ELOVL2 fördert die Krebsprogression durch Hemmung der Zellapoptose beim Nierenzellkarzinom
Mar 20, 2022
Abstrakt. NierenZellkarzinom (RCC) ist eine aggressive urogenitale Malignität, die mit einer schlechten Prognose in Verbindung gebracht wurde, insbesondere bei Patienten mit Metastasen. Seine wichtigsten Subtypen sind klarzelliges RCC (ccRCC), papilläres PCC (pRCC) und chromophobes RCC (chRCC). Das Vorhandensein von intrazellulären Lipidtröpfchen (LDs) gilt als Kennzeichen von ccRCC. Die Bedeutung eines veränderten Lipidstoffwechsels bei ccRCC wurde allgemein anerkannt. Die Verlängerung von sehr langkettigen Fettsäuren (ELOVL) katalysiert die Verlängerung von Fettsäuren (FAs), moduliert die Lipidzusammensetzung und ist für normale Körperfunktionen erforderlich. Die Beteiligung von Elongasen an RCC bleibt jedoch unklar. In der vorliegenden Studie wurde die Expression von ELOVL2 in ccRCC untersucht; insbesondere wurden in Primärtumoren hohe Konzentrationen von sieben ELOVLisoenzymen beobachtet. Bemerkenswerterweise wurden erhöhte ELOVL2-Expressionsspiegel sowohl bei ccRCC als auch bei pRCC und chRCC beobachtet. Darüber hinaus war ein höherer ELOVL2-Spiegel signifikant mit der erhöhten Inzidenz einer schlechten Prognose von Patienten mit ccRCC und pRCC assoziiert. Der CRISPR/Cas9--vermittelte Knockdown von ELOVL2 führte zur Unterdrückung der Elongation von langkettigen mehrfach ungesättigten FAs und einer erhöhten LD-Produktion inNieren-Krebszellen. Darüber hinaus führte die ELOVL2-Ablation zur Unterdrückung der Zellproliferation über die Induktion von Apoptose in vitro und zur Abschwächung des Tumorwachstums in vivo. Insgesamt liefert die vorliegende Studie neue Einblicke in die Tumorproliferationsmechanismen, die den Lipidstoffwechsel betreffen, und legt nahe, dass ELOVL2 ein attraktives neues Ziel für die RCC-Therapie sein könnte.
Schlüsselwörter:Nierenzellkarzinom, Lipidtröpfchen, Zellproliferation, Niere, Niere
Einführung
Das Nierenzellkarzinom (RCC) ist eine häufig auftretende und tödliche bösartige Erkrankung, die weltweit für etwa 2 Prozent aller Krebsfälle und damit verbundenen Todesfälle verantwortlich ist(1), wobei die wichtigsten Subtypen klarzelliges RCC (ccRCC), papilläres PCC (pRCC) und Chromophobie sind RCC (RCC). Von allen RCC-Subtypen ist das ccRCC die häufigste histologische Manifestation und seine Pathogenese ist durch die konstitutive Aktivierung von Hypoxie-induzierbaren Faktoren (HIFs) aufgrund des Funktionsverlusts im von Hippel-Lindau (VHL)-Tumorsuppressorgen gekennzeichnet (1). Es wurden verschiedene zielgerichtete Therapien gegen den vaskulären endothelialen Wachstumsfaktor (VEGF) oder das Target of Rapamycin (mTOR) bei Säugetieren und Immun-Checkpoint-Inhibitoren für metastasierende Erkrankungen entwickelt. Bei der Mehrzahl der Patienten ist jedoch ein Fortschreiten der Erkrankung unvermeidlich (1,2).
CISTANCHE WIRD DIE NIEREN-/RENALE DIALYSE VERBESSERN
Ein Kennzeichen von ccRCC ist die Fülle an intrazellulären Lipidtröpfchen (LDs), die aus einem neutralen Lipidkern bestehen, der Triglyceride (TGs) und Cholesterinester (CEs) enthält, die von einer Phospholipid-Monoschicht umgeben sind(3).LDs sind dynamische Organellen, die für die Lipidaufnahme verantwortlich sind und Speicherung und werden verwendet, um die Homöostase aufrechtzuerhalten, die Energieproduktion zu erleichtern und vor verschiedenen Arten von Stress zu schützen oder um die Membranbiogenese während des schnellen Tumorzellwachstums bei mehreren Krebsarten aufrechtzuerhalten (4). Tatsächlich haben frühere Studien gezeigt, dass LDs zu ccRCC beitragen Fortschreiten (5,6).
Es wurde berichtet, dass die Fettsäuren (FAs), die den Hauptbestandteil von Lipiden bilden, als Substrate für die Energiespeicherung, Membransynthese und die Produktion von Signalmolekülen dienen. Verlängerung und Entsättigung sind zentrale Schritte der De-Novo-Synthese von langkettigen FAs (LC-FAs), wobei die Länge und der Grad der Ungesättigtheit Determinanten der FA-Funktion und des metabolischen Schicksals sind (7). Stearoyl-CoA-Desaturase 1 (SCD1), ein Mitglied der Fettacyl-Desaturase-Familie, wurde bei ccRCC (6.8.9) ausführlich untersucht. Es wurde gezeigt, dass eine erhöhte SCD1-Expression die Lebensfähigkeit unterstützt, während ein niedermolekularer SCD1-Inhibitor (A939572) wurde gezeigt, dass es die Zellproliferation bei ccRCC unterdrückt (8.9). Darüber hinaus. Yang et al. (10) zeigten, dass Sterol Regulatory Element-Binding Protein 1 (SREBP1) die Lipid-Desaturation durch FA Acid Desat-Urase 1 (FADSI) vor der Aktivierung der NF-xB-Signalübertragung zur Förderung der Zellproliferation bei ccRCC förderte. Jedoch bleiben mögliche Rollen von Elongasen bei RCC unklar.
