Protease-aktivierter Rezeptor 1 trägt zum Mikrozirkulationsversagen und tubulären Schäden bei renaler Ischämie-Reperfusionsverletzung bei Mäusen bei

Yu Guan,¹Daisuke Nakano,²Lei Li,³Haofeng Zheng,³Akira Nishiyama,²Ye Tian,¹und Lei Zhang¹

tatsächlichen Ausfall mit zu entlastenCistanche-Kraut

1. Einleitung

DasNiereIschämie-Reperfusions(IR)-Verletzungen während einer partiellen Nephrektomie nicht vermeiden können undNiereTransplantation [1], die bekanntermaßen zur Retention von Stoffwechselabfallprodukten führt und zu akutenNiereVerletzung (AKI) undAKI-chronischNiereKrankheit (AKI-CKD) [2]. Bisher ist keine spezifische medikamentöse Therapie für AKI und AKI-CKD klinisch verfügbar [3]. Mehrere häufige pathologische Veränderungen treten bei AKI auf, wie z. B. Mikrozirkulationsversagen [4], einschließlich Stauung und Blutung, und akute tubuläre Nekrose [5]. Daher haben sich Studien darauf konzentriert, diese pathologischen Veränderungen als potenzielle therapeutische Kandidaten ins Visier zu nehmen. Wir haben zuvor gezeigt, dass die Aufrechterhaltung der peritubulären Kapillaren nachNieren-Eine IR-Verletzung reduzierte die Kapillarverstopfung und verbesserte den Übergang von AKI zu CKD [6]. Akute Tubulusnekrose kann schwierig zu behandeln sein; Daher kann die Regeneration von Tubuli durch tubuläre Zellproliferation ein wichtiger Ansatz sein, um den weiteren Verlust der Nierenfunktion zu verhindern [7].

Der Protease-aktivierte Rezeptor-1 (PAR-1) gehört zur Familie der Protease-aktivierten Rezeptoren (PAR) und wird bekanntermaßen durch Thrombin stimuliert, um die Blutplättchenkoagulation zu induzieren. Wir haben kürzlich gezeigt, dass PAR-1 zur Entwicklung einer akut induzierten glomerulären Schädigung beiträgt [8]. Darüber hinaus wurde berichtet, dass Thrombin/PAR-1 eine Rolle bei der Proliferation und Apoptose von Epithelzellen spielt. Basierend auf diesen Merkmalen stellten wir die Hypothese auf, dass PAR-1 den Schweregrad der AKI beschleunigte, indem es entweder die peritubuläre Kapillarblutgerinnung oder die tubuläre Regeneration regulierte. In dieser Studie untersuchten wir die Rolle von PAR-1 mithilfe von Q-94, einem PAR-1--selektiven negativen allosterischen Modulator, bei einer MausNieren-IR-Verletzungsmodell und Thrombin-stimulierte kultivierte humane Tubuluszellen.

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2. Materialien und Methoden

2.1. Akutes Nieren-IR-Mausmodell.

Alle Tierversuche wurden gemäß den experimentellen Richtlinien des Institutional Animal Care and Use Committee der Capital Medical University durchgeführt. DasNiereDas IR-Mausmodell wurde wie zuvor beschrieben etabliert [8]. Kurz gesagt, 8- Wochen alte C57/BL6-männliche Mäuse wurden durch Injektion von Pentobarbital-Natrium (50 mg/kg; ip) anästhesiert und zufällig in die folgenden Gruppen eingeteilt: Schein, I/R plus Vehikel und I/R (Vehikel: Kochsalzlösung 10 mg/kg iv) plus Q94 (ein PAR-1-Antagonist bei 10 mg/kg iv) Gruppen (n=7–8 in jeder Gruppe). Für das Nierenwärme-IR-Verletzungsprotokoll wurden die Mäuse einer Uninephrektomie unterzogen, um die Schädigung der Nierenfunktion zu bewerten; nach einer Woche wurde der Nierenstiel mit beschädigungsfreien Gefäßklammern für 30 min abgeklemmt. Nach Reperfusion für 48 h wurden die Mäuse getötet; ihre Nierengewebeproben wurden gesammelt und in 4-prozentiger Paraformaldehydlösung fixiert, um Paraffinblöcke herzustellen. Plasma wurde erhalten, um Blut-Harnstoff-Stickstoff (BUN) und Kreatinin zu messen.

2.2. Materialien.

Q94 wurde von Tocris Bioscience (Bristol, UK) gekauft. Andere Chemikalien wurden von Sigma Aldrich (St. Louis, MO, USA) bezogen, sofern nicht anders angegeben.

2.3. Assay für Kreatinin und BUN.

Kommerzielle Assay-Kits (Creatinine Assay Kit ab65340; Abcam, Cambridge, UK) wurden verwendet, um Kreatinin zu messen. BUN-Assay-Kits wurden von ABSBio TM (UREA NITROGEN Kit, CNHAO BIO, Beijing, China) bezogen.

2.4. Histologie.

Vor dem Einbetten in Paraffin wurde das Nierengewebe mit 4 Prozent Paraformaldehyd fixiert. Nierenparaffinblöcke wurden in 2-μm-Schnitte geschnitten und über Nacht bei 25°C auf Objektträger montiert. Nach der Entparaffinierung wurden die Schnitte mit Hämatoxylin und Eosin (H&E) gefärbt. Bilder wurden unter Verwendung eines Mikroskops (BX-51/DP-72; Olympus, Tokio, Japan) erhalten. Wie zuvor beschrieben [9], wurde eine Schädigung der Nierentubuli auf der Grundlage mehrerer histopathologischer Veränderungen diagnostiziert, wie z. B. tubuläre Dilatation, Stauung/Blutung, Verlust des Bürstensaums, tubuläre Zylinderbildung und Zelllyse mit abgestoßenen Trümmern im tubulären Lumen. Der Röhrenschaden wurde gemäß dem Prozentsatz der beschädigten Röhren bewertet: 0, kein Schaden; 1,<25%; 2,="" 25–50%;="" 3,="" 51–75%;="" and="" 4,="">75 Prozent. Die Wertung erfolgte verblindet.

2.5. Immunfluoreszenz und Immunhistochemie.

Die Schnitte wurden wie für den Histologie-Assay (H&E) beschrieben präpariert und dann mit 0,3-prozentigem Wasserstoffperoxid 30 Minuten lang inkubiert, um endogene Peroxidasen nach der Entparaffinierung mit Xylol zu blockieren. Zur Antigengewinnung wurden die Schnitte mit Proteinase K (DAKO Cytomation, Glostrup, Dänemark) für 10 min inkubiert. Nach dem Blockieren mit 10 % Ziegenserum wurden die Schnitte mit primären Antikörpern über Nacht bei 4 Grad C inkubiert (Anti-Kim-1-Antikörper, ab47635, Abcam; Anti-Ki67-Antikörper, ab15580, Abcam; Anti-PAR-1-Antikörper, ab32611 , Abkam). Nach der Inkubation mit dem primären Antikörper wurden die Schnitte mit dem sekundären Antikörper bei 25 Grad C für 1 Stunde inkubiert. DAB-Substrat (DAKO) wurde verwendet, um die Färbeergebnisse der Immunhistochemie (IHC) sichtbar zu machen. Fluoreszenzsignale wurden mit einem mit Alexa Fluor 594- markierten sekundären Antikörper detektiert. Bilder wurden unter Verwendung eines FL-Fluoreszenzmikroskops (BX51; Olympus) mit einem geeigneten Filter aufgenommen. Die ImageJ-Software (NIH, Bethesda, MD, USA) wurde verwendet, um die positiven Bereiche zu analysieren.

2.6. Echtzeit-PCR.

Um die Regulation der mRNA-Expression unter diesen Bedingungen zu bewerten, wurde mRNA aus Nierengewebe isoliert. Ein PCR-System (7300 Fast Real-Time; Applied Biosystems, Foster City, CA, USA) und ein Light Cycler Fast Start DNA Master SYBR Green I-Kit (Applied Biosystems) wurden verwendet, um die Konzentrationen von 18S und PAR nachzuweisen-1 mRNA. Die Primersequenzen waren wie folgt: 18S – 5′ -GTAACCCGTTGAACCCCATT-3′, 5′-CCATCCAATCG GTAGTAGCG-3′; PAR-1 – 5′-GTTGATCGTTTCCACG GTCT-3′, 5′-GCTGCCTCTGTACCAGGACT-3′. Relative mRNA-Spiegel wurden unter Verwendung der 2-ΔΔCq-Methode bestimmt. Der ΔΔCq-Wert wurde anhand der Daten der Kontrollgruppe berechnet.

2.7. Chirurgisches Verfahren und In-vivo-Multiphotonen-Bildgebungseinstellungen.

Die Mäuse wurden mit 2 Prozent Isofluran (Mylan, Osaka, Japan) anästhesiert. Nach der Tracheotomie wurde die Jugularvene für die Injektion von Fluoreszenzfarbstoff und die Infusion einer Erhaltungsflüssigkeit, die aus 1,0 μl/min von 2 % Albumin in Phosphat-gepufferter Kochsalzlösung bestand, kanüliert. Die linke Niere jeder Maus wurde durch einen kleinen Flankeneinschnitt nach außen geführt und an einem Deckglas befestigt. Der Mikroskoptisch und die Tiere wurden während aller experimentellen Verfahren unter Verwendung eines Heizkissens erwärmt. Die intravitale Multiphotonenmikroskopie wurde unter Verwendung eines konfokalen Multiphotonen-Fluoreszenz-Bildgebungssystems Olympus FV1000MPE durchgeführt, das von einem Chameleon Ultra-II MP-Laser bei 860 nm (Coherent, Inc., Santa Clara, CA, USA) angetrieben wurde. Das Mikroskopobjektiv war eine 25x-Wasserimmersionslinse mit einer numerischen Apertur von 1,05. Die Abbildungseinstellungen für das Mikroskop (Verstärkung und Offset für alle drei Kanäle; blau, grün und rot) wurden während des gesamten Experiments festgelegt. Nach einer 30-minütigen Erholungsphase wurde Rhodamin-B- 70kD-Dextran intravenös injiziert und 3-D-Z-Stapel-Bilder wurden in einer Tiefe von 5–50 μm (2 μm Abstand) von der Nierenoberfläche aufgenommen.

2.8. Zellkultur.

Humane Nieren-2 (HK2)-Zellen wurden von der Cell Bank of Academy Sciences (Shanghai, China) erhalten und wie zuvor beschrieben kultiviert [10]. Die Zellen wurden in Dulbeccos modifiziertem Eagle-Medium, ergänzt mit 10 Prozent fötalem Rinderserum und 1 Prozent Penicillin-Streptomycin, in einer befeuchteten Atmosphäre aus 95 Prozent Luft und 5 Prozent CO2 bei 37 Grad kultiviert.

2.9. WST-1-Assays zur Bewertung der Zellproliferation.

HK2-Zellen wurden in 6-Well-Platten mit einer Dichte von 1 × 104 Zellen/Well ausgesät. Nach Stimulierung der HK2-Zellen mit Thrombin wurden WST- 1-Assays gemäß dem Protokoll des Herstellers (Katalog #C0035; Beyotime, Shanghai, China) durchgeführt, um die Proliferationsfähigkeit der Zellen zu bestimmen. Nach 2-stündiger Inkubation mit 100 μl WST-1-Reagenz in jeder Vertiefung wurde die Extinktion der Proben mit einem Mikroplatten-Lesegerät bei einer Wellenlänge von 450 nm gemessen.

2.10. Caspase-3-Assay.

Caspase-3-Aktivität wurde unter Verwendung eines im Handel erhältlichen Caspase-3-Aktivitätskits (Katalog-Nr. C1116; Beyotime, Shanghai, China) gemessen [11]. Nach der Inkubation mit dem Reagenz des Caspase-3-Aktivitätskits wurde die Extinktion der Proben mit einem Mikroplatten-Lesegerät (Spectra-Max M2, Molecular Devices, Sunnyvale, CA, USA) bei 405 nm gemäß den Anweisungen des Herstellers erfasst.

2.11. Daten- und statistische Analyse.

Eine Einweg-Varianzanalyse wurde verwendet, um mehrere Gruppen zu vergleichen, gefolgt von Tukeys multiplem Vergleichstest. Um zwei einzelne Gruppen zu vergleichen, haben wir den Student-t-Test verwendet. p < 0:05="" wurde="" als="" statistisch="" signifikantes="" ergebnis="">

Cistanche tubulosabeugt Nierenerkrankungen vor

3. Ergebnisse

3.1. PAR-1-Expression in der IR-Niere.

Wir bestätigten zuerst die Expression von PAR-1 und die Auswirkungen von IR auf sein Expressionsniveau in derNiere. Wir beobachteten einen fast 2--fachen Anstieg des Expressionsniveaus von PAR-1-mRNA im Vergleich zu dem in Scheinoperationsmäusen nach 48 h (Abbildung 1(a)). Wir haben auch die Expression von PAR-1 durch Immunfluoreszenz 48 h nach IR gemessen. PAR-1 wurde in der Bürstensaummembran der Röhrenzelle exprimiert. Das Niveau der PAR-1-FL-Fluoreszenz war im Vergleich zu Mäusen der Scheingruppe hochreguliert (Fig. 1(b) und 1(c)). Diese Daten legen nahe, dass sowohl die Lokalisierung von PAR-1 in tubulären Zellen als auch sein Expressionsniveau nach IR in der Niere hochreguliert waren.

3.2. Nierenfunktion und histopathologische Veränderungen. Wir haben bewertetNiereFunktion durch Nachweis der BUN- und Kreatininspiegel im Plasma. I/R induzierte einen Anstieg der Spiegel von BUN und Kreatinin im Vergleich zu Mäusen, die einer Scheinoperation unterzogen wurden. Darüber hinaus war der IR-induzierte Anstieg des BUN-Spiegels bei mit Q94- behandelten Mäusen signifikant verringert (Abbildung 2(a)). Der Serum-Kreatininspiegel war bei mit Q94- behandelten Mäusen gehemmt im Vergleich zu Mäusen, die nur einer IR-Operation unterzogen wurden (Fig. 2(b)). Diese Daten legen nahe, dass die Verabreichung von Q94 schützen kannNiereFunktion nach IR-Verletzung.

Wir bewerteten auch histopathologische Veränderungen der Niere, indem wir H&E-Färbungen durchführten. Nieren-IR erhöhte bei den mit Vehikel behandelten Mäusen im Vergleich zu Scheinmäusen signifikant die Zylinderbildung, die tubuläre Dilatation und den Verlust des Bürstensaums und die Verstopfung/Blutung. Die Behandlung mit Q94 unterdrückte diese durch IR induzierten Veränderungen deutlich ( 2(c) und 3(a) ). Die Analyse der H&E-Färbungsergebnisse zwischen den Gruppen ergab den Stauungs-/Blutungs-Score und den tubulären Schadens-Score für jede Gruppe. Die Mäuse der Q94-Gruppe zeigten eine viel niedrigere Punktzahl (Fig. 2(e) und 3(c)). Wir haben auch Kim -1 als ein gefärbtNiereVerletzungsmarker von Nierentubuluszellen durch IHC [12]. Kim-1--positive Bereiche waren im renalen tubulären Bereich bei Mäusen mit IR-Insult erhöht, die durch Q94 signifikant unterdrückt wurden (Abbildungen 2(d) und 2(f)). Diese Daten legen nahe, dass Q94 unterdrücken kannNieretubuläre Schäden durch IR-Verletzung.

3.3. Abnormaler Blutzellenfluss in der In-vivo-Bildgebung.

PAR-1 und sein Ligand Thrombin spielen eine wichtige Rolle bei der Stauung; Q94 deutlich verbesserte Staus. Daher führten wir eine intravitale Bildgebung durch Multiphotonenmikroskopie durch. Dies ermöglicht die Echtzeit-Beobachtung des Blutkörperchens in der peritubulären Kapillare bei lebenden Mäusen (Abbildung 3(c)). Plasma wurde durch 70 kDa-Dextran, konjugiert mit Rhodamin B, sichtbar gemacht (Fig. 3(d)). Blutzellen, die als Reaktion auf den Laser keine FL-Fluoreszenz erzeugen, wurden verwendet, um Rhodamin B anzuregen, und als Schatten dargestellt. Wie in Abbildung 3(e) gezeigt, störte Nieren-IR die regelmäßige Blutzellenfolge und induzierte ein Versagen der Mikrozirkulation. Q94 verbesserte peritubuläre kapillare Blutkörperchen.

3.4. Röhrenzellproliferation nach IR-Verletzung.

Es wurde berichtet, dass die proliferative Regeneration von tubulären Zellen eine wichtige Rolle bei der Wiederherstellung der tubulären Struktur und der Nierenfunktion nach einer IR-Verletzung spielt. PAR-1 ist dafür bekannt, die Proliferation von Epithelzellen zu modifizieren, wenn es durch Thrombin aktiviert wird. Wir haben daher die Proliferation von tubulären Nierenzellen in einem Ki-67-IHC-Assay nachgewiesen. 48 h nach IR war die Zahl der proliferierenden Ki-67--positiven tubulären Zellen erhöht. Q94 steigerte weiter die erhöhte Anzahl von Ki-67--positiven tubulären Zellen nach IR im Vergleich zu der in nur IR-behandelten Mäusen (Figuren 4(a) und 4(b)). Außerdem überprüften wir, ob die Fähigkeit zur Zellproliferation durch die Hemmung von PAR-1 in vitro-Experimenten unter Verwendung von HK2-Zellen, die mit Thrombin, einem PAR-1-Agonisten, inkubiert wurden, beeinflusst wurde. Die proliferative Aktivität von HK2-Zellen wurde durch den WST-1-Assay gemessen. Wie in Fig. 4(c) gezeigt, wurde die Proliferation von HK2-Zellen nach der Behandlung mit Thrombin dramatisch unterdrückt. Diese Thrombin-induzierte Hemmung wurde jedoch durch Q94 nahezu aufgehoben. Diese Daten zeigen, dass PAR-1 die Proliferation von tubulären Nierenzellen negativ regulierte, was durch den Q94 PAR-1-Antagonisten fast aufgehoben wurde.

zur Linderung der chronischen Nierenerkrankung mitZistanche

3.5. Nierentubuläre Zellapoptose.

Wir untersuchten weiter die Apoptose von Nierenzellen unter Verwendung von Caspase-3, der wichtigsten Henker-Caspase, die während der Apoptose sowohl durch intrinsische als auch durch extrinsische Wege aktiviert wird [13]. Unter Verwendung von Thrombin-inkubierten kultivierten HK2-Zellen stellten wir fest, dass Thrombin die Aktivität von Caspase -3 erhöhte. Darüber hinaus unterdrückte die Verabreichung von Q94 die Aktivität von Caspase-3 (Abbildung 4(d)). Diese Daten legen nahe, dass die Thrombin-induzierte Apoptose von HK2-Zellen durch den Q94-PAR-1-Antagonisten gehemmt wurde.

4. Diskussion

NiereEine IR-Verletzung ist gekennzeichnet durch Kongestion/Blutung, akute Tubulusnekrose, Entzündung und Ablagerung von Gipsverbänden [5]. Hier haben wir gezeigt, dass die Hemmung von PAR-1 sowohl die mit dem Blut verbundenen Veränderungen als auch die tubulointerstitiellen Veränderungen verbessert. Es ist bekannt, dass PAR-1 und sein Ligand Thrombin eine wichtige Rolle bei der Thrombozytenkoagulation spielen, und eine Störung dieses Systems, wie beispielsweise durch Thrombomodulin [14, 15], AKI verhindern kann. Wir haben gezeigt, dass die PAR- 1-Hemmung die Stauung unterdrückt und den Blutfluss in den peritubulären Kapillaren bei Mäusen mit renaler IR-Verletzung verbessert, was darauf hindeutet, dass das PAR-1-System die Mikrozirkulation verschlechtert. Darüber hinaus war das Expressionsniveau von PAR-1 in den Tubuli nach einer renalen IR-Verletzung hochreguliert, was darauf hindeutet, dass das PAR-1--abhängige System in den Tubuli auch die renale IR-Verletzung verstärkt. Es ist allgemein bekannt, dass die Regeneration tubulärer Zellen ein wichtiger Prozess beim Wiederaufbau der tubulären Struktur und bei der Wiederherstellung der Nierenfunktion nach einer IR-Verletzung ist [16, 17]. Je nach Verletzungsgrad ist diese Reparaturkapazität nicht unbegrenzt [18]. Daher werden dringend Behandlungsoptionen benötigt, um Schäden in tubulären Zellen abzuschwächen oder ihre Proliferation zu beschleunigen. Unsere In-vitro-Studie zeigte, dass PAR- 1/Thrombin die Proliferation von tubulären Zellen negativ regulierte, was wiederum nach der Hemmung von PAR-1 beschleunigt wurde. Darüber hinaus wurde gezeigt, dass eine IR-Verletzung bei Mäusen die tubuläre Proliferation nach 48 h erhöht, mit einem weiteren Anstieg nach PAR-1-Hemmung. Wir fanden heraus, dass PAR-1 in der Bürstensaummembran der proximalen Tubuli erhöht war. Da berichtet wurde, dass die Funktion der glomerulären Filtrationsbarriere während einer Nieren-IR-Schädigung verringert ist [19], kann das aus den Glomeruli gefilterte Thrombin das erhöhte PAR - 1 aktivieren und dadurch die tubuläre Regeneration stören.

Unsere Ergebnisse legen nahe, dass das PAR-1/Thrombin-System die Proliferation von tubulären Zellen unterdrückt und die Apoptose erhöht. Eine andere Studie zeigte jedoch gegensätzliche Wirkungen von PAR-1, wenn es durch Protein C aktiviert wurde [20, 21]. Diese offensichtlich widersprüchliche Rolle von PAR-1 kann von der Methode seiner Aktivierung abhängen. In unserer Studie war eine mögliche Erklärung für die ihm zugeschriebene Rolle, dass PAR-1 durch gefiltertes Thrombin aktiviert wurde. Die Größe von Protein C beträgt über 60 kDa, was ähnlich der von Albumin [22, 23] und viel größer als die von Thrombin (36 kDa) ist. Darüber hinaus ist seine Plasmakonzentration (<100 nm)="" is="" less="" than="" 10%="" of="" thrombin="" (="">1 μM), was darauf hindeutet, dass Protein C weniger filtriert wird und im Vergleich zu Thrombin ein schwächeres Signal erzeugt.

Thrombotische Episoden sind ein Risikofaktor für Patienten mit terminaler Niereninsuffizienz [24]. Eine Studie zeigte, dass ein PAR-1-Mangel vor diabetischer CNI schützt [25]. In unserer Studie beobachteten wir die Wirkung der Hemmung von PAR-1 auf die Nierenfunktion in einer frühen Phase nach IR. In weiteren Studien beabsichtigen wir, eine chronische zu entwickelnNiereIR-induziertes Krankheitsmodell [2] zur Bewertung der potenziellen Verbindung zwischen PAR-1 und CKD.

Zusammenfassend haben wir gezeigt, dass PAR-1 das Versagen der Mikrozirkulation verschlimmert und die Proliferation von tubulären Zellen negativ reguliert. Im Gegensatz dazu trug die Hemmung von PAR-1 zur Verbesserung der Mikrozirkulation und der Proliferation von tubulären Zellen und nach IR bei, diente als herausragender Mechanismus der Nierenerholung und sollte als neue Strategie bei der Behandlung von AKI angesehen werden.

