TEIL 1 Wässrige Extrakte von Herba Cistanche förderten die Darmmotilität bei Loperamid-induzierten Verstopfungsratten durch Verbesserung der interstitiellen Zellen von Cajal

Shuai Yan,1,2 Yin-zi Yue,1 Xiao-peng Wang,1 Hong-li Dong,1 Shu-guang Zhen,1 Ben-sheng Wu,1 und Hai-hua Qian3

1 Suzhou Krankenhaus vonTraditionelle Chinesische Medizin,Suzhou, Jiangsu 215009, China

2Nanjing Universität vonTraditionelle Chinesische Medizin, Nanjing, Jiangsu 210023, China Volksrepublik

3Abteilung für Anorektale Chirurgie, Jiangsu Provincial Hospital vonTraditionelle Chinesische Medizin, Nanjing, Jiangsu 210029, China Volksrepublik

Korrespondenz sollte an Hai-Hua Qian gerichtet werden; haihuaqian@126.com

Empfangen am 24. Mai 2017; Überarbeitet am 5. Oktober 2017; Akzeptiert am 25. Oktober 2017; Veröffentlicht 28. Dezember 2017

Wissenschaftliche Herausgeberin: Samra Bashir

Copyright © 2017 Shuai Yan et al. Dies ist ein Open-Access-Artikel, der unter der Creative Commons Attribution License vertrieben wird, die die uneingeschränkte Verwendung, Verbreitung und Vervielfältigung in jedem Medium erlaubt, vorausgesetzt, das Originalwerk wird ordnungsgemäß zitiert.

Traditionelle Chinesische MedizinEs wurde berichtet, dass es gute Auswirkungen auf die Behandlung von funktioneller Verstopfung hat. Diese Arbeit versuchte, die Auswirkungen wässriger Extrakte von Herba Cistanche (AEHC) auf die STC-Behandlung zu beweisen und die möglichen Mechanismen durch ein Loperamid-induziertes STC-Modell (Slow Transit Constipation) zu bestimmen. Die HPLC wurde zur Identifizierung und Bestätigung der bioaktiven Komponenten in der AEHC durchgeführt. Es wurde festgestellt, dass AEHC die STC-Reaktionen basierend auf erhöhter Stuhlmenge, Feuchtigkeitsgehalt und Darmtransitrate sowie Serumspiegeln von GAS, MTL, SS und CGRP abschwächte. Die Protein- und mRNA-Spiegel von c-kit, Markierung von interstitiellen Zellen von Cajal (ICC), stiegen ebenfalls an. In der Zwischenzeit stieg nur der Proteinspiegel von SCF, einem Liganden-ofc-Kit, an. Die Analyse unserer Daten deutete darauf hin, dass AEHC offensichtlich die Funktion von ICC über einen Signalweg mit PI3K, SCF und C-Kit verbessern und die Dickdarmmotilitätsindizes wie GAS, MTL, SS und CGRP verbessern könnte. Es ist interessant festzustellen, dass AEHC bei Verstopfung wirksam zu sein schien, so dass weitere Experimente notwendig sind, um die genauen beteiligten Mechanismen zu klären.

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1. Einleitung

Verstopfung ist eine häufige funktionelle Magen-Darm-Erkrankung und ein Problem der öffentlichen Gesundheit, die durch eine ständig schwierige, seltene oder unvollständige Defäkation gekennzeichnet ist [1]. Die Prävalenz von Verstopfung variiert von 0,7% bis 81% auf der ganzen Welt, besonders bei älteren Menschen [2, 3]. Langsame Transitverstopfung (STC) ist eine häufige Magen-Darm-Erkrankung bei 13–37% der Patienten mit chronisch behandlungsresistenter Verstopfung [4, 5]. Epidemiologische Daten deuten auf eine höhere Inzidenz vonSTCbei jungen Weibchen mehr als bei Männern [6].STCverursacht hartnäckige Verstopfung, zeigt wenig Reaktion auf konservative Behandlung und eine Tendenz zu neurodegenerativen Erkrankungen. Nicht so einfach wie eine funktionelle Erkrankung, erfordert sie eine invasive und aggressive Behandlung [7].

