Renoprotektive Wirkung von Oridonin in einem Mausmodell einer akuten Nierenschädigung durch Unterdrückung einer durch Makrophagen verursachten Entzündung

edmund.chen@wecistanche.com

EINLEITUNG

Ein wichtiges Merkmal von AkutNierenverletzung(AKI) ist der plötzliche Rückgang inNierenfunktion. Es ist ein globales Gesundheitsproblem, das in der Gesellschaft weit verbreitete Besorgnis hervorgerufen hat. Laut Statistik leiden jedes Jahr etwa 13,3 Millionen Menschen weltweit an AKI, davon 85 Prozent in Entwicklungsländern, die 1,7 Millionen Menschen töten werden.1,2) Bemerkenswerterweise ist AKI keine einzelne Krankheit und kann eine Komplikation sein von mehreren Erkrankungen. Normalerweise kann es durch Sepsis, Schock, Ischämie-Reperfusion und Vergiftung verursacht werden. Nach längerer Entwicklung neigt diese Krankheit dazu, chronisch zu werdenNierenerkrankung,Herzinsuffizienz und EndstadiumNierenkrankheit.3–5) Zusammenfassend kann AKI eine enorme wirtschaftliche Belastung verursachen und die psychische und physische Belastung der Patienten praktisch erhöhen.NierenIschämie-Reperfusion wird derzeit als die häufigste Ursache von AKI angesehen und tritt normalerweise während eines Traumas, einer chirurgischen Resektion oder aufNierentransplantation. Makrophagen sind eine der wichtigsten Entzündungszellen, die eine wichtige Rolle bei der AKI-Progression spielen. Mincle wird hauptsächlich auf myeloiden Zellen und Neutrophilen exprimiert, insbesondere auf Makrophagen. Es hat eine stark zurückgehaltene Lektindomäne vom C-Typ, die eine wichtige Rolle bei der antimykotischen Immunität spielt. Mincle wurde ursprünglich von Matsumoto als Lipopolysaccharid (LPS) identifiziert – ein induziertes Protein, das den Kernfaktor kappaB (NF-κB) über die Card9-Bcl10-MALT1-Signalgebung aktivieren kann, was zu der Bildung eines effektiven T-Helfer 1 (Th1) und Th17-Subtyps, die die Expression von Entzündungsfaktoren fördern, um angeborene und adaptive Immunantworten zu verbinden.6) Neuere Forschungen haben ergeben, dass Mincle auch alle Arten von abnormalen Substanzen in Zellen erkennen kann, verwandte Signale und reagieren dann auf relevante Antworten. Beispielsweise kann Mincle an -GlcCer binden, das ein allgegenwärtiger intrazellulärer Metabolit aus geschädigten Zellen ist, Zytokine aktiviert und induziert und antigenspezifische T-Zell-Antworten auslöst.7) Mincle ist ein Rezeptor, der heterogenen Zelltod wahrnimmt und den endogenen Liganden erkennen kann SAP130, das von toten Zellen freigesetzt wird, induziert die Produktion von entzündlichen Zytokinen und fördert die Infiltration von Neutrophilen in geschädigtes Gewebe.8,9) Insbesondere bestätigt Lans Team, dass Mincle spezifisch auf M1-Makrophagen induziert wird und eine Schlüsselrolle bei der Aufrechterhaltung des Entzündungsphänotyps spielt M1-Makrophagen.6) Daher kann eine gezielte Mischtherapie der Schlüssel zur Behandlung der AKI-Erkrankung sein.

CISTANCHE WIRD DIE NIEREN-/NIERENFUNKTION VERBESSERN

Oridonin ist eine aus London extrahierte tetrazyklische Dipeptid-Naturverbindung mit einem Kaurienskelett, die eine breite Palette biologischer Funktionen hat, darunter antimikrobielle, Antitumor-, entzündungshemmende und Antifibrose-Wirkung. Viele Arten von Forschung haben das Anti-Tumor-Potenzial und den Mechanismus dieser natürlichen Diterpenoide in einer Reihe von Krebszelllinien beschrieben.10,11) und es wurde bestätigt, dass Oridonin als Anti-Krebs-Medikament derzeit in klinischen Phase-I-Studien in China. Die Rolle von Oridonin inNierenerkrankungwird selten berichtet. Mehrere Arten von Forschung haben bestätigt, dass Oridonin Proteinurie reduzieren kann undNierenschädenin Mausmodellen mit spontanem Lupus erythematodes und In-vitro-Studien haben ergeben, dass Oridonin die Sekretion von entzündlichen Zytokinen und die durch LPS induzierte Entzündungsreaktion nach der Behandlung mit Oridonin reduzieren kann.12,13) ​​In dieser Studie konzentrierten wir uns darauf, das Potenzial von Oridonin aufzudecken bei der Behandlung von AKI und ob der zugrunde liegende Mechanismus mit der Hemmung von Mincle in Makrophagen zusammenhängt. Diese Studie kann starke Beweise für das Screening von AKI-Therapeutika liefern.

