führt, dass die vielen Funktionen des Körpers allmählich abnehmen. Experimente haben das bestätigtCistancheAnti-Aging-Effekte hat "I", sondern vergleichende Studien zu den Anti-Aging-EffektenCistanchevor und nach der Verarbeitung wurden noch nicht gemeldet. Dieses Experiment untersucht hauptsächlich dieAnti-Aging-EffektevonCistanchevor und nach der Verarbeitung und liefert eine wissenschaftliche Grundlage für die Untersuchung des Alterungsmechanismus.

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1 Versuchsmaterial

1.1 Versuchstiere

SD-Ratten mit einem Gewicht von 180-220 g. SPF wurde bereitgestellt von Liaoning Changsheng Biotechnology Co., Ltd., Lizenznummer: SCXK (Liao) 2015-0001.

1.2 Medikamente und Reagenzien

Cistanchewurde aus Alashan-Wildfleischasche in der Inneren Mongolei gekauft und als trockener, fleischiger Stamm mit Schuppenblättern identifiziertCistanche DeserticolaYC Ma von Professor Zhai Yanjun von unserem Krankenhaus; das Herstellungsverfahren für jede Gruppe von Testsubstanzen ist wie folgt, rohe Cistanche: roh Die Cistanche wird 2 Stunden lang gedämpft, in 6 mm dicke Scheiben geschnitten und bei 70°C getrocknet. Cistanche-Scheiben nehmen und dreimal in Wasser extrahieren, dann den Sud mischen und auf eine bestimmte Konzentration konzentrieren. Zubereitung von Cistanche: Rohe Cistanche nehmen und 8 Stunden in Gelbwein einweichen, 1:1 zugeben, 16 Stunden dämpfen, in 6 mm dicke Scheiben schneiden und bei 70 T trocknen. Die Cistanche-Scheiben entnehmen und 3 mal mit Wasser extrahieren, Kombinieren Sie dann den Sud und konzentrieren Sie ihn auf eine bestimmte Konzentration. Vitamin E-Weichkapseln (Chargennummer 1407061, Shenyang Hongqi Pharmaceutical Co., Ltd.); D-Galactose (Chargennummer 710B055, Beijing Soleibao Technology Co., Ltd.); Stickoxid (NO)-Kit (Chargennummer: BPE30262); Malondialdehyd (Chargennummer: BPE30262) MDA) Kit (Chargennummer BPE30527); Superoxiddismutase (SOD)-Kit (Chargennummer: BPE3O387); alle bereitgestellt von Shanghai Langdon Biotechnology Co., Ltd.; mitochondriales DNA-Extraktionskit vom Säulentyp (erworben von Beijing Lab Technology Co., Ltd.); PCR-Kit (erworben von TIANGEN Reagent Company); andere Reagenzien sind im Inland rein.

1.3 Experimentelle Ausrüstung

Gencycler (Hangzhou Longkey Scientific Instrument Co., Ltd.); Mikroplattenlesegerät (Thermo Fisher Technology Co., Ltd., USA); Kammer mit konstanter Temperatur und Feuchtigkeit (Shanghai Yiheng Scientific Instrument Co., Ltd.); Typ TGL-16C teilt der Tischzentrifuge mit (Shanghai Anting Scientific Instrument Factory); Vortex-Mischer (Instrumentenfabrik Qingpu Huxi Shanghai); Elektronische Waage (Shanghai Yousheng Weighing Apparatus Co., Ltd.); Vortex-Mischer (Instrumentenfabrik Shanghai Qingpu Huxi).