Es wurde berichtet, dass bei Säugetieren die anfänglichen und geschwindigkeitsbestimmenden FA-Kondensationsreaktionen durch eine Familie von Elongase-Enzymen katalysiert werden, die als Verlängerung sehr langkettiger FAs (ELOVL) bezeichnet werden. Bisher wurden sieben ELOVL-Mitglieder identifiziert, die allgemein in diejenigen unterteilt werden können, die spezifisch für gesättigte und einfach ungesättigte FAs (ELOVL1, ELOVL3, ELOVL6 und ELOVL7) oder für mehrfach ungesättigte FAs (PUFAs; ELOVL2, ELOVL4 und ELOVL5) sind. Lucarelli et al. (9) zeigten eine signifikante Akkumulation von PUFAs und eine erhöhte Expression von ELOVL2 und ELOVL5 in ccRCC. Bemerkenswerterweise wurde gezeigt, dass systemische Docosahexaensäure (DHA) endogen produziert wird und die De-novo-Lipogenese kontrolliert, während sie aufgrund der ELOVL2-Ablation auch die Lipidspeicherung unabhängig vom Sterol-regulatorischen Element-bindenden Transkriptionsfaktor 1 (SREBPF1) reguliert Mäuse (11). Darüber hinaus wurde gezeigt, dass die ELOVL2-Überexpression die LD-Akkumulation mit einer verstärkten FA-Aufnahme sowohl in der Präadipozyten-Zelllinie 3T3-LI als auch in F442A-Zellen fördert(12). Frühere In-vitro-Studien mit exogen verabreichtem DHA für Krebszellen. haben gezeigt, dass DHA antitumorigene, entzündungshemmende und pro-apoptotische Wirkungen auf Krebszellen ausübt (13-15). Eine mögliche Rolle von ELOVL2 bei der ccRCC-Progression durch die Modulation des Lipidstoffwechsels bleibt jedoch weitgehend unerforscht.
In der vorliegenden Studie wurden die Rollen von ELOVL2 im ccRCC-Fortschritt untersucht, indem die Transkriptionsprofilierung von primärem ccRCC und normal durchgeführt wurdeNiereProben, die zeigen, dass ELOVL2 in ccRCC überexprimiert und unter den ELOVL-Isoenzymen überrepräsentiert ist. Bemerkenswerterweise wurde ELOVL2 auch in ccRCC sowie in pRCC und RCC überexprimiert, was signifikant mit einer schlechten Prognose von Patienten mit CCR CCR pRCC assoziiert ist. Darüber hinaus wurde gezeigt, dass die ELOVL2-Hemmung den Lipidstoffwechsel beeinflusst und die Zellproliferation über die Förderung der Apoptose unterdrückt, zumindest teilweise durch die Störung der Homöostase des endoplasmatischen Retikulums (ER).NierenkrebsZellen. Die Ergebnisse der vorliegenden Studie deuten darauf hin, dass ELOVL2 ein potenzielles neues therapeutisches Ziel für die RCC-Behandlung sein könnte.
CISTANCHE WIRD NIEREN-/NIERENVERSAGEN VERBESSERN
Materialen und Methoden
Zelllinien und Kulturen. Die Zelllinien 293T (RCB2202) und OS-RC-2 (RCB0735) wurden vom RIKEN BioResource Center erworben, während die Zelllinien 786-O und ACHN von ATCC erworben wurden; SK-RC-52-Zellen waren ein freundliches Geschenk von Dr. J. G. Old (Memorial Sloan Kettering Cancer Center). RPTEC-Zelllinie, die aus Epithelzellen des Menschen gewonnen wirdNieren-proximaler Tubulus, wurde von Lonza Group, Ltd. (CC-2553) bezogen. Die ACHN-, 786-O-, SK-RC-52- und OS-RC-2-Zellen wurden in RPMI-1640-Medium, ergänzt mit 10 % fötalem Rinderserum (FBS), bei 37 °C mit einer 5 % befeuchteten CO2-Atmosphäre kultiviert. Die 293T-Zellen wurden in Dulbeccos modifiziertem Eagle-Medium, ergänzt mit 10 % fötalem Rinderserum (FBS), bei 37 °C in einer Atmosphäre mit 5 % befeuchtetem CO2 kultiviert. Die RPTEC-Zellen wurden darin kultiviertNieren-Epithelwachstumsmedium (REGM™) Bulletkit™ (CC‑3190; Lonza Bioscience) bei 37 °C mit einer 5 % befeuchteten CO2-Atmosphäre.
Patienten und ccRCC-Proben. RCC-Gewebe und angrenzendes normales GewebeNiereGewebe von 46 Patienten, die radikale oder partielle Nephrektomien erhielten, wurden zwischen 2006 und 2015 gemäß den von der Ethikkommission der Universität Tsukuba genehmigten Protokollen (Genehmigungs-Nr. H28-104) vom Krankenhaus der Universität Tsukuba entnommen. Alle Patienten gaben vor der Operation eine schriftliche Einverständniserklärung ab. Die Zuordnung der Tumorstadien erfolgte nach dem TNM-Staging der Union for International Cancer Control (16). Pathologische Grade wurden nach dem vierstufigen Fuhrman-Grading-System klassifiziert (17). Alle Patientencharakteristika sind in Tabelle SI RNA-Extraktion und cDNA-Synthese zusammengefasst. Gesamt-RNA wurde aus den gefrorenen Geweben extrahiert undNieren-Krebszellen unter Verwendung von TRIzol® Reagenz (Thermo Fisher Scientific, Inc.). Nach der RNA-Reinigung wurde die RNA dann mit einem High-Capacity cDNA Reverse Transcription Kit (Kat.-Nr. 4368814; Thermo Fisher Scientific, Inc.) gemäß den Anweisungen des Herstellers in cDNA revers transkribiert.
Reverse Transkription-quantitative Polymerase-Kettenreaktion (RT-qPCR). Die Genexpressionsniveaus wurden mit einem 7500 Fast Real-Time PCR-Gerät mit Fast SYBR-Green Master Mix (Thermo Fisher Scientific, Inc.) quantifiziert. Die Zyklusbedingungen waren wie folgt: Anfängliches Halten bei 95 °C für 20 Sekunden, 40 Zyklen bei 95 °C für 3 Sekunden und 60 °C für 30 Sekunden, gefolgt von einer Schmelzkurve im Bereich von 95 °C für 15 Sekunden bis 60 °C C für 1 min. Als interne Kontrolle wurde Hypoxanthin-Phosphoribosyltransferase 1 (HPRT1) verwendet. Alle Primersequenzen sind in Tabelle SII aufgeführt. Um Apoptose-assoziierte Gene zu bewerten, werden die relativen Expressionsniveaus der pro-apoptotischen Gene, Bcl-2-assoziiertes X-Protein (BAX), Bcl-2-homologer Antagonist/Killer (BAK), Phorbol-12-Myristat-13- Acetat-induziertes Protein 1 (PMAIP1/NOXA) und p53 hochregulierter Modulator der Apoptose (BBC3/PUMA) und des anti-apoptotischen Gens BCL2 und des Gens für das induzierte myeloische Leukämie-Zelldifferenzierungsprotein (MCL1) wurden analysiert. Die relativen Genexpressionsniveaus wurden mit der 2-ΔΔCq-Methode quantifiziert (18).
