Teil 2: Warum Kräuterextrakte potenzielle antioxidative, Anti-Aging-, entzündungshemmende und aufhellende kosmetische Zutat sein können

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Schlüsse

Kräuterextrakteaus verschiedenen pflanzlichen Materialien variierten in der äußeren Erscheinung, einschließlich Farbe und Geschmack. Unter 16 Kräuterextrakten ist SR enthielt den signifikantesten Gehalt an Phenolen und Flavonoiden, so dass SR die signifikantesten antioxidativen Aktivitäten in beiden DPPH besaß. und FRAP-Assays (p< 0.05).="" in="" addition,="" rd="" and="" pe="" also="" possessed="">AntioxidansTätigkeiten, die mit denen von SR vergleichbar sind (S. >0.05). Darüber hinaus haben SR, RD, und PE zeigte eine vielversprechendeweißendWirkung mit den signifikantesten Anti-Tyrosinase-Aktivitäten im Vergleich zu den anderen (p< 0.05).="" however,="" the="" herbal="" extract="" with="" the="" most="" significant="" anti-aging="" activities="" was="" ep,="" which="" inhibited="" collagenase,="" elastase,="" and="" hyaluronidase="" activity="" by="" 78.5="" ±="" 0.0%,="" 69.0="" ±="" 1.4%,="" and="" 64.2="" ±="" 0.3%,="" respectively.="" furthermore,="" ma="" and="" ms="" possessed="" the="" most="" significant="" anti-inflammatory="" activity,="" since="" it="" inhibited="" il-6="" and="" tnf-α="" secretion="" (p="">< 0.05).="" therefore,="" the="" various="">Kräuterextraktedie oben genannten vielversprechenden positiven Auswirkungen auf die Haut und könnte möglicherweise in kosmetischen /CosmeceuticalProdukte. Kräuterextrakte in Form von wässrigen Lösungen können direkt angewendet werden auf der Haut als verschiedene Formen von kosmetischen Produkten, wie Toner, Gesichtsnebel und Gesichtsserum. Sie könnten auch in verschiedene Formen entwickelt werden von kosmetischen Produkten, einschließlich Creme, Lotion und Gel. Für die Lieferung dieserKräuterextraktein eine tiefere Hautschicht, um ihreCosmeceuticalEigenschaften. Weiterhin wird eine Lyophilisation oder Lösungsmittelentfernung als weitere Verfahren zur Herstellung eines getrockneten Extrakts, der nicht nur mehr Details über die Menge des extrahierten Materials liefert, sondern auch länger aufbewahrt werden kann Zeitraum.

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Experimentelle Sektion

Pflanzliche Materialien

G. extension und M. alba Blätter wurden im Oktober 2018 von einer lokalen Farm im Bezirk Mae Rim, Chiang Mai, Thailand, gesammelt. Das Frische Die Blätter wurden mit Leitungswasser gewaschen und bei Umgebungstemperatur trocknen gelassen. Die Blätter wurden in kleine Stücke geschnitten und etwa gedämpft 5-10 Min. Anschließend wurden die geströmten Blätter bei niedriger Temperatur für 15 min geröstet und schließlich in einem Ofen getrocknet (UF110, Memert, Deutschland) für 3 Tage auf eine Temperatur von 45 oC eingestellt. Weiterhin wurden getrocknete M. alba-Blätter ohne Dämpf- oder Röstprozesse hergestellt. Getrocknete E. purpurea-Blüten wurden von einer lokalen Farm in Chiang Mai, Thailand, gekauft. Getrocknete A. elatior und G. pentaphyllum Blätter waren gekauft im Geschäft der Royal Project Foundation in Chiang Mai, Thailand. Getrockneter C. tinctorius, C. morifolium, C. ternatea, H. sabdarifa und J. Samba-Blüten, getrocknete P. amaryllifolius-Blätter, getrocknete R. damascena-Blüten, getrocknete S. rebaudiana-Blätter, getrocknetes C. verum-Rindenpulver und getrocknetes P. Emblica-Fruchtpulver wurden auf einem lokalen Markt in Chiang Mai, Thailand, gekauft. Alle getrockneten Pflanzenmaterialien wurden zu einem feinen Pulver gemahlen mit einem Moulinex-Mixer (Moulinex, Paris, Frankreich) und bis zur weiteren Verwendung in verschlossenen Behältern aufbewahrt, wie in Abbildung 10 gezeigt.