Eine Reihe von aktuellen chemischen Medikamenten wie osmotische oder sekretorische Abführmittel und Füllstoffe werden universell eingesetzt, um

behandeln Verstopfung [8], obwohl ihre Anwendungen aufgrund hoher Ausgaben und bauchbedingter Nebenwirkungen wie Schmerzen, Krämpfe und Blähungen begrenzt sind [9]. Derzeit steht die Regulation des Magen-Darm-Traktes im Vordergrund der Verstopfungstherapien. Cisaprid wurde zunächst als Propotenzmittel zur Behandlung von Magenerkrankungen erzeugt, später aber wegen des Risikos von Herzrhythmusstörungen zurückgezogen [10].

Tegaserod ist ein selektiver 5-Hydroxytryptamin-Rezeptor-Antagonist, der die Darmperistaltik und -sekretion stimulieren kann [11, 12]. Prucaloprid ist ein neuartiges Dihydrobenzofuran-Carboxamid-Derivat und 5-HT-Rezeptoragonist mit hoher Selektivität und Spezifität, der die Magen-, Dünndarm- und Dickdarmmotilität verbessern kann und in der Dynamik schneller arbeitet [13-15]. Als Prostaglandin-E1-Derivat kann Lubiproston selektiv den CIC-Kanal aktivieren, um die gastrointestinale Sekretion zu fördern und die Wirkung der Darmübertragung zu erhöhen [16].

Cistanchehat den Effekt, dass die Tonisierung derNiereund kann auch heilenVerstopfung

Motilität bei Verstopfung ist ein weit verbreitetes Problem, aber seine Ätiologie ist noch nicht klar. Dennoch haben überzeugende Beweise den Beitrag von interstitiellen Zellen von Cajal (ICC) zur Pathogenese von Verstopfung gezeigt [17]. ICC wird zwischen den Nervenenden und glatten Muskelzellen im Magen-Darm-Trakt gefunden. Das ICC ist allgemein als Schrittmacherzellen für die gastrointestinale Aktivität und als neuromuskuläre Übertragungsmediatoren anerkannt [18]. Studien haben gezeigt, dass die ICC-Dichte im Dickdarm von Patienten mit langsamer Transitverstopfung im Vergleich zu normalen Patienten bemerkenswert niedriger ist [19]. Dementsprechend kann eine abnehmende Anzahl von ICC zu einem Mangel an langsamer Wellenaktivität führen, wodurch die kontraktile Reaktion beeinträchtigt und ein verzögerter Transit bei Patienten mit langsamer Transitverstopfung induziert wird. Für diesen Punkt kann die Melioration von ICC unter Verwendung von Arzneimitteln entscheidend sein, um Verstopfung durch langsamen Transit zu heilen.

Verschiedene pflanzliche Arzneimittel und traditionelles Chinesisch für- Mula haben in letzter Zeit als neumodische Therapeutika zur Behandlung von chronischer Verstopfung als Folge einer verbesserten Stuhlproduktion auf sich aufmerksam gemacht [20, 21]. Herba Cistanche ist eine traditionelle pflanzliche Medizin, die bei der Behandlung von chronischen Nierenerkrankungen, weiblicher Unfruchtbarkeit, starker Menorrhagie und Impotenz eingesetzt wird [22, 23]. Herba Cistanche verhindert die Apoptose des Gehirnneurons durch Expression von Apoptose-bezogenen Faktoren und neurotrophen Faktoren in MES23.5-Zellen [24]. Herba Cistanche hat auch pharmazeutisches Potenzial bei der Behandlung des Yang-Qi-Nieren-Yang-Mangelsyndroms gezeigt. Eine aktuelle Studie hat gezeigt, dass Herba Cistanche die mitochondriale Atmung und den Glutathion-Antioxidans-Status in H9c2-Kardiomyozyten erhöht [25].

TCM glaubt, dass Verstopfung eine enge Beziehung zu den Nieren hat. Die Niere, die sich an den äußeren Genitalien und am Anus öffnet, steuert das Wasserlassen und die Defäkation. Der Transport des Abfalls beruht auf der Förderung des Nieren-Qi und der Ernährung des Nieren-Yins. Wenn das Nieren-Yang mangelhaft ist oder das Feuer des Lebenstors erlischt, führt die kalte Überlastung des Dickdarms zur Stagnation des Abfalls. Verstopfung wird auch durch trockenen Stuhlgang verursacht, da ein Mangel an Nierenessenz nicht genügend Flüssigkeit erzeugt [26].