Western-Blot-Analyse. Die Western-Blot-Analyse wurde wie zuvor beschrieben durchgeführt (19). Die Zellen wurden in Lysepuffer (20 mM Tris-HCl (pH 7,5), 150 mM NaCl, 1 mM EDTA, 1 % SDS und Protease-Inhibitor) lysiert und auf Eis beschallt. Die Lysate wurden bei 1,000 xg für 20 min bei 4˚C zentrifugiert und die Überstände wurden als Proben gesammelt. Die Proteinquantifizierung der Proben wurde mit dem Quick Start Bradford Protein Assay (Kat.-Nr. 5000202JA; Bio‑Rad Laboratories, Inc.) durchgeführt. Die Proben wurden einer 10-prozentigen SDS-PAGE unterzogen und die getrennten Produkte anschließend auf PVDF-Membranen übertragen.
CISTANCHE WIRD NIEREN-/NIERENINFEKTIONEN VERBESSERN
Die Membranen wurden mit ECL Prime Blocking Agent (Kat. Nr. RPN418V; Cytiva) für 60 min bei Raumtemperatur blockiert. Die Membranen wurden dann über Nacht bei 4 °C mit den folgenden Antikörpern inkubiert: Anti-Serin/Threonin-Proteinkinase/Endoribonuklease-Inositol-erforderndes Enzym 1 (Anti-IRE1; 1:200; Nr. 3294, Cell Signaling Technology, Inc.), anti-phosphoryliertes IRE1 (anti-p-IRE1; 1:200; NB100-2323, Novus Biologicals, LCC), anti-C/EBP-homologes Protein (anti-CHOP; 1:200; MA1-250, Thermo Fisher Scientific, Inc .). Anti-Kaninchen- oder Anti-Maus-Immunglobulin-G-HRP-gekoppelter, ganzer Esel-Ab (Kat.-Nr. NA934V, NA931VS; GE Healthcare; Cytiva) wurden bei 1:10 000 als sekundäre Antikörper verwendet. Die Western Blots wurden mit ImmunoStar® Zeta (FUJIFILM Wako Pure Chemical Corporation) unter Verwendung eines Fujifilm LAS‑4000 Imager und LAS400IR (FUJIFILM Wako Pure Chemical Corporation) sichtbar gemacht. ‑Aktin wurde als interne Kontrolle verwendet (1:10.000, Kat.-Nr. A5316; Sigma‑Aldrich).
Bioinformatische Analyse der Genexpression. Klinische und RNA-Sequenzierungsdaten (RNA-seq) von Primärtumoren, die von Patienten mit RCC in der Datenbank The Cancer Genome Atlas (TCGA) gesammelt wurden, wurden vom Genomic Data Commons (GDC) Data Portal (20) heruntergeladen. Insgesamt wurden 1.005 (880 erkrankte und 125 Kontroll-) Proben untersucht, darunter 530 erkrankte und 71 Kontrollproben für dieNiere Nierenklarzellige Karzinom-Kohorte (KIRC; ccRCC), 286 erkrankte und 31 gesunde Proben für den GebärmutterhalsNiere NierenPapillarzellkarzinom-Kohorte (KIRP; pRCC) und 64 erkrankte und 23 gesunde Proben für die Nieren-Chromophobe-Kohorte (KICH; chRCC). Die ELOVL2-Genexpression in den Urogenitalkrebsproben wurde unter Verwendung der Gene Expression database of Normal and Tumor tissues (GENT2) analysiert. Genexpressionsdaten wurden aus dem öffentlichen Repository Gene Expression Omnibus (GEO) der Plattform U133 Plus 2 (GPL570) (http://gent2.appex.kr/gent2/) (21) heruntergeladen.
Plasmide und lentivirale Transduktion. Kleine Haarnadel-RNAs (shRNAs) für ELOVL2, die in früheren Studien charakterisiert wurden (22, 23), wurden in den lentiviralen Vektor pLKO.1 (Plasmid #8453; Addgene, Inc.) subkloniert. Die bei der Konstruktion des shRNA-Vektors verwendeten Oligonukleotidsequenzen sind in Tabelle SIII aufgeführt. Lentiviren wurden in 293T-Zellen durch Co-Transfektion von vier Plasmiden in trans erzeugt, darunter der lentivirale Vektor (pLKO-shControl oder pLKO-shELOVL2), pMDLg/pRRE (Plasmid Nr. 12251; Addgene, Inc.), pRSV-Rev (Plasmid Nr. 12253 ; Addgene, Inc.) und pMD2.G (Plasmid Nr. 12259; Addgene, Inc.) unter Verwendung von Lipofectamine 2000® Transfektionsreagens (Thermo Fisher Scientific, Inc.). 48 h nach der Transfektion wurden virushaltige Überstände gesammelt und zur Infektion durch einen 0,45-µm-Filter filtriert. Für virale Transduktionen wurden pLKO-shControl- oder pLKO-shELOVL2-Lentiviren mit den 786-O-, ACHN- und SK-RC-52-Zellen über Nacht bei 37 °C in einem befeuchteten Zellkulturinkubator inkubiert. Die Zellen wurden 24 h nach der Infektion in Gegenwart von Puromycin selektiert. Um Subklone zu stabilisieren, wurden Zellen in Medium mit Puromycin für 1 Monat bei 37 °C in einem befeuchteten Zellkulturinkubator kultiviert und überlebende Pools wurden für Expressions- und Proliferationsanalysen verwendet.