Abbildung 10. Getrocknete Kräuter (a) und getrocknete Pulver (b) aus verschiedenen pflanzlichen Stoffen

Mikroskopische Analyse von getrockneten Pflanzenstoffen

Die Pflanzenproben wurden von Frau Wannaree Charoensup, Botanikerin am Herbarium, Abteilung für Pharmazeutische Wissenschaften, Fakultät für Pharmazie, Chiang Mai Universität. Getrocknetes Pulver jedes Pflanzenmaterials wurde mit einer Nikon ECLIPSE analysiert E200 Mikroskop (Nikon Solutions Co., Ltd., Konan, Japan) verbunden mit einer Canon EOS750D Kamera (Canon Inc., Tochigi, Japan). [54] Montage Proben in verdünntem Glycerin wurden verwendet, um Objektträger vorzubereiten. Die mikroskopischen Eigenschaften und Zellbestandteile jeder Probe wurden untersucht und fotografiert mit einem Mikroskop mit 400× Objektivvergrößerungen.

Cistanche AnlageweißendEffektauf der HautAntioxidation

Chemische Werkstoffe

L-Ascorbinsäure, Kojisäure, Gallussäure, Quercetin, Oleanolsäure, Hyaluronsäure, Folin-Ciocalteu-Reagenz, Lipopolysaccharid (LPS), Rind Serumalbumin (BSA), 2,4,6-Tris(2-pyridyl)-s-triazin (TPTZ), 2,2'-diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH), 3-(4,5-dimethylthiazolyl-2)-2,5-diphenyltetrazoliumbromid (MTT), Kollagenase aus Clostridium histolyticum (EC 3.4.24.3), Elastase aus Schweinebauchspeicheldrüse (EC 3.4.4.7), Hyaluronidase aus Rinderhoden (EC 3.2.1.3.5), N-[3-(2-Furyl)acryloyl]-Leu-Gly-Pro-Ala (FALGPA), N-Succinyl-Ala-Ala-Ala-p-nitroanilid (AAAPVN), Dihydrochlorid-Pilztyrosinase (EC 1.14.18.1), L-3,4-Dihydroxyphenylalanin (L-DOPA) und L-Tyrosin wurden von SigmaAldrich (St. Louis, MO, USA) gekauft. Tricine and Tris base wurde von Fisher Chem Alert (Fair Lawn, NJ, USA) gekauft. Dulbecco modifizierter Adler Medium (DMEM), L-Glutamin, RPMI-1640, Penicillin/Streptomycin und Trypanblau wurden von Invitrogen™ (Grand Island, NY, USA) gekauft. Salzsäure und Essigsäure in AR-Qualität wurden von Merck (Darmstadt, Deutschland) gekauft. Aluminiumchlorid (AlCl3), Calciumchlorid (CaCl2), Eisenchlorid (FeCl2), Eisenchlorid (FeCl3), Eisensulfat (FeSO4), Kaliumacetat (CH3CO2K), Kaliumchlorid (KCl), Kalium Dihydrogenphosphat (KH2PO4), Kaliumpersulfat (K2S2O8), Natriumacetat (C2H3NaO2), Natriumcarbonat (Na2CO3), Natriumchlorid (NaCl), Natriumhydroxid (NaOH), Mononatriumphosphat (NaH2PO4) und Dinatriumphosphat (Na2HPO4) wurden von Fisher gekauft. Chemikalien (Loughborough, Vereinigtes Königreich). Ethanol und Dimethylsulfoxid (DMSO) in AR-Qualität wurden von Labscan (Dublin, Irland) gekauft.

Kräuterextraktion

Pflanzliche Pflanzenmaterialien wurden durch Infusion in abgekochtem Wasser extrahiert. Kurz gesagt, 1 g von jedem getrockneten Kräuterpflanzenpulver wurde in einen Tee verpackt Beutel und in 50 ml abgekochtes DI-Wasser getaucht. Der Teebeutel wurde dann nach 1, 3, 5, 10 und 15 Minuten Infusion entfernt. Der infundierte Extrakt wurde auf Raumtemperatur abgekühlt und in weiteren Untersuchungen verwendet.

Cistanche HerbaAuszug

Bestimmung des Gesamtphenolgehalts nach der Folin-Ciocalteu-Methode

Der Gesamtphenolgehalt jedes Kräuterextrakts wurde mit der Folin-Ciocalteu-Methode bewertet, die auf einer Methode von Chaiyana et al. basiert. [55] die von der Methode von Li et al. modifiziert worden waren. [56] Gallussäure wurde verwendet, um eine Standardkurve zu erstellen. Die Gehalte an phenolischer Verbindung werden in Milligramm Gallussäureäquivalent (GAE) pro Milliliter vonKräuterextrakte. Alle Experimente wurden in dreifacher Ausfertigung durchgeführt.