HerbaCistancheist ein gewöhnliches vereinheitlichendes Kraut, das süß und salzig im Geschmack und warm in der Natur ist. Aufgrund des Dickdarms und der Nierenmeridiane kann es Nieren-Yang tonisieren und den Darm befeuchten, um Verstopfung zu lindern. Dieses einzelne Kraut und seineChinesischPharmazeutische Präparate wurden häufig zur Behandlung von Verstopfung mit bemerkenswerter Wirksamkeit eingesetzt [27].

In China sind die Auswirkungen von HerbaCistancheWurzeln auf Verstopfung wurden aufgezeichnet [28, 29] und in Shen Nongs chinesischer Materia Medica als "getrocknete sukkulente Stängel der Cistanche-Arten" [30] bezeichnet; wissenschaftliche Beweise für die Wirkung von Herba Cistanche-Wurzeln auf Verstopfung gibt es jedoch bisher nicht, die klinisch wirksame Dosis beträgt 20 g pro Tag inChinesisches Arzneibuch, und die klinische Wirkung nimmt mit der Dosierung nicht weiter zu.

Da Herba Cistanche so knapp ist [31], standardisiert es seine klinische Dosierung für die Behandlung vonSTCDurch experimentelle Studie verhindert nicht nur eine fehlgeschlagene Behandlung aufgrund unzureichender Dosierung, sondern hält die Patienten auch von wirtschaftlichen Verlusten und sogar Medikamentenmissgeschicken durch Überbeanspruchung fern. Wir hoffen,

Die Ergebnisse könnten eine wissenschaftliche Grundlage für neue Medikamente gegen Verstopfung legen. Daher ist es wichtig, die Funktion der wässrigen Herba Cistanche zur Darmförderung und ihre Wirkung auf ICC in der vorliegenden Studie zu untersuchen.

Cistanchekann heilenVerstopfung

2. Materialien und Methoden

2.1. Herstellung von wässrigem Extrakt aus Herba Cistanche.

Alle Herba Cistanche wurden von der Nanjing Haichang Chinese Medicine Group Co., Ltd. (Nanjing, China) gekauft, die nach ethnobotanischen Standardpraktiken von den Plantagen im Sinkiang-Gebiet Chinas geerntet, gesammelt und verarbeitet wurden. Die Identität der Pflanze wurde morphologisch von Professor Tu Lin Lu von der Nanjing University of Chinese Medicine, Nanjing, China, festgestellt. Ein Gutscheinexemplar (NUCMCHS-2015628) wurde am College of Health Sciences, Nanjing University of Chinese Medicine, Nanjing, China, hinterlegt.

Scheiben von Herba Cistanche mit einem Gewicht von 500 g wurden mit einem elektrischen Mixer pulverisiert und in 5000 ml destilliertem Wasser extrahiert, wonach der wässrige Extrakt bei 100 ° C für 2 h mit einer zirkulierenden Extraktionsanlage gereinigt wurde

Die Membranpore (Millipore, Billerica, MA, USA) und die aus den Extrakten gewonnenen Rückstände wurden in 4000 ml Wasser gelöst. Nach der Refluxextraktion wurden die Extrakte gesammelt und verdampft, um das endgültige Probenprodukt zu erhalten. Wässrige Extrakte wurden konzentriert, um Pellets (1 g/ml) unter Verwendung einer

zur späteren Verwendung. Feste Proben wurden in destilliertem Wasser rekonstituiert, um die erforderlichen Dosen von 10, 20 und 40 mg / kg Körpergewicht für das Experiment zu erhalten.

2.2. Tiere.

Das in dieser Studie verwendete experimentelle Protokoll wurde auf der Grundlage ethischer Verfahren und wissenschaftlicher Betreuung vom Suzhou Hospital ofTraditionelle Chinesische Medizin-Institutional Animal Care and Use Committee, Suzhou, China (SHTCM-IACUC; Zulassungsnummer: PNU- 2016-0003). Alle männlichen Ratten (Sprague Dawley-Stamm) mit AG wurden vom Shanghai Laboratory Animal Research Center in Übereinstimmung mit den Richtlinien der National Institutes of Health gekauft. Die Tiere hatten freien Zugang zu einer Standarddiät (AIN-93 M) und Leitungswasser ad libitum und wurden einzeln in Edelstahl% relativer Luftfeuchtigkeit untergebracht und täglich 12 h natürlichem Licht und 12 h Dunkelheit ausgesetzt.