Für Überexpressionsexperimente wurden die OSRC‑2-Zellen mit dem leeren pCMV6-Vektor (Plasmid Nr. PS100001; Origene Technologies, Inc.) oder pCMV6‑ELOVL2 (Plasmid Nr. RC209232; Origene Technologies, Inc.) bei 37 °C in einer befeuchteten Zellkultur transfiziert Inkubator, unter Verwendung von Lipofectamine 3000 ® -Transfektionsreagenz (Thermo Fisher Scientific, Inc.), gemäß den Anweisungen des Herstellers. Die Zellen wurden 48 h nach der Transfektion für die angegebenen Assays verwendet. CRISPR/Cas9-Design und Klonen. Das Plasmid pX330-U6-Chimeric_BB-CBh-hSpCas9 (pX330) war ein Geschenk von Feng Zhang (Addgene, Inc.; Plasmid Nr. 42230) (24). CRISPR Single‑Guide (sg) Sequenzen für ELOVL2 wurden mit dem CRISPR Design Tool (GE Healthcare Dharmacon, Inc.;‑discovery.com/gene-editing/crispr-cas9/crispr-design-tool/), vor dem Klonen in pX330. Die CRISPR-Führungssequenz für Einzelführungskontrolle (sgControl) wurde zuvor entwickelt (25). Die Oligonukleotidsequenzen der Single-Guide-RNAs (sgRNAs) sind in Tabelle SIII aufgelistet
Die ACHN-Zellen wurden dann in Platten mit 6 Vertiefungen (1,4 x 105 Zellen/Vertiefung) ausgesät und 2 h später mit 2 µg pX330-exprimierter sgRNAs und 0,2 µg pCI-neo-Vektor (Promega Corporation; Kat. Nr. E1841) bei 37 °C in einem befeuchteten Zellkulturinkubator unter Verwendung von FuGENE HD (Promega Corporation; Kat. Nr. E2312). 24 h nach der Transfektion wurden 7 bis 10 Tage lang 400 µg/ml G418 aufgetragen und die Zellen konnten sich 2 oder 3 Tage lang erholen. Als sich die Zellen der Konfluenz näherten, wurden sie spärlich in 10-cm-Schalen ausgesät. Nach 2 oder 3 Wochen wurden erkennbare Kolonien unter Verwendung von Klonierungsscheiben (MilliporeSigma; Kat.-Nr. Z374431-100EA) isoliert. Einzelne Klone wurden expandiert und auf Knockout-Status durch Sanger-Sequenzierung für den Zielbereich bewertet.
CISTANCHE WIRD NIEREN-/NIERENSCHMERZEN VERBESSERN
Zellproliferationsassays. Die Zellproliferation wurde unter Verwendung des MTT-Assays mit einem Cell Counting Kit-8 (CCK-8; Dojindo Molecular Technologies, Inc.) gemäß den Anweisungen des Herstellers bewertet. Kurz gesagt, die Zellen wurden in Platten mit 96 Vertiefungen ausgesät und 1 0 µl WST-8 wurden nach 72 h hinzugefügt. Die OD460 wurde nach einer einstündigen Inkubation bei 37 °C gemessen. Subkutane Xenotransplantation. Nackte (nu/nu) weibliche BALB/c-Mäuse (n=12; 6–8 Wochen alt) wurden von Charles River Laboratories, Inc. gekauft. Die Mäuse wurden unter spezifischen pathogenfreien Bedingungen in einem 12- h Hell/Dunkel-Zyklus, mit ad libitum Zugang zu Nahrung und Wasser. Für subkutane Xenotransplantat-Assays wurden 1 x 107 Zellen, suspendiert in 100 µl PBS, subkutan in die rechte Flanke unter Verwendung einer 24G-Nadel injiziert, und die Tumorvolumina wurden einmal pro Woche gemessen. Das Tumorvolumen wurde nach folgender Formel berechnet: mm3=Länge x Breite x Höhe x 0,52 (26). Nach 90 Tagen wurden alle Tiere getötet und die Xenotransplantat-Tumoren herausgeschnitten. Die Tiere wurden mit 2 Prozent Isofluran anästhesiert, bevor sie durch zervikale Dislokation eingeschläfert wurden
Formalinfixierte und in Paraffin eingebettete (FFPE) Proben der Xenograft-Tumoren wurden vor der Entparaffinierung und Rehydrierung in 4 µm dicke Schnitte geschnitten. Für die Antigengewinnung wurden die Schnitte 21 min lang in einem Zitronensäurepuffer mit Mikrowelle vorbehandelt. Nach dem Antigen-Retrieval-Verfahren wurde die endogene Peroxidase-Aktivität mit 3 % H2O2 für 25 Minuten blockiert und die Objektträger wurden mit Ki-67-Antikörper (1:200; Dako; Agilent Technologies, Inc.; M7240) über Nacht bei 4 °C inkubiert. Die immunhistochemische Reaktion wurde unter Verwendung des sekundären Antikörpers Histofine Simple Stain MAX PO® (Nichirei Biosciences, Inc.; Kat.-Nr. 424151) unter Verwendung von Diaminobenzidin als Chromogen sichtbar gemacht. Alle Tierversuche wurden vom Animal Experiment Committee der University of Tsukuba genehmigt und alle Experimente wurden gemäß den Richtlinien der Tierversuchsverordnung der University of Tsukuba (Genehmigung Nr. 20‑370) durchgeführt. Apoptose-Assays. Die Apoptose wurde mit dem Caspase-Glo® 3/7 Assay System (Promega Corporation; Kat.-Nr. G8090), dem Annexin-V-FLUOS-Färbekit (Roche Diagnostics; Kat.-Nr. 11858777001) und JC-1 Mitochondrial Membrane Potential bewertet Assay-Kit (Cayman Chemical Company; Kat.-Nr. 10009172), gemäß den Anweisungen des Herstellers.
Färbung von LDs. Die Zellen wurden auf Deckgläschen aus Glas in 60-mm-Schalen ausgesät und mit Ölsäure (200 µM)-haltigem Medium bei 37 °C über Nacht in einem Inkubator mit 5 % CO 2 kultiviert. Das Medium wurde dann abgesaugt und die Zellen wurden vor der Fixierung mit 4 Prozent Formaldehyd (FUJIFILM Wako Pure Chemical Corporation) für 5 min bei Raumtemperatur zweimal mit PBS gewaschen. Die Zellen wurden dann zweimal mit PBS gewaschen und mit 0,5 µM Lipi‑Green (Dojindo Molecular Technologies, Inc.) für 30 Minuten im Dunkeln bei 37 °C inkubiert. Danach wurden die Zellen zweimal mit PBS gewaschen und die Deckgläser wurden unter Verwendung von VECTASHIELD® Antifade Mounting Medium with DAPI (Vector Laboratories, Inc.; Kat.-Nr. H-1200) auf Glasobjektträger montiert. Bilder der gefärbten Zellen wurden mit einem BZ-X710-Fluoreszenzmikroskop (Keyence Corporation) aufgenommen. Lebende Zellen wurden 30 Minuten lang mit 0,5 µM Lipi-Green in ausgewogener Hanks-Salzlösung (HBSS) inkubiert, bevor sie zweimal in HBSS gewaschen, in 1 mM EDTA/PBS (pH 8,0) mit 0,5 % BSA resuspendiert und durch ein Zellsieb geleitet wurden . Die Zellen wurden auf einem Gallios-Durchflusszytometer (Beckman-Coulter, Inc.) analysiert, und die Daten wurden unter Verwendung der FlowJo v10-Software (FlowJo LLC) analysiert.