Bestimmung des Gesamtflavonoidgehalts nach der Aluminiumchloridmethode

Der Gesamtflavonoidgehalt jedes Kräuterextrakts wurde mit der Aluminiumchloridmethode basierend auf einer Methode von Do et al. bewertet.[57] Quercetin wurde verwendet, um eine Standardkurve zu erstellen. Die Flavonoidspiegel werden in Milligramm Quercetinäquivalent (QE) pro Milliliter vonKräuterextrakte. Alle Experimente wurden in dreifacher Ausfertigung durchgeführt.

2,2'-Diphenyl-1-picrylhydrazyl-Reagenzien (DPPH)-Assay

Die Abscheideaktivität gegen DPPH-Radikale (DPPH) jedes Kräuterextrakts wurde mit dem DPPH-Assay basierend auf einer Methode von Chaiyana et al., [55], die gegenüber der Methode von Blois modifiziert worden war. [58] Die Aasaktivität wurde unter Verwendung der Gleichung berechnet.

% Aufräumaktivität = {((A-B)-(C-D))/(A-B)} x 100 (1)

wobei A die UV-Absorption der DPPH-Lösung, B die UV-Absorption der Lösungsmittel, C die UV-Absorption des Gemisches vonpflanzlich Extrahiertund DPPH-Lösung, und D ist die UV-Absorption der Kräuterextraktlösung. Die Positivkontrolle war L-Ascorbinsäure. Alle Experimente wurden in dreifacher Ausfertigung durchgeführt.

FRAP-Assay (Ferric Reducing Antioxidant Power)

Die EisenreduktionAntioxidansDie Stärke jedes Kräuterextrakts wurde mit dem FRAP-Assay basierend auf einer Methode von Chaiyana et al. bewertet,[55] die von der Methode von Saeio et al. modifiziert worden war[59] FeSO4 wurde verwendet, um eine Standardkurve zu erstellen. Die eisenhaltige Reduktionsleistung beträgt dargestellt in Bezug auf die äquivalente Kapazität (EC1), die der Menge an FeSO4-Äquivalenten pro Milliliter der Probe entspricht. Die Positivkontrolle war L-Ascorbinsäure. Alle Experimente wurden in dreifacher Ausfertigung durchgeführt.

Bestimmung der Anti-Tyrosinase-Aktivität

Die hemmende Aktivität gegen das Tyrosinase-Enzym jedes Kräuterextrakts wurde mit einem spektralphotometrischen Assay basierend auf einem Methode des Laosirisathian et al.,[60], die von der Methode des Pomerantz modifiziert worden war. [61] Die Anti-Tyrosinase-Aktivitäten wurden berechnet. Verwenden der Gleichung

% Anti-Tyrosinase-Aktivität = {((A-B)-(C-D))/(A-B)} x 100 (2)

wobei A die UV-Absorption eines Tyrosinase-Enzyms in Kombination mit dem Substrat, B die UV-Absorption des Lösungsmittels und C das UV ist Absorption derKräuterextrakteIn Kombination mit einem Tyrosinase-Enzym und dem Substrat ist D die UV-Absorption der pflanzlichen Extraktlösung. Die Positivkontrolle war Kojisäure. Alle Experimente wurden in dreifacher Ausfertigung durchgeführt.

Cistancheist einTyrosinase-Hemmer

Bestimmung der Kollagenase-Hemmaktivität mittels spektralphotometrischer Methode

Die kollagenasehemmende Aktivität jedes Kräuterextrakts wurde mit einem spektralphotometrischen Assay bewertet, der auf einer Methode von Chaiyana et al.[44] mit leichten Modifikationen. Erstens waren 0,16 Einheiten/ml Kollagenaselösung eine Kombination von Kollagenase aus Clostridium Histolytikum, 80 mM NaCl, 2 mM CaCl2 und 50 mM Tricinpuffer, pH 7,5. Anschließend wurden 200 μL der resultierenden Kollagenaselösung auf 20 μL jedes Kräuterextrakts in einer Flachboden-Bohrlochplatte (Costar, Corning Ltd., Sunderland, UK) aufgetragen und 15 min stehen gelassen. Anschließend 80 μL von 1 mg/ml FALGPA im Trizinpuffer, pH 7,5, wurde als Substrat auf die enzymatische Reaktion aufgetragen und weiter für 20 min belassen. Das UV Die Absorption der resultierenden Mischung wurde bei 340 nm mit einem Multimode-Detektor (Beckman CoulterDTX880, Fullerton, CA, USA) gemessen. Das Kollagenasehemmende Aktivitäten wurden unter Verwendung der Gleichung

% Antikollagenase-Aktivität = {((A-B)-(C-D))/(A-B)} x 100 (3)

wobei A die UV-Absorption der Kollagenaselösung in Kombination mit der FALUNGPA-Lösung, B die UV-Absorption der Lösungsmittel ist, C das UV ist Absorption derKräuterextraktekombiniert mit der Kollagenase- und FALUNGPA-Lösung, und D ist die UV-Absorption des Kräuterextrakts Lösung. Die Positivkontrolle war EGCG. Alle Experimente wurden in dreifacher Ausfertigung durchgeführt.