2.3 Versuchsplanung.

Das Loperamid wurde verwendet, um Verstopfung bei Ratten in Übereinstimmung mit früheren Studien zu induzieren [32, 33]. Insgesamt 60 Ratten wurden nach dem Zufallsprinzip in 5 Gruppen (pro Gruppe) eingeteilt: A: normale Gruppe (NG), B: Modellgruppe (Lop + fahrzeugbehandelte Gruppe), C: eine Gruppe von Verstopfungsratten, die mit niedrigwässrigem Extrakt von Herba Cistanche behandelt wurden (Lop + LAEHC-behandelte Gruppe), D: eine Gruppe von Verstopfungsratten, die mit mittelwässrigem Extrakt von Herba Cistanche behandelt wurden (Lop + MAEHC-behandelte Gruppe), und E: eine Gruppe von Verstopfungsratten, die mit hochwässrigem Extrakt von Herba Cistanche (Lop + HAEHC-behandelte Gruppe) behandelt wurden. Gruppe A wurde mit normaler Kochsalzlösung (10 ml/kg) behandelt; Gruppe B wurde mit Loperamid behandelt

(4 mg/kg); Gruppe C wurde mit Loperamid (4 mg/kg) und niedrigwässrigem Extrakt aus Herba Cistanche (1 g/kg) behandelt; Gruppe D wurde mit Loperamid (4 mg/kg) und mittelwässrigem Extrakt von Herba Cistanche (2 g/kg) behandelt, und Gruppe E wurde mit Loperamid (4 mg/kg) und hochwässrigem Extrakt aus Herba Cistanche (4 g/kg) behandelt. Allen Ratten aus der normalen Gruppe wurden 0,9% Natriumchlorid injiziert, während den anderen an 3 aufeinanderfolgenden Tagen zweimal täglich Loperamid in 0,9% Natriumchlorid injiziert wurde, um Verstopfung zu induzieren. Der wässrige Extrakt von Herba Cistanche wurde in Wasser suspendiert und einmal täglich von Tag 4 bis Tag 18 in Gruppe C, Gruppe D und Gruppe E oral verabreicht, während die Gruppen A und B eine konsistente Wassermenge über Gavage erhielten.

2.4. Chromatographischer Zustand.

Die HPLC-Profilierung wurde im Shimadzu Liquid Chromatographic System (Tokio, Japan) durchgeführt, bestehend aus einer LC-20AT-Pumpe und einer

wurden bei 330 nm bei 30 °C überwacht. Die isokratische mobile Phase bestand aus Methanol 0,1% Ameisensäure (80 : 20, v/v) und lief mit einer Durchflussrate von 1,0 ml/min. Die chromatographische Trennung wurde

Partikelgröße 5 m, Beijing Dikma Science and Technology Co., Ltd., Peking, China).

2.5. Analyse von Bewegung, Nahrungsaufnahme, Wasseraufnahme, Körper

Gummi Acker (eine wässrige Suspension von 20% Holzkohle und 10% Gummi Acker) wurde oral in einem Volumen von 25 ml/kg jedes Tieres verabreicht. Nach 30 min wurden die Tiere durch Zervixdislokation humanisiert und seziert. Der Dünndarm vom Pylorus bis zum Blinddarm wurde durchquert und die vom Holzkohlemehl zurückgelegte Strecke und die Gesamtlänge des Dünndarms gemessen. Für eine einzelne Ratte wurde der Prozentsatz des Darmtransits als Prozentsatz der von der Holzkohlemahlzeit zurückgelegten Strecke im Verhältnis zur Gesamtlänge des Dünndarms berechnet. Die folgende Gleichung berechnet die Darmtransitrate (%): Entfernung durch die Holzkohle/Entfernung von Pylorus nach Cecum 100%.

2.6. Blutentnahme und Gewebeentnahme. Am Ende des Versuchszeitraums wurden die Ratten einem 12-stündigen Fasten unterzogen, erhielten aber freien Zugang zu Wasser. Alle Ratten wurden dann 30 Minuten später durch intraperitoneale Injektion von Natriumpentobarbital (50 mg/kg) betäubt und auf einen temperaturgeregelten Tisch gelegt. Blutproben wurden gesammelt und bei 3500 U / min für 15 Minuten zentrifugiert, um Serum zu erhalten. Der Dickdarm wurde sofort gespalten und mit normaler Kochsalzlösung bei 4 ° C gespült und dann in zwei Stücke geteilt. Ein Fragment wurde in 10% Formalin fixiert und in Split-Paraffin für die anschließende immunhistochemische (IHC) Analyse verarbeitet, während das andere Gewicht und Haar war. Veränderungen in Bewegung, Nahrungsaufnahme, Wasser

