Teil 1:Echinacosid hemmt die Glutamatfreisetzung durch Unterdrückung des spannungsabhängigen Ca2 plus-Eintritts und der Proteinkinase C in zerebrokortikalen Nervenenden von Ratten

Kontakt: Audrey Hu WhatsApp/hp: 0086 13880143964 E-Mail:audrey.hu@wecistanche.com

Cheng Wei Lu 1,2, Tzu Yu Lin 1,2, Shu Kuei Huang 1 und Su Jane Wang 3,*

Abstrakt:

Das glutamaterge System kann an den Wirkungen von neuroprotektiven Therapien beteiligt sein.Echinacosid, ein Phenylethanoidglykosid, das aus der chinesischen Heilpflanze extrahiert wirdHerba Cistanche, hat neuroprotektive Wirkungen. Diese Studie untersuchte die Auswirkungen vonEchinacosidüber die durch 4-Aminopyridin hervorgerufene Glutamatfreisetzung in zerebrokortikalen Nervenenden (Synaptosomen) von Ratten. Echinacosid hemmte Ca2 plus -abhängige, aber nicht Ca2 plus -unabhängige, durch 4-Aminopyridin hervorgerufene Glutamatfreisetzung in einer konzentrationsabhängigen Weise. Echinacosid reduzierte auch den durch 4--Aminopyridin hervorgerufenen Anstieg der zytoplasmatischen freien Ca2+-Konzentration, veränderte jedoch nicht das synaptosomale Membranpotential. Die hemmende Wirkung von Echinacosid auf die durch 4--Aminopyridin hervorgerufene Glutamatfreisetzung wurde durch o-Conotoxin MVIIC, einen Breitbandblocker der Cav2.2 (N-Typ)- und Cav2.1 (P/Q-Typ)-Kanäle, verhindert , war aber unempfindlich gegenüber den intrazellulären Ca2 plus Freisetzungsinhibitoren Dantrolen und 7-Chlor-5-(2-Chlorphenyl)-1,5-Dihydro-4 ,1-Benzodiazepin-2(3H)-on (CGP37157). Darüber hinaus verringerte Echinacosid die 4--Aminopyridin-induzierte Phosphorylierung von Proteinkinase C, und Proteinkinase-C-Inhibitoren hoben die Wirkung von Echinacosid auf die Glutamatfreisetzung auf. Gemäß diesen Ergebnissen schlagen wir vor, dass die hemmende Wirkung von Echinacosid auf die evozierte Glutamatfreisetzung mit einem reduzierten spannungsabhängigen Ca2+-Eintrag und einer anschließenden Unterdrückung der Proteinkinase-C-Aktivität verbunden ist.

Schlüsselwörter:Echinacosid; Glutamatfreisetzung; zerebrokortikale Nervenenden; spannungsabhängige Ca2 plus Kanäle; Proteinkinase C

1. Einleitung

Echinacosidist ein wichtiges Phenylethanoidglykosid, das in vorhanden istKräuterCistanche, eine bekannte traditionelle chinesische Medizin zur Behandlung von Vergesslichkeit, Impotenz und chronischer Verstopfung [1].Echinacosidbesitzt verschiedene Bioaktivitäten wie Antioxidation, Entzündungshemmer, Antikrebs, Leberschutz und Immunmodulation [2–4]. Echinacosid hat insbesondere neuroprotektive Wirkungen; Beispielsweise kann es vor oxidativem Stress oder Neurotoxin-induzierter Neurotoxizität in primären kortikalen Neuronen der Ratte, humanen Neuroblastom-SH-SY5Y-Zellen und Phäochromozytom (PC12)-Zellen schützen [5–8]. Darüber hinaus dämpft Echinacosid Hirnschäden und verbessert die kognitive Funktion in Tiermodellen der Parkinson-Krankheit, der Alzheimer-Krankheit und des Verschlusses der mittleren Hirnarterie [9–12]. Allerdings ist der Mechanismus, durch denEchinacosidNeuroprotektion induziert, ist nicht vollständig geklärt.