2 Experimentelle Methode

2.1 Tiermodell und Gruppierung

Nach 1 Woche adaptiver Fütterung wurden die Ratten zufällig in eine Blindgruppe, eine Modellgruppe, eine Kontrollgruppe, aCistancheGruppe mit hoher, mittlerer und niedriger Dosis und B. striata: Gruppen mit hoher, mittlerer und niedriger Dosis, von denen jede 9 Gruppen mit 8 Stück war. Mit Ausnahme der Blindgruppe wurde den anderen Gruppen D-Galactose 167,5 mg/kg subkutan morgens injiziert; der Blindgruppe wurde ein gleiches Volumen normaler Kochsalzlösung injiziert; am Nachmittag wurden die hohen, mittleren und niedrigen Dosen von Fleischasche und Wein 5,48 bzw. 2 verabreicht. 74, 1,37 g/kg der Testproduktlösung, die positive Kontrollgruppe erhielt 2,75 mg/ml Vitamin E, die Blindgruppe und die Modellgruppe erhielten ein gleiches Volumen normaler Kochsalzlösung durch intragastrische Verabreichung. 6 aufeinanderfolgende Wochen lang wurden sie schließlich hingerichtet und verschiedene Indikatoren wurden gemessen.

2.2 Bestimmung des SOD-, MDA- und NO-Gehalts in Rattenserum

Blut wurde aus der abdominalen Aorta der Ratte entnommen, 15 Minuten lang bei 3000 U/min zentrifugiert, um das Blutserum abzutrennen, und zur späteren Verwendung bei -20 Y gelagert. Die Bestimmung des MDA.SOD.NO-Gehalts erfolgt gemäß den Anweisungen des Testkits.

2.3 Einfluss auf das Gewicht von Immunorganen bei alternden Modellratten

Die Ratten in jeder Gruppe wurden gewogen und nach der Blutentnahme getötet. Milz und Thymus wurden entnommen, mit Kochsalzlösung gewaschen, getrocknet und gewogen, und die Milz- und Thymus-Koeffizienten wurden berechnet.

2.4 Beobachtung der Morphologie des Milzgewebes

Die gewogenen Milzen wurden mit 4 Prozent Paraformaldehyd fixiert, in Paraffin eingebettet, geschnitten und mit HE gefärbt. Die Veränderungen in pathologischen Schnitten der Milz in jeder Gruppe wurden unter einem Mikroskop beobachtet.

2.5 Statistische Methoden

Verwenden Sie die SPSS-Software, um eine einseitige Varianzanalyse und einen LSD-t-Test für den paarweisen Vergleich durchzuführen.

2.6 Nachweis von mtDNA-Mutationen im Gehirn

Das Rattenhirngewebe wurde mit flüssigem Stickstoff in einen Mörser gegeben, schnell zu Pulver zermahlen und dann gemäß den Kit-Anweisungen für die mtDNA-Extraktion aus Hirngewebe auf das Literaturverfahren bezogen.

Die PCR-Amplifikation weist die Deletion des mtDNA4834-Fragments nach: Die Primer beziehen sich auf die vollständige Sequenz des von Gada-leta et al. berichteten Ratten-mtDNA-Genoms. (1898), und die Primer werden von Shanghai Shengang Industrial Co., Ltd. synthetisiert. {13}}, P4: 5'-CCTCTTTTCTGATAGGCGGG-3,

PCR-Reaktionssystem: DNA-Template 1 |xL, 2 x Taq PCR MasterMix 25 |xL, ddH2O 20 jiL, je 2 Primer. Amplifikationsbedingungen: erste 95 Y-Denaturierung für 5 min; 95 T Denaturierung für 30 s, 56 T Annealing für 30 s, 72 T Verlängerung für 45 s, insgesamt 35 Zyklen; die letzte 72 T Verlängerung für 7 Minuten. Die amplifizierten Produkte wurden einer 1,5-prozentigen Agarose-Gelelektrophorese unterzogen.