Schlüsselwörter:Oridonin; akute Nierenschädigung (AKI); Makrophage; Minkel; Entzündung; Nierenfunktion

MATERIALEN UND METHODEN TiereSechsunddreißig männliche C57BL/6-Mäuse (im Alter von 8–1 0 Wochen) wurden von Beijing Vital River Laboratory Animal Technologies Co., Ltd. (Peking, China) bezogen und in einem temperaturkontrollierten und feuchtigkeitsgeregelten Stall gehalten -Kontrollraum des Tierversuchszentrums der Southwest Medical University (21,0 ± 2,0 Grad bzw. 65 ± 5 Prozent). Alle Mäuse wurden stochastisch in drei Gruppen eingeteilt: Scheingruppe, Modellgruppe für Ischämie-Reperfusionsverletzung (IRI) (IRI-Gruppe) und mit Oridonin behandelte IRI-Gruppe (OR-Gruppe) (15 mg/kg). Vor der Operation wurden die Mäuse mit einer intraperitonealen Injektion von 45 mg/kg Natriumpentobarbital anästhesiert. Das AKI-Mausmodell wurde durch bilaterales Klemmen etabliertNieren-Arterien für 35 min. Mäuse in der Scheingruppe wurden nur 35 min lang der Bauchhöhle ausgesetzt, während den Mäusen in der OR-Gruppe Oridonin für 3 Tage nach der Operation kontinuierlich intragastral verabreicht wurde, und den anderen Gruppen wurde das gleiche Volumen an Kochsalzlösung als Kontrolle verabreicht. Die Mäuse wurden am dritten Tag mit einer intraperitonealen Injektion von mit Kochsalzlösung verdünntem Pentobarbital-Natrium (200 mg/kg) eingeschläfert. Alle tierexperimentellen Verfahren wurden gemäß den Richtlinien für die Pflege von Versuchstieren (Genehmigungsnummer 201812-55) durchgeführt.

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Chemikalien und ReagenzienOridonin (BP1041, Reinheit größer als oder gleich 95 Prozent) wurde von Biopurify phytochemicals Ltd. (Chengdu, China) bezogen. NF-κB-, p-AKT- und induzierbare Stickoxidsynthase (iNOS)-Antikörper wurden von Cell Signaling Technology (Beverly, MA, USA) bezogen. Interleukin (IL)-1, Tumornekrosefaktor (TNF)-, Mincle, p-NF-κB und AKT-Antikörper wurden von Santa Cruz Biotechnology (Santa Cruz, CA, USA) erworben. Gesamt-RNA-Extraktionskit wurde von Tiangen Biochemical Technology (Beijing) Co., Ltd. (Peking, China) bezogen. Reverse Transcription Kit, Echtzeit-PCR-Kit, bereitgestellt von Shanghai Promega Bioproducts Co., Ltd. (Shanghai, China). LPS (Escherichia coli 055:B5) wurde von Sigma Chemical (St. Louis, MO, USA) bereitgestellt. DNA-Transfektionsreagenz wurde von Zeta Life (Zeta Life, USA) erhalten.

Zellkultur und TransfektionenRAW264.7-Zellen wurden von der Chinese Academy of Sciences Cell Bank (Shanghai, China) erworben und bei 37 Grad in einer Umgebung mit 5 Prozent CO2 in Dulbeccos modifiziertem Eagle-Medium (DMEM) mit hohem Glukosegehalt kultiviert. Der Verdau wurde durchgeführt, als die Zellen zu 80 Prozent Konfluenz gewachsen waren. Das gesamte Experiment verwendete die Zellen der logarithmischen Wachstumsphase. Die Überexpression von Mincle in RAW264.7-Zellen wurde durch Transfektion des Mincle-Überexpressionsplasmids (Genechem, Shanghai, China) in Zellen mit Zeta Life Advanced DNA-Transfektionsreagenz durchgeführt. Die Morphologie und der Wachstumsstatus der Zellen wurden unter Verwendung eines Lichtmikroskops beobachtet.