Die Neuroprotektion ist ein komplexer Prozess zur Erhaltung der neuronalen Struktur und Funktion bei toxischen Angriffen. Die Reduktion der Glutamat-Exzitotoxizität wird als potenzieller Mechanismus angesehen, der an der Neuroprotektion des Gehirns beteiligt ist. Glutamat, ein exzitatorischer Aminosäure-Neurotransmitter, spielt eine entscheidende Rolle bei mehreren Gehirnfunktionen [13]. Die Überaktivierung von Glutamatrezeptoren bei hohen Glutamatkonzentrationen verursacht jedoch eine intrazelluläre Ca2-Plus-Überladung, mitochondriale Dysfunktion, Produktion freier Radikale und neuronalen Tod [14,15]. Dieser pathologische Prozess ist an zahlreichen Hirnerkrankungen beteiligt, darunter zerebrale Ischämie, traumatische Hirnverletzung, Epilepsie und neurodegenerative Erkrankungen [16,17]. Daher gelten Inhibitoren, die die pathophysiologische glutamaterge Übertragung blockieren, als potenzielle neuroprotektive Arzneimittel. Bemerkenswerte Beispiele hierfür sind Glutamatrezeptorantagonisten [18,19]; Klinische Studien für diese Medikamente sind jedoch aufgrund geringerer Wirksamkeit und unerwünschter oder sogar zytotoxischer Nebenwirkungen gescheitert [20,21]. Zusätzlich zur direkten Blockade des Glutamatrezeptors kann die Hemmung der Glutamatfreisetzung eine wirksame Strategie zur Neuroprotektion sein. Mehrere Neuroprotektiva (z. B. Memantin und Riluzol) können die Glutamatfreisetzung im Hirngewebe von Ratten reduzieren [22–24].

In Anbetracht der Rolle von Glutamat bei der Exzitotoxizität und des neuroprotektiven Profils von Echinacosid wurden in der vorliegenden Studie isolierte Nervenenden (Synaptosomen) verwendet, die aus der Großhirnrinde von Ratten gereinigt wurden, um die Wirkung von Echinacosid auf die Glutamatfreisetzung zu untersuchen und mögliche Mechanismen weiter zu untersuchen. Das isolierte Nervenendpräparat ist ein etabliertes Modell zur Untersuchung der präsynaptischen Regulation der Neurotransmitterfreisetzung durch Medikamente ohne postsynaptische Wirkungen [25]. Unter Verwendung dieses Modells bewerteten wir die Wirkung von Echinacosid auf die Glutamatfreisetzung, das Membranpotential, den präsynaptischen Ca2-plus-Einstrom und die Proteinkinase-C-Aktivität. Gemäß unserer Literaturrecherche ist dies der erste Bericht, der den Mechanismus dokumentiert, durch den Echinacosid die endogene Glutamatfreisetzung auf präsynaptischer Ebene hemmt.

2. Ergebnisse

2.1. EchinacosidHemmt die durch 4- Aminopyridin hervorgerufene Glutamatfreisetzung aus zerebrokortikalen Nervenenden der Ratte durch Verringerung der vesikulären Exozytose

Abbildung 1 veranschaulicht die konzentrationsabhängige Wirkung von Echinacosid auf die durch 4--Aminopyridin hervorgerufene Glutamatfreisetzung aus gereinigten zerebrokortikalen Synaptosomen der Ratte. In mit 1 mM CaCl2 inkubierten Synaptosomen rief 1 mM 4--Aminopyridin eine Glutamatfreisetzung von 7,4 ± {{1{{20}}}},1 nmol/mg/5 min hervor, die reduziert war durch 1, 5, 10, 30 und 50 µM Echinacosid auf 6,5 ± 0,2, 5,8 ± 0,3, 4,8 ± 0,2,

4,1 ± 0,1 bzw. 2,3 ± 0,4 nmol/mg/5 min (F(5,24)=67,1, p=0). 000). Der IC50-Wert für die Echinacosid-vermittelte Hemmung der durch 4--Aminopyridin hervorgerufenen Glutamatfreisetzung, abgeleitet aus einer Dosis-Wirkungs-Kurve, betrug 24 µM. Darüber hinaus wird die durch 1 mM 4--Aminopyridin hervorgerufene Glutamatfreisetzung in einer extrazellulären Ca2+-freien Lösung mit 300 µM Ethylenglykol-bis(-aminoethylether)-N,N,N/,N/-tetraessigsäure (EGTA) betrug 2,1 0,2 nmol/mg/5 min (F(2,12)=310,65, p=0,000),

