Gleichzeitige Bestimmung von Echinacosid und 2,3,5,4'-Tetrahydroxystilben-2-Ο- -D-Glucosid in oraler Flüssigkeit von Congrong Tongbian durch HPLC

Abstrakt:Ziel war die gleichzeitige Bestimmung von Echinacosid und 2,3,5,4'-Tetrahydroxystilben-2-Ο- -D-Glucosid in der Verdauungsflüssigkeit von Congrong mittels HPLC. Die Tech Mate C18-ST-Säule (4,6 mm × 250.0 mm, 5 μm) wurde mit Gradientenelution durch Acetonitril-0.2 % Ameisensäurelösung verwendet; die Detektionswellenlänge betrug 330nm; Die Flussrate betrug 1,0 ml/min. Die Ergebnisse zeigten, dass Echinacosid und 2,3,5,4'-Tetrahydroxystilben-2-Ο- -D-Glucosid in der Probe eine gute Auflösung der benachbarten chromatographischen Peaks mit einer guten linearen Beziehung im Bereich von 0 aufwiesen .159 3-0.955 8 ug und 0.385 3-4.623 5 ug. Die etablierte Methode ist einfach und genau und kann zur Bestimmung von Echinacosid und Stilbenglycosid in der oralen Verdauungsflüssigkeit von Congrong verwendet werden.

Schlüsselwörter:Congrong Degestive orale Flüssigkeit;Echinacosid; 2,3,5,4'-Tetrahydroxystilben-2-Ο- -D-Glucosid; HPLC

BIO-CISTANCHE-EXTRAKT MIT 30 % ECHINACOSID UND 12 % ACTEOSID

Die aktuellen Qualitätsstandards vonCistanche RongVerdauungsflüssigkeit zum Einnehmen hat Probleme wie einfache Testgegenstände, schlechte Bedienbarkeit sowie umständliche und zeitaufwändige Vorgänge. Zusätzlich zu den allgemeinen Prüfpunkten enthält die Norm nur dünnschichtige Identifizierungspunkte für Polygonum multiflorum und Citrus aurantium sowie Polygonum multiflorum und Citrus aurantium. Die eigentliche Dünnschichtchromatographie-Identifizierungsmethode ist nicht streng genug und weist eine schlechte Durchführbarkeit auf. Der Inhaltsbestimmungspunkt verwendet Ultraviolettspektrophotometrie, um 1,8-Dihydroxyanthrachinon in der Mundflüssigkeit von Cistanche purpurea nachzuweisen. Da diese Methode mehrere Rückflussextraktionen erfordert, ist der Vorgang umständlich und zeitaufwändig und die Reproduzierbarkeit und Genauigkeit sind schlecht. Die Qualität der ursprünglichen Arzneimittel kann nicht kontrolliert werden, und die Qualitätskontrolle der Königsdroge Cistanche deserticola fehlt. In dieser Standardforschungsarbeit wird die Bestimmung vonEchinaceaside in Cistanche deserticolaUndStilbenglycosid in Polygonum multiflorumin Cistanche deserticola Oral Liquid wurde untersucht. Basierend auf der Zusammensetzung der Formel und den Prozesseigenschaften wurde eine leistungsstarke Flüssigphase etabliert. Die chromatographische Methode wurde verwendet, um die Echinacosid- und Stilbenglycoside in der verdauungsfördernden Mundflüssigkeit von Cistanche Rong zu bestimmen, und ihre Gehaltsgrenzen wurden formuliert, um die Qualitätskontrollstandards weiter zu verbessern und zu verbessern. Die Bestimmungsmethode ist einfach und schnell und die Inhaltsgrenzen sind angemessen formuliert. Nach methodischer Überprüfung sind Genauigkeit, Präzision, Linearität, Haltbarkeit und Bereichsgenauigkeit gut und können zur Bestimmung des Inhalts von Cistanche Rong Tongbang Oral Liquid [1-5] verwendet werden.

1 Instrumente und Reagenzien

1.1 Instrumente

Hochleistungsflüssigkeitschromatograph von Waters (2695 und ARC); 1/100,000 elektronische Waage (MS205DU), 1/10,000 elektronische Waage (ME204E, Mettler-Toledo).

1.2 Testmedikamente und Reagenzien

Echinacea-Seite (Chargennummer 110670-201706, Reinheit 89,7 %); Stilbenglycosid (Chargennummer 110844-201915, Reinheit 90,7 %), alle bereitgestellt vom China Institute of Food and Drug Control; Cistanche purpurea orale Flüssigkeit (Chargennummer 20191204, 20191205, 20191206, 20200404, 20200405, 20200406, 20200407, 20200408, 20200409, 20200410), bereitgestellt von einem Pharmaunternehmen in Gansu; Methanol usw. sind chromatographisch rein; Wasser ist hochreines Wasser; Andere Reagenzien sind analysenrein.

2 Methoden und Ergebnisse

2.1 Chromatographische Bedingungen

Verwenden Sie Tech Mate C{{0}}ST (4,6 mm × 250.0 mm, 5 μm) als chromatographische Säule, verwenden Sie Acetonitril als mobile Phase A und verwenden Sie 0,2 %ige Ameisensäurelösung als mobile Phase B. Gradientenelution gemäß den Vorschriften in Tabelle 1 durchführen; Säulentemperatur Die Temperatur beträgt 35 Grad; die Detektionswellenlänge beträgt 330 nm; die Flussrate beträgt 1,0 ml/min; das Injektionsvolumen der Prüfprobe und der Referenzsubstanz beträgt jeweils 10 µL; Die Anzahl der theoretischen Böden sollte bezogen auf den Echinaceaside-Peak nicht weniger als 4000 betragen.

2.2 Vorbereitung der Lösung

Vorbereitung der Referenzlösung: Nehmen Sie geeignete Mengen der Echinaceaside-Referenzsubstanz und der Stilbenglycosid-Referenzsubstanz, wiegen Sie sie genau ab und geben Sie 70 % Methanol hinzu, um eine gemischte Lösung mit 70 ug Echinaceaside und 150 ug herzustellen Stilbenglycosid pro 1 ml. , das ist es. Vorbereitung der Testlösung: Produkt gut schütteln, ca. 0,3 g entnehmen, genau abwiegen, in eine 25 ml braune Messflasche geben, entsprechende Menge 70 %iges Methanol zugeben, 30 Minuten beschallen, abkühlen lassen, 70 % hinzufügen 1 % Methanol auf Skala verdünnen, gut schütteln, filtrieren und das restliche Filtrat entnehmen. Vorbereitung der Negativprobenlösung: Wiegen Sie etwa 0,3 g der Negativprobe genau ein und bereiten Sie sie entsprechend der Herstellungsmethode der Testlösung vor.

Abbildung 1 HPLC-Chromatogramme der oralen Verdauungsflüssigkeit von Congrong

2.3 Methodische Überprüfung

2.3.1 Arbeitskurve und linearer Bereich

Zeichnen Sie die gemischte Referenzlösung genau auf und geben Sie 70 % Methanol hinzu, um eine Reihe gemischter Referenzlösungen herzustellen. Nehmen Sie genau 1{{20}} µL jeder der oben genannten Serien von Kontrolllösungen auf, injizieren Sie sie in den Flüssigkeitschromatographen und messen Sie den integrierten Wert der Peakfläche. Nehmen Sie die Konzentration der Referenzlösung (µg/ml) als Ordinate (x) und den integrierten Wert der Peakfläche als Abszisse (y). Zeichnen Sie ein Diagramm, um eine gerade Linie zu erhalten, die durch den Ursprung verläuft. Die Regressionsgleichung ist y1=1.510 4×106x-1.177 2×105 (r=0.999 9), {{10} }.644 0×106x-6.3836×105 (r=0.999 9). Die Ergebnisse zeigen, dass Echinaceaside und Stilbenglycosid eine gute lineare Beziehung im Massenbereich von 0,159 3 bis 0,955 8 ug und 0,385 3 bis 4,623 5 aufweisen. ug.

Cistanche Tubulosa

2.3.2 Präzisionstest

Nehmen Sie genau 10 µL der gemischten Referenzlösung auf und wiederholen Sie die Injektion sechsmal unter den chromatographischen Bedingungen „2.1“. Der RSD der Peakflächen von Echinacosid und Stilbenglycosid wurde mit 0,66 % bzw. 0,59 % gemessen, was darauf hinweist, dass die Präzision des Instruments gut ist.

2.3.3 Stabilitätstest

Nehmen Sie gemäß der Methode unter „2.1“ dieses Produkt (Chargennummer 20191205), um eine Testlösung herzustellen, und injizieren Sie Proben zur Messung bei 0 h, 4 h, 8 h, 12 h, 20 h usw 24 h nach der Zubereitung und notieren Sie die Peakfläche. Die relative Standardabweichung liegt zwischen 2,37 % und 2,79 %. Die Ergebnisse zeigen, dass die Testlösung innerhalb von 24 Stunden stabil ist.

2.3.4 Wiederholbarkeitstest

Nehmen Sie 6 Aliquote der gleichen Testprobencharge (Chargennummer 20191205) und injizieren Sie Proben zur Messung gemäß den chromatographischen Bedingungen unter „2.1“. Ergebnisse: Die relative Standardabweichung von Echinaceaside betrug 1,48 % mit guter Wiederholbarkeit; Die relative Standardabweichung von Stilbenglycosid betrug 1,10 % bei guter Wiederholbarkeit.

Cistanche Tubulosa

2.3.5 Bestimmung der Wiederherstellungsrate

Nehmen Sie die Probenzugabe und -rückgewinnung an, um 50 % der Probenmenge (0,3 g) der Testprobe und den Probengehalt von 1,0 bereitzustellen:0 .5, 1.{{10}}:1.0, 1.0:1,5 bzw. und absorbieren Sie die Referenzsubstanz-Reservelösung 1 (Echinacea-Glykosidgehalt) genau 0.431 5 mg/ml) 1.0 ml, 2.0 ml und jeweils 3,0 ml und geben Sie dann genau die Referenzsubstanz-Stammlösung 2 (Stilbenglycosid) hinzu Massenkonzentration 0,8678 mg/ml) 1,25 ml, 2,50 ml bzw. 3,75 ml. Jeweils in 25-mL-Messkolben geben

Mit einem Stickstoffgebläse trockenföhnen. Wiegen Sie dann 9 Proben derselben Charge mit bekannten Inhalten genau ab (Chargennummer 20191205, Echinaceaside-Gehalt beträgt 7,810 2 mg/g, Stilbenglycosid-Gehalt beträgt 14,232 4 mg/ g) und die Probenmenge jeder Probe beträgt Die Probenmenge der Testprobe beträgt etwa 0,15 g. Geben Sie es jeweils in den oben genannten Messkolben. Bereiten Sie es gemäß der Methode unter der Testlösung vor. Messen Sie es gemäß dem Gesetz. Berechnen Sie die Wiederherstellungsrate. Das Ergebnis ist einfach.

Die durchschnittliche Wiederfindung von Stilbenglycosiden und Stilbenglycosiden betrug 98,28 % bzw. 98,43 %, und die RSDs betrugen 1,56 % bzw. 0,97 %, was auf eine gute Instrumentengenauigkeit hinweist.

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