bei 80 ° C gelagert, bis sie untersucht wurden. Aufnahme, Körpergewicht und Haare wurden während des gesamten Versuchszeitraums täglich beobachtet und aufgezeichnet. Wir beobachteten "Veränderungen in der Übung" nach den spezifischen Schritten: Die selbstgebaute Box (60 cm hoch, 50 cm lang und 80 cm breit mit dunkler Umfassungswand) wird für Freifeldtests verwendet; Der weiße Grund wurde in einem dunklen und ruhigen Raum durch die schwarze Linie in Diamanten (12 cm) unterteilt; eine 100-W-Glühbirne hing 1 m über der Mitte der Box; Die Ratten wurden am 4., 6., 12. und 18. Tag der Modellierung in die Mitte der Box gestellt. Die Anzahl der Quadrate, die Ratten innerhalb von 5 Minuten durchliefen, wurde als horizontale Bewegungsanzeige und die aufrechte Zeit der Ratten innerhalb von 5 Minuten als vertikale Bewegungsanzeige verwendet. Horizontale und Bewegungswerte sowie vertikale Bewegungswerte geben den Umfang der Übung von Ratten an. Jede Ratte wurde einmal gemessen [34, 35].

Cistanchekann entlastenVerstopfung

2.7. Messung der fäkalen Parameter.

Am letzten Tag der oralen Verabreichung wurden frische Stuhlpellets von jeder SD-Ratte 6 h lang in runde Stopfenröhrchen gesammelt und die Gesamtgewichte aus jeder Gruppe aufgezeichnet. Um den Fäkalienfeuchtegehalt zu bestimmen, haben wir eine elektrische Waage verwendet, um die Stuhlpellets zu trocknen, bis ein konstantes Gewicht erreicht ist, und das Trockengewicht gemessen. Der Feuchtigkeitsgehalt

2.8. Bewertung von GAS, MTL, SS und CGRP.

Die Konzentrationen von Gastrin (GAS), Motilin (MTL), Somatostatin (SS) und Calcitonin-Gen-verwandtem Peptid (CGRP) im Serum wurden von ELISA unter Verwendung kommerziell erhältlicher Kits geschätzt.

2.9. Histologische Analyse.

Transversale Doppelpunkte, die von SD-Ratten gesammelt wurden, wurden mit 10% Formalin für 12 h fixiert, eingebettet

m dicke Scheiben, die mit Hämatoxylin und Eosin angefärbt wurden (H&E, Sigma-Aldrich, MO, USA). Morphologische Merkmale dieser Abschnitte wurden unter Lichtmikroskopie beobachtet, woraufhin die Zottenlänge, die Kryptendicke und die Muskeldicke mit der Leica Application Suite (Leica Microsystems, Schweiz) gemessen wurden.

2.10. Immunhistochemische Analyse.

Wir folgten den Methoden von Zhu et al. (2016) [36]; unbefleckte 5 m Abschnitte waren

gefärbt mit Kaninchen-Anti-C-Kit (1: 100) bei 4 C über Nacht. Die Sekundärantikörper- und Avidin-Biotin-Peroxidase-Komplexmethode wurden gemäß den Anweisungen des Herstellers verwendet. Eine Immunglobulin-Negativkontrolle wurde verwendet, um die unspezifische Bindung zu eliminieren. Ausdrucksstufen des c-kits

2.11. Analyse der Darmtransitrate.

Das Verhältnis des Darmtransits wurde gemäß den zuvor berichteten Protokollen durchgeführt [36]; Kurz gesagt, nach 14 Tagen Behandlung, unterlagen alle SD-Ratten einem 12-stündigen Fasten, durften aber freien Zugang zu Wasser haben.