Bestimmung der elastasehemmenden Aktivität mit der spektralphotometrischen Methode

Die elastasehemmende Aktivität jedes Kräuterextrakts wurde mit einem spektralphotometrischen Assay basierend auf einer Methode von Chaiyana bewertet. et al.[44] Die elastasehemmenden Aktivitäten wurden unter Verwendung der Gleichung

% Antielastase-Aktivität = {((A-B)-(C-D))/(A-B)} x 100, (4)

wobei A die UV-Absorption von Elastaselösung und AAAPVN-Lösung ist, B die UV-Absorption der Lösungsmittel, C die UV-Absorption derKräuterextraktekombiniert mit Elastase und AAAPVN-Lösung, und D ist die UV-Absorption der pflanzlichen Extraktlösung. EGCG wurde als Positivkontrolle. Die Positivkontrolle war EGCG. Alle Experimente wurden in dreifacher Ausfertigung durchgeführt.

Bestimmung der Hyaluronidase-Hemmaktivität durch spektralphotometrische Methode

Die hyaluronidasehemmende Aktivität jedes Kräuterextrakts wurde mit einem spektralphotometrischen Assay bewertet, der auf einer Methode von Chaiyana et al.[44] Die hyaluronidasehemmenden Aktivitäten wurden unter Verwendung der Gleichung

% Hyaluronidase-Aktivität = {((A-B)-(C-D))/(A-B)} x 100 (5)

wobei A die UV-Absorption der Hyaluronidaselösung in Kombination mit der Hyaluronsäurelösung ist, B die UV-Absorption der Lösungsmittel ist, C ist die UV-Absorption derKräuterextraktekombiniert mit der Hyaluronidase-Lösung und der Hyaluronsäure-Lösung, und D ist das UV Absorption der Kräuterextraktlösung. Die Positivkontrolle war Oleanolsäure. Alle Experimente wurden in dreifacher Ausfertigung durchgeführt.

Bestimmung der entzündungshemmenden Aktivität durch den enzymgebundenen Immunosorbent-Assay (ELISA)

Die entzündungshemmende Wirkung jedes Kräuterextraktes wurde mittels hemmender Aktivitäten gegen IL-6- und TNF-α-Sekretion untersucht. basierend auf einer Methode von Chaiyana et al.,[44], die von der Methode von Mueller et al. modifiziert worden war[62] LPS wurde verwendet, um die Entzündungsprozess in Maus-Monozyten-Makrophagen-RAW-264.7-Zellen (American Type Culture Collection, ATCCTIB-71). Die inkubierte Zelle mit LPS diente als Fahrzeugkontrolle, wobei 100% der Zytokine sezerniert wurden, während unbehandelte RAW 264,7-Zellen als Negativkontrolle dienten. Das Der MTT-Assay wurde verwendet, um die Lebensfähigkeit von RAW 264,7 Zellen in Verbindung mit dem ELISA zu bewerten. [62] Die Hemmung der IL-6- und TNF-α-Sekretion betrug berechnet mit Hilfe der Gleichung

% Zytokinhemmung = {((A-B)-(C-D))/(A-B)} x 100 (6)

wobei A die optische Dichte derKräuterextrakteaus dem MTT-Assay, B ist die optische Dichte der Negativkontrolle aus dem MTT-Assay, C ist die optische Dichte der Kräuterextrakte aus ELISA und D ist die optische Dichte der Fahrzeugsteuerung von ELISA. Die Positivkontrolle war Dexamethason. Alle Experimente wurden in dreifacher Ausfertigung durchgeführt.

Statistische Analyse

Alle Ergebnisse werden in Form von Mittelwert ± Standardabweichung (S.D.) dargestellt. Die Einweg-Varianzanalyse (ANOVA) wurde verwendet, um Bestimmung der statistischen Signifikanz, gefolgt von den Post-hoc-Tests der Türkei mit SPSS 17.0 für Windows (SPSS Inc., Chicago, IL, USA). P< 0.05="" was="" regarded="" as="" statistically="">

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