und diese Ca2 plus -unabhängige Komponente der durch 4--Aminopyridin hervorgerufenen Glutamatfreisetzung wurde durch 2 0 uM Echinacosid (1,8 ± 0,2 nmol/mg/5 min; p {{1 0}}.58; Abbildung 1). In Synaptosomen, die mit 0,1 µM Bafilomycin A1, einem vesikulären Transporter-Inhibitor [26], behandelt wurden, war die durch 4--Aminopyridin hervorgerufene Glutamatfreisetzung signifikant reduziert (2,2 ± 0,2 nmol/mg/ 5 min; F (2,12)=249.518, p=0.000). In Gegenwart von Bafilomycin A1 konnten 2 0 uM Echinacosid die Freisetzung von Glutamat nicht signifikant hemmen (2,1 ± 0,2 nmol/mg/5 min; p=0,94; Abbildung 1). Im Gegensatz dazu erhöhten 10 μM DL-threo-beta-Benzyloxyaspartat (DL-TBOA, ein Glutamat-Wiederaufnahmehemmer) [27] die durch 4--Aminopyridin hervorgerufene Glutamatfreisetzung auf 11,8 ± 0,4 nmol/mg/5 min ( t(8)=-11.31, p=0.000). Selbst in Gegenwart von DL-TBOA hemmten 20 uM Echinacosid die durch 4--Aminopyridin hervorgerufene Glutamatfreisetzung signifikant (7,7 ± 0,2 nmol/mg/5 min; F(2,12)=87.23, p=0.000; Abbildung 1).

2.2 Echinacosid reduziert die zytosolische Ca2+-Konzentration, verändert aber nicht das synaptosomale Membranpotential

Eine durch 1 mM 4--Aminopyridin verursachte Synaptosom-Depolarisation erhöhte die Ca2-Plus-Konzentration (p=0.000; Tabelle 1). Die Anwendung von 20 μM Echinacosid hatte keinen signifikanten Einfluss auf die basale Ca2-Plus-Konzentration (t(8)=0.06, p=0.95), verringerte jedoch signifikant den 4--Aminopyridin-induzierten Anstieg von Ca2 plus Konzentration (t(10)=6.16, p=0.000). Außerdem erhöhte 1 mM 4--Aminopyridin die Fluoreszenz von 3',3',3'-Dipropylthiadicarbocyanin-iodid [DiSC3(5)] (p=0.000). Die Zugabe von 20 μM Echinacosid veränderte weder das Ruhemembranpotential (t(8)=0,976, p=0,36) noch signifikant den 4-Aminopyridin-vermittelten Anstieg von DiSC3 (5) Fluoreszenz (t(8)=-0.014, p=0.99; Tabelle 1).

2.3 Reduzierter Ca2-plus-Einstrom durch die Kanäle Cav2.2 (N-Typ) und Cav2.1 (P/Q-Typ) kann mit der Hemmung der durch 4-Aminopyridin hervorgerufenen Glutamatfreisetzung durch Echinacosid in Zusammenhang stehen

Abbildung 2 zeigt, dass 2 uM o-Conotoxin MVIIC, ein N- und P/Q-Typ-Ca2-plus-Kanalblocker, die durch 4-Aminopyridin hervorgerufene Glutamatfreisetzung von 7,4 ± {{10}} reduzierte. 2 bis 2.0 ± 0.1 nmol/mg/5 min (t(9)=25.35, p=0.000). In Gegenwart von o-Conotoxin MVIIC war die Wirkung von 20 µM Echinacosid auf die durch 4--Aminopyridin hervorgerufene Glutamatfreisetzung nicht signifikant (1,8 2± plus 0,2 nmol/mg/5 min; t(8)=1.06, p=0.32). Dantrolen (10 uM), ein Inhibitor der intrazellulären Ca-Freisetzung aus dem Endoplasma

Retikulum [28], reduzierte durch 4-Aminopyridin hervorgerufene Glutamatfreisetzung (5,6 ± 0,3 nmol/mg/5 min; F(2,14) {{10}}). 95, S.=0.000). In Gegenwart von Dantrolen konnten jedoch 20 μM Echinacosid immer noch die Glutamatfreisetzung signifikant hemmen (3,3 ± 0,2 nmol/mg/5 min; p=0.000). Ähnliche Ergebnisse wurden mit 100 µM 7-Chlor-5-(2-Chlorpheny)-1,5-Dihydro-4,1-Benzothiazepin beobachtet -2(3H)-on (CGP37157), ein membrandurchlässiger Blocker des mitochondrialen Na plus /Ca2 plus Austauschs. In den fünf untersuchten synaptosomalen Präparaten reduzierten 20 µM Echinacosid in Kombination mit 100 µM CGP37157 die durch 4--Aminopyridin hervorgerufene Glutamatfreisetzung um 48,3 Prozent ± 5,2 Prozent (F(2,13) ​​= 136.79, p {{ 49}}.000), ähnlich der Hemmung durch Echinacosid allein (46,2 Prozent ± 2,3 Prozent; p=0.89; Abbildung 2).