Echtzeit-Polymerase-Kettenreaktion. Die Genexpressionsniveaus von c-kit-, SCF- und PI3K-mRNAs im Dickdarm wurden mit einem Gesamt-RNA-Extraktionskit (TIANGEN Biotech,

Peking, China) nach den Protokollen des Herstellers. Die Realtime PCR wurde mit ABI StepOnePlus Real-Time PCR System (ABI) durchgeführt. SYBR Green I Real-Time PCR Master Mix (QPK201, Toyobo, Japan) wurde zur Erkennung von PCR-Produkten eingesetzt. Die Reaktionen wurden in dreifachen Durchläufen durchgeführt. Anschließend wurde frisches Rattendickdarmgewebe mit einem Gewicht von 0,5 g homologen

l) wurde gemäß Herstellerangaben mit dem TRIzol Reagenz (Invitrogen, USA) extrahiert. Ein Reverse-Transkriptions-PCR-Kit (Takara Biotechnology Co., Inc.) wurde verwendet, um den ersten cDNA-Strang gemäß dem Protokoll des Herstellers zu synthetisieren. Alle Zielparameter sind in Tabelle 1 aufgeführt. Das Zyklusprotokoll war unter den folgenden Bedingungen: 95 C für 5 min (DNA-Denaturierung), gefolgt von 40 Zyklen von 95 C für 15 s, 60 C für 20 s und 72 C für 40 s. Am Ende der Amplifikationszyklen wurde eine Schmelzkurvenanalyse durchgeführt.

2.12. Western Blot-Analyse.

Proteingehalte von C-Kit und SCF in Dickdarmprobenhomogenaten wurden mittels Western Blot bewertet. Kurz gesagt, die Gesamtproteine von Homogenaten wurden mit einem Bicinchoninsäure-Assay (Pierce Biotechnology, Rockford, IL, USA) bestimmt. Natriumdodecylsulfat-Polyacrylamid-Gel (SDS-PAGE) wurde zur Trennung von Pro-Teens im BioRad-Elektrophoresesystem (BioRad Laboratories, Hercules, CA, USA) verwendet. Proteine wurden dann auf Polyvinylidendifluorid (PVDF) -Membranen übertragen. Nach 2-stündiger Behandlung mit Sperrpuffer in TBS, der 5% fettfreie Milch bei Raumtemperatur enthielt, wurden PVDF-Membranen über Nacht mit 1 : 1000 verdünntem Anti-c-Kit (Santa Cruz, CA, USA), 1 : 500 verdünntem Anti-SCF (Sigma, MO,

Die USA) und 1: 8000 verdünnte Anti-Actin-Antikörper (Kangchen, Shanghai, China). Die Bindung des primären Antikörpers wurde mit dem entsprechenden HRP-konjugierten Sekundärantikörper (Beyotime, Jiangsu, China) nachgewiesen. Für die Chemilumineszenzdetektion wurden ein verbessertes Chemilumineszenz-Kit (Pierce Biotechnology Inc., Rockford, IL, USA) und das Odyssey Infrared Imaging System (Gene Company Ltd., Hong Kong) verwendet. Housekeeping-Prolaktin wurde als Ladekontrolle verwendet. Die Menge der Proteinexpression wird relativ zu den Aktinspiegeln dargestellt.

2.13. Statistische Analyse.

Messdaten wurden als mittlerer Standardfehler des Mittelwerts (REM) gemeldet und von SPSS analysiert

16.0 Software (SPSS, Chicago, IL, USA). Die Einweg-Varianzanalyse (ANOVA), gefolgt von Duncans Mehrfachbereichstests, wurde verwendet, um signifikante Unterschiede in allen Parametern zu bestimmen. Die Werte wurden als statistisch signifikant bei

CistancheAbkochung ist eine gute Medizin zur BehandlungVerstopfung

3. Ergebnisse

3.1. Zusammensetzung und funktionelle Bestandteile von Herba Cistanche.

Wie in Abbildung 1 gezeigt, enthalten die Wurzeln von Herba Cistanche hohe Konzentrationen mehrerer bioaktiver Komponenten, die mit abführenden Wirkungen zusammenhängen. Die Konzentrationen von Gesamt-Echinacosid und Gesamt-Verbascosid betrugen 0,64 mg/g bzw. 0,16 mg/g. Zwei Peaks, die auf hohe Echinacosid- und Verbascosidspiegel hindeuten, wurden im LP zu einem geeigneten Retentionszeitpunkt durch Hochleistungsflüssigkeitschromatographie (HPLC) nachgewiesen.

3.2. Allgemeine Bemerkung.

SP-Ratten starben im Laufe des Experiments nicht, was auf eine bessere Sicherheit und Funktionsfähigkeit des Tiermodells hindeutet. Im Vergleich zu Gruppe A zeigten Ratten in der Modellgruppe flauschiges Fell, Müdigkeit, trockenen Stuhl und

verschlechterte sich mit der Verlängerung der Modellierungszeit.

