Entwicklung von Impfstoffen gegen Maul- und Klauenseuche und Herausforderungen bei der Herbeiführung einer langanhaltenden Immunität: Trends und aktuelle Perspektiven

Abstrakt:

Die Maul- und Klauenseuche (MKS) ist eine äußerst ansteckende Viruserkrankung bei Nutztieren, die durch das Maul- und Mausseuchevirus der Gattung Aphthovirus verursacht wird und schwerwiegende wirtschaftliche Auswirkungen sowohl auf einzelne Landwirte als auch auf die Volkswirtschaft hat. Viele Versuche, einen Impfstoff gegen MKS zu entwickeln, haben es nicht geschafft, eine sterile Immunität hervorzurufen. Die klassischen Methoden der Impfstoffherstellung beruhten auf der selektiven Anhäufung von Mutationen um Antigen- und Bindungsstellen herum. Umkehrung des Erregers durch positive Selektion und Quasi-Artenschwarm; die Verwendung dieser Methode ist für den Einsatz in nicht-endemischen Gebieten nicht anwendbar. Die chemische Abschwächung mit binärem Ethylenimin (BEI) schützte die Kapsidintegrität und erzeugte eine ausgeprägte Immunität gegen den Challenge-Stamm.

Die Maul- und Klauenseuche ist eine Viruserkrankung, die das Immunsystem eines Tieres beeinträchtigt. Das Maul- und Klauenseuche-Virus kann in tierische Zellen eindringen, Zellmembranen und innere Organe zerstören, die Immunfunktion von Tieren beeinträchtigen und sie anfällig für Infektionen durch andere Krankheitserreger machen.

Gleichzeitig kann die Impfung mit dem Maul- und Klauenseuche-Impfstoff die Immunität von Tieren verbessern und sie immun gegen das Virus machen. Nach erfolgreicher Impfung produziert das Tier Antikörper, und wenn es erneut dem Maul- und Klauenseuche-Virus ausgesetzt wird, kann es schnell eine Immunantwort auslösen, die eine weitere Infektion des Virus und die Entstehung der Krankheit wirksam verhindert passieren.

Daher ist die Verbesserung der Immunität von Tieren, insbesondere durch die Impfung gegen MKS, ein wichtiges Mittel zur Vorbeugung von MKS. Gleichzeitig können wissenschaftlich fundierte Fütterungsmanagement- und Hygienemaßnahmen sowie Maßnahmen zur Epidemieprävention auch dazu beitragen, die Ausbreitung des Virus und das Auftreten der Maul- und Klauenseuche zu verringern. Unter diesem Gesichtspunkt müssen wir darüber nachdenken, ob der menschliche Körper auf die Verbesserung der Immunität achten muss. Cistanche kann die Immunität des Menschen erheblich verbessern. Cistanche hat auch antivirale und krebshemmende Wirkungen, die die Kampffähigkeit des Immunsystems stärken und die Immunität des Körpers verbessern können.

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Bei der Impfung von Tieren wurden virale Antigene getestet, die chemisch synthetisiert oder in Viren, Plasmiden oder Pflanzen exprimiert wurden. Es wurde versucht, Tiere mit DNA-Impfstoffen zu immunisieren, die entweder strukturelle oder nichtstrukturelle Proteinantigene exprimieren. Der Einsatz von Interleukinen als genetisches Adjuvans für DNA-Impfstoffe hat eine vielversprechende Wirkung. Während die Herausforderungen bei der Induktion einer sterilen Immunität in nichtstrukturellen (NS) Proteinen von FMDV liegen, die für die Apoptose dendritischer Zellen verantwortlich sind und negative Auswirkungen auf lymphoproliferative Reaktionen haben, die zu einer vorübergehenden Immunsuppression führen. Darüber hinaus unterdrückte die Zerstörung des Wirtsproteintransports durch nichtstrukturelle Proteine ​​die CD8-plus-T-Zell-Proliferation. In dieser Überprüfung wurde versucht, mehrere Ansätze für Impfstoffentwicklungsversuche und die Engpässe bei der Herstellung steriler Immunität anzusprechen.

Schlüsselwörter:

MKS-Impfstoff, langanhaltende Immunität, sterile Immunität.

Hintergrund

Die Maul- und Klauenseuche (MKS) ist eine äußerst ansteckende Virusinfektion von Nutztieren, die durch das Maul- und Mausseuchevirus der Gattung Aphthovirus und der Familie Picornaviridae verursacht wird. Dies führt zu erheblichen wirtschaftlichen Verlusten.1,2 Haus- und Wildhuftiere sind stark von MKS betroffen.3–5 Die 5S-Protomere werden spontan von einzelnen reifen Proteinen produziert; VP1, VP3 und VP0, von denen sich fünf zu einem 12S-Pentamer zusammenfügen. Während das 75S-Viruskapsid durch den Zusammenbau der 12 Pentamere gebildet wird,6,7 wurde berichtet, dass das 146S-Antigen des vollständigen Maul- und Klauenseuchevirus (MKSV) eine sehr ähnliche Antigenspezifität wie das Viruskapsid aufweist.8,9 Maul- und Klauenseuche Das Virus der Mundkrankheit hat ein breites Wirtsspektrum, eine hohe genetische Variationsrate und große Antigenunterschiede und verfügt über sieben Serotypen (A, O, C, Asia1, SAT1, SAT2 und SAT3) und mehr als 100 Serosubtypen.10 Aufgrund des Quasi-Artenschwarms tauchen jedes Jahr auch viele neue Varianten auf. Es gibt keine Kreuzimmunität, die durch die sieben Serotypen hervorgerufen wird. Außerdem besteht nur eine teilweise Kreuzimmunität zwischen den verschiedenen Subtypen desselben Serotyps.11 Die Variabilität und der Polymorphismus von MKSV haben die Prävention und Kontrolle von MKS sehr schwierig gemacht.10 Rekombinantes MKS-Adenovirus, das P12A- und 3C-Proteine ​​verschiedener Serotypen exprimiert, hat dies getan zeigte eine schützende Wirkung.12–14

Klassische inaktivierte Impfstoffe weisen viele Mängel auf, darunter thermische Instabilität, kurzlebige Immunität, hohe Kosten, das Risiko einer Rekombination mit Wildstämmen und eine Umkehrung der Pathogenität.11,15,16

Trotz 90 Jahren Forschung gibt es keinen wirksamen Impfstoff, der eine sterile und solide Immunität gegen MKS erzeugt, aber die Krankheit bleibt in weiten Teilen der Welt enzootisch. Viele Versuche, einen Impfstoff gegen MKS zu entwickeln, haben es nicht geschafft, eine sterile Immunität hervorzurufen, mit geringem Kreuzserotyp-Schutz und einer unzureichenden Dauer der Immunität.17 Die klassischen Methoden der Impfstoffproduktion, wie die serielle Passage des Virus auf Zellkulturen,18 sind nicht zulässig Tiere und sein natürlicher Wirt konnten das Virus abschwächen. Dies ist auf die selektive Anhäufung von Mutationen um Antigen- und Bindungsstellen zurückzuführen.19–21 Die Verwendung der Umkehrung des Erregers durch positive Selektion und Quasi-Artenschwarm-Methode ist jedoch für den Einsatz in nicht-endemischen Gebieten nicht anwendbar.22 DNA und Proteintechnologien haben die Forschung durch die Modifizierung von Integrinrezeptoren23 durch den Einsatz synthetischer Peptide verbessert, die eine explizite Immunantwort im Tier auslösen können.24 T-Helferzell-Epitope, die der G-H-Schleifenregion intrinsisch sind, sind wirksame B-Zell-Epitope induzieren humorale Immunität.25 Die Verwendung von rekombinantem Interferon (IFN) und Rinderinterleukin 18 (IL-18) als Adjuvans hat die Langzeitimmunität bei Labortieren verbessert.26,27

In jüngster Zeit sind rekombinante Lebend-Vektor-DNA-Impfstoffe wirksame Induktoren zytotoxischer T-Lymphozyten (CTL).28,29 Um diesen Effekt bei MKS hervorzuheben, ist ein geeignetes Adjuvans erforderlich.30 Um diesen Effekt zu überwinden, hat die Rekombination der Ig-Superfamilie des Wirts und des MKS-Epitops das humorale verbessert und zelluläre Immunantwort des Tieres.

Das Engpassproblem bei der Induktion einer sterilen und langanhaltenden Immunität wird durch die Zerstörung des Wirtsproteintransports durch nichtstrukturelle (NS) Proteine, insbesondere 3A, behindert und löst daher keine Clusterdifferenzierung 8 positive (CD8 plus) T-Zell-Antwort aus Schwache CTL und das Virus bleiben im Tier bestehen.31 Integrinrezeptoren, die die Apoptose von aus dem Knochenmark stammenden dendritischen Zellen (DC) vermittelten, behinderten die angeborene Immunität des Wirts.32 Guzman et al.33 und Joshi et al.34 analysierten Ersatzreaktionen für die CTL-Abtötung, wie z. B. Proliferation oder Produktion von IFN durch CD8-exprimierende Zellen, aber viele CD8 plus-exprimierende Lymphozyten, die keine CTLs sind, produzieren IFN, einschließlich natürlicher Killerzellen (NK) und Untergruppen von Gamma-Delta-T-Zellen (δ). 35–37

Laut Oh et al.38 kann die IFN-Reaktion bei geimpften Rindern restimuliert werden, die am Tag der Belastung einen hohen Titer virusneutralisierender Antikörper im Blutkreislauf aufwiesen, was in direktem Zusammenhang mit dem impfstoffinduzierten Schutz durch IFN steht - und neutralisierender Antikörper. Darüber hinaus sind die CD4-plus-T-Zellen der wichtigste blühende Phänotyp und IFN-produzierende Zellen. Bei einer natürlichen Infektion kam es jedoch zu Lymphopenie, die sich mit der Spitzenvirämie und der IFN-Reaktion im Serum überlappte, während in vivo die Zahl der Plasmozyten-DC (pDC) und die in vitro pDC-IFN-Sekretion innerhalb von 2 Tagen nach der Infektion kurzzeitig zurückgingen.39 Produktion von IFN- aus Monozyten-abgeleitete DCs (MoDCs) und aus Haut abgeleitete DCs (Haut-DCs) werden in der akuten Phase der Infektion von Schweinen gehemmt.40 Es kam auch zu einer Apoptoseinduktion in unreifen dendritischen Zellen durch FMDV.32 Zur Überwindung der Immunpathogenese des Virus Durch die Steigerung der Antikörperproduktion und der T-Zell-Proliferation wurden durch synthetische Oligonukleotide als Adjuvanzien für Schleimhautimpfstoffe höhere CTL-Aktivität und IFN-Expression in CD8-T-Zellen erreicht.41 Das Hauptziel dieser Arbeit besteht darin, Trends in der Entwicklung von MKS-Impfstoffen zu überprüfen Herausforderungen bei der Induktion einer sterilen und langfristigen Immunität.

Abgeschwächter und inaktivierter Impfstoff

Es gab viele Versuche, abgeschwächte MKS-Lebendimpfstoffe durch herkömmliche Methoden wie serielle Passage in nicht-permissiven Tieren oder Zellkultur zu verbessern. Die Abschwächung wurde durch die Passage bei nicht anfälligen Arten wie Mäusen, Kaninchen und embryonierten Eiern erreicht, bis die Virulenz bei Rindern verloren ging. Serielle Passagen von FMDV C-S8c1 bei hoher Infektionsmultiplizität in der Zellkultur führten zu einem defekten Genom (C-S8p260), das Mäuse vollständig vor einer tödlichen Belastung mit FMDV C-S8c1 schützte und für Schweine nach der Impfung mit einer Einzeldosis sicher war von C-S8p260.42 Es induzierte auch hohe Titer neutralisierender Antikörper und aktivierter T-Zellen bei Schweinen.42

Die serielle Kontaktübertragung des hochpathogenen, an Schweine angepassten O Taiwan 97-Isolats bei Schweinen verringert die Virulenz nach der 14. Schweinepassage erheblich und verschwindet nach der 16. Passage.43 Aminosäureveränderungen während der In-vivo-Passagen waren höchst stille Substitutionen und Veränderungen in VP1 (1D) waren vorübergehend. Die Entwicklung eines MKS-Impfstoffs in nicht-permissiven Wirten kann dazu führen, dass der Wirkstoff andere zelluläre Rezeptoren als Arg-GlyAsp (RGD) verwendet. Ein Plaque-Test im BHK 21-Test könnte negativ ausfallen, während das Virus intakt ist.43 Austausch der Aminosäure Seitenketten, die durch eine andere Aminosäure in der Nähe der Kapsid-Untereinheit lokalisiert werden, könnten neue Disulfidbindungen oder elektrostatische Wechselwirkungen zwischen Untereinheitsschnittstellen bilden und werden entweder projiziert oder initiiert, um für Infektionen entbehrlich zu sein, indem sie die Hitzetoleranz der Impfstämme (44) unter Verwendung aktueller Verfahren von MKS-Impfstoffen erhöhen die weniger auf eine ideale Kühlkette angewiesen sind. FMDV C-S8p260-Stämme sind segmentiert und replikationskompetent, was die Grundlage für die Abschwächung von Impfstoffen mit zwei Sicherheitsbarrieren bilden kann.45