Analyse des Zellzählkits-8 (CCK-8).3.000 Zellen wurden in einer 96-Well-Platte mit 6 Wiederholungswells pro Gruppe ausgesät. Anschließend wurden die Zellen 24 h lang in einem serumfreien Medium ausgehungert, gefolgt von einer 24-stündigen Behandlung mit einem wirkstoffhaltigen Medium. Fügen Sie dann nach dem Entfernen des Mediums 100 l 10-prozentiges CCK-8-Reagenz in jede Vertiefung hinzu und inkubieren Sie 3 h lang. Die Zellüberlebensrate wurde gemäß dem Extinktionswert jeder Vertiefung berechnet.

Beurteilung der NierenfunktionDer Gehalt an Serumkreatinin und Harnstoffstickstoff wurde unter Verwendung des geeigneten Kits (Jiancheng, Nanjing, China) gemessen. Die Werte werden in mmol/l Serum ausgedrückt.

Hämatoxylin-Eosin (H&E) und Perjodsäure-Schiff (PAS)-FärbungDas GesammelteNiereGewebe wurde für 24 h in 4-prozentiges Paraformaldehyd gelegt und dann in Ethanollösungen unterschiedlicher Konzentrationen gelegt und zum Einbetten in Xylol- und Wachsblöcke gelegt. Vor dem Färben wurden die Objektträger für 2 h in einen 60-Grad-Ofen gestellt und dann entparaffiniert und rehydriert. Einige Proben wurden mit Eosin- und Hämatoxylin-Pigmenten gefärbt, andere Proben fügen Periodsäurealkohol und Schifffdye-Lösung separat hinzu. Schließlich beobachtet und fotografiert in einer Mikroskopkamera.

Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA)Die Konzentration von IL-1 , IL-6 und TNF- im Zellkulturüberstand wurde unter Verwendung von ELISA-Kits gemessen (IL-1 : Neobioscience, EMC001b; IL-6 : Neobioscience , EMC004; TNF-: Neobioscience, 500850). Führen Sie Probentests gemäß der vom Reagenzienlieferanten bereitgestellten Methode durch und berechnen Sie den Konzentrationswert jeder Gruppe gemäß der Standardkurve.

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Westlicher FleckAlle Tier- und Zellproben wurden in Radioimmunopräzipitationstest (RIPA)-Puffer auf Eis lysiert und zentrifugiert, um die entsprechende Proteinprobe zu erhalten. Der Coomassie-Brillantblau-Assay wurde verwendet, um die Proteinkonzentration jeder Probe zu bestimmen, und das Gel wurde mit einer bestimmten Menge an Proteinproben laufen gelassen. Jede Gruppe von Proteinen wurde durch Natriumdodecylsulfat-Polyacrylamid-Gelelektrophorese (SDS-PAGE) getrennt und dann auf die Polyvinylidendifluorid (PVDF)-Membran übertragen. Nach Inkubieren der Membran mit Primärantikörpern bei 4 Grad über Nacht wurden die Sekundärantikörper 1 Stunde bei Raumtemperatur inkubiert. Die Farbe der Bande wird mit einer Farbentwicklungslösung entwickelt, und die Grauintensität der Bande wurde mit der Software Image J berechnet.

Echtzeit-PCRDie Gesamt-RNA wurde nach der Gebrauchsanweisung des Tiangen-Kits gewonnen und in enzymfreiem Wasser gelöst. Gemäß den entsprechenden Anweisungen verwenden wir ein Reverse-Transkriptions-Kit, um cDNA zu synthetisieren. RT-PCR-Reaktionsbedingungen wurden wie folgt durchgeführt: 37 Grad für 15 Minuten, 95 Grad für 5 Minuten und dann 40 Zyklen von