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3 Ergebnisse und Analyse

3.1 Die Wirkung vonCistancheüber die körperlichen Anzeichen alternder Ratten

Verglichen mit der Blindgruppe zeigten die alternden Ratten dunkles und gelbes Fell, lockere und stumpfe Haut, lose Haut, Haarausfall, Appetitlosigkeit, reduzierte spontane Aktivität, Bewegungsverlangsamung, Wirbelsäulenwölbung, Lustlosigkeit, langsame Reaktion und andere Alterserscheinungen. Je länger die Injektionszeit, desto deutlicher die Symptome. Verglichen mit der Altersgruppe verbesserten sich der mentale Zustand, die Fellfarbe, der Appetit, die Körperform und die Reaktionsempfindlichkeit der Ratten mit zunehmender Verabreichungszeit in jeder VerabreichungsgruppeCistanche. Dabei gab es grundsätzlich keinen Unterschied zwischen der hochdosierten Produktgruppe und der Kontrollgruppe.

3.2 Die Wirkung vonCistancheüber den Gehalt an MDA, SOD und NO im Serum alternder Modellratten

Die Ergebnisse sind in Tabelle I dargestellt. Im Vergleich zur Blindgruppe war die Modellgruppe mda.no signifikant erhöht (P<0.01), and="" sod="" was="" significantly="" reduced="" (p=""><0.01); compared="" with="" the="" model="" group,="" each="" treatment="" group="" mda.no="" was="" significantly="" lower=""><0.01 or=""><0.05), sod="" has="" a="" rising="" trend,="" but="" it="" is="" not="" statistically="" significant;="" compared="" with="" the="" high-dose="" group="" of="">Cistanche, war der MDA.N0 der Cistanche-Gruppen mit mittlerer und niedriger Dosis signifikant reduziert (F<0.05 ),="" sod="" tends="" to="" increase;="" compared="" with="" the="" high-dose="" group="" of="" cistanche,="" the="" mda.no="" of="" the="" middle="" and="" low-dose="" groups="" of="" cistanche="" rose="" significantly="" (p=""><0.01 or="" p=""><0.05), and="" the="" sod="" tended="" to="" decrease;="" compared="" with="" the="" jiu="" nvrong="" gao="" dose="" group,="" the="" mda.no="" of="" the="" high-dose="" eggplant="" paste="" group="" increased="" significantly="" (p=""><0.01), and="" sod="" tended="" to="" decrease.="" this="" result="" shows="" that="" the="" high-dose="" group="" is="" better="" than="" the="" low-dose="" group="" compared="" with="" different="" dose="" groups,="" and="" the="" treatment="" effect="" of="" the="" product="" group="" is="" better="" than="" that="" of="" the="" raw="" product="" group="" compared="" with="" the="" same="" dose="" group.="">

3.3 DieWirkung von Cistancheüber die Immunfunktion alternder Modellratten Chi

3.3.1 Die Wirkung von Cistanche auf den Milzindex und den Thymusindex von alternden Modellratten

Die Ergebnisse sind in Tabelle 2 dargestellt. Verglichen mit der Blindgruppe beträgt der Koeffizient von Thymus und Milz in der Modellgruppe g

Es gibt einen abnehmenden Trend, der jedoch statistisch nicht signifikant ist. Im Vergleich zur Modellgruppe waren die Thymus- und Milzkoeffizienten jeder Behandlungsgruppe signifikant erhöht (F<0.05); compared="" with="" the="" high-dose="" cistanche="">

Im Gruppenvergleich wurden die Thymus- und Milz-Koeffizienten der mittleren und niedrigen Dosisgruppen ermitteltCistanchehaben eine Tendenz zur Abnahme

Potenzial; im Vergleich zur HochdosisCistanche Deserticolahochdosierte Gruppe, Thymus und Milz der mittleren und niedrigdosierten Weinmädchenpastengruppe

Der viszerale Koeffizient hat einen abnehmenden Trend; im Vergleich zur HochdosisCistanche DeserticolaHochdosis-Gruppe, die Thymus- und Milz-Koeffizienten der HochdosisCistanche DeserticolaHochdosisgruppe haben einen abnehmenden Trend. Dieses Ergebnis zeigt, dass die hochdosierte Gruppe im Vergleich zu unterschiedlichen Dosisgruppen besser ist als die niedrigdosierte Gruppe und die Behandlungswirkung der Produktgruppe besser ist als die der Rohproduktgruppe im Vergleich zur gleichen Dosisgruppe.