Die meisten Untersuchungen zeigen, dass die Inaktivierung von FMDV im Tiermodell mithilfe einer Aminosäuresubstitution in 2C in C-S8c1 nicht nachweisbar war, jedoch in einem geringen Anteil des an Meerschweinchen angepassten FMDV vorhanden war.46 Diese Aminosäuresubstitution wurde danach in der Viruspopulation schnell überwiegend die Wiedereinführung des Meerschweinchen-adaptierten Virus bei Schweinen. Diese Ergebnisse zeigen, wie die Einführung von Viren mit Minderheitsvarianten in einen künstlichen Wirt zu deren Dominanz führen kann, wenn die ursprüngliche Wirtsart erneut infiziert wird.47 Zusätzlich zu dieser positiven Selektion und dem Quasi-Artenschwarm kann sich der Impfstamm in einen pathogenen Stamm umwandeln. 22

Die Inaktivierung des Virus durch die Verwendung von Formalin und Endonuklease führt nicht zur Inaktivierung des Virus bzw. zum Abbau der antigenen Stellen.48 Binäres Ethylenimin (BEI) wurde auch zur Abschwächung des Virus unter Beibehaltung der Integrität des Kapsids verwendet.15,49 BEI- Inaktivierte FMD-Zellrezeptoren, Integrine, werden für die Bindung und Internalisierung in kultivierte Zellen verwendet. Die Interaktion wird durch einen Aminosäurerest vermittelt, der sich innerhalb der GH-Schleife des VP1-Kapsidproteins befindet.49 FMDV-spezifische monoklonale Antikörper oder ein synthetisches Peptid zeigten eine Bindung von BEI- inaktivierte FMD wurden durch ihre Co-Lokalisierung mit dem Markerprotein in BHK-21 internalisiert, vermittelt durch das Integrin-Bindungsmotiv RGD.50 Darüber hinaus hat die BEI-Inaktivierung keinen Einfluss auf die Antigenität der GH-Schleife.20,51 Die BEI-Inaktivierung, die erhaltene Virionarchitektur und die Rezeptoren begünstigten die Internalisierung des Virus in kultivierte Zellen sowie in vivo und werden durch die Integrinerkennung vermittelt.47,52,53 Die Gesamtvirusquantifizierung zeigt jedoch im Vergleich zu Formalin ein minimales Ergebnis Inaktivierung (65–71,6 Prozent), während die BEI-Inaktivierung 44,2 Prozent beträgt.49

Die sequentielle Passage von FMDV vom Typ C aus Schweinen und Meerschweinchen und die Beibehaltung bei Schweinen und säugenden Mäusen führt zu Aminosäureaustauschen (I2483T in 2C, Q443R in 3A und L1473P in VP1). Die ersetzte Aminosäure (L1473P) neben dem Integrin-bindenden RGD-Motiv verhinderte das Wachstum des Virus in verschiedenen Zelllinien und veränderte seine Antigenität.47 Eine weitere von Burman et al.20 durchgeführte Studie ergab, dass eine einzelne Aminosäureänderung im RGD plus 1 und RGD plus 4-Stellen hemmen die Virusanhaftung und Infektion, die durch v 6 oder v 8 erleichtert wird, aber das Virus nutzt v 3 für die Zellanheftung. Ersetzungen durch Methionin oder Arginin an der Bindungsstelle sind wirksame Inhibitoren für v 6. Zwei Leucinreste an den Stellen RGD plus 1 und RGD plus 4 stabilisierten die Bindung, abhängig von der Struktur unmittelbar C-terminal zur RGD.20,54 EDTA-resistente Bindung an v 6 ist ein Kennzeichen, und es wurde erwartet, dass der stabile Komplex mit seinem zellulären Rezeptor eine beträchtliche hohe MKS-Infektiosität hervorruft.21

Die Alaninsubstitution mit Leucinen an der ersten und vierten Position an den Stellen RGD plus 1 und RGD plus 4 führt zur Hemmung der Virusbindung und Virusanheftung an v 6 oder v 8. Das Virus nutzt jedoch v 3 für den Zelleintritt.20 Während Zellkulturadaptierte Stämme nutzen die Heparansulfat-Proteoglykane (HSPG) als alternativen Rezeptor. Die Bestätigung ihrer Ektodomänen und des Ligandenbindungszustands von Integrinen ist ein wichtiger Faktor für den Tropismus von Viren.54

Heparansulfat-bindende Viren internalisierten DC effektiv, präsentierten den Lymphozyten jedoch kein Antigen und lösten so eine FMDV-spezifische IgG-Reaktion aus.55 Diese Ergebnisse zeigen, dass die DC-Internalisierung von FMDV für Impfviren mit HS-Bindungskapazität am effizientesten ist, die HS-Bindung jedoch nicht ausschließliche Anforderung.

Der selektive Druck, der durch die humorale Immunantwort des Wirts ausgeübt wird, spielt eine wichtige Rolle sowohl bei der Auswahl als auch bei der Stabilisierung der antigenen FMDV-Varianten, was zu einer Veränderung des Zelltropismus führt. In-vitro-Tests ergaben, dass die parallele Passage von FMDV in Gegenwart subneutralisierender homologer Seren zur Aufrechterhaltung von Mutanten führte.56 Rindern wurde jedoch eine Vermehrung von FMD Typ A24 angeimpft, das eine SGD-Sequenz in der Zellrezeptor-Bindungsstelle enthielt Das Virus wuchs in BHK-21-Zellen schlecht und die Sequenz blieb während der Vermehrung in BHK-21-Zellen, die das bovine V 6-Integrin (BHK3 V 6) exprimierten, sowie in experimentell inokulierten und Kontaktrindern stabil erhalten .56

Von zwei unabhängigen Übertragungsketten bei Rindern kommt es zu genomischen Veränderungen aufgrund der sequentiellen Passage auf dem BHK-21-zelladaptierten (Heparansulfat-bindenden) Stamm von FMDV. Eine Wildtyp-Variante mit einer Aminosäuremutation bei VP1 356 wurde schnell für die In-vivo-Virusreplikation ausgewählt.57

Die Deletionsgene kodieren für das NS-Protein, das für die Virusreplikation in vitro nicht entscheidend ist. Dies ist eine alternative Technik zur Erzeugung attenuierter Lebendimpfstoffe. Um als Impfstoff nützlich zu sein, muss dieses Deletionsvirus jedoch noch in der Lage sein, sich in anfälligen Tieren zu vermehren. Der Vorteil dieses Ansatzes im Vergleich zur klassischen Methode der Abschwächung, die im Allgemeinen Mutationen an einer begrenzten Anzahl von Stellen einführt, besteht darin, dass das Risiko einer Umkehrung zur Virulenz erheblich verringert ist58 und NS-Proteine ​​​​wirksame T-Zell-Epitope sind.59