3.3. Wirkung von AEHC auf die Stuhlzahl und den Feuchtigkeitsgehalt bei Loperamid-induzierten Verstopfungsratten.

Im Vergleich zu normalen Fäkalien waren die Fäkalien in den Gruppen B, C, D und E trocken, klein und hart und waren vor der Behandlung ohne Polieren.

Immerhin wurde Ratten Loperamid injiziert (behandelt mit Medikamenten haben Symptome gelindert wie Körper und 3 (b)).

das Gewicht unterschied sich nicht signifikant zwischen allen experimentellen Gruppen, obwohl Gruppe E ein etwas niedrigeres Körpergewicht als die anderen Gruppen aufwies (Abbildung 2(a)). Darüber hinaus aßen SD-Ratten mit Verstopfung signifikant weniger Nahrung als Gruppe A ( ), während die Unterschiede zwischen den Gruppen B, C, D und E (Abbildung 2(b)) nicht signifikant waren. Auch der Wasserverbrauch hat sich zwischen Gruppe A und Gruppe B nicht verändert. Darüber hinaus wurde in den folgenden Ländern kein signifikanter Anstieg des Wasserverbrauchs festgestellt:

dass die Behandlung mit dem AEHC keine Veränderung bewirkt hat. Obwohl die Darmtransitrate in den Gruppen C, D und auch deutlich höher warDie Gruppen C, D und E wiesen signifikant niedrigere Verhältnisse auf als Gruppe A.

3.4. Wirkung von AEHC auf die Dünndarmtransitrate bei Loperamid-induzierten Verstopfungsratten.

Wie aus Abbildung 4 hervorgeht, wurden bei den fünf Gruppen keine Unterschiede in der Dünndarmtransitzeit des Ausgangswerts festgestellt. Gruppe B hat ein deutlich niedrigeres Holzkohlepulver-Antriebsverhältnis im Vergleich zu Gruppe A (P< 0.01).="" although="" the="" intestinal="" transit="" rate="" in="" groups="" c,="" d,="" and="" e="" was="" also="" significantly="" higher="" than="" that="" in="" group="" b="" (𝑃="">< 0.05),="" groups="" c,="" d,="" and="" e="" had="" significantly="" lower="" ratios="" than="" group="">

3.5. Die Intervention mit AEHC verbessert teilweise die Funktion des Dickdarmmotilitätsindex.

Die Serumspiegel von GAS und MTL, die von Ratten der Gruppe B erhalten wurden, nahmen im Vergleich zu denen der Gruppe A signifikant ab (P< 0.01,="" resp.).="" on="" the="" other="" hand,="" groups="" c,="" d,="" and="" e="" (𝑃="">< 0.05,="" resp.)="" have="" effectively="" higher="" levels="" of="" gas="" and="" mtl="" from="" the="" administration="" of="" herba="" cistanche="" extracts="" compared="" with="" group="" b.="" the="" ss="" values="" in="" group="" b="" rats="" were="" higher="" compared="" with="" group="" a="" (𝑃="">< 0.01);="" groups="" c,="" d,="" and="" e="" have="" attenuated="" levels="" of="" ss="" (𝑃="">< 0.05)="" (figure="" 5).="" compared="" with="" constipation="" rats,="" the="" cgrp="" levels="" in="" group="" a="" normal="" rats="" (𝑃="">< 0.01)="" and="" in="" herba="" cistanche-administered="" groups="" c,="" d,="" and="" e="" were="" constant="" (𝑃="">0.05).

3.6. Histologische Veränderung des Dickdarms

Um zu untersuchen, ob die AEHC-Behandlung eine strukturelle Veränderung des Dickdarmgewebes induzieren kann, wurden die Zottenlänge, die Kryptenschichtdicke und die Muskeldicke in Querkolons von Ratten in den fünf Gruppen nach der H & E-Färbung gemessen. Durch den Vergleich der Pathologie des Dickdarms der Ratten in jeder Gruppe war die Dickdarmschleimhaut glatt und enthält kleine Arterien und kleine Venen in der Submukosa und eine große Anzahl von Fettzellen. Außerdem bestand die Muskelschicht aus glatten Muskelzellen und die Subserosa war vollständig. Die durchschnittliche Länge des Zotten war in Gruppe B deutlich kürzer als in Gruppe A (P< 0.01).="" however,="" the="" average="" length="" of="" the="" villus="" in="" group="" c="" greatly="" increased="" by="" more="" than="" 30%="" when="" compared="" with="" group="" b="" (figures="" 6="" and="" 7)="" (𝑃="">< 0.05).="" meanwhile,="" the="" average="" length="" of="" the="" villus="" greatly="" increases="" in="" groups="" d="" and="" e="" when="" compared="" with="" group="" b="" (figures="" 6(a)="" and="" 6(b))="" (𝑃="">< 0.01).="" furthermore,="" alteration="" of="" muscle="" thickness="" was="" very="" similar="" to="" villus="" length.="" in="" group="" b,="" the="" muscle="">

