Aufhellende Kosmetika haben einen großen Marktumfang und breite Entwicklungsaussichten, während aufhellende Produkte der traditionellen chinesischen Medizin schon immer ein Forschungsschwerpunkt waren. In dieser Studie wurde der aufhellende aktive Extrakt von Platycodon grandiflorum (PGE) zum ersten Mal isoliert und gereinigt und der Aufhellungsaktivitätsmechanismus und die chemische Zusammensetzung von PGE aufgeklärt. Insgesamt 45 Komponenten wurden mittels Hochleistungsflüssigkeitschromatographie-Massenspektrometrie (HPLC-MS)-Analyse identifiziert, darunter Arbutin, Syringin, Chlorogensäure, Glykosid E, Platycodin D3, Baicalin, Platycodin D und Luteolin. Die Abfangraten von PGE gegenüber den freien Radikalen DPPH und ABTS betrugen 98,03 Prozent bzw. 84,30 Prozent. Die Hemmrate von PGE gegenüber Tyrosinase betrug bis zu 97,71 Prozent. Das PGE hatte signifikante entzündungshemmende Wirkungen auf RAW264.7-Makrophagen, die durch Lipopolysaccharid (LPS) stimuliert wurden, und hatte signifikante Hemmwirkungen auf die Tyrosinase- und Melaninerzeugung von B16F10-Zellen, die durch a-MSH stimuliert wurden. Die Ergebnisse zeigten, dass das PGE einen synergistischen Aufhellungseffekt erzielte, indem es die Aktivierung freier Sauerstoffradikale auf Tyrosinase, Antioxidation, entzündungshemmende Wirkung, Enzymaktivität und Melaninbildung hemmte. Als aus natürlichen Pflanzen gewonnener Aufheller verfügt PGE über ein hervorragendes Potenzial für die Erforschung und Entwicklung pflanzlicher Aufhellungskosmetik, was den Grundstein für die weitere Entwicklung und Nutzung der Ressourcen von Platycodon grandiflorum legt und eine theoretische Grundlage für die Entwicklung grüner und organischer Aufhellungskosmetik bietet.
Laut einschlägigen StudienCistancheist ein weit verbreitetes Kraut, das als „Wunderkraut, das das Leben verlängert“ bekannt ist. Sein Hauptbestandteil istCistanosid, was verschiedene Auswirkungen hat, wie zAntioxidans, aentzündungshemmendund Förderung der Immunfunktion. Der Mechanismus zwischen Cistanche undHautaufhellungliegt in der antioxidativen Wirkung von Cistanche-Glykosiden. Melanin in der menschlichen Haut entsteht durch die katalysierte Oxidation von TyrosinTyrosinaseDa die Oxidationsreaktion die Beteiligung von Sauerstoff erfordert, werden die sauerstofffreien Radikale im Körper zu einem wichtigen Faktor, der die Melaninproduktion beeinflusst. Cistanche enthält Cistanosid, ein Antioxidans, das die Bildung freier Radikale im Körper reduzieren kannHemmung der Melaninproduktion.
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1. Einleitung
In der globalen Schönheitsindustrie gibt es zahlreiche Arten aufhellender Funktionskosmetik, und es wird erwartet, dass der Marktanteil weiter wächst. Um der steigenden Nachfrage nach Hautaufhellern in aufhellenden kosmetischen Formulierungen gerecht zu werden und den hautaufhellenden Effekt zu erzielen, hat die Kosmetikindustrie mehrere chemische Zusatzstoffe eingeführt, darunter Hydrochinon, Cystein, Glutathion, Vitamin A und Glukokortikoid. Diese Verbindungen haben eine gute Aufhellungswirkung; einige von ihnen haben jedoch toxische Nebenwirkungen; Beispielsweise verursacht „Rhododendron“ weiße Flecken auf der Haut des Anwenders.1 „Hydroquinon“ hat zytotoxische und mutagene Eigenschaften ) zu Kosmetika ist nicht erlaubt. Die Wirkung des Produkts ist nicht der einzige Maßstab, den der Verbraucher beim Kauf von Kosmetika berücksichtigt. In den letzten Jahren kam es im Streben nach Gesundheit immer wieder zu Sicherheitsproblemen bei kosmetischen Produkten. Forscher haben herausgefunden, dass aus natürlichen Kräutern gewonnene Aufhellungswirkstoffe weniger toxisch sind und weitaus weniger Nebenwirkungen haben. Immer mehr Verbraucher legen Wert auf Produktsicherheit. Darüber hinaus erfreuen sich grüne, umweltfreundliche und biologische Produkte immer größerer Beliebtheit, was sich auch in der Werbung vieler Direktvertriebsmarken widerspiegelt. Daher sind die Erforschung und Entdeckung sicherer und gesunder aufhellender Hautpflegebestandteile zu einem Trend in der modernen Entwicklung geworden. Die Verwendung chinesischer Kräuterextrakte aus natürlichen Pflanzen als Rohstoffe in Kosmetika hat sich nach und nach zu einem Forschungsschwerpunkt bei der Entwicklung von Bleaching- und Hautpflegeprodukten entwickelt.4
Platycodon grandiflorum, ein traditionelles chinesisches Heilmittel, wird in China seit über 2000 Jahren verwendet. Die früheste Erwähnung geht auf den „Shennong-Kräuterklassiker“ zurück.5 Die traditionelle pharmakologische Wirkung von Platycodon grandiose besteht darin, Husten und Auswurf zu reduzieren. Platycodon grandiflorum enthält Saponine, Alleen, Phenolsäuren, Sterole und Polysaccharide.6–8 Die Komplexität und Vielfalt der chemischen Bestandteile bestimmt die Vielfalt ihrer biologischen Aktivitäten.9 Moderne pharmakologische Forschungen haben gezeigt, dass Platycodon grandiflorum entzündungshemmende, bakteriostatische und antibakterielle Eigenschaften hat -Tumor-, Antioxidations-, Immunregulations- und andere pharmakologische Wirkungen.10,11 In Korea und Nordchina wird Platycodon grandiflorum häufig als Rohstoff für Lebensmittel und Kosmetika verwendet. Kosmetika, die aus dem Rohstoff Platycodon grandiflorumas hergestellt werden, wie Bleichessenz, Bleichmilch und Bleichduschgel, werden von Verbrauchern in Korea, Japan und anderen asiatischen Ländern bevorzugt.12 Der Extrakt aus Platycodon grandiflorum ist auch in der Liste der internationalen Kosmetikrohstoffe aufgeführt Materialkatalog.13 Allerdings sind die aufhellenden Wirkstoffe und der Wirkungsmechanismus von Platycodon grandiflorum noch unklar, und es wurden nur wenige vorläufige Studien zu seiner aufhellenden Aktivität durchgeführt. Gong XJ et al. verglichen die Tyrosinase-hemmenden Aktivitäten verschiedener chinesischer Kräuter und fanden heraus, dass Platycodon grandiflorum die stärkste hemmende Wirkung hatte.14 Auf dieser Grundlage haben Xu BJ et al. untersuchten die aufhellende Wirkung des wirksamen Bestandteils von Platycodon grandiflorum mittels eines Experiments zur Tyrosinasehemmung und stellten fest, dass der wirksame Bestandteil von Platycodon grandiflorum wahrscheinlich der gesamte Saponingehalt war.15 In dieser Studie sollten die aktiven aufhellenden Substanzen und der Aufhellungsmechanismus von Platycodon grandiflorum weiter geklärt werden Als Forschungsobjekt verwendeten wir den aufhellenden Wirkstoffextrakt von Platycodon grandiflorum, der durch die pharmakodynamische Tracking-Methode gewonnen wurde. Durch die Untersuchung der Aktivität und Komponenten klären wir die Zusammensetzung der aufhellenden Wirkstoffe von Platycodon grandiflorum und erforschen den Aufhellungsmechanismus der aufhellenden Wirkstoffe von Platycodon grandiflorum. Die Studie wird eine theoretische Grundlage für die bessere Nutzung von Platycodon grandiflorum als Rohstoff für aufhellende Kosmetika liefern.
Hautaufhellungseffekte beinhalten die Reduzierung der Melaninproduktion in der Haut. Melanin ist das Hauptpigment zur Steuerung der Haut- und Haarfarbe. Es ist eine hochmolekulare Verbindung, die in Tieren und Pflanzen weit verbreitet ist. Wenn übermäßig viel Melanin produziert wird, reichert sich Melanin in der Haut an und bildet Flecken und Sommersprossen, was zu schwerem Hautkrebs führen kann.16 Um eine übermäßige Hautpigmentierung zu verhindern, ist es daher notwendig, die Melaninproduktion zu hemmen. Melanozyten befinden sich in der epidermalen Basalschicht und werden durch Tyrosinase kontrolliert. Reaktive Sauerstoffspezies aktivieren die Tyrosinaseaktivität, und Tyrosinase katalysiert 3,4-Dihydroxyphenylalanin (DOPA), um DOPA-Chinon zu produzieren, und katalysiert dann DOPA-Chinon, um durch Autooxidation und Enzymreaktion Melanin zu produzieren. Daher kann die Hemmung der Tyrosinase- und Melanozytenproliferation die Melaninproduktion erheblich hemmen.17 Darüber hinaus können gute antioxidative und entzündungshemmende Wirkungen die durch Oxidation und Entzündung der Haut verursachten Schäden reduzieren, die Hautalterung verzögern und die Haut elastisch und glatt halten üben einen synergistischen Aufhellungseffekt aus.18,19
Um einen natürlichen aktiven Extrakt aus Platycodon grandiflorum mit aufhellenden, antioxidativen und entzündungshemmenden Eigenschaften zu finden, konzentrierte sich diese Studie daher hauptsächlich auf die Auswirkungen von Platycodon grandiflorum-Extrakt (PGE) auf die Tyrosinase-Hemmung, die intrazelluläre Tyrosinase-Hemmung und die hemmende Aktivität der Zelle Melaninbildung. Ziel der Studie war es, die hemmende Wirkung von PGE auf die Tyrosinaseaktivität und die Melaninbildung zu analysieren und die aufhellende und hautpflegende Wirkung von PGE sowie seine antioxidativen und entzündungshemmenden Wirkungen umfassend zu bewerten. Die chemische Zusammensetzung von PGE wurde mittels Hochleistungsflüssigkeitschromatographie (HPLC) und Flüssigkeitschromatographie (LC)/Massenspektrometrie (MS) identifiziert und analysiert, und das spezifische aufhellende aktive Material des PGE wurde geklärt. Es ist von entscheidender Bedeutung, neue Platycodon grandiflorum-Produkte zu entwickeln und die Entwicklung der Platycodon grandiflorum-Industrie zu fördern.
2. Materialien und Methoden
2.1. Materialien
Ameisensäure, Methanol, 2,2-Diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH), 2,20-casino-bis (3-ethylbenzothiazolin-6-sulfonsäure) (ABTS ), Acetylaceton, NaOH, K2S2O8 und Ehrlich-Reagenz wurden von der Beijing Chemical Plant bezogen. Die Referenzprodukte Platycodin D, Arbutin, Platycodin D3, Glykosid E, Syringin, Chlorogensäure, Baicalin und Luteolin wurden vom China Institute of Pharmaceutical Biological Products Identification bezogen. Das chromatographisch reine Acetonitril und Methanol wurden von JT Baker Co., USA, bezogen. Tyrosinase, L-Tyrosin, Natriumhyaluronat und Hyaluronat wurden von Beijing Solebo Technology Co., Ltd. bezogen. Die ursprünglichen 264,7-Zellen und B16F10-Zellen wurden vom Cell Resource Center des Shanghai Institute of Biological Sciences, China, gekauft und dort gelagert Labor einer medizinischen Hochschule, die der Universität für Chinesische Medizin Changchun angegliedert ist. Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DMEM), fötales Rinderserum und Antibiotika (Penicillin und Streptomycin) wurden von Gibco USA bezogen. Triton Changchun Baijin Biotechnology Co., Ltd. Reines Wasser wurde von Wahaha Food Co. Ltd. bezogen.
2.2. Zubereitung aus dem aufhellenden Wirkstoffextrakt Platycodon grandiflorum
Platycodon grandiflorum wurde von Hebei Renxin Pharmaceutical Co. Ltd. geliefert. Platycodon grandiflorum wurde zu Pulver zerkleinert, erhitzt und dreimal für jeweils 1 Stunde mit 95-prozentiger Ethanollösung wiederverwendet. Dann wurde das Produkt filtriert und das Filtrat gewonnen und mit dem aus drei Extraktionen erhaltenen Filtrat zusammengeführt. Das Filtrat wurde getrocknet und zur Auflösung mit destilliertem Wasser gemischt, und mit Wasser gesättigtes n-Butanol (1:1 Volumen) wurde fünfmal extrahiert. Die n-Butanol-Schicht wurde vereinigt, die n-Butanol-Lösung entfernt und das PGE erhalten. Die Extraktionsrate von PGE aus Platycodon grandiflorum betrug 8,9 Prozent.
2.3. Zellkultur
B16F10-Maus-Melanomzellen und RAW264.7-Zellen wurden in DMEM, ergänzt mit 10 Prozent fötalem Rinderserum, 100 U ml–1 Penicillin und 100 g ml–1 Streptomycin, in feuchter Luft mit 5 Prozent CO2 bei 37 °C kultiviert. Wenn die Zellen wurden bis zum Fusionszustand gezüchtet, mit Trypsin verdaut und die Zellen wurden alle zwei Tage passiert. Alle Experimente wurden dreimal durchgeführt und dreimal wiederholt, um die Wiederholbarkeit sicherzustellen.
2.4. Zelllebensfähigkeitstest
Um die Sicherheit von PGE zu bewerten, wurden die Auswirkungen von PGE auf B16F10- und RAW264.7-Zellen mit der CCK-8-Methode gemäß den Anweisungen des Herstellers bestimmt.20 Zunächst wurden B16F10-Zellen und RAW264.7-Zellen in {{ 10}}Well-Platten mit Konzentrationen von 5 × 103 Zellen pro Well und 1 × 10⒋ Zellen pro Well für 24 Stunden und dann mit PGE oder DMEM in unterschiedlichen Konzentrationen für 72 Stunden behandelt. Nach der Behandlung wurden 10 ml CCK-8-Reagenz in jede Vertiefung gegeben und die Zelle wurde weitere 2 Stunden lang kultiviert. Die Absorption bei 450 nm wurde mit einem Mikroplatten-Lesegerät gemessen.
2.5. Antioxidative Aktivität
Die antioxidative Aktivität von PGE wurde mittels DPPH- und ABTS-Radikalfängertests bestimmt, und Ascorbinsäure wurde als Positivkontrolle verwendet.21,22 Die Ergebnisse wurden als prozentuale Hemmungsrate ausgedrückt.
Darüber hinaus PGE-Lösung, Ascorbinsäure und Platycodin D mit unterschiedlichen Konzentrationen ({{0}}.2, 0.4, 0.6, 0.8 , 1.0 und 1,2 mg mL―1) wurden in ein verstopftes Reagenzglas gegeben. Dann wurden 2 ml DPPH-Lösung in jedes Reagenzglas gegeben; Die Röhrchen wurden gewirbelt, die Mischung wurde gemischt und 30 Minuten lang in einer dunklen Kammer reagieren gelassen, und die Absorption A1 bei 520 nm wurde bestimmt. Anschließend wurden 2 ml Methanol als Kontrollgruppe anstelle der DPPH-Lösung verwendet, um den Absorptionswert A2 zu bestimmen. Der Absorptionswert A0 wurde bestimmt, indem die Probenlösung durch 2 ml Methanol als Blindkontrollgruppe ersetzt wurde. Der Absorptionswert wurde mit Methanol auf 0 eingestellt. Die DPPH-Radikalfängerrate wurde nach folgender Formel berechnet:
Um ABTS plus Mutterlauge herzustellen, wurden 35,2 mg ABTS und 6,139 mg Kaliumpersulfat auf ein konstantes Volumen von 10 ml gemischt. Die Flüssigkeit wurde nach 12–16 h Reaktion bei Raumtemperatur mit Methanol verdünnt, bis der Absorptionswert der Lösung bei 734 nm etwa 7,{{10}} × 0,2 betrug. Dann 30 ml PGE-Lösung, Ascorbinsäure und Platycodin D mit unterschiedlichen Konzentrationen (0.2, 0.4, 0,6, 0,8, 1,0, 1,2 mg mL―1) wurden mit 220 ml ABTS plus c-Lösung in einer enzymmarkierten 96--Well-Platte gemischt und die Absorption bei 734 nm nach 6-minütiger Reaktion im Dunkeln gemessen.
Dabei ist A0 die Absorption der Blindprobe und AS die Absorption der zu messenden Probe.
2.6. Lipopolysaccharid-induzierte entzündungshemmende Aktivität von RAW264.7-Makrophagen
RAW264.7-Makrophagen in 1 ml Medium wurden in eine 24--Wellplatte mit 1×104 Zellen pro Well ausgesät und über Nacht kultiviert, so dass die Zellen an der Wand hafteten. Die Zellen wurden 24 Stunden lang kultiviert, nachdem sie Lipopolysaccharid (LPS) und PGE-Extrakten in verschiedenen Konzentrationen (10, 50, 100 mg mL―1) ausgesetzt wurden. Die Konzentrationen von NO, IL-6 und TNF-a im Zellüberstand wurden mit einem ELISA-Kit gemäß den Anweisungen des Herstellers bestimmt.23
2.7. Tyrosinase-Aktivität
Unter Verwendung einer in der Literatur beschriebenen Methode mit Phosphatpuffer (25 mmol, pH=6,8) als Lösungsmittel, L-Tyrosin-Substratlösung (0,5 mg mL―1), einem Tyrosinenzym Lösung (50 U ml―1) und andere Lösungen in 96-Well-Platten eines 240-ml-Gesamtreaktionssystems, zusammen mit 120 ml Substratlösung, 40 ml Phosphatpuffer, 40 ml Probenlösung und Mixer. Dann wurden 40 ml Tyrosin-Enzymlösung zum obigen System gegeben. Die Reaktion der konstanten Temperatur eines 37 °C warmen Wasserbades über 20 Minuten wurde aufgezeichnet und die Absorption bei 475 nm gemessen.24
Dabei ist A die Absorption der durch die äquivalente Pufferlösung ersetzten Probenlösung, B die Absorption der Probenlösung, die durch die äquivalente Pufferlösung ersetzte Tyrosinaselösung, C die Absorption der Probenlösung und D die Absorption von die äquivalente Pufferlösung anstelle der Tyrosinaselösung (Tabelle 1).
2.8. Hemmende Aktivität der Melaninbildung
B16F10-Melanomzellen in 1 ml Medium wurden in eine 24--Well-Kulturplatte mit 1×104 Zellen pro Well ausgesät und über Nacht kultiviert, damit die Zellen an der Wand haften konnten. Die Zellen wurden 48 Stunden lang mit a-Melanozyten-stimulierendem Hormon (100 nM a-MSH) und 24, 48 und 72 Stunden lang mit verschiedenen PGE- und Arbutinkonzentrationen (100, 150, 200 mg mL―1) kultiviert.
Nach der Verabreichungszeit wurden die Zellen zweimal mit PBS (pH=7,2) gewaschen und mit 200 ml PBS, das 1 Prozent Triton X-100 enthielt, gemischt. Die Zellen wurden durch Einfrieren und Auftauen lysiert. Nachdem das System 30 Minuten lang bei 12 000 U/min zentrifugiert wurde, wurde der Überstand entfernt und 1 M NaOH mit 10 Prozent Dimethylsulfoxid (300 ml) in die Zellkörner gegeben; Anschließend wurde 2 Stunden lang bei 80 Grad reagiert, um das Melanin in den Zellen zu lysieren.25 Die Absorption bei 450 nm wurde bestimmt.
2.9. Zelltyrosinase-Aktivität
B16F10-Melanomzellen in 1 ml Medium wurden in eine 24--Well-Kulturplatte mit 1 × 104 Zellen pro Well ausgesät und über Nacht kultiviert, damit die Zellen an der Wand haften konnten. Die Zellen wurden 48 Stunden lang mit a-Melanozyten-stimulierendem Hormon (100 nM a-MSH) und 24, 48 und 72 Stunden lang mit unterschiedlichen Konzentrationen (100, 150, 200 mg mL―1) PGE und Arbutin kultiviert. Nach der Verabreichungszeit wurden die Zellen zweimal mit PBS (pH =7,2) gewaschen und mit 200 ml PBS, das 1 Prozent Triton X-100 enthielt, gemischt. Die Zellen wurden durch Einfrieren und Auftauen lysiert. Nach 30-minütiger Zentrifugation bei 12 000 U/min wurde der Überstand in eine Platte mit 96--Wells gegeben, 100 ml pro Well, und mit 100 ml 0,1-prozentiger L-DOPA-Lösung gemischt. Nach 2-stündiger Inkubation bei 37 Grad wurde die Absorption bei 475 nm sofort bestimmt.26
2.10. Analyse der chemischen Zusammensetzung
2.10.1. HPLC-Analyse.Die PGE-Probenlösung wurde mit einem Shimadzu LC{{0}}AHT HPLC-System mit einem ELSD6000 Evaporative Light Scattering Detector (Alltech CHROM) analysiert.27 Die chromatographische Trennung wurde auf einem Sepax Bio durchgeführt -C18-Säule (4,6 x 250 mm, 5 mm, von Sepax Technologies, Delaware, USA). Das mobile Phasensystem bestand aus der mobilen Phase A (Acetonitril) und der mobilen Phase B (0,1 Prozent Ameisensäure, Wasser). Der Lösungsmittelgradient ist in Tabelle 2 dargestellt. Die chromatographischen Bedingungen waren wie folgt: Die Durchflussrate betrug 0,8 ml/min, die anfängliche Temperatur der Evaporative Light Scattering Detection (ELSD) betrug 105 × C, die Gasdurchflussrate betrug 2,8 l/min. 1, und die Injektionsmenge betrug 20 l. Es wurden zwanzig Chargen PGE hergestellt.
2.10.2. Analyse der chemischen Zusammensetzung von PGE mittels HPLC kombiniert mit Massenspektrometrie.Zur Analyse und Identifizierung wurde die hochauflösende LC/MS-Technologie Q-Orbitrap in Kombination mit dem hochauflösenden Massenspektrometer Q Exactive auf dem Chromatographiesystem Ultimate 3000 RS verwendet die chemische Zusammensetzung der PGE-Probenlösung mittels MS.28 Die MS-Bedingungen sind wie folgt: Ionenquelle: Elektrospray-Ionisationsquelle; Scan-Modus: Scan-Schalter für positive und negative Ionen; Nachweismethode: Vollmasse/dd-MS2; Auflösung: 70 000 (volle Masse), 17 500 (dd-MS2); Scanreichweite: 150.0–2000.0 m/z; Elektrospray-Spannung: 3,8 kV (positiv); Kapillartemperatur: 300 Grad C; Kollisionsgas: hochreines Argon (Reinheit 99,999 Prozent); Hüllgas: Stickstoff (Reinheit 99,999 %, 40 Arb); Hilfsgas: Stickstoff (Reinheit 99,999 Prozent, 350 Grad); Datenerfassungszeit: 30,0 Min. Chromatografische Bedingungen: Chromatische Grafiksäule: RP-C18 (150 × 2,1 mm, 1,8 mm, Welch); Flussrate: 0,30 ml min― 1; wässrige Phase: 0,1 Prozent wässrige Ameisensäurelösung; organische Phase: 0,1 Prozent Ameisensäureacetonitril; Nadelwaschflüssigkeit: Methanol; Säulentemperatur: 35 Grad C; Injektionsvolumen: 5,00 ml. Der Lösungsmittelgradient ist in Tabelle 3 dargestellt.
2.11. Datenstatistik
Alle Experimente wurden mindestens dreimal durchgeführt. Die Daten wurden als Mittelwert ± Standardabweichung angegeben. Statistische Analysen wurden mit SPSS 21.0 und Origin 9.0 durchgeführt. Für mehrere Vergleiche wurden die Daten einer einfaktoriellen ANOVA (türkischer Post-hoc-Test) und einem gepaarten T-Test unterzogen, um die statistische Signifikanz zu bestimmen. p < 0.05 galt als statistisch signifikanter Unterschied zwischen den Gruppen.
3. Ergebnisse
3.1. Die Auswirkungen von PGE auf die Lebensfähigkeit von B16F10-Zellen und 264,7-Zellen
Die Auswirkungen von PGE auf B16F10-Melanomzellen und RAW264.7-Makrophagen wurden mithilfe der CCK-8-Methode nachgewiesen. Die Zellen wurden 24 Stunden lang mit unterschiedlichen PGE-Konzentrationen behandelt und anschließend mit der CCK-8-Methode nachgewiesen. Die Ergebnisse werden als Prozentsatz des Überlebens im Vergleich zur Kontrollgruppe ausgedrückt. Unter PGE-Konzentrationen von 10–100 mg mL―1 (Zelllebensfähigkeit: 99,42 ±1,951–107,17 ±2,601 Prozent) zeigte das PGE keine Zytotoxizität auf die 264,7-Zellen (Abb. 1). Allerdings kam es bei einer PGE-Konzentration von 200 mg mL―1 zu einem signifikanten Rückgang der Zellaktivität (Zelllebensfähigkeit: 74,91 ± 1,574 Prozent). Daher ist ein Dosierungsbereich von 10–100 mg mL―1 (Die Extraktionsrate von PGE in Platycodon Grandiflorum betrug 8,9 Prozent. Eine Konzentration von 10–100 mg mL―1 PGE entspricht 0,11–1,12 mg mL―1 Platycodon Grandiflorum. Die Zugabe von 1 ml wirkstoffhaltigem Medium pro Vertiefung entspricht der Zugabe von 0,11–0,12 mg Platycodon Grandiflorum.) sollte ausgewählt werden. Hier wurden 10 mg mL―1, 50 mg mL―1 und 100 mg mL―1 (Konzentration pflanzlicher Arzneimittel: 0,11 mg mL―1, 0,56 mg mL―1 bzw. 1,12 mg mL―1) ausgewählt niedrige, mittlere und hohe Konzentrationen.
Die Aktivität der B16F10-Zellen unterschied sich geringfügig von der der 264,7-Zellen. Bei einer PGE-Konzentration von 10–200 mg mL―1 (Lebensfähigkeit der Zellen: 99,03 ± 1,965 Prozent – 91,48 ± 1,382 Prozent) unterschied sich die Aktivität der B16F10-Zellen nicht signifikant von der der Kontrollgruppe. Wenn die Konzentration jedoch 250 mg mL―1 betrug (Zelllebensfähigkeit: 85,69 ± 2,284 Prozent), begann die Aktivität der B16F10-Zellen zu sinken, und die Zellaktivität unter einer PGE-Konzentration von 1000 mg mL―1 (Zelllebensfähigkeit: 70,75) ein Dosierungsbereich von 10–200 m3,337 Prozent) war am niedrigsten. g mL―1 (Die Extraktionsrate von PGE in Platycodon Grandiflorum betrug 8,9 Prozent. Eine Konzentration von 100–200 mg mL―1 PGE entspricht 1,12–2,24 mg mL―1 Platycodon Grandiflorum. Zugabe von 1 ml wirkstoffhaltigem Medium pro Vertiefung entspricht der Zugabe von 1,12–2,24 mg Platycodon Grandiflorum.) sollte ausgewählt werden. Hier 100 mg mL―1, 150 mg mL―1 und 200 mg mL―1 (Konzentration pflanzlicher Arzneimittel: 1,12 mg mL―1, 1,68 mg mL―1 2,24 mg mL―1). ) wurden als niedrige, mittlere bzw. hohe Konzentrationen ausgewählt (Abb. 2).
3.2. Antioxidative Kapazität von PGE
Zur Messung der antioxidativen Aktivität von PGE wurden DPPH- und ABTS-Radikalfängertests verwendet. Die Abfangaktivitäten von PGE gegenüber DPPH- und ABTS-Radikalen wurden unter verschiedenen PGE-Konzentrationen bestimmt (0.5, 1.0, 1.5, 2.0, 2.5 mg mL― 1). Als Positivkontrolle dienten Platycodin D und Ascorbinsäure. Wie in Abb. 3 gezeigt, stieg die Abfangaktivität von PGE gegenüber freien DPPH- und ABTS-Radikalen dosisabhängig an, ähnlich wie bei den Ergebnissen der Positivkontrollgruppe. Bei einer PGE-Konzentration von 6,25 mg mL― 1 betrug die Fängeraktivität gegenüber dem DPPH-Radikal 98,03 ±0,60 Prozent, fast genauso viel wie die Fängeraktivität von Ascorbinsäure. Darüber hinaus zeigte PGE auch eine starke Fängeraktivität gegenüber ABTS-Radikalen (84,30 ± 0,53 Prozent), die höher war als die der Platycodin-D-Kontrollgruppe.
3.3. PGE-Reduktionseffekt auf die LPS-stimulierte Entzündungsreaktion von RAW264.7-Makrophagen
Gemäß den Ergebnissen der Wirkung von PGE auf die RAW264.7-Makrophagenaktivität in Abschnitt 3.1 wurden PGE-Konzentrationen von 10, 50 und 100 mg mL―1 als niedrige, mittlere bzw. hohe Dosierung ausgewählt, um die Wirkung zu testen von PGE auf LPS-stimulierte RAW264.7-Makrophagenentzündung. Wie in Abb. 4 gezeigt, reduzierte das PGE dosisabhängig die NO-Produktion in LPS-stimulierten RAW264.7-Makrophagen und reduzierte dosisabhängig die Spiegel der Entzündungsfaktoren IL-6 und TNF-a.
3.4. Auswirkungen von PGE auf die Pilz-Tyrosinase-Aktivität, den Melaningehalt in B16F10-Melanozyten und die intrazelluläre Tyrosinase-Aktivität
Wie in Abb. 5 gezeigt, nahm die Tyrosinase-hemmende Aktivität von PGE mit zunehmender Extraktkonzentration signifikant zu. Je höher die PGE-Konzentration, desto stärker ist die Hemmwirkung der Tyrosinase. Die Tyrosinase-inhibitorischen Aktivitäten von PGE bei 0,5, 1,0, 1,5, 2,0, 2,5 und 3,0 mg mL―1 betrugen 6{ {29}}.29 Prozent, 79,32 Prozent, 85,14 Prozent, 95,23 Prozent, 96,43 Prozent bzw. 97,71 Prozent. Wenn die PGE-Konzentration jedoch 2,5–3,0 mg mL― 1 betrug, stieg die Tyrosinase-Hemmaktivität nicht signifikant an; Daher war es nicht notwendig, Experimente mit höheren Konzentrationen durchzuführen. Unter den gleichen Bedingungen war die Hemmungsrate von 3,0 mg mL‵1 PGE (Konzentration pflanzlicher Arzneimittel: 33,71 mg mL―1) ähnlich der von Arbutin (3 mg mL―1, 96,97 ± 1,849 Prozent) und höher von Platycodin D (3 mg mL―1, 81,67 ±2,331 Prozent).
Gemäß der Wirkung von PGE auf die Aktivität von B16F10-Melanozyten in Abschnitt 3.1 wurden PGE-Konzentrationen von 100, 150 und 200 mg mL―1 PGE als niedrige, mittlere und hohe Dosen ausgewählt, um die Wirkung von PGE auf den Melaningehalt zu testen und Tyrosinaseaktivität von B16F10-Melanozyten, stimuliert durch a-MSH. Wie in Abb. 6 gezeigt, war die Tyrosinaseaktivität von B16F10-Zellen, die mit 100 nM a-MSH stimuliert wurden (Kontrollgruppe), signifikant höher als die von nicht stimulierten Zellen. Mit der Erhöhung der PGE-Konzentration nahmen die hemmenden Aktivitäten der Tyrosinase- und Melaninproduktion auf B16F10-Zellen dosisabhängig signifikant zu. Mit zunehmender Verabreichungszeit nahm die Hemmwirkung von PGE auf die Tyrosinase- und Melaninproduktion der B16F10-Zellen allmählich zu.
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