Die Wirkung wurde bei gentechnisch veränderten FMDV-Impfstoffstämmen mit einem gewissen Aminosäureaustausch an den Antigenstellen gezeigt, mit ähnlichen Wachstumseigenschaften wie das Wildvirus, das das Tier nachweislich vollständig vor einer Belastung schützt, aber die Fähigkeit zur Replikation in vitro aufweist.60

Der MKS-Notfallimpfstoff mit doppeltem Öladjuvans zeigte eine Verringerung der Virämie und der Virusschattierung und zeigte keine klinischen Symptome. Es gab einen konsistenten Nachweis von IL-6, IL-8 und IL-12 bei geimpften Tieren.61 Während andere Zytokine IL-1, IL-2, TNF , TGF und Interferone wurden nicht nachgewiesen; Dies zeigt, dass der Impfstoff weder eine systemische Entzündungsreaktion noch eine systemische Erhöhung der T-Lymphozytenaktivität hervorrief, was mit einem kurzlebigen Schutz gegen MKS zusammenhängt.61

Rekombinantes menschliches IL-2 ist ein starker humoraler Immuninduktor im murinen MKS-Modellimpfstoff.62 Geimpfte Tiere bleiben 7–8 Monate lang serokonvertiert positiv und systemische Konzentrationen der Zytokine (IL-6, IL{{5 }} und IL-12) nahmen nach der Impfung zu.63

Leere virale Kapside

Leere virale Kapside, auch als virusähnliche Partikel (VLP) bekannt, umfassen das gesamte Repertoire an immunogenen Stellen, die auf intakten Viren zu finden sind, verfügen jedoch nicht über infektiöse Nukleinsäuren und beinhalten die Klonierung des viralen Genoms, das für die Synthese, Verarbeitung und Assemblierung von Viren essentiell ist Strukturproteine ​​in leere virale Kapside (P1-2A- und 3Cpro-kodierende Gene; Abbildung 1).64 Leere Kapside werden auf natürliche Weise in vitro in Zellkulturen produziert, sind antigenisch ähnlich und immunogen.65

Die Verwendung des leeren Kapsidimpfstoffs ist ein vielversprechender Kandidat, da er die Verwendung des Virus bei der Impfstoffproduktion umgeht und die Konformation von Epitopen konserviert.45 Darüber hinaus besteht kein Risiko einer Umkehrung des Virus und einer Rekombination mit den Wildstämmen. Serumfreie, in Suspension wachsende Säugetierzellen wurden für die transiente Genexpression (TGE) von rekombinanten MKS-Leerkapsiden verwendet.66 Die Identifizierung geimpfter infizierter oder genesener Tiere ist mit der derzeit verfügbaren Technologie einfach.67–69

Untereinheit-Impfstoff

Der Subunit-Impfstoff enthält virale Antigene, die durch chemische Extraktion oder Bioexpression einer minimalen Menge nicht-viraler Antigene in einem Kulturmedium gewonnen werden.70 Forscher haben herausgefunden, dass VP1 eines der FMDV-Kapsidproteine ​​ist, das in den 1970er Jahren eine erhebliche Oberflächenexposition aufwies und jüngste Fortschritte in der strukturellen Virologie.71

Bei jüngsten Versuchen, abgeschwächte Impfstoffe herzustellen, wurde Gentechnik eingesetzt, um Teile des Genoms zu mutieren oder eine proteinkodierende Region von VP1 abzuschaffen. Unter Verwendung rekombinanter DNA wurde ein Virus konstruiert, dessen RGD-Rezeptorbindungsstelle auf VP1 FMDV entfernt hatte.72 Bei Mäusen oder Schweinen im Alter von 7- bis 10- Tagen war dieses Virus nicht in der Lage, sich an Zellen anzuheften und tat dies auch nicht Infektion auslösen.73

Das VP1-Kapsidprotein von FMDV und die carboxyterminale Region von VP1 verfügen über eine G-H-Schleife, die stark immunogen ist und den B-Zell-Epitopen entspricht. Ein chemisch synthetisiertes Peptid, das aus Regionen (Reste 141 bis 158) eines Virushüllenproteins (VP1) des FMDV-Serotyps O besteht, hat hohe Mengen neutralisierender Antikörper hervorgerufen und Rinder vor der intradermolingualen Inokulation infektiöser Viren geschützt,24 was auf die Bedeutung des G –H-Schleife bei der Auslösung einer humoralen Immunantwort. Das VP1 enthält auch die hypervariable Region und die immunogene Stelle; Die Nutzung des Standorts wäre die Grundlage für eine breite Immunogenität.74

Der Einbau von IFN als genetisches Adjuvans führte zu einem verzögerten Auftreten klinischer Symptome und zum Ausbruch einer Virämie.75 Ein rekombinantes Seidenraupen-Baculovirus, das für die P1-2A- und 3C-Protease von FMDV Asia 1 kodiert, war in der Lage, spezifische Antikörper zu produzieren bei geimpften und geschützten Tieren nach der Belastung mit einem virulenten homologen Virus wurden die klinischen Symptome gemildert und verzögert.64

Eine Einzeldosis des defekten Adenovirus 5 (Ad5), das die P1- und die 3C-kodierende Region des FMDV-Serotyps A (Ad5A24) enthielt, wurde induziert, was Antikörper neutralisierte und Schweine vor homologer Belastung schützte.76 Die Wirkung auf den zellulären Immunarm wurde jedoch nicht untersucht .