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1Abteilung für Urologie, Beijing Friendship Hospital, Capital Medical University, Peking, China

2Institut für Pharmakologie, Universität Kagawa, Kagawa, Japan

3Division of Kidney Transplantation, Department of Surgery, The Third Affiliated Hospital of Sun Yat-sen University,

Guangzhou, China

Die Korrespondenz ist an Ye Tian zu richten; kidney@ccmu.edu.cn und Lei Zhang; leizhangkidney@gmail.com Erhalten am 1. Januar 2021; Überarbeitet am 25. Januar 2021; Akzeptiert am 8. Februar 2021; Veröffentlicht am 23. Februar 2021

Akademischer Herausgeber: Junyan Liu

Copyright © 2021 Yu Guan et al. Dies ist ein Open-Access-Artikel, der unter der veröffentlicht wirdCreative Commons Attribution License, die die uneingeschränkte Nutzung, Verbreitung und Vervielfältigung in jedem Medium erlaubt, vorausgesetzt, das Originalwerk wird ordnungsgemäß zitiert.

Eine durch Ischämie-Reperfusion (IR) induzierte Nierenschädigung ist während einer Nierentransplantation und einer robotergestützten partiellen Nephrektomie schwer zu vermeiden. Eine renale IR-Schädigung ist gekennzeichnet durch tubuläre Schädigung, Mikrozirkulationsversagen und Entzündung, die die Nierenschädigung koordinativ verstärken; Für diese Erkrankungen ist jedoch keine spezifische Behandlung verfügbar. Der Protease-aktivierte Rezeptor -1 (PAR-1) und sein Ligand Thrombin sind an der Blutgerinnung beteiligt und stehen nachweislich mit Epithelzellschädigungen in Verbindung. Hier stellten wir die Hypothese auf, dass PAR-1 die renale IR-induzierte tubuläre Zellschädigung und das Versagen der Mikrozirkulation verstärkt und dass die pharmakologische Hemmung von PAR-1 durch Q94 diese Verletzungen verhindern könnte. Nierenwarmes IR erhöhte die Expression von PAR-1 in den Nierentubuli. Q94 schwächte IR-induzierte Veränderungen der Nieren und histopathologische Schäden ab. Das Versagen der Mikrozirkulation wurde durch Stauung in der Histopathologie analysiert, und der Fluss der Blutzellen, der durch intravitale Multiphotonenmikroskopie untersucht wurde, wurde durch die Behandlung mit Q94 unterdrückt. Q94 erhöhte trotz der geringeren Nierenschädigung auch die tubuläre Zellproliferation dramatisch. Thrombin unterdrückte die Zellproliferation und induzierte Apoptose in den Tubuli; diese Wirkungen wurden durch die Behandlung mit Q94 verhindert. Zusammengenommen war PAR-1 mit einer Nieren-IR-Schädigung verbunden. Die Hemmung von PAR-1 verbesserte die Verletzung möglicherweise durch Verbesserung der renalen Mikrozirkulation und des Überlebens/der Proliferation tubulärer Zellen.

Data AvailabIch zündetey

Die Autoren bestätigen, dass die Daten, die die Ergebnisse dieser Studie stützen, im Artikel verfügbar sind.

Canflcts of Interest

Alle Autoren haben erklärt, dass kein Interessenkonflikt besteht.

Authors' CantriButians

Yu Guan und Daisuke Nakano schrieben das Manuskript und führten Tierversuche durch. Lei Li führte In-vitro-Experimente durch. Haofeng Zheng führte die statistische Analyse durch. Akira Nishiyama hat das Manuskript überarbeitet. Lei Zhang und Ye Tian haben diese Studie entworfen.

Acknowledgments

Diese Studie wurde von der National Natural Science Foundation of China (Nr. 82000712) und der China Postdoctoral Science Foundation (Nr. 2020M670385) unterstützt.

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