95 Grad für 10 min, 95 Grad für 15 s und 60 Grad für 1 min. Das relative mRNA-Expressionsniveau jedes Gens wurde relativ zu Glyceraldehyd-3-phosphatdehydrogenase (GAPDH) normalisiert. Die Sequenzen der Primer sind in Tabelle 1 gezeigt.ImmunfluoreszenzfärbungRAW264.7-Zellen wurden in 4 Prozent Paraformaldehyd fixiert, dann mit Rinderserumalbumin bei Raumtemperatur (RT) für 1 Stunde blockiert und mit den entsprechenden primären Antikörpern bei 4 Grad über Nacht inkubiert. Nach dreimaligem Waschen mit phosphatgepufferter Kochsalzlösung (PBS) wurden die Zellen 1 h lang bei RT mit sekundären Antikörpern inkubiert. Der Zellkern wurde mit 4′-6-Diamidino- 2-phenylindol (DAPI) gefärbt. Die Immunfluoreszenzbilder wurden mit einem Nikon-Eclipse-Mikroskop (Nikon, Tokio, Japan) aufgenommen.Statistische AnalyseStatistische Analyseergebnisse werden als Mittelwert ± Standardabweichung (SD) dargestellt. Vergleiche zwischen den Gruppen wurden unter Verwendung von Einweg-ANOVA, p< 0.05="" was="" considered="" significant.="" graphpad="" prism="" 7="" software="" was="" used="" to="" calculate="" data="" for="" statistical="">

ERGEBNISSE

Oridonin gehemmte durch Ischämie-Reperfusion induzierte Nierenschädigung und -entzündungUm die Schutzwirkung von Oridonin auf AKI zu bewertenNiereInduziert durch Ischämie-Reperfusion untersuchten wir das Blut Kreatinin, Harnstoff und StickstoffNieren-tubulärer Verletzungsindex von Mäusen in jeder Gruppe, sowie die Expression von entzündlichen Zytokinen in Nierengewebe und bewertetNieren-Pathologie durch H&E- und PAS-Färbung. Das Ergebnis ist in der Figur gezeigt, dass die Serum-Kreatinin- (Fig. 1a) und Harnstoff-Stickstoff- (Fig. 1b) Spiegel der AKI-Modellgruppe reduziert waren, wenn drei Tage lang Oridonin kontinuierlich injiziert wurde. Dementsprechend zeigte der tubuläre Verletzungsindex, dass Oridonin die tubuläre Nekrose in der Tuberkulose stark reduziertNierevon AKI-Mäusen (Abb. 1c). Echtzeit-PCR-Ergebnisse zeigten, dass Oridonin die mRNA-Spiegel von IL-1 , MCP-1 und F4/80 im signifikant herunterregulierteNiereder AKI-Modellgruppe (Abb. 1d–f). Darüber hinaus zeigten die Ergebnisse der pathologischen Färbung und Immunfluoreszenz, dass Oridonin die tubuläre Nekrose (Abb. 1g) und den Proteinspiegel von entzündlichen Zytokinen (Abb. 1h) bei AKI-Mäusen signifikant reduzierte, was die Nierenschädigung effektiv verbesserte, was darauf hinweist, dass Oridonin eine signifikante verletzungshemmende Wirkung hatte und entzündungshemmende Wirkungen auf das AKI-Modell.

Oridonin-inhibierter Mincle/AKT/NF-κB-Signalweg in der Niere von AKI-MäusenDen therapeutischen Mechanismus von Oridonin weiter aufzuklärenNieren-Entzündung untersuchten wir weiter die Aktivierung der Mincle/AKT/NF-κB-Signalgebung nach Oridonin-Verabreichung. Western-Blot-Ergebnisse zeigten, dass die Oridonin-Intervention die Expression der entzündungsbezogenen Proteine ​​IL-1 und iNOS bei AKI signifikant reduzieren kannNierenund verringern die Aktivierung von Proteinen des AKT- und NF-κB-Signalwegs (Abb. 2a–e), was darauf hindeutet, dass Oridonin die IRI-induzierte Entzündung imNierevon AKI. Bemerkenswerterweise zeigten Echtzeit-PCR- und Western-Blot-Ergebnisse, dass Oridonin die mRNA- und Proteinspiegel von Mincle imNieredes AKI-Modells (Abb. 2f, g). Um den Aufenthaltsort von Mincle in derNiere, führten wir in jeder Gruppe eine Immunfluoreszenz durch (Abb. 2h), die Ergebnisse zeigten, dass sich Mincle in der befandNieren-interstitium und gemeinsam mit dem Makrophagen-Marker F4/80 lokalisiert, was darauf hindeutet, dass Mincle hauptsächlich in exprimiert wurdeNieren-Makrophagen und nach AKI stark hochreguliert. Die Ergebnisse der Immun-FL-Fluoreszenz zeigten auch, dass die Makrophagen nach AKI signifikant zunahmen, was auf die wichtige Rolle von Makrophagen bei der Entwicklung von AKI hindeutet. Bemerkenswerterweise hemmte Oridonin signifikant Mincle inNieren-Makrophagen von AKI-Mäusen. Die obigen Ergebnisse zeigen, dass sich Oridonin verbessern könnteNiereEntzündungen und Verletzungen durch Hemmung der Mincle/AKT/NF-κB-Signalübertragung.