Sowohl für die Vacciniavirus- als auch für die Baculovirus-gesteuerte Expression leerer Kapside des A-Serotyps; Da sie rational konzipierte Mutationen enthielten, wurde die Stabilität in eukaryotischen Zellen erhöht.77 Diese Methode zur Herstellung von Impfantigenen bietet gegenüber aktuellen Technologien mehrere voraussichtliche Vorteile im Hinblick auf Produktionskosten, Infektionsrisiko und thermotoleranten Impfstoff.45

Humaner Adenovirus-Typ-5-Vektor, der Kapsidprotein (P1-2A und mutierte virale 3C-Protease) exprimiert, verleiht eine signifikante humorale, zelluläre und mukosale Immunität, die bei BALB/c-Mäusen hervorgerufen wird. Die Impfung von Meerschweinchen löste erhebliche neutralisierende Antikörper und Anti-FMDV-Immunglobulin A (IgA)-Antikörper aus, mit 100-prozentigem Schutz der Meerschweinchen vor der Infektion.78

Ein rekombinantes Hunde-Adenovirus Typ 2 (CAV2), das Kapsidproteine ​​(P1/3C) exprimiert (Abbildung 1), konnte bei Meerschweinchen eine starke humorale Immunantwort auslösen. Das Hunde-Adenovirus Typ 2 (CAV2)-exprimierende VP1-Protein löste jedoch bei Meerschweinchen oder Mäusen keine anhaltende Antikörperreaktion aus.79

Schweine, die mit Adenovirus 5 und dem Cytomegalovirus-Enhancer, der für A24-2B kodiert (Ad5-CI-A24-2BC), geimpft wurden, zeigten eine maximale neutralisierende Antikörperantwort bei 7–14 dpv und lösten eine höhere IgM-Produktion aus 7 dpi.14 Ein modifizierter Zytomegalievirus-Promotor verstärkte die Wirksamkeit des Vektors und steigerte die Zellinfektion in der Zellkultur. Die Gruppe, die den Impfstoff erhielt, war nach der Herausforderung vollständig geschützt.14

Durch die intramuskuläre Inokulation von Mäusen mit rekombinanten, rekombinanten Kapsidproteinen des FMDV-Baculovirus, geklont mit dem Cytomegalovirus-Immediate-Early-Enhancer als Promotor (CMV-IE), und einer T-Zell-Immunogen-kodierenden Region mit T-Zell-Epitopen wurden wirksam neutralisierende Antikörper und Gamma-Interferon induziert ( IFN- .80 P1- 2A- und 3C-kodierende Regionen des FMD-Serotyps A, die in Seidenraupenpuppen (Bombyx mori) exprimiert werden, konnten hohe Titer spezifischer Antikörper induzieren und waren vollständig vor einer virulenten homologen Virusbelastung geschützt.81

Das multiple antigene Peptidsystem ist im Vergleich zum einzelnen linearen Peptid der MKS-Impfantigene hoch immunogen.82 Synthetische Dendrimerpeptide, die zwei Kopien der wichtigsten MKSV-antigenen B-Zell-Antigenstelle [VP1 (140–158)] kovalent verknüpft enthalten an eine heterotypische T-Zell-Antigenstelle des Nichtstrukturproteins 3A [3A (21–35)], schützt Schweine nachweislich vor einer viralen Belastung.83 Dendrimerpeptid, das das heterotypische und hochkonservierte FMDV 3A reproduziert (21–35) Das T-Zell-Epitop hat auch die neutralisierenden Antikörper- und IFN-Reaktionen verbessert.84 Bei 70 Prozent der mit B2T geimpften Schweine wurde bei einer Virusexposition am Tag 25 nach der Immunisierung ein vollständiger Schutz – keine klinischen Anzeichen einer Krankheit – beobachtet.84

DNA-Impfstoffe

Die interne Ribosomeneintrittsstelle (IRES) des Enzephalomyokarditis-Virus (EMCV) wurde gelöscht und das L-Gen, das an der Zellabschaltung durch Proteolyse von eIF beteiligt ist, wurde entfernt46,85 und das EMCV-IRES, das nachweislich die Expressionseffizienz steigert, wurde entfernt wurde stromaufwärts der P1-Sequenzen eingefügt.86 DNA-Impfstoff, der P1-2A und GM-CSF als Adjuvans-induzierten robusten FMDV-spezifischen und neutralisierenden Antikörper kodiert und Zytokine IL indosiert-8 und IFN-Produktion bei Schweinen.87

DNA-Impfstoffe basierend auf viralen Minigenen, die den drei wichtigsten B- und T-Zell-FMDV-Epitopen von VP1 (Aminosäuresequenz 133–156), -3A (Aminosäuresequenz 11–40) und VP4 (20–34) entsprechen. Schützen Sie Mäuse, wenn zum Zeitpunkt der Herausforderung keine spezifischen Antikörper vorhanden sind.88

Intranasale Verabreichung des FMDV-DNA-Impfstoffs; Die Verwendung von Chitosan als Transportvehikel und IL-15 als molekularem Adjuvans hat eine mukosale und systemische Immunantwort mit verstärkter zellvermittelter Immunität (CMI) induziert, wie durch das höhere Maß an T-Zell-Proliferation und CTL-Reaktion gezeigt wird. und Expression von IFN- sowohl in CD4 plus- als auch CD8 plus-T-Zellen. 73

Mäuse, die mit Plasmiden geimpft wurden, die VP1 und IL9 als genetisches Adjuvans exprimieren und bei denen der Anti-Apoptose-Mechanismus ausgelöst wurde, entwickelten eine starke humorale Reaktion sowie einen hohen IFN- und Perforinspiegel in CD8 plus T-Zellen, jedoch nicht mit IL{{6} } in diesen T-Zellen. IL-9 regulierte die Expression des Beclin-Gens hoch und verhinderte die Apoptose von T-Zellen.89

Eine andere Studie ergab, dass der VP1-DNA-Impfstoff, der Interleukin-6 und IFN- exprimiert und als molekulare Adjuvantien verwendet wird, die antigenspezifischen zellvermittelten Reaktionen verbessert. Es induzierte auch einen hohen Titer an IgG2a/IgG1, IFN-, IL-4 und die Reifung dendritischer Zellen.90

Unter Verwendung von IL-2 als genetischem Adjuvans bei der Kodierung von DNA-Impfstoffen müssen zwei MKSV-VP1-Epitope (Aminosäurereste 141–160 und 200–213), die mehrere Epitope umfassen, sowohl die T-Zell-Proliferation als auch neutralisierende Antikörper gegen MKS bei Schweinen hervorrufen Verwendung von IL-2 als genetisches Adjuvans.91,92

Schweine, die mit dem Anti-FMDV-DNA-Impfstoffplasmid, das für P1-2A3C3D kodiert, und einem Plasmid, das den Schweine-B-Zell-Aktivierungsfaktor der TNF-Familie (BAFF) exprimiert, immunisiert wurden, förderten die Aktivierung der B-Zell-Reifung und den Wechsel der Immunglobulinklasse.93

Ein Replika-basierter DNA-Impfstoff mit regelmäßiger Auffrischimpfung bot eine effiziente Impfstrategie gegen MKSV.94 Der Einbau verschiedener antigener Ziele in DNA-Impfstoffe ist eine perfekte Möglichkeit, einen Antigencocktail in einer einzigen Impfstoffformulierung herzustellen. Mäuse, die mit drei Plasmiden immunisiert wurden, die das Antigen des Maul- und Klauenseuchevirus (MKSV), des Pseudorabiesvirus (PRV) und des klassischen Schweinepestvirus (CSFV) kodieren, haben vielversprechende Ergebnisse gezeigt.95

Die intramuskuläre Inokulation von Meerschweinchen mit DNA-Plasmiden, die FMDV exprimieren und eine Signalsequenz des inokulierten Schweine-IgG-Gens enthalten, zeigte eine neutralisierende Antikörperreaktion und die Milzzellproliferation nahm nach der Auffrischimpfung zu, die Tiere waren jedoch nicht vor einer viralen Belastung geschützt.96

DNA-Impfstoff, der für T-Zell-Epitope und B-Zell-Epitope von den Stellen 135–167 von VP1 kodiert und Stelle 1 die Regionen 141–160 (G–H-Schleife) und den Carboxylterminus von VP1 von FMDV Typ O umfasst, hat eine starke zelluläre Immunantwort hervorgerufen wie mit dem T-Zell-Proliferationsassay beobachtet.97

Die intranasale Verabreichung von FMDV-DNA-Impfstoff, der für Kapsidprotein kodiert, kationisches PLGA (Poly(lactid-co-glycolid) als Vehikel und bovines IL-6 als genetisches Adjuvans haben bei geimpften Tieren zu verstärkten mukosalen und systemischen Immunantworten geführt.98

DNA-Impfstoff, der Kapsidprotein (P1-2A, 3C und 3D) exprimiert, mit pGM-CSF geprimt und mit inaktiviertem FMDV-Antigen verstärkt, zeigte bei geimpften Schweinen ein erhebliches Maß an Kreuzserotyp-Reaktivität. In den Virusneutralisations- und ELISA-Tests wurde über ein signifikantes Maß an serotypübergreifender Reaktivität gegen A, C und Asia1 berichtet.99 Allerdings induzierte ein DNA-Impfstoff, der das VP1-Protein exprimierte und Antisense-RNA produzierte, die auf die 5ʹUTR von FMDV abzielte, eine spezifische Immunantwort bei den Geimpften Mäuse.72

Ein DNA-Impfstoff, der VP1 zusammen mit IL-15 (molekulares Adjuvans) exprimiert, steigerte die Schleimhautsekretion von IgA und Serum-IgG sowie die zellvermittelte Immunität (CMI), wie durch höhere Werte antigenspezifischer T-Zell-Proliferation und zytotoxischer T-Lymphozyten nachgewiesen wurde (CTL)-Reaktion und höhere Expression von IFN- sowohl in CD4 plus- als auch CD8 plus-T-Zellen, die die Milz- und Schleimhautstellen informieren.73

Rekombinante Impfstoffe werden durch Rekombination der Ig-Superfamilie des Wirts hergestellt und die viralen Epitope haben die humorale und zelluläre Immunantwort geimpfter Tiere verbessert. RNA-Impfstoffe sind wirksame IgG-Klassenschalter. Darüber hinaus wurde bei geimpften Mäusen auch ein hoher IgM-Titer beobachtet.100 Plasmid-DNA, die Epitope von FMDV enthält, weist bei Mäusen eine ideale Gewebeverteilung auf.101

Herausforderungen bei der Induktion einer lang anhaltenden Immunität

Nach einer Infektion mit verschiedenen FMDV-Serotypen kommt es zu einer signifikanten Veränderung der T-Lymphozyten-Subpopulationen, der funktionellen Kompetenz und der Häufigkeit.102 Bis 48 Stunden nach der Infektion (pi) kommt es zu einer Herunterregulierung der boCD4 plus- und boCD8 plus-T-Zellen. Allerdings wird bei FMDV-Serotyp O eine Herunterregulierung von boWC1-plus-T-Zellen bis zu 48 hp beobachtet. Lymphozyten von geimpften Tieren zeigten nach Exposition gegenüber FMDV eine signifikante Hochregulierung von boCD4-plus-, boCD8-plus- und boWC1-plus-T-Zellen. 102

Nach einer natürlichen Infektion kommt es bei verschiedenen Krankheitsverläufen zu einem signifikanten Anstieg der 3A-NS-Proteinexpression in Lymphozyten, was zu einer vorübergehenden Immunsuppression von CD4 plus- und CD8 plus-T-Zellen führt. 34

Die Zerstörung des Wirtsproteintransports durch NS-Proteine, insbesondere 3A, stört vollständig und löst daher keine CD8-plus-T-Zell-Antwort aus.31 Aufgrund der schwachen CTL blieb das Virus im Tier bestehen. Integrinrezeptoren vermitteln die aus dem Knochenmark stammende DC-Apoptose und behindern so die angeborene Immunität des Wirts.32 Ein weiteres wichtiges Phänomen, das die Immunität des Wirts beeinträchtigt, ist Lbpro, eine hochkonservierte Domäne, die eine wichtige Rolle spielt, indem sie die Ubiquitinierung wichtiger Signalmoleküle bei der Aktivierung des Typs hemmt I-IFN-Reaktion wie Retinsäure-induzierbares Gen I (RIG-I), TANK-bindende Kinase 1 (TBK1), TNF-Rezeptor-assoziierter Faktor 6 (TRAF6) und TRAF3.103 Dies verringert den Grad der sofortigen und frühen Initiierung von IFN mRNA- und IFN-stimulierte Genprodukte.102 Darüber hinaus blockiert 3Cpro den Intra-Golgi-Transport, indem es das für den Intra-Golgi-Transport erforderliche Protein abbaut.

Guzman et al.33 und Joshi et al.34 analysierten Ersatzreaktionen für die CTL-Abtötung, wie z. B. Proliferation oder Produktion von IFN durch CD8-exprimierende Zellen, über die berichtet wurde, aber viele CD8-plus-exprimierende Lymphozyten, die keine CTLs sind, die IFN produzieren, einschließlich NK-Zellen und Untergruppen von δ T -Zellen. 35–37,39,104

Die 10 Tage nach der Herausforderung mit Ad5-FMDV-3C ausgewertete CTL-Aktivität zeigte einen signifikanten Anstieg der CTL-Aktivität 10 Tage nach der Herausforderung im Vergleich zu den Boost-Werten, kehrte jedoch 17 Tage danach auf die Ausgangswerte zurück die Herausforderung.17 Ein Versuch, die CTL-Aktivität am Tag 4 zu bewerten, scheiterte jedoch daran, genügend Zellen zu erhalten. Dies war auf eine durch FMDV induzierte Lymphopenie und Immunpathologie zurückzuführen. Neben einem Rückgang der Langzeitpersistenz des MKS-Virus besteht ein positiver Zusammenhang zwischen der IFN-Reaktion und dem impfstoffinduzierten Schutz.38

Laut Oh et al.38 sind CD4-plus-T-Zellen der wichtigste sich vermehrende Phänotyp und die IFN-produzierenden Zellen.

Unabhängig vom FMDV-Serotyp erreichte das IFN- im Serum zwei bis drei Tage nach der Infektion seinen Höhepunkt, die Lymphopenie korrespondierte mit der höchsten Virämie und der IFN-Reaktion im Serum, und die Anzahl der zirkulierenden dendritischen Plasmozyten (pDC) und die In-vitro-pDC-IFN-Produktion sanken nach 48 Stunden vorübergehend. Unabhängig vom injizierten FMDV-Serotyp oder dem Alter des betroffenen Tieres wurde nie eine Infektion von Lymphozyten oder pDCs festgestellt.39

Die Bildung von IFN aus Monozyten-abgeleiteten DCs (MoDCs) und aus Haut abgeleiteten DCs (Haut-DCs) wird während der akuten Phase der Schweineinfektion unterdrückt. Diese Auswirkung geht mit einem Anstieg der Virustiter im Blut einher, diese Zellen werden jedoch nicht produktiv infiziert. Interessanterweise ändert sich die Fähigkeit dieser DCs, Partikel aufzunehmen und Antigene zu verarbeiten, nicht, was zeigt, dass Antigene ihre Fähigkeit, Partikel aufzunehmen und Antigene zu verarbeiten, nicht beeinträchtigen.35

Abschluss

Basierend auf der oben genannten Literatur- und Forschungslücke werden die folgenden Empfehlungen ausgesprochen. Die zelluläre Internalisierung, das Glykosylierungsmuster, die Antigenpräsentation und die Mechanismen der positiven Selektion (Entwicklung pathogener Stämme) der herkömmlichen Impfstoffe sollten untersucht werden. Durch den Impfstoff induziertes CD8 plus T CMI stärkt die langlebige Immunantwort und den Kreuzschutz. δ-T-Zellrezeptoren spielen eine Rolle bei der Pathogenese, Persistenz und CTL-Produktion des Immunsystems, die eingehend untersucht werden sollte. Rekombinantes Protein unter Verwendung eines Durchflusszytometers und eines ELISpot-ELISA zur Analyse der Internalisierung von Impfstoffpartikeln, der Antigenpräsentation und der Beurteilung der Kreuzkopplung zwischen antigenpräsentierenden Zellen.

Es sollten neue webbasierte Tools entwickelt werden, die die Auswirkungen von Seitenketten auf das B- oder T-Zell-Epitop zeigen. Der Einsatz von Infektions- und Impfstoffentwicklungs- und Wirksamkeitstests an Tiermodellen sollte eindeutig angestrebt werden, da es einen bemerkenswerten Unterschied zwischen den Integrinrezeptoren bei Labortieren sowie bei Schweinen und Wiederkäuern gibt. Die rechnerische Schätzung genomweiter CTL-Epitope durch die Integration von Epitop-Vermutungstools in die Berechnung einer großen Anzahl viraler Sequenzen und die anschließende In-vivo-Bewertung bieten einen großen Vorteil bei der Herstellung von Impfstoffen mit langanhaltendem Schutz und Kreuzschutzfähigkeit.

Abkürzungen

3A, Nichtstrukturelles Protein; Ad5, Adenovirus-5-Vektor; 3Cpro, 3C-Protease (Nichtstrukturprotein); BEI, Binäre Ethylenamine; BHK-Zelle, Babyhamster-Nierenzelle; CD4 plus, Clusterdifferenzierungsfaktor vier positiv; CD8 plus, Clusterdifferenzierungsfaktor acht positiv; cDNA, komplementäre DNA; CTL, zytotoxische T-Zellen; DC, dendritische Zelle; ELISA, Enzyme-linked Immunosorbent Assay; MKS, Maul- und Klauenseuche; MKSV, Maul- und Klauenseuche-Virus; GM-CSF, Granulozyten und Monozyten Koloniestimulierender Faktor; IFN-, Interferon alpha; IFN-, Interferon-Gamma; Ig, Immunglobulin; IL, Interleukin; LTR, lange terminale Wiederholung; NK-Zellen, natürliche Killerzellen; NS-Protein, nichtstrukturelles Protein; P1-2A, Gen für Strukturproteinvorläufer; P1-2A3C3D, viraler Strukturproteinvorläufer P1–2A und die Nichtstrukturproteine ​​3C und 3D; PBMC, mononukleäres peripheres Blut; RT-PCR, Reverse-Transkriptions-Polymerase-Kettenreaktion; SAT, südafrikanischer Typ; TGE, transiente Genexpression; TGF, Tumorwachstumsfaktor; TNF, Tumornekrosefaktor; Th-Zellen, T-Helferzellen; VP1, virales Protein 1; δ-T-Zellen, Gamma-Delta-T-Zellen.

Erklärung zur Datenfreigabe

Die in dieser Rezension verwendeten Daten sind zweitrangig und im Artikel enthalten.

Wissen

Ich bin dem Büro des Vizepräsidenten für Forschung und gemeinnützige Arbeit der Universität Gondar für die Bereitstellung von Materialien und finanzieller Unterstützung sehr dankbar. Ich danke auch dem College of Veterinary Medicine and Animal Sciences der University of Gondar für die zusätzliche Unterstützung der Einrichtung.

Finanzierung

Der Autor dankt dem Vizepräsidentenbüro der Universität Gondar, Forschung und Zivildienst.

Offenlegung

Der Autor erklärt, dass in dieser Arbeit keine Interessenkonflikte bestehen.

Verweise

1. Kitching P, Hammond J, Jeggo M, et al. Globale MKS-Kontrolle – ist das eine Option? Impfung. 2007;25(30):5660–5664. doi:10.1016/j. Impfstoff.2006.10.052

2. Raza S., Siddique K., Rabbani M. et al. Die mikrobielle Pathogenese in silico-Analyse von vier Strukturproteinen von Aphthovirus-Serotypen ergab signifikante B- und T-Zell-Epitope. Mikrobenpathogen. 2019;128 (August 2018):254–262. doi:10.1016/j.micpath.2019.01.007

3. Arzt J, Belsham GJ. Übertragung der Maul- und Klauenseuche von persistierend infizierten Trägerrindern auf naive Rinder durch Übertragung von oropharyngealer Flüssigkeit. Tierarztwelt. 2018;3:318. doi:10.1128/ mSphere.00365-318

4. Arzt J, Pacheco JM, Stenfeldt C. Pathogenese des virulenten und abgeschwächten Maul- und Klauenseuchevirus bei Rindern. Tierarztwelt. 2017;14:89. doi:10.1186/s12985-017-0758-759

5. Sobhy NM, Bayoumi YH, Mor SK, El-Zahar HI, Goyal SM. Ausbrüche der Maul- und Klauenseuche in Ägypten: molekulare Epidemiologie, Evolution und prognostische Bedeutung kardialer Biomarker. Int J Vet Sci Med. 2018;6(1):22–30. doi:10.1016/j. gerade.2018.02.001

6. Senthilkumaran C, Yang M, Bittner H, et al. Nachweis von Genom, Antigen und Antikörpern in Mundflüssigkeiten von Schweinen, die mit dem Maul- und Klauenseuche-Virus infiziert sind. Kann J Vet Res. 2017;81:82–90.

