Studie zum Einfluss der Immunität bei Mäusen

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Zwei von dreißig MännernDBA/2NCrl(D2N)-Mäuse, die als Kontrollstamm in der Hintergrunddatenanalyse von verwendet wurdenDBA/2N-MDXMäuse, die mit abnormalen Befunden vorgestellt wurden, die auf eine Infektion hindeuteten. Fall 1: Eine 4- Woche alte männliche D2N-Maus zeigte eine weiße Plaque-Läsion in der linken Niere (keine klinischen Symptome), und eine pathologische Untersuchung der Niere wurde durchgeführt. In den Tubuli und im Interstitium der linken Niere wurde eine entzündliche Zellinfiltration, hauptsächlich Neutrophile, beobachtet, und im linken Nierensegment wurde Staphylococcus aureus (S. aureus) nachgewiesen. Daher wurde diese Läsion an der linken Niere als eitrig diagnostizierttubulointerstitiellNephritis verursacht durch S. aureus-Infektion. Fall 2: Bei einer 9- Woche alten, männlichen D2N-Maus wurde ein linker Torticollis mit Gewichtsverlust festgestellt. Die histologische Untersuchung ergab eine exsudative Entzündung um die Rachenöffnung der Eustachischen Röhren und eine eitrige Entzündung beider Mittelohren und des linken Innenohrs mit Abszessbildung und Clustern als grampositive Mikrokolonien. S. aureus wurde aus Abstrichkulturen beider äußerer Gehörgänge identifiziert. Infolgedessen wurde dieser Fall von Torticollis durch S. aureus-eitrige Mittelohrentzündung und das Internet verursacht. S. aureus ist als opportunistischer Erreger mit dem Potenzial bekannt, häufig eitrige Erkrankungen bei immunkompetenten Labortieren zu verursachen. Nach unserem Wissen ist dieser Fall einer S. aureus-Infektion mit Torticollis bei einer D2N-Maus jedoch nicht gemeldet.

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Ein Methicillin-resistenter Staphylococcus aureus (MRSA)-Isolat tauchte 2018 in einer Labormaus am Center for Laboratory Animal Science des National Defense Medical College aufMRSAIsolate wurden danach auch in den anderen Mäuseräumen von Mäusen gewonnen. An diesen MRSA-Isolaten wurden zur Bestimmung ihrer Genotypen molekulare Typisierungen wie Multi-Locus-Sequenztypisierung (MLST), Staphylococcus aureus Protein A(spa)-Typisierung, SCCmec-Typisierung und Koagulase-Typisierung durchgeführt. Alle Isolate zeigten identische Genotypen (ST1, spa t1784, SCCmec Typ IV und Koagulase Typ VII), was darauf hindeutet, dass die Isolate identische Klone waren. Vor dem Auftreten von MRSA im Jahr 2018 wurden in dieser Einrichtung keine Isolate mit solchen Genotypen isoliert, es wurde davon ausgegangen, dass der MRSA-Klon über Menschen oder Versuchstiere in die Einrichtung eingeschleppt wurde. ST11 ist das erste ambulant erworbene MRSA, das in den Vereinigten Staaten von Kindern gewonnen wurde, jedoch wird ST1 derzeit weltweit von Menschen und Tieren gewonnen. In Japan wurden ST1- und SCCmec-Typ-IV-Stämme aus Menschen und Katzen isoliert, was darauf hindeutet, dass ST1 zwischen Menschen und Tieren übertragen wird. Ein MRSA-Stamm mit diesen Genotypen, aber auch mit spa tl784, wurde beim Menschen gewonnen. Derzeit ist die Unterscheidung zwischen im Krankenhaus erworbenem MRSA, ambulant erworbenem MRSA und viehbezogenem MRSA mehrdeutig. Diese Ergebnisse legen nahe, dass Mäuse als Reservoire für MRSA fungieren könnten.

In neueren Krebsimmuntherapien wird die Aktivität von Molekülen wie PD-1 gehemmt, um die Aktivität von Immunzellen gegen Krebs zu erhöhen. Trotz der hohen therapeutischen Wirkung gibt es Fälle, in denen sich bei der Krebsimmuntherapie Autoimmunerkrankungen entwickeln. Hier etablierten wir ein System, das PD-1 zeitspezifisch in kultivierten Zellen und Mäusen abbauen kannSMASH-Degron-System. PD-1-SMASh-Fusionsprotein in Jurkat-Zellen und CD3 plus Splenozyten war 1 Tag nach Verabreichung von Asunaprevir (ASV) oder Grazoprevir (GRV), die NS3/4A-Protease-Inhibitoren sind, reduziert. Das Wachstum von MC-38-Adenokarzinomzellen, die in PD-1-kirsch-SMASh-Knockin(KI)-Mäusen mit ASV inokuliert wurden, war im Vergleich zu Wildtyp(WT)- und unbehandelten KI-Mäusen unterdrückt. Darüber hinaus konnten die mit KI-Knochenmarkszellen transplantierten WT-Mäuse, nachdem sie mit tödlicher Strahlung bestrahlt worden waren, MC-38-Zellen mit GRV abstoßen. KI-Mäuse schienen gesund zu sein und zeigten keine Anzeichen einer Autoimmunerkrankung. Wir schlagen vor, dass die Verwendung des Degron-Systems in lebenden Organismen nicht nur verschiedene biologische Studien, sondern auch die Behandlung von Krankheiten voranbringen wird.

Progesteron (P4) wird von der Plazenta ausgeschieden, um die Schwangerschaft aufrechtzuerhalten, und fungiert als Immunregulator. Glucocorticoid ist eine andereimmunregulatorischSteroid zur Regulierung von Entzündungen. In dieser Studie wurden menschliche periphere mononukleäre Blutzellen (PBMCs) in NOG-Mäuse transplantiert, um eine Graft-versus-Host-Disease (GVHD) zu induzieren, und für den Vergleich zwischen P4- und Cortisol (COR)-Effekten verwendet. PBMCs wurden in Anwesenheit verschiedener Konzentrationen von P4 oder COR stimuliert und die Zellen wurden durch Durchflusszytometrie (FCM) analysiert. Aliquots vonPBMCswurden in NOG-Mäuse transplantiert, und P4 oder COR wurde den Mäusen zweimal pro Woche injiziert. Nach 28 Tagen wurden FCM und immunhistochemische Analysen durchgeführt. Als Ergebnis hemmte eine hohe P4-Konzentration die T-Zell-Aktivierung in vitro, während die Hemmung nach der Entfernung nicht anhielt. Die Unterdrückung der T-Zell-Aktivierung war bei der COR-Behandlung im Vergleich zu P4 geringer, und die T-Zell-Erschöpfung war ausgeprägter. P4--injizierte Mäuse trugen im Vergleich zu Kontrollmäusen mehr Splenozyten, insbesondere CD8-T-Zellen. Die geringere Expression von CD25 führt jedoch zu einer geringeren Infiltration menschlicher T-Zellen in Lunge und Leber und wenigerGVHDSymptome wurden beobachtet. Andererseits war die Zahl der Milzzellen, insbesondere der T-Zellen, bei COR-injizierten Mäusen signifikant geringer, und aktivierte/erschöpfte Zellen waren reichlich vorhanden. Diese Ergebnisse legen nahe, dass P4 es vorzieht, T-Zellen im Vergleich zu COR in vitro zu erhalten.

Helicobacter hepaticus und Helicobacter bills sind als Erreger von Hepatitis und Colitis bei Mäusen bekannt. Die Existenz mehrerer positiver Fälle wird immer noch jährlich in Versuchstiereinrichtungen in Japan bestätigt. Es ist am besten, Zökuminhalt oder frischen Kot als Probe für PCR-Tests auf H. hepaticus und H. bilis zu verwenden.

Kürzlich wurden DNA- und RNA-Transport- und -Lagerungsreagenzien von verschiedenen Herstellern hergestellt. Es wird erwartet, dass diese Reagenzien die Probleme beim Transport von Proben, die für PCR-Tests verwendet werden, beseitigen werden. Daher wurde in dieser Studie die Nützlichkeit des Nukleinsäure-Speicherreagens untersucht, indem ein PCR-Test von Helicobacter unter Verwendung des Inhalts des Blinddarms durchgeführt wurde, der unter Verwendung des Nukleinsäure-Konservierungsreagens konserviert wurde. Als Ergebnis konnte in Proben, die 7 Tage lang unter Verwendung der Konservierungslösung gelagert wurden, Helicobacter in der gleichen Menge nachgewiesen werden wie in der frischen Probe. Aus dem Obigen wurde vorgeschlagen, dass es beim PCR-Test von Helicobacter möglich ist, den Test mit hoher Genauigkeit durchzuführen, selbst wenn der Transport Tage dauert, indem die in das Nucleinsäure-Lagerungsreagenz eingetauchte Probe durch einen gekühlten Flug transportiert wird.

Wir haben zuvor E.coli-Mutantenstämme mit deutlich verbesserter Adhärenz an festen In-vitro-Oberflächen entwickelt, indem wir die Gene modifiziert haben, die auf Nährstoffmangel reagieren. Um die Wechselwirkung zwischen diesen adhäsionsverstärkten E. coli-Stämmen (AEEs) und der In-vivo-Darmumgebung zu bewerten, haben wir ihre Fähigkeit zur Kolonisierung des Darmtrakts durch Inokulation von Mäusen bewertet.

Vor dem Bewertungsexperiment transformierten wir AEEs mit einem Plasmid, das Luciferase für die In-vivo-Visualisierung exprimiert. wie sie alle paar Tage in nüchterne Mäuse geimpft und Kot gesammelt wurden. Die Zahl der LebendenAEEswurde durch Messen der CFU aus den gesammelten Fäkalien geschätzt.

Als Ergebnis waren AEEs im Vergleich zum Kontrollstamm für mehