SINGLE-CELL RNA-SEQ ENTHÜLLT DIE KRITISCHEN ROLLEN DER STING- UND MDA5-VERMITTELTEN ZYTOSOLISCHEN NUKLEINSÄURE-ERKENNUNGSWEGE SOWIE DER IFNAR/STAT2-SIGNALISIERUNG BEI DER REKOMBINANTEN MVA-INDUZIERTEN ANTITUMOR-IMMUNITÄT

Hintergrund

Onkolytische Viren sind aufgrund ihrer Fähigkeit, eine angeborene und adaptive Antitumorimmunität zu induzieren, vielversprechende Therapeutika für fortgeschrittene Krebsarten. Das modifizierte Vacciniavirus Ankara (MVA) ist ein abgeschwächtes, replikationsdefizientes Pockenvirus, das für den menschlichen Gebrauch sicher ist und daher eine günstige Plattform für die Krebsimmuntherapie darstellt. Zuvor haben wir entdeckt, dass das E5R-Gen in MVA einen Inhibitor des cGAS/STING-vermittelten zytosolischen DNA-Sensorwegs kodiert. Das manipulierte MVA, das das E5R-Gen löscht und den Wachstumsfaktor Flt3L für dendritische Zellen (DC) zusammen mit einem T-Zell-Co-Stimulator OX40L exprimiert, erzeugt bei intratumoraler Verabreichung eine starke Antitumorimmunität. Wir haben auch gezeigt, dass die intratumorale (IT) Injektion von rMVA der 1. Generation die CD8+-Aktivierung in einer cGAS/STING- und STAT1/STAT2--abhängigen Weise fördert und die regulatorischen OX40hi-T-Zellen (Tregs) über OX40L/ dezimiert. OX40-Interaktion und IFNAR-Signalisierung. Das E3L-Gen von MVA kodiert für einen Inhibitor der zytosolischen dsRNA-Sensorwege. Der Zweck dieser Studie besteht darin, zu untersuchen, ob rMVADE3L durch die Deletion von E3L aus rMVA (MVADE5R-hFlt3LmOX40L) seine Antitumorwirkung weiter verbessert. Wir haben uns auch auf die Verwendung von Einzelzell-RNA-Seq (scRNA-Seq) konzentriert, um die Veränderung der immunsuppressiven Tumormikroumgebung durch IT-Abgabe von rMVADE3L zu untersuchen.

Vorteile von Cistanche Tubulosa-Antitumor

Methoden

Wir haben rMVADE3L entwickelt, indem wir das E3L-Gen aus rMVA gelöscht haben. Wir untersuchten die angeborenen Immunantworten von aus dem Knochenmark stammenden DCs (BMDCs) und Tumorzelllinien auf rMVADE3L und rMVA. Wir verglichen auch die Antitumorwirksamkeit der beiden Viren in murinen B16-F10-Melanom- und MC38-Dickdarmkrebsmodellen. Darüber hinaus führten wir eine scRNA-Seq von sortierten tumorinfiltrierenden CD45+-Immunzellen aus Tumoren durch, die zwei Tage nach der IT-Injektion mit rMVADE3L oder PBS im Wildtyp, MDA5/STING-, STAT2-, geerntet wurden. oder IFNAR1-defiziente Mäuse.

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Ergebnisse

Im Vergleich zu rMVA aktiviert rMVADE3L sowohl die cGAS/STING- als auch die MDA5/MAVS-vermittelten Nukleinsäure-Sensorwege in DCs und Tumorzelllinien wirksamer. IT rMVADE3L erzeugt stärkere Antitumorwirkungen als rMVA. Unsere Ergebnisse zeigten, dass es nach der rMVADE3L-Behandlung bei WT-Mäusen zu einem Zustrom von entzündlichen Monozyten in die Tumoren kam, der bei STAT2- oder IFNAR-Knockout-Mäusen fehlte. Die Auswertung viraler Transkriptome auf Einzelzellebene ergab, dass Makrophagen und Monozyten anfälliger für rMVA DE3L waren als andere Zelltypen. Die transkriptomischen Veränderungen in DC-Untergruppen hängen weitgehend von der IFNAR/STAT2-Signalisierung ab. Im Gegensatz dazu bestimmt der MDA5/STING-vermittelte Weg das Transkriptomprofil von entzündlichen Monozyten als Reaktion auf rMVADE3L.

Cistanche tubulosa – verbessert das Immunsystem

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Schlussfolgerungen

Zusammenfassend zeigen unsere Ergebnisse, dass scRNA-seq ein leistungsstarker Ansatz zur Untersuchung der Immunantworten des Wirts auf immunogene Viren ist, der zukünftige Designs einer wirksameren viralen Krebsimmuntherapie leiten würde.

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Danksagungen

Diese Arbeit wurde durch das Forschungsstipendium der Society of Memorial Sloan Kettering (MSK) (LD), den MSK Technology Development Fund (LD), den Parker Institute for Cancer Immunotherapy Career Development Award (LD) und den gesponserten Forschungspreis von IMVAQ Therapeutics unterstützt. Diese Arbeit wurde teilweise vom Swim Across America (JDW, TM), dem Ludwig Institute for Cancer Research (JDW, TM) und dem National Cancer Institute Grants R01 CA56821 (JDW) unterstützt. Diese Forschung wurde teilweise auch durch den NIH/NCI Cancer Center Support Grant P30 CA008748 finanziert.

Vorteile von Cistanche für Männer: Stärkung des Immunsystems