7. Palinski RM, Bertram MR. Erste Genomsequenz der Sublinie Ind2001e des Maul- und Klauenseuchevirus Serotyp O aus Südvietnam. Ankündigung von Microbiol Resour. 2019;8: e01424–18. doi:10.1128/mra.01424-1418

8. Pulido MR, Sobrino F, Borrego B, et al. Abgeschwächte RNA des Maul- und Klauenseuchevirus, die eine Deletion in der 3′-nichtkodierenden Region trägt, kann bei Schweinen Immunität hervorrufen. J Virol. 2009;83(8):3475–85. doi:10.1128/JVI.01836-08

9. Saravanan P, Iqbal Z, Selvaraj DPR, Aparna M, Umapathi V. Vergleich chemischer Extraktionsmethoden zur Bestimmung des 146S-Gehalts in öladjuvantierten Impfstoffen gegen Maul- und Klauenseuche. J Appl Microbiol. 2019;1(Rückert 1985):1–9. doi:10.1111/jam.14465

10. Jamal SM, Belsham GJ. Maul- und Klauenseuche: Vergangenheit, Gegenwart und Zukunft. Tierarzt Res. 2013;44(1):1–14. doi:10.1186/1297-9716- 44-116

11. Robinson L, Knight-Jones TJ, Charleston B, et al. Globale Aktualisierung der Maul- und Klauenseuche-Forschung und Lückenanalyse: 7 - Pathogenese und Molekularbiologie. Transbound Emerg Dis. 2016;63(1):63–71. doi:10.1111/tbed.12520

12. Sreenivasa BP, Mohapatra JK, Pauszek SJ, et al. Rekombinantes humanes Adenovirus-5, das Kapsidproteine ​​indischer Impfstämme des Maul- und Klauenseuchevirus exprimiert, löst bei Rindern eine wirksame Antikörperreaktion aus. Tierarzt Mikrobiol. 2017;203:196–201. doi:10.1016/ j.vetmic.2017.03.019

13. Neilan JG, Schutta C, Barrera J, et al. Wirksamkeit eines Adenovirus-übertragenen Maul- und Klauenseuche-Virus-Serotyp-A-Untereinheiten-Impfstoffs bei Rindern unter Verwendung eines direkten Kontaktübertragungsmodells. BMC Vet Res. 2018;14(1):1–9. doi:10.1186/s12917-018- 1582-1

14. Pena L, Pires M, Koster M, et al. Die Verabreichung eines Antigens der leeren Kapsiduntereinheit des Maul- und Klauenseuchevirus mit dem Nichtstrukturprotein 2B verbessert den Schutz von Schweinen. Impfung. 2008;26 (45):5689–5699. doi:10.1016/j.vaccine.2008.08.022

15. Barteling SJ, Cassim NI. Sehr schnelle (und sichere) Inaktivierung des Maul- und Klauenseuchevirus und der Enteroviren durch eine Kombination aus binärem Ethylenimin und Formaldehyd. Dev Biol (Basel). 2004;119:449–455

16. Rweyemamu MM, Umehara O, Giorgi W, Medeiros R, Neto DL, Baltazar M. Wirkung von Formaldehyd und binärem Ethylenimin (BEI) auf die Integrität des Kapsids des Maul- und Klauenseuchevirus. Rev Sci Tech. 1989;8(3):747–764. doi:10.20506/rst.8.3.425

17. Patch JR, Kenney M, Pacheco JM, Grubman MJ, Golde WT. Charakterisierung der zytotoxischen T-Lymphozytenfunktion nach Infektion und Impfung mit dem Maul- und Klauenseuchevirus. Virales Immunol. 2013;26(4):239–249. doi:10.1089/vim.2013.0011

18. Rodriguez-Calvo T, Ojosnegros S, Sanz-Ramos M, Garcia-Arriaza J, Escarmis C, Domingo E, Sevilla N. Neues Impfstoffdesign basierend auf defekten Genomen, die Merkmale abgeschwächter und inaktivierter Impfstoffe kombinieren. Plus eins. 2010;5(4):1–11. doi:10.1371/journal.pone.0010414

19. Núñez JI, Baranowski E, Molina N, et al. Säuresubstitution im Nichtstrukturprotein 3A kann die Anpassung des Maul- und Klauenseuchevirus an das Meerschweinchen vermitteln. J Virol. 2001. doi:10.1128/JVI.75.8.3977-3983.2001

20. Burman A, Clark S, Abrescia NGA, et al. Spezifität der VP1-GH-Schleife des Maul- und Klauenseuchevirus für v 6-Integrine. J Virol. 2006;80(19):9798–9810. doi:10.1128/JVI.00577-06

21. Dicara D, Burman A, Clark S, et al. Das Maul- und Klauenseuchevirus bildet mit seinem Hauptrezeptor, Integrin v 6, einen äußerst stabilen, EDTA-resistenten Komplex: Auswirkungen auf die Infektiosität. J Virol. 2008;82(3):1537–1546. doi:10.1128/JVI.01480-07

22. Domingo E, Sheldon J, Perales C, et al. Evolution viraler Quasispezies. Microbiol Mol Biol Rev. 2012;76(2):159–216. doi:10.1128/MMBR.05023-11

23. Mckenna TS, Lubroth J, Rieder E, et al. Das an der Rezeptorbindungsstelle deletierte Maul- und Klauenseuche-Virus (MKS) schützt Rinder vor MKS. J Virol. 1995;69(9):5787–5790. doi:10.1128/ jvi.69.9.5787-5790.1995

24. Dimarchi R, Brooke G, Gale C, Cracknell V, Doel T, Mowat N. Schutz von Rindern vor Maul- und Klauenseuche durch ein synthetisches Peptid. Wissenschaft. 1986; 232:639–641. doi:10.1126/science.3008333

25. Gómez N, Salinas J, Escribano JM, et al. Schützende Immunantwort auf das Maul- und Klauenseuche-Virus mit VP1, das in transgenen Pflanzen exprimiert wird. Schützende Immunantwort auf das Maul- und Klauenseuche-Virus mit VP1, das in transgenen Pflanzen exprimiert wird. J Virol. 1998;72:2–5.

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