Tabelle 1 Vergleich des SOD.MDA.NO-Gehalts im Blut von Ratten in jeder Gruppe (n. =8, x ± s)

Notiz:. Verglichen mit I Modellgruppe, P<005.><001; j="" air-day="" group="" comparison.=""><[)01; tlilll="" high-dose="" ether="" group="" jqi="" [i_low-dose="" group="" comparison.=""><005.><(). ()1;="" the="" high-dose="" product="" group="" is="" compared="" with="" the="" product="" tl="" and="" ff="" [journal="" f="" group.="" })=""><0.05.1l><(1o1; product="" high="" yanlian="" group="" q.="" pindaoli="" {group="" comparison.=""><005.><>

3.3.2 Die Wirkung von pathologischen Veränderungen in der Milz vonCistanchealternde Modellratten. Die leere Gruppe hat eine dünne und gleichmäßige Milzkapsel, klare Milzbälkchen ohne Schwellung, klare Trennung von rotem und weißem Fruchtfleisch, mehr Milzknötchen und die gleiche Größe, in der Mitte der Milz Die Anzahl der Zellen in der Lymphscheide um die Arteriolen ist dicht. In der Modellgruppe war die Milz verdickt, Trabekel und Cortex geschwollen, die rote und weiße Pulpa war unklar, die weiße Pulpa war signifikant reduziert, die Anzahl der Lymphozyten war reduziert, eine große Anzahl von Entzündungszellen war infiltriert und die Die morphologische Struktur wurde beschädigt. Obwohl die Größe der Milzknötchen in jeder Behandlungsgruppe unterschiedlich war, waren die weißen und roten Pulpengrenzen klar. Die Anzahl der Zellen in der Lymphscheide um die zentrale kleine Arterie der Milz war dicht, und die Morphologie und Struktur wurden wiederhergestellt. Darüber hinaus konnte die Gruppe der hochdosierten Destillateure die pathologischen Veränderungen verbessern. Es ist besser als die Vitamin-E-Gruppe, in der dieCistancheProdukt ist besser als die Rohproduktgruppe, und die hochdosierte Gruppe ist besser als die niedrigdosierte Gruppe. Siehe Beilage X-XI Beilage.1-10 ist die mtDNA in den Gehirnen von Ratten in der Blindgruppe, Modellgruppe, Kontrollgruppe und erhöhten Gruppe. mtDNA Abbildung 3 Elektrophoreseergebnisse von mtDNA-PCR-Amplifikationsprodukten im Rattenhirn (Primer PI.P2)

3.4 Deletion und Mutation von mtDNA im Gehirn

Gemäß den Primern P3 und P4 kann ein konservatives mtDNA-Fragment von etwa 770 bp erhalten werden. Aus Abbildung 2 können wir sehen, dass die Zielfragmente in allen 9 Bahnen amplifiziert wurden, was darauf hinweist, dass alle 9 Gruppen von mtDNA erfolgreich extrahiert wurden.

Determination of mtDNA4834 bp deletion mutation: If there is a rat mtDNA4834 bp deletion, primers P1 and P2 will amplify the 4834 bp loss and break the fusion gene fragment with a length of 597 bp. As shown in Figure 3, there is a clear DNA band between 500 l>p und 750 bp in den Bahnen 2, 4, 5, 7, 9 und 10. Die Fragmente wurden gewonnen und zur Sequenzierung an Hangzhou Baocheng Biotechnology Company geschickt. Verglichen mit der von Gadateta et al. (1989) bewiesen, dass es eine Deletion von mtDNA-Fragmenten von etwa 4000-5000 bp gibt. Daher zeigt es, dass im Gehirn der Modellgruppe etwa 4834 bp Deletion der mtDNA vorliegen. Die Spuren 1, 3 und 8 weisen keine Fragmente auf, was darauf hinweist, dass in 1, 3 und 8 keine Deletionen von mitochondrialen Fragmenten vorhanden sind. und die leere Gruppe, was darauf hindeutet, dass die hochdosierte Destillierhefe-Gruppe Anti-Aging-Wirkungen haben könnte. Siehe Abbildung 2~Abbildung 3.

1-10 ist die mtDNA in den Gehirnen von Ratten in der Blindgruppe, Modellgruppe, Kontrollgruppe und erhöhten Gruppe. mtDNA Abbildung 3 Elektrophoreseergebnisse von mtDNA-PCR-Amplifikationsprodukten im Rattenhirn (Primer PI.P2)

Cistanche: Anti-Aging

4. Diskussion

Das durch intragastrale Verabreichung von D-Galactose verursachte Alterungsmodell ist derzeit ein häufiger verwendetes Alterungsmodell. Das Modell reduziert vor allem die Aktivität einer Vielzahl von antioxidativen Enzymen, sodass während des Stoffwechsels des Körpers eine Vielzahl freier Radikale entstehen, die zur Alterung des Körpers führen. Die Veränderungen in der Gewebemorphologie ähneln denen der natürlichen Alterung ⑻. Eine große Anzahl von Experimenten hat gezeigt, dass D-Galactose einen abnormalen Anstieg des NO-Gehalts im Gehirn und in der Kleinhirnrinde und im Blut von alternden Mäusen verursacht. Die Ergebnisse dieser Studie bestätigten, dass der Blutgehalt alternder Ratten signifikant höher war als der der normalen Gruppe, was den in der Literatur berichteten Ergebnissen ähnlich war "-m.

In diesem Experiment wird die Anti-Aging-Wirkung des Alterungsmodells von Ratten vor und nach der Verarbeitung vonCistanchewurde gelernt. Die Ergebnisse zeigten das Serum-MDA und -N in den alternden Modellratten. Deutlich erhöht (P<0.01), sod="" significantly="" decreased="" (p=""><0.01), the="" model="" group="" thymus="" and="" spleen="" coefficients="" have="" a="" tendency="" to="" decrease,="" the="" spleen="" has="" obvious="" pathological="" damage,="" and="" mtdna="" in="" the="" brain="" is="" also="" missing.="" different="" processed="" meat="" ash="" can="" significantly="" reduce="" the="" levels="" of="" mda="" and="" no="" (/=""><0.01 or=""><0.05), sod="" has="" a="" rising="" trend,="" increase="" spleen="" index="" and="" thymus="" index,="" improve="" spleen="" pathological="" damage,="" and="" high="" mtdna="" in="" the="" brain="" the="" dose="" group="" and="" the="" positive="" drug="" group="" also="" did="" not="" appear="" to="" be="" missing.="" and="" the="" prepared="" meat="" puree="" is="" better="" than="" the="" raw="" meat="" puree,="" and="" the="" high-dose="" group="" is="" better="" than="" the="" low-dose="" group.="" research="" in="" recent="" years="" believes="" that="" aging="" is="" also="" related="" to="" the="" lipid="" peroxidation="" of="" biological="" membranes="" caused="" by="" free="" radicals.="" sod="" "'-e="" is="" an="" enzyme="" that="" scavenges="" superoxide="" free="" radicals.="" the="" older="" the="" body,="" the="" weaker="" the="" body's="" sod="" activity="" and="" the="" fewer="" antioxidants.="" this="" will="" increase="" the="" free="" radical="" damage="" factor="" mda,,4~,7],="" and="" eventually="" accelerate="" aging.="" in="" addition,="" the="" results="" of="" the="" thymus="" and="" spleen="" coefficients="" of="" aging="" model="" rats="" indicate="" that="" roujing="" rong="" can="" delay="" aging="" by="" improving="" the="" immune="" function="" of="" the="" body.="" the="" results="" of="" the="" study="" hope="" to="" provide="" a="" scientific="" basis="" for="" the="" clinical="" application="" of="">Cistanche.