2.4 EchinacosidHemmt die durch 4-Aminopyridin hervorgerufene Glutamatfreisetzung durch Signalisierung durch Proteinkinase C

Wie in Abbildung 3 dargestellt, 10 uM 2-[1-(3-dimethylaminopropyl)indol-3-yl]-3-(indol-3-yl)maleimid (GF109203X), ein allgemeiner Proteinkinase-C-Inhibitor [29], reduzierte die durch 4-Aminopyridin hervorgerufene Glutamatfreisetzung (F(2,13) ​​= 19.46, p=0).{{17 }}). In den mit GF109203X behandelten Synaptosomen reduzierten 20 μM Echinacosid die durch 4-Aminopyridin hervorgerufene Glutamatfreisetzung um nur 5,5 Prozent ± 1,8 Prozent (p=0,89), weniger als die von Echinacosid allein (42,4 Prozent ± 2,3 Prozent ; p=0.000). Ähnliche Ergebnisse wurden mit 5,6,7,13-Tetrahydro-13-methyl-5-oxo-12H-indolo[2,3-a]pyrrolo[3] erhalten ,4-c]Carbazol-12-propannitril (Go6976), ein Selektivprodukt für Ca2 plus -abhängige Proteinkinase-C-Isoformen ( , I, II, y) [29]. In Anwesenheit von 3 µM Go6976 reduzierten 20 µM Echinacosid die Glutamatfreisetzung um 11,9 Prozent ± 2,9 Prozent (p=0,59), was eine signifikante Verringerung im Vergleich zu Echinacosid allein bedeutet (42,4 Prozent 2,3 Prozent; p {{ 65}}.000; Abbildung 3). Im Gegensatz dazu veränderten 3 uM Rottlerin, ein Ca2 plus -unabhängiger Proteinkinase-C6-Inhibitor [30], die durch 4--Aminopyridin (1 mM) hervorgerufene Glutamatfreisetzung nicht signifikant (p=0,45). Nichtsdestotrotz verursachten 20 μM Echinacosid in Gegenwart von Rottlerin effektiv eine durchschnittliche Hemmung von 37,1 % ± 5,6 % der Freisetzung (F(2,13) ​​= 19,72, p=0).{{88 }}), ähnlich wie durch Echinacosid allein (p=0.41; Abbildung 3). Außerdem ist der mitogenaktivierte Proteinkinase-Inhibitor 2-(2-amino-3-methoxyphenyl)-4H-1-benzopyran-4-one) (PD98059 ) (50 µM) und der Proteinkinase-A-Inhibitor N-[2-(p-Bromocinnamylamino)ethyl]-5-isochinolinsulfonamid (H89) (100 µM) verringerten die durch 4-Aminopyridin hervorgerufene Glutamatfreisetzung (S.=0.000). Selbst in Anwesenheit von PD98059 oder H89 reduzierten 20 μM Echinacosid die Freisetzung effektiv (F(2,13) ​​= 52.3, p=0.000; Abbildung 3).

Abbildung 4 zeigt, dass 1 mM 4--Aminopyridin die Phosphorylierung von Proteinkinase C in Synaptosomen erhöhte (t(4)=-6.871, p=0.002). Wenn Synaptosomen vor der Zugabe von 4--Aminopyridin 10 min lang mit 20 uM Echinacosid vorbehandelt wurden, verringerte sich die durch 4--Aminopyridin induzierte Phosphorylierung der Proteinkinase C erheblich (F(2,6)=29.202 , p=0.001).