ER-Tracker-Färbung. Die ACHN-Zellen (ACHN/sgControl, ACHN/sgELOVL2-1 und ACHN/sgELOVL2-2) wurden auf Deckgläschen aus Glas in 6{{20}}-mm-Schalen ausgesät und 48 h lang bei 37 ˚C kultiviert ein Inkubator mit 5 % CO 2 . Das Medium wurde dann abgesaugt und die Zellen wurden zweimal mit HBSS gewaschen, bevor sie mit 4 % Formaldehyd (FUJIFILM Wako Pure Chemical Corporation) für 5 min bei Raumtemperatur fixiert wurden. Die Zellen wurden dann zweimal mit HBSS gewaschen und mit 500 nM ER Tracker Red (Thermo Fisher Scientific, Inc.; Kat.-Nr. E34250) für 2 h im Dunkeln bei 37 °C inkubiert. Anschließend wurden die Zellen zweimal mit PBS gewaschen und die Deckgläser auf Glasobjektträger aufgezogen. Bilder der gefärbten Zellen wurden mit einem BZ-X710-Fluoreszenzmikroskop (Keyence Corporation) aufgenommen. Lebende Zellen wurden mit 500 nM ER Tracker in HBSS für 30 min inkubiert, bevor sie zweimal in HBSS gewaschen, in 1 mM EDTA/PBS (pH 8,0) mit 0,5 Prozent BSA resuspendiert und durch ein Zellsieb geleitet wurden. Die Zellen wurden auf einem Gallios-Durchflusszytometer analysiert, und die Daten wurden unter Verwendung der FlowJo v10-Software analysiert.
Gaschromatographie-Massenspektrometrie (GC-MS). Die Extraktion von Gesamtlipiden aus Zellpellets wurde wie zuvor beschrieben durchgeführt (27). Die Hydrolyse und Derivatisierung der Extrakte zu FA-Methylestern (FAMEs) wurde durchgeführt. Für die internen Standards von konjugierten BEs, C20:4 (ω-6), C20:5 (ω-3), C22:5 (ω-6), C22:5 (ω-3) und C22 :6 (ω-3) FAMEs wurden von MilliporeSigma oder Cayman Chemical Company bezogen. Die GC-MS-Analyse wurde unter Verwendung eines GCMS-TQ8040 (Shimadzu Corporation) mit einer Omegawax® Kapillar-GC-Säule (MilliporeSigma; Kat.-Nr. 24136) durchgeführt. Der Temperaturgradient wurde anfänglich von 70 auf 150 ˚C mit einer Rate von 20 ˚C pro Minute und von 150 auf 280 ˚C mit einer Rate von 8 ˚C pro Minute erhöht, bevor er von 280 auf 200 ˚C mit einer Rate von 15 abgesenkt wurde ˚C pro min. Die Probeninjektion wurde im splitlosen Modus mit 1,0 &mgr;l injizierter Probe durchgeführt. Für die MS-Analyse wurden die Ionenquelle und die Grenzflächentemperatur auf 200 °C bzw. 270 °C eingestellt. Die Daten wurden im Full-Scan-Modus (30-600 m/z) unter 70 eV Ionisationsspannung erfasst. FAMEs wurden anhand der Retentionszeit und des Elektronenionisations-MS (EI-MS)-Spektrums identifiziert, die mit Referenz-FAME-Standards übereinstimmen. Die relative Menge an FAMEs wurde durch Vergleich der durchschnittlichen Peakfläche pro Probenmasse berechnet. Jede Probe wurde dreimal unabhängig gemessen.
Statistische Analyse. Die Daten werden als Mittelwert ± Standardabweichung ausgedrückt. Alle statistischen Analysen wurden mit der Software JMP 10 (SAS Institute, Inc.), GraphPad Prism8 (GraphPad Software, Inc.) oder dem R-Paket (Version 4.0.2; RStudio, Inc.) durchgeführt. Die Signifikanz der Unterschiede zwischen den beiden Gruppen wurde mit dem ungepaarten Student-t-Test oder dem Mann-Whitney-Test bewertet. Die Signifikanz der Unterschiede zwischen den drei oder mehr Gruppen wurde unter Verwendung von Einweg-ANOVA mit Post-hoc-Vergleichen unter Verwendung des Dunnett-Tests oder des Kruskal-Wallis-Tests, gefolgt von einem Dunn-Post-hoc-Test mit Bonferroni-Korrektur, bewertet. Überlebenskurven wurden mit der Kaplan-Meier-Methode erstellt und die Differenz zwischen den Kurven wurde mit dem Log-Rank-Test bewertet. Die Patienten wurden unter Verwendung des Grenzwerts der mittleren Expressionswerte in zwei Gruppen eingeteilt, eine Gruppe mit niedriger oder hoher Expression. P<0.05 was="" considered="" to="" indicate="" a="" statistically="" significant="">
Ergebnisse
ELOVL2 wird in RCC stark überexprimiert. Die Häufigkeit von sieben ELOVL-Isoenzymen in entsprechenden Normal- und Tumorgeweben wurde zuerst in der vorliegenden Kohorte untersucht, was ergab, dass die ELOVL1-, ELOVL2-, ELOVL5- und ELOVL7-Expressionsniveaus in ccRCC-Geweben erhöht waren (Abb. 1A). Um diese Ergebnisse zu validieren, wurde die ELOVL-Isoenzym-Genexpression in entsprechenden normalen und Tumorgeweben unter Verwendung der TCGA-Datenbank (KIRC-Kohorte) untersucht. Es wurde bestätigt, dass die ELOVL2-mRNA-Expression in ccRCC-Geweben am stärksten und signifikant erhöht war (Abb. 1B; P<0.0001). subsequently,="" elovl2="" mrna="" expression="" was="" investigated="" further="" among="" three="" major="" histological="" subtypes="" of="" rcc="" using="" tcga="" database="" (kirc,="" kirp="" and="" kich="" cohorts).="" this="" revealed="" that="" elovl2="" was="" overexpressed="" in="" the="" prcc="" and="" chrcc="" tissues;="" however,="" its="" expression="" in="" ccrcc="" tissues="" was="" the="" highest="" among="" the="" histological="" subtypes="" (fig.="" 1c).="" moreover,="" the="" elovl2="">
Die Expressionsniveaus waren in den Zelllinien ACHN, 786-O und SK-RC-52 deutlich erhöht, obwohl die mRNA-Expressionsniveaus in der OS-RC-2-Zelllinie niedriger waren als in der RPTEC-Zelllinie (Abb. 1D). . Anschließend wurde die krebsassoziierte Veränderung der ELOVL2-Genexpression bei verschiedenen Krebsarten unter Verwendung der GENT2-Datenbank untersucht (Abb. 1E). Im Vergleich zu normalem Gewebe war die ELOVL2-Expression signifikant höher inNiere, Prostata-, Lungen- und Dickdarmkrebs, wohingegen die ELOVL2-Expression bei Blasen- oder Brustkrebs ähnlich war. Diese Ergebnisse deuten darauf hin, dass die Rollen von ELOVL-Isozymen je nach Krebsart unterschiedlich sind und dass eine ELOVL2-Überexpression mit der Karzinogenese oder dem Fortschreiten der Krankheit von RCC, insbesondere ccRCC, in Verbindung gebracht werden kann.