war im Vergleich zu Gruppe A dramatisch dünner. Die Muskeldicke in den Gruppen C, D und E stieg jedoch um 30-35% gegenüber der der Gruppe B (Abbildungen 6 und 7). Insgesamt deuten diese Ergebnisse darauf hin, dass der AEHC die Zottenlänge und Muskeldicke im Dickdarm von verstopften Ratten erhöhen kann.

3.7. Verabreichung der AHEC-Behandlung Erhöhte Proteinexpression von c-Kit und SCF.

Die Immunreaktivität davon wurde im Dickdarm nachgewiesen, da die Zellen in allen Gruppen positiv auf c-kit getestet wurden. Wie in Abbildung 8 gezeigt, war das Expressionsniveau von c-kit in Gruppe B niedriger als das in Gruppe A (P< 0.05).="" the="" expression="" level="" of="" c-kit="" in="" group="" c="" was="" higher="" than="" that="" in="" group="" b="" (𝑃="">< 0.05),="" while="" more="" c-kit="" was="" present="" in="" groups="" d="" and="" e="" than="" in="" group="" b="" (𝑃="">< 0.05).="" after="" treatment="" with="" different="" concentrations="" of="" aqueous="" extract="" of="" herba="" cistanche="" for="" 2="" weeks,="" the="" protein="" expression="" levels="" of="" c-kit="" and="" scf="" were="" detected="" by="" western="" blot="" analysis.="" western="" blot="" analysis="" showed="" that="" c-kit="" and="" scf="" expression="" levels="" were="" remarkably="" lower="" after="" loperamide="" treatment="" in="" colons="" of="" rats="" (figure="" 9).="" figure="" 8(e)="" demonstrates="" that="" the="" decreased="" c-kit="" in="" constipation="" rats="" significantly="" increased="" by="" 31.2%="" after="" treating="" the="" rats="" with="" 500="" 𝜇g/ml="" aehc="" (𝑃="">< 0.05).="" in="" addition,="" treatment="" with="" 100="" and="" 200="" g/ml="" aehc="" elevated="" c-kit="" protein="" expression="" levels.="" scf="" protein="" expression="" significantly="" increased="" by="" 20.1,="" 24.7,="" and="" 8.4%="" at="" treatment="" with="" 100,="" 200,="" and="" 500="" 𝜇g/ml="" aehc,="" respectively="" (figure="" 9).="" 3.8.="" effect="" of="" aehc="" on="" mrna="" expression="" of="" c-kit,="" scf,="" and="" pi3k.="" to="" investigate="" whether="" aehc="" treatment="" can="" affect="" the="" regulation="" of="" mrna="" related="" to="" muscle="" contraction,="" alterations="" in="" c-kit,="" scf,="" and="" pi3k="" expression="" levels="" were="" observed="" in="" colons="" of="" constipation="" rats="" using="" specific="" primers.="" the="" results="" showed="" that="" the="" mrna="" levels="" of="" c-kit="" in="" group="" b="" were="" significantly="" lower="" compared="" with="" group="" a="" (𝑃="">< 0.05),="" while="" the="" mrna="" levels="" in="" groups="" c,="" d,="" and="" e="" were="" higher="" than="" in="" group="" b="" (𝑃="">< 0.05)="" (figure="" 10).="" we="" also="" examined="" the="">

Ausdruck von SCF, ein Ligand des Kits. Die mRNA-Expression von SCF bei Ratten der Gruppe B war signifikant niedriger als in Gruppe A, während die Behandlung mit AEHC in den Gruppen C, D und E die SCF-mRNA-Expression erhöhte (Abbildung 10). Darüber hinaus untersuchten wir die Wirkung von AEHC auf die PI3K-Genexpression. An Tag 14 war der PI3K-Genexpressionsspiegel in den Gruppen C, D und E signifikant höher als in Gruppe B (P<>