2.5 Echinacosid-vermittelte Hemmung der Glutamatfreisetzung ist nicht an einem Gamma-Aminobuttersäure-Typ-A (GABAA)-Rezeptor beteiligt

In Abbildung 5 wurde die Wirkung von Echinacosid auf die durch 4--Aminopyridin hervorgerufene Glutamatfreisetzung in Abwesenheit oder Gegenwart von SR95531 (einem Antagonisten des GABAA-Rezeptors) verglichen. Außerdem veränderten 100 uM SR95531 die durch 4--Aminopyridin (1 mM) hervorgerufene Glutamatfreisetzung nicht signifikant. Bei den mit SR95531- behandelten Synaptosomen führte die Anwendung von 20 uM Echinacosid zu einer 43-prozentigen Hemmung der durch 4-Aminopyridin hervorgerufenen Glutamatfreisetzung (F(2,12)=42.63, p { {18}}.000), was sich nicht signifikant von der durch Echinacosid allein erzeugten Hemmung unterschied (40 Prozent; p=0.000). Ein ähnliches Ergebnis wurde mit einem anderen GABAA-Rezeptorantagonisten, Bicucullin (50 uM), erhalten. Die in Gegenwart von Bicucullin und Echinacosid gemessene Freisetzung unterschied sich signifikant von der in Gegenwart von Bicucullin allein erhaltenen (p=0.000).

3. Diskussion

In dieser Studie,Echinacosid, ein Wirkstoff in HerbaCistanche, hemmte die durch 4-Aminopyridin hervorgerufene Glutamatfreisetzung in den Nervenenden der Großhirnrinde der Ratte. Die möglichen zugrunde liegenden Mechanismen für dieEchinacosid-vermittelte Hemmung der Glutamatfreisetzung werden hier weiter untersucht und diskutiert.