Oridonin stellte die durch LPS induzierten morphologischen Veränderungen der RAW264.7-Makrophagen signifikant wieder herUm die Wirkung von Oridonin auf entzündliche Makrophagen zu untersuchen, verwendeten wir LPS, um RAW264.7-Zellen zur Konstruktion von an zu stimulierenEntzündungszellmodell. Die chemische Struktur von Oridonin ist in Fig. 3a gezeigt. Wir haben daher die Toxizität von Oridonin bei verschiedenen Konzentrationen an RAW264.7-Zellen getestet. Die CCK8-Ergebnisse zeigen, dass Oridonin bei einer Konzentration von 5 &mgr;M keine signifikante Wirkung auf die Zellmorphologie hat ( 3b ), was in nachfolgenden In-vitro-Experimenten verwendet wurde. Wir fanden überraschenderweise heraus, dass Oridonin die LPS-induzierte Makrophagen-Morphologie signifikant verbesserte (Abb. 3c), einschließlich der Verringerung intrazellulärer Vakuolen und der Festigung der Zellen.

Oridonin unterdrückte die Sekretion und Expression von Entzündungsfaktoren in LPS-stimuliertem RAW264.7Zellen Um die entzündungshemmende Wirkung von Oridonin auf LPS-stimulierte RAW264.7-Zellen zu klären, verwendeten wir Echtzeit-FL-Fluoreszenz-PCR, ELISA und Immunfluoreszenz, um die von jeder Zellgruppe sezernierten Entzündungsfaktoren zu messen. Die Ergebnisse zeigten, dass Oridonin die mRNA-Spiegel von IL-1 , IL-6, TNF- , iNOS und MCP-1 in LPS-stimulierten Zellen signifikant reduzierte (Abb. 4a–e). Darüber hinaus regulierte Oridonin auch signifikant die Sekretion von IL-1 , IL-6 und TNF- im Überstand im Entzündungszellmodell (Abb. 4f–h) sowie die Proteinspiegel von entzündliche Zytokine in LPS-stimulierten Makrophagen (Fig. 4i). Die obigen Ergebnisse zeigen, dass Oridonin eine offensichtliche entzündungshemmende Wirkung auf Makrophagen hat.

Oridonin blockierte den Mincle/AKT/NF-κB-Signalweg in entzündlichen Makrophagen in vitroMincle ist als Mustererkennungsrezeptor wesentlich für die Förderung von Makrophagen-bedingter Entzündung imNierevon AKI. Die obigen tierexperimentellen Ergebnisse zeigten, dass Oridonin die Expression von Mincle im Blut herunterregulieren kannNierevon AKI. Daher untersuchten wir weiter, ob Oridonin den mRNA- und Proteinspiegel von Mincle im LPS-stimulierten Makrophagen-Entzündungsmodell reduzieren kann. Die Ergebnisse von Western Blot, Immunfluoreszenz und Echtzeit-PCR zeigten, dass 5 µM Oridonin nicht nur die mRNA-Expression signifikant reduzierte (Abb. 5c), sondern auch den Proteinspiegel von Mincle in entzündlichen Makrophagen herunterregulierte (Abb. 5a, b , d). Darüber hinaus regulierte Oridonin den Proteinspiegel von iNOS und phosphoryliertem AKT und NF-κB in mit LPS behandelten RAW264.7-Zellen signifikant herunter.

Die Überexpression von Mincle eliminierte die hemmende Wirkung von Oridonin auf die Entzündung in LPS-stimulierten RAW264.7-ZellenUm zu bestimmen, ob Mincle das Hauptziel von Oridonin zur Hemmung von Entzündungen in Makrophagen ist, haben wir die RAW264.7-Zellen mit Mincle-Überexpressionsplasmid transfiziert, um die Expression von Mincle hochzuregulieren. Gemäß den Ergebnissen von Echtzeit-PCR und Western Blot wurde gezeigt, dass die mRNA- und Proteinspiegel von Mincle in RAW264.7-Zellen nach der Transfektion erhöht waren (Abb. 6a, b). Das Plasmid wurde dann in die mit Oridonin behandelten entzündlichen Zellen transfiziert, und die Ergebnisse zeigten, dass die Expression von Mincle auch in den Zellen dieser Gruppe erhöht war ( 6c , d). Der Vektor wurde als Negativkontrolle in Zellen transfiziert. Die Ergebnisse der Erholungsexperimente zeigten, dass die Überexpression von Mincle in mit Oridonin behandelten entzündlichen Makrophagen die Aktivierung von AKT und NF-κB durch Erhöhung des Phosphorylierungsniveaus dieser beiden Proteine ​​hochregulierte (Abb. 6d–g), was darauf hindeutet, dass Oridonin die Entzündung von Makrophagen hemmt kann durch Herunterregulieren von Mincle und seiner nachgeschalteten AKT- und NF-κB-Signalisierung. Darüber hinaus zeigten die Echtzeit-PCR- und ELISA-Ergebnisse, dass die Überexpression von Mincle die Expression und Sekretion von Zytokinen in mit Oridonin behandelten entzündlichen Makrophagen wiederherstellte (Abb. 6h–l). Die obigen Ergebnisse zeigten, dass Oridonin Entzündungen in Makrophagen hemmt, indem es die Mincle/AKT/NF-κB-Signalübertragung reguliert.

DISKUSSION

AKI ist ein klinisches Syndrom, das durch eine Vielzahl von Ätiologien und pathologischen Mechanismen verursacht wird.NierenIschämie-Reperfusionsverletzung ist ein häufiger pathophysiologischer Prozess in Kliniken und eine der Hauptursachen für akuteNierenverletzung.14,15) Die Entzündungsreaktion ist ein komplexes Netzwerk, an dem beteiligt istNieren-Parenchymzellen und ansässige Immunzellen, in denen Makrophagen eine wichtige Rolle spielenNierenverletzung.16) Aufgrund von Veränderungen in der Immunmikroumgebung werden Makrophagen in mehrere Phänotypen polarisiert, hauptsächlich unterteilt in M1- und M2-Typen. Der iNOS-Ausdruck ist ein Zeichen des M1-Typs. Sowohl In-vivo- als auch In-vitro-Studien ergaben, dass die iNOS-Expression in der Modellgruppe erhöht ist und die Expression nach der Behandlung abnimmt. Makrophagen-induziertes C-Typ-Lektin (Mincle) ist ein C-Typ-Lektinrezeptor, der auf aktivierten Makrophagen exprimiert wird und genetisch auf Maus-6F2- und menschlichem Chromosom 12P31 lokalisiert ist. Einige Studien haben berichtet, dass Mincle an der Initiierung der angeborenen Immunantwort beteiligt ist, indem es Pathogen-assoziierte molekulare Mustererkennungsrezeptoren erkennt.17) Einige experimentelle Studien haben festgestellt, dass nach einer zerebralen ischämischen Verletzung bei Mäusen die Infiltration weißer Blutkörperchen in den verletzten Bereich erhöht wird kann zum Verlust von Neuronen im vaskulären Perfusionsbereich führen, und ein Knockout von Mincle kann erheblich sein

Verlangsamen Sie die ischämische Verletzung, die durch den Verschluss der mittleren Hirnarterie verursacht wird. Neueste Forschungen zeigen, dass Mincle den Tod spüren kannNieren-tubuläre Epithelzellen, die sich mit -Glucosylceramid verbinden, die Entzündungsreaktion beschleunigen und die Beseitigung der Entzündung verzögern.18) Studien zuNierenerkrankungist dasselbe wie unsere Forschungsergebnisse, die gezeigt haben, dass Mincle sowohl in Ischämie-Reperfusions- als auch in Cisplatin-induzierten AKI-Modellen stark exprimiert wird und spezifisch auf M1--Typ-Makrophagen exprimiert wird. Zusammenfassend lässt sich sagen, dass die gezielte Mincle-Studie eine neue Behandlung für verwandte Krankheiten sein könnte, die durch entzündliche Makrophagen verursacht werden. Unsere Studie ergab, dass die Expression von Mincle im AKI-Mausmodell erhöht ist

konstruiert durch Ischämie-Reperfusion. Nach den Ergebnissen der Immunfluoreszenz-Kolokalisierung wird Mincle hauptsächlich auf dem exprimiertNiereMakrophagen der Modellgruppe Mäuse und stimmt mit den Ergebnissen von Lans Forschung überein. Mincle wird spezifisch auf M1-Makrophagen induziert, wo die Mincle-Sky-Signalgebung die entzündlichen Phänotypen von M1-Makrophagen im akuten Zustand fördert und aufrechterhältNierenentzündung.6) Mincle gehört zum C-Typ-Lectin-Rezeptor (CLR), der Pilze und andere Formen von Mikroorganismen oder aseptische Gefahren erkennen kann. Sie induzieren über das Linkerprotein CARD9 eine Entzündung, gefolgt vom Aufbau des CARD9-Bcl10-Komplexes und der typischen NF-κB-Regulierung. Es besteht ein Regelungsverhältnis

zwischen NF-κB und AKT-Protein.10,19) In der Entzündungsstudie von LPS-stimulierten Makrophagen wurde bestätigt, dass die AKT- und NF-κB-Expression erhöht ist. Anschließend transfizierten wir das hochexprimierende Plasmid von Mincle in die Zelle, die mit einer medikamentösen Intervention behandelt wurde, und die Ergebnisse zeigten, dass der Signalweg von AKT und NF-κB-Signalweg wieder aktiviert wurde. Daraus kann geschlossen werden, dass Mincle die Proteinexpression dieses Weges beeinflussen kann. Es ist jedoch nicht klar, wie Mincle diese beiden Signalwege hochreguliert, und es ist nicht klar, ob das Protein über den Himmelsweg aktiviert wird, wie die gemeldete Forschung sagt.

Oridonin ist eine natürliche Diterpenoidverbindung, die aus Orion extrahiert wird, und es hat eine breite Palette von pharmakologischen Wirkungen, einschließlich Antitumor-, entzündungshemmender und neuroprotektiver Wirkung. Bei der Erforschung der neuroprotektiven Funktion von Oridonin fand Wens Team heraus, dass Oridonin die Insulinresistenz blockieren kann, indem es die Autophagie hemmt, um die kognitive Dysfunktion zu verbessern.20) Lins Team fand heraus, dass Oridonin vor der Parkinson-Krankheit und Krampfanfällen schützen kann, indem es neurooxidativen Stress und andere neuroprotektive Wirkungen reduziert. 21) Am gründlichsten untersucht ist die Antitumorwirkung von Oridonin. Ein Forschungsteam verarbeitete das Medikament zu inhalierbaren Partikeln zur Behandlung von Modellmäusen mit nicht-kleinzelligem Lungenkrebs, die eine starke Angiogenese-hemmende Wirkung und eine pro-apoptotische Wirkung zeigten und eine signifikante Anti-Krebs-Wirkung hatten.22) Oridonin kann auch entzündungshemmend wirken Wirkung. Es kann den Notch-Signalweg hemmen, die Polarisierung von Makrophagen induzieren, um zu einem entzündungshemmenden Phänotyp zu wechseln, und das Auftreten einer autoimmunen Neuritis unterdrücken.23)

Es kann auch das Auftreten von Osteoarthritis lindern, indem es die Sekretion von Entzündungsfaktoren und die Produktion von reduktiver Oxidase hemmt.24) Einige Studien haben gezeigt, dass Oridonin auch signifikante Auswirkungen auf verschiedene hatNierenerkrankungen. Studien haben berichtet, dass Oridonin mit 5-Fluorouracil (5-FU) zusammenarbeiten kann, um Antitumorwirkungen auszuüben und die Zytotoxizität von 5-FU zu verstärkenNieren-Krebszellen.25) Gemäß den Ergebnissen der In-vivo-Experimente dieser Studie kann Oridonin den Serum-Kreatinin-Harnstoff-Stickstoff bei Mäusen mit Ischämie-Reperfusions-Verletzung signifikant reduzieren und seine pathologischen Schäden signifikant reduzieren. Die Ergebnisse zeigten auch, dass Oridonin die Entzündungsaktivität im Zusammenhang mit der Unterdrückung des AKT- und NF-κB-Signalwegs hemmen kann, was den Forschungsergebnissen der Oridonin-Intervention bei diabetischer Nephropathie ähnlich ist, und gleichzeitig die Infiltration von entzündlichen Zytokinen und die Aktivität des Toll- wie Rezeptor 4 (TLR4)/NF-κB-Signalweg.26) Die obigen Ergebnisse deuten darauf hin, dass Oridonin Mincle hemmen und die Aktivität des AKT- und NF-κB-Signalwegs unterdrücken kann. In In-vitro-Experimenten wurden diese Pathway-Indikatoren im LPS-stimulierten Makrophagen-Entzündungsmodell erhöht und auch durch Oridonin verringert. Die Ergebnisse der Wiederherstellungsexperimente zeigten, dass die Überexpression von Mincle in mit Oridonin behandelten entzündlichen Makrophagen die Aktivitäten der AKT- und NF-κB-Signalübertragung erhöhte, was zu einer Hochregulierung der Expression und Sekretion von entzündlichen Zytokinen in mit Oridonin behandelten Zellen führte, was darauf hindeutete, dass Oridonin Entzündungen hemmt Makrophagen können durch die Unterdrückung der Mincle- und AKT/NF-κB-Signalgebung entstehen

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Es gibt viele Möglichkeiten, AKI-Tiermodelle zu konstruieren, einschließlich bilateraler Ischämie-Reperfusion, einseitiger IRI mit kontralateraler Nephrektomie, Cisplatin, Diphtherietoxin, LPS, Aristolochinsäure oder Folsäure. Die Injektion von Cisplatin kann jedoch die klinische Patienten nicht vollständig simulieren. Das durch Injektion von Diphtherie-Toxin induzierte Modell neigt dazu, das Fortschreiten von zu verlängernNierenerkrankung, was hauptsächlich dazu führen kannNieren-Fifibrose und glomeruläre Sklerose sowie leichte tubuläre Schäden. Die Aristolochinsäure-Nephropathie ist eine tubulointerstitielle Nephritis, und Folsäure ist auch ein Nephrotoxizitäts-Induktor vonNieren-Fibrose, aber die klinische Inzidenz dieser beiden ist gering.27) IRI-induzierte AkuterkrankungNierenverletzungist ein globales Problem der öffentlichen Gesundheit, das mit hoher Morbidität, Mortalität und Gesundheitskosten verbunden ist. Daher verwenden wir Ischämie-Reperfusion, um ein akutes zu konstruierenNiereVerletzungsmäusemodell. Mehrere Studien haben unterschiedliche Zeiten des Klemmens berichtetNieren-Arterie. Ein Forschungsteam hat ein IRI-Tiermodell entwickelt, um bilateral zu klemmenNieren-Stiele von Sprague-Dawley (SD) Ratten für 1 h.28) Ein anderes Forschungsteam klemmte bilateralNieren-Arterien für 45 min, um ein Reperfusionsmodell in Wistar-Ratten vorzubereiten. Zusätzlich wurde eine Studie durchgeführt, in der C57BL/6J-Mäuse verwendet wurden, um die bilateralen Nierenstiele 35 Minuten lang zu klemmen, um ein Modell zu bauen.29) Basierend auf den früheren experimentellen Ergebnissen wurde festgestellt, dass die Reperfusion nach der bilateralen wieder aufgenommen wurdeNieren-Arterie wurde für 20 min abgeklemmt und das Serum-Kreatinin kehrte drei Tage später auf den normalen Ausgangswert zurück. Daher entschieden wir uns, die bilateralen Nierenarterien vor der Reperfusion 35 Minuten lang abzuklemmen, und die Veränderungen des Serumkreatinins waren nach der Operation drei Tage lang stabil. Während der Operation können wir beobachten, dass die Farbe derNierewechselt von rosa nach hellrot, was verursacht wird durchNieren-arterielle vaskuläre Ischämie. Nachdem wir den Clip 35 Minuten später entfernt haben, können wir beobachten, dass die Farbe derNierenormalisiert, wurde das IRI-AKI-Modell konstruiert. Zusammenfassend zeigte dieser Befund, dass Oridonin eine signifikante entzündungshemmende Wirkung hat und die Nieren bei AKI vor Verletzungen schützen kann, die hauptsächlich in der Hemmung von Mincle und der Aktivität seiner nachgeschalteten Signalübertragung von NF-κB und AKT bestehen können. Diese Studie stellt einen neuen potenziellen Mechanismus der Behandlung von AKI mit Oridonin bereit, der Optionen für die klinische Behandlung von AKI bieten kann.