ELOVL2-Überexpression ist mit dem Fortschreiten von RCC assoziiert. Der Zusammenhang zwischen der Genexpression von ELOVL2 und den Stadien der Tumorknotenmetastasierung (TNM) in der KIRC-Kohorte wurde untersucht, um die klinische Bedeutung von ELOVL2 bei ccRCC zu klären. Die ELOVL2-Expression war bei lokal fortgeschrittener und metastasierter Erkrankung höher, obwohl ihre Expression nicht mit dem Status der Lymphknotenmetastasen assoziiert war (Abb. 2A-C). Insgesamt war die ELOVL2-Expression entsprechend dem klinischen Stadium erhöht (Abb. 2D). Anschließend wurde der Zusammenhang zwischen der Expression von ELOVL2 und der Prognose von Patienten mit RCC evaluiert, um die klinischen Auswirkungen von ccRCC aufzuklären. Laut Kaplan-Meier-Analyse zeigte sich, dass die hohe Expression von ELOVL2 in der vorliegenden Kohorte (P=0.0015, Abb. 2E) signifikant mit einer schlechten Prognose assoziiert war. Um diese Ergebnisse zu validieren, wurde der Zusammenhang zwischen der Expression von ELOVL2 und der Prognose von Patienten mit ccRCC in der KIRC-Kohorte weiter untersucht und es wurde gezeigt, dass in ähnlicher Weise die hohe Expression von ELOVL2 signifikant mit einer schlechten Prognose assoziiert war (P<0,01, fig.="" 2f).="" moreover,="" a="" high="" expression="" of="" elovl2="" was="" significantly="" associated="" with="" a="" poor="" prognosis="" of="" patients="" with="" prcc=""><0.0001, fig.="" 2g).="" however,="" this="" was="" not="" observed="" in="" patients="" with="" chrcc="" (fig.="" 2h).="" in="" total,="" the="" aforementioned="" results="" indicated="" that="" elovl2="" may="" mediate="" ccrcc="" and="" prcc="" disease="" progression,="" at="" least="">
ELOVL2 fördert die Vermehrung von Nierenkrebszellen. Um die Funktion von ELOVL2 bei der Proliferation von RCC-Zellen zu beurteilen, wurde der shRNA-Knockdown von ELOVL2 in 786-O-, ACHN- und SK-RC-52-Zellen durchgeführt. Die Effekte jeder shRNA wurden mittels RT-qPCR bewertet und eine signifikante Abnahme der ELOVL2-Expression wurde bestätigt (Abb. 3A). Anschließend wurden MTT-Assays durchgeführt, um die Auswirkungen des ELOVL2-Knockdowns auf die Zellproliferation zu untersuchen. Es wurde beobachtet, dass der Knockdown von ELOVL2 die Proliferation aller Zellen im Vergleich zu den mit Kontroll-shRNA transfizierten Zellen hemmte ( 3B ).
Im Gegensatz dazu wurde eine ELOVL2-Überexpression in den OS-RC‑2-Zellen induziert, einer Zelllinie mit einer niedrigeren basalen Expression von ELOVL2. Die Transfektionseffizienz wurde mittels RT-qPCR bewertet und eine signifikant erhöhte Expression von ELOVL2 wurde bestätigt (Abb. 3C). MTT-Assays zeigten, dass die Proliferation von ELOVL2-überexprimierenden Zellen im Vergleich zur Kontrollgruppe signifikant gefördert wurde (Abb. 3D), was darauf hindeutet, dass ELOVL2 ein Promotor der Proliferation von sein könnteNieren-Krebszellen.
Die ELOVL2-Ablation unterdrückt das Tumorwachstum in vivo, die Synthese von PUFAs und die Produktion von LDs inNieren-Krebszellen. Um die Rolle von ELOVL2 bei der RCC-Progression weiter zu klären, wurde eine ELOVL2-Knockout-ACHN-Zelllinie unter Verwendung eines CRISPR/Cas9-Systems (sgELOVL2-1 und sgELOVL2-2) etabliert (Abb. S1). In vitro wurde die Zellproliferation durch ELVOVL2-Ablation in den ACHN-Zellen signifikant verringert (Abb. S1). Noch wichtiger ist, dass die CRISPR/Cas9-vermittelte Ablation von ELOVL2 das Tumorwachstum unterdrückte, als die Zellen subkutan in Mäuse implantiert wurden (Abb. 4A). Die maximalen Volumina der subkutanen Xenotransplantat-Tumoren in ACHN/Kontrolle und ACHN/sgELOVL2‑2 am Tag der Tötung betrugen 241 bzw. 109 mm3. Zu beachten ist, dass sich alle Fremdtransplantattumoren in der ACHN/sgELOVL2-1-Gruppe 14 Tage nach der Transplantation spontan zurückbildeten und zum Zeitpunkt der Exstirpation nicht erkannt wurden. Der Ki-67-Index wurde auch in den mit Kontrolle oder sgELOVL2 transfizierten Xenograft-Tumoren untersucht, und es wurde beobachtet, dass die ACHN/sgELOVL2-2-Zellen einen signifikant niedrigeren Ki-67-Index aufwiesen als die ACHN/Kontrollzellen (Abb. 4B und C). . Diese Ergebnisse unterstützten weiter die Möglichkeit, dass ELOVL2 das Tumorwachstum in vivo verstärkt. Da sich ELOVL2 auf Chromosom 6p24.2 befindet und für ein Transmembranprotein des endoplasmatischen Retikulums kodiert, das die Elongation von C20–C24-PUFAs steuert (7), wurden die Gesamt-FA-Spiegel dann in den ACHN/sgControl- und ACHN/sgELOVL2-Zellen mittels GC-MS-Analyse bewertet (Abb. S2). Die Veränderung der LC-PUFA-Spiegel wird in Abb. 4D gezeigt. ELOVL2 ist ein essenzielles Enzym bei der endogenen Produktion von Docosahexaensäure (DHA, C22:6 n-3) (28,29) und wie erwartet wurden die DHA-Spiegel durch die Ablation von ELOVL2 signifikant gesenktNieren-Krebszellen. Außerdem die
Die Mengen anderer LC-PUFA-Spezies, einschließlich Arachidonsäure (AA, C20:4 n-6), Eicosapentaensäure (EPA) und Docosapentaensäure (DPA), waren ebenfalls signifikant verringert. Andererseits war die Produktion von DPA in den ACHN/sgELOVL2-Zellen nicht konsistent verändert. Die Menge an DPA in den ACHN-Zellen war sehr gering und wurde in mehreren Proben nicht nachgewiesen (Abb. S2). Da frühere Studien gezeigt haben, dass ELOVL2 die Akkumulation von LDs durch die Produktion von DHA fördert (11,12), wurde die Speicherung von LDs weiter unter Verwendung einer neutralen Lipidfärbung bewertet. Bemerkenswert ist, dass die Häufigkeit von LDs in den ACHN/sgELOVL2-Zellen im Vergleich zu den ACHN/sgControl-Zellen signifikant verringert war (Abb. 4E-4G), was darauf hindeutet, dass die Veränderung des Lipidstoffwechsels durch ELOVL2-Überexpression die RCC-Zellproliferation beeinflussen kann.
ELOVL2-Ablation induziert die Apoptose vonNieren-Krebszellen. Frühere Studien haben gezeigt, dass die Produktion von intrazellulären LDs die Apoptose unter stressigen Tumormikroumgebungen fördert (4). Daher wurde in der vorliegenden Studie die Apoptose in ACHN/sgControl- oder ACHN/sgELOVL2-Zellen bewertet und eine signifikant erhöhte Aktivität von Caspase 3/7 wurde in den ACHN/sgELOVL2-Zellen nachgewiesen ( 5A ). In ähnlicher Weise wurde eine größere Anzahl von apoptotischen ACHN/sgELOVL2-Zellen im Vergleich zu ACHN/sgKontrollzellen identifiziert, wie durch Annexin V/PI-Färbung belegt ( 5B ). Je nach zellulärem Stress führt die intrinsische Apoptose (30) zum Verlust des mitochondrialen Membranpotentials; Daher bewertete die vorliegende Studie das mitochondriale transmembrane elektrische Potenzial von ACHN/sgControl- oder ACHN/sgELOVL2-Zellen unter Verwendung von fluoreszierendem JC‑1 weiter. Das Aggregat/Monomer-Verhältnis war in den ACHN/sgELOVL2-Zellen signifikant verringert (Fig. 5C), was auf die Förderung der mitochondrialen Transmembranpolarisation und die Aktivierung des intrinsischen apoptotischen Signalwegs durch ELOVL2-Ablation hinweist. Genauer gesagt waren die Expressionsniveaus der pro-apoptotischen Gene (BAX, BAK, PUMA und NOXA) signifikant erhöht, während die Expressionsniveaus der anti-apoptotischen Gene (BCL2 und MCL1) aufgrund der ELOVL2-Ablation signifikant verringert waren (Abb. 5D). Diese Ergebnisse zeigten, dass ELOVL2 durch die Hemmung der Apoptose von Nierenkrebszellen zum zellulären Überleben beiträgt
Der Abbau der Lipidspeicherkapazität in LD-Form kann zum Zusammenbruch der ER-Homöostase führen, was die unfolded protein response (UPR) und zelluläre Apoptose auslöst (4,5). Um die Hypothese der Beteiligung der ELOVL2-Expression an der ER-Homöostase zu unterstützen, wurde daher eine ER-Tracker-Färbung in ACHN/sgControl- oder ACHN/sgELOVL2-Zellen durchgeführt. Nachfolgende ER-Bildgebung (Abb. 5E) und Quantifizierung mittels Durchflusszytometrie (Abb. 5F und G) zeigten eine ER-Expansion in den ACHN/sgELOVL2-Zellen aufgrund von ER-Stress. Zusätzlich förderte die ELOVL2-Ablation die Phosphorylierung von IRE1, einem Aktivator von UPR-Sensoren (Fig. 5H), während die Expression vonCHOP, das eine Hauptrolle bei der durch ER-Stress induzierten Apoptose spielt, wurde durch ELOVL2-Ablation hochreguliert (Abb. 5H). Insgesamt zeigten diese Ergebnisse, dass der ELOVL2-vermittelte Lipidstoffwechsel die Zellapoptose unterdrücktNieren-Krebszellen und schlug vor, dass die Störung der ER-Homöostase ein möglicher Mechanismus der Induktion sein könnte.
Diskussion
Die vorliegende Studie zeigte, dass ELVOL2 den Lipidstoffwechsel verändern und das Tumorwachstum durch die Hemmung der Apoptose von Nierenkrebszellen fördern kann. Darüber hinaus wurde beobachtet, dass die ELOVL2-Expression in RCC-Geweben erhöht war und dass
die höhere Expression von ELOVL2 war signifikant mit einer schlechten Prognose von Patienten mit RCC assoziiert. Es gibt begrenzte Studien zur Rolle von ELOVL2 bei der Krebsprogression (22,31,32) und ihre Ergebnisse sind umstritten. Simple et al. (22) zeigten, dass ELOVL2 die LC‑PUFA-Synthese förderte, wodurch eine effiziente EGFR-Signalübertragung und die Proliferation von Glioblastom-Stammzellen unterstützt wurden. Im Gegensatz dazu berichteten Kang et al. (31), dass die ELOVL2-Ablation die Zellmigration und die Koloniebildung von Brustkrebszellen fördern kann, und zeigten, dass eine verringerte ELOVL2-Expression mit einer schlechteren Prognose von Patientinnen mit Brustkrebs assoziiert war. Darüber hinaus berichteten Ding et al. (32), dass ELOVL2 die Proliferation von Neuroblastomzellen unterdrückt und mit günstigen Überlebensraten in Verbindung gebracht wurde. Gemäß den widersprüchlichen Ergebnissen früherer Studien wurde eine Multifunktionalität für ELOVL2 bei der Krebsprogression nachgewiesen, die je nach Krebsart deutlich variiert.
Ein veränderter Lipidstoffwechsel wirkt sich stark auf das Fortschreiten von Krebs aus, ein Effekt, der in den Ergebnissen der vorliegenden Studie beobachtet wurde und mit Forschungsergebnissen übereinstimmt, die die Rolle von ELOVL2 als primärem Controller des Elongationsprozesses von LC‑PUFAs und einem kritischen Enzym in der DHA-Biosynthese darstellen ( 7). In der vorliegenden Studie wurde gezeigt, dass endogene LC‑PUFAs,
einschließlich AA und DHA, waren aufgrund der ELOVL2-Ablation in Nierenkrebszellen verringert. In diesem Zusammenhang wurde bereits früher berichtet, dass die Hemmung des AA-Signalwegs durch Lipoxygenase (LOX)-Inhibitoren Apoptose induziert und die Lebensfähigkeit verringertNieren-Krebszellen in vitro (33,34). Obwohl die ELOVL2-Überexpressionsergebnisse der vorliegenden Studie mit diesen mechanistischen Befunden übereinstimmen, wurde jedoch zuvor berichtet, dass die DHA-Verabreichung die Proliferation und Invasion von Nierenkrebszellen in vitro hemmen kann (35, 36). Es ist jedoch bekannt, dass LC-PUFAs unterschiedliche und gegensätzliche Wirkungen auf das Fortschreiten von Krebs haben. Daher kann die Veränderung eines empfindlichen Gleichgewichts zwischen einer Vielzahl von LC-PUFAs aufgrund der Hemmung von ELOVL2 mit den unterschiedlichen Phänotypen in Verbindung gebracht werden, die bei verschiedenen Krebsarten beobachtet werden. Frühere Studien haben gezeigt, dass LDs durch die endogene Produktion von DHA durch ELOVL2 in Mäusen erhöht werden (11,12). In ähnlicher Weise wurde gezeigt, dass die ELOVL2-Ablation die Produktion von DHA und LDs in Nierenkrebszellen unterdrücken kann, was darauf hindeutet, dass eine ELOVL2-Überexpression die LD-Produktion durch endogene DHA-Produktion in RCC fördern könnte. Krebszellen werden oft unter raueren Umweltbedingungen (Makro und Mikro) gefunden, einschließlich Hypoxie und Nährstoffmangel, wachsen aber dennoch schnell unter solch starken Stressoren. Die Funktionen von LDs unter zellulären Stressbedingungen, wie die Aufrechterhaltung von Energie und Redox-Homöostase, die Regulierung der Autophagie, die Aufrechterhaltung der ER-Homöostase und der Schutz vor Lipotoxizität, wurden nachgewiesen (4).
Ackerman et al. (6) zeigten, dass LDs die Akkumulation von toxischen, gesättigten Lipiden während Hypoxie verhindern, indem sie die zelluläre Lipidsättigung durch den Austausch von TG‑residenten ungesättigten FAs in ccRCC puffern. Zelluläre Lipotoxizität aufgrund von gesättigten FS (SFA), einschließlich Palmitat (C16:0), kann Apoptose verursachen, was zum Tod von Krebszellen führt (37,38). Kürzlich wurde ELOVL2 als entscheidendes überlebensförderndes Enzym bezeichnet, das bei der Prävention von durch Glucolipotoxizität induzierter Zellapoptose hilft (39). Bemerkenswert ist, dass die durch die ELOVL2/DHA-Achse modifizierte Lipidpartitionierung zu einer ungiftigen Nutzung von SFA-Palmitat führt, indem dessen Transport in die Mitochondrien für die FA-Oxidation (FAO) durch einen CPT1-abhängigen Mechanismus begünstigt wird. Darüber hinaus zeigten Balaban et al., dass C4-2B-Prostatakrebszellen und MCF-7-Brustkrebszellen vor Palmitat-induzierter Apoptose durch mitochondriale FAO geschützt sind (37,38). Es wurde berichtet, dass während der durch Palmitat induzierten Lipotoxizität die zellulären Spiegel von antiapoptotischen Proteinen, einschließlich BCL-2 oder MCL-1, verringert sind (40,41), während Spiegel von proapoptotischen Proteinen, einschließlich PUMA oder NOXA, berichtet wurden erhöht werden (42,43). In der vorliegenden Studie wurde gezeigt, dass die ELOVL2-Ablation fördern kannNieren-Apoptose von Krebszellen durch die Veränderung von pro- und anti-apoptotischen Genen in ähnlicher Weise. Diese Ergebnisse deuten darauf hin, dass ELOVL2 Zellen vor lipotoxizitätsgetriebener Apoptose schützen könnte, um das Tumorwachstum bei RCC zu fördern.
Darüber hinaus wurde gezeigt, dass die ELOVL2-Ablation bei RCC ER-Stress und CHOP-Hochregulierung fördern kann, indem BCL-2 und MCL-1 herunterreguliert werden, während BAK und BAX über einen mitochondrienabhängigen Signalweg hochreguliert werden (44). Tatsächlich zeigten die Ergebnisse der vorliegenden Studie, dass pro- und anti-apoptotische Gene in ähnlicher Weise durch ELOVL2-Ablation verändert wurden. In Übereinstimmung mit den Ergebnissen der Studie von Qui et al. (5), die berichteten, dass HIF2/PLIN2-abhängige LDs die Resistenz gegen ER-Stress und das Zellüberleben bei ccRCC fördern, unterstützen diese kollektiven Ergebnisse die Förderung der zellulären Apoptose durch ER-Stress durch ELOVL2 Ablation einNieren-Krebszellen, Verringerung der LDs und Entfernung des zellulären Puffers gegen toxische Lipide.
Zusammenfassend hat die vorliegende Studie nach unserem besten Wissen zum ersten Mal gezeigt, dass ELOVL2 das Tumorwachstum durch die Hemmung der Apoptose über die Elongation von PUFAs fördert, zumindest teilweise durch Aufrechterhaltung der ER-Homöostase inNieren-Krebszellen. Zusammengenommen wurde vorgeschlagen, dass ELOVL2-induzierte LDs aufgrund mehrerer Schutzwirkungen gegen zellulären Stress bei RCC zum Fortschreiten von Krebs beitragen könnten. Darüber hinaus wurde vorgeschlagen, dass ELOVL2 ein attraktives potenzielles therapeutisches Ziel für Patienten mit RCC sein könnte.