3.1 Mechanismen, die der durch Echinacosid vermittelten Hemmung der Glutamatfreisetzung zugrunde liegen

Die durch 4--Aminopyridin hervorgerufene Glutamatfreisetzung umfasst zwei Komponenten: eine physiologisch relevante Ca2+-abhängige Komponente, die durch Exozytose von Glutamat enthaltenden synaptischen Vesikeln produziert wird; und eine Ca2+-unabhängige Komponente, die von einer verlängerten Depolarisation herrührt, die eine Membranpotential-vermittelte Verschiebung des Glutamat-Transporters im stationären Zustand nach außen verursacht und somit den zytosolischen Glutamat-Ausfluss beeinflusst [31]. Hier beobachteten wir, dass Echinacosid die durch 4--Aminopyridin hervorgerufene Glutamatfreisetzung in Gegenwart eines Ca2+-freien Mediums (Ca2+-unabhängige Freisetzung) nicht signifikant hemmte. Darüber hinaus wurde die beobachtete Echinacosid-vermittelte Hemmung der 4--Aminopyridin-hervorgerufenen Glutamatfreisetzung durch Bafilomycin A1 (das den Glutamatgehalt von synaptischen Vesikeln verringert), aber nicht durch DL-TBOA (das nicht selektiv alle exzitatorischen Aminosäuren hemmt) verhindert Transporter-Subtypen). Diese Ergebnisse legen nahe, dass Echinacosid die Ca2 plus -abhängige Exozytose der Glutamatfreisetzung beeinflusst, ohne den Ca2 plus -unabhängigen zytosolischen Glutamatfluss durch die Umkehrung des Plasmamembran-Glutamattransporters der Nervenenden zu beeinflussen. In synaptischen Terminals stabilisiert die Hemmung des Na-plus-Kanals oder die Aktivierung des K-plus-Kanals die Membranerregbarkeit und reduziert folglich den evozierten Ca2-plus-Eintrag und die Freisetzung von Neurotransmittern [32,33]. Daher umfasst der potenzielle Mechanismus, der der Hemmung der Echinacosid-vermittelten Glutamatfreisetzung zugrunde liegt, eine Verringerung der synaptosomalen Erregbarkeit. Diese Möglichkeit ist jedoch aufgrund von zwei Beobachtungen unhaltbar: (1) die durch 4- Aminopyridin hervorgerufene Membranpotentialdepolarisation, gemessen mit dem membranpotentialempfindlichen Farbstoff DiSC3(5), wurde durch die Zugabe von Echinacosid nicht beeinflusst; und (2) Echinacosid beeinflusste nicht die durch 4- Aminopyridin hervorgerufene Ca2 plus -unabhängige Glutamatfreisetzung, eine Freisetzungskomponente, die nur vom Membranpotential abhängt [31]. Wenn die Wirkung nicht durch die Unterdrückung der synaptosomalen Erregbarkeit verursacht wird, kann sie sich durch eine Verringerung der Aktivität von Ca2 plus-Kanälen Cav2.2 (N-Typ) und Cav2.1 (P/Q-Typ) in Verbindung mit einer Glutamat-Exozytose in manifestieren Nervenendigungen [34–36]. Durch die Verwendung von Fura-2 demonstrieren wir, dass Echinacosid den durch 4-Aminopyridin hervorgerufenen Anstieg der Ca2+-Konzentration signifikant verringert. Darüber hinaus zeigen unsere Daten, dass die hemmende Wirkung von Echinacosid auf die durch 4--Aminopyridin hervorgerufene Glutamatfreisetzung von 42,4 % 2,3 % auf 12,1 % 3,9 % abnahm, nachdem sie einem Blocker von Cav2.2 (N-Typ) und Cav2 ausgesetzt waren .1 (P/Q-Typ) Ca2 plus Kanäle. Darüber hinaus beobachteten wir, dass Echinacosid weiterhin die durch 4--Aminopyridin hervorgerufene Glutamatfreisetzung in Gegenwart von intrazellulären Ca2-Plus-Freisetzungsinhibitoren signifikant hemmte. Diese Ergebnisse weisen darauf hin, dass die gleichzeitige Unterdrückung von Cav2.2 (N-Typ) und Cav2.1 (P/Q-Typ) Ca2 plus Kanalaktivität der potentielle Mechanismus ist, der der Echinacosid-vermittelten Glutamat-Freisetzungshemmung zugrunde liegt. Jedoch konnte die kombinierte Aktivierung von Cav2.2 (N-Typ) und Cav2.1 (P/Q-Typ) Ca2 plus Kanalaktivität die Wirkung von Echinacosid nicht vollständig blockieren. Daher können andere nicht identifizierte Arten von Ca2+-Kanälen oder andere präsynaptische Signalwege an der Hemmung beteiligt sein. Beispielsweise sind GABAA-Rezeptoren auf präsynaptischer Ebene vorhanden, und ihre Aktivierung hemmt nachweislich den Ca2-plus-Einstrom und die Glutamatfreisetzung [37]. In der vorliegenden Studie blockierten die GABAA-Rezeptorantagonisten SR95531 und Bicucullin nicht die Echinacosid-vermittelte Hemmung der Glutamatfreisetzung, was darauf hindeutet, dass GABAA-Rezeptoren nicht an der Verringerung der spannungsabhängigen Ca2-plus-Kanalaktivität und der anschließenden Hemmung der Glutamatfreisetzung beteiligt sind. Der Eintritt von Ca2 plus durch spannungsabhängige Ca2 plus-Kanäle aktiviert mehrere Proteinkinasen, die mit der Glutamatfreisetzung in Nervenenden verbunden sind, einschließlich der mitogenaktivierten Proteinkinase, Proteinkinase C und Proteinkinase A. Hier zeigen wir, dass Proteinkinase-C-Inhibitoren das Echinacosid effizient antagonisieren -vermittelte Hemmung der Glutamatfreisetzung; dennoch war der mitogenaktivierte Proteinkinase-Inhibitor PD98059 oder der Proteinkinase-A-Inhibitor H89 unwirksam. Darüber hinaus nahm die durch 4-Aminopyridin induzierte Phosphorylierung von Proteinkinase C in Synaptosomen nach einer Vorbehandlung mit Echinacosid in einer Konzentration ab, die zur Hemmung der Glutamatfreisetzung wirksam war. Daher kann der Signalweg der Echinacosid-vermittelten Hemmung der Glutamatfreisetzung Proteinkinase C beinhalten. Proteinkinase C ist ein wichtiges intrazelluläres Signalsystem, das auf präsynaptischer Ebene vorhanden ist und eine entscheidende Rolle bei der Exozytose von Neurotransmittern spielt. Zum Beispiel werden mehrere synaptische Proteine, die am Transport von synaptischen Vesikeln oder an der Rekrutierung und Exozytose beteiligt sind, wie das myristoylierte Alanin-reiche C-Kinase-Substrat, durch Proteinkinase C phosphoryliert [38,39]. Dieser Phosphorylierungsprozess kann durch depolarisationsstimulierten Ca2+-Eintrag gesteigert werden, was die Glutamatfreisetzung erleichtert [40]. Daher können wir vernünftigerweise spekulieren, dass die hier beobachtete hemmende Wirkung von Echinacosid auf den Ca2-Plus-Eintrag die Proteinkinase-C-Aktivität und folglich die Glutamatfreisetzung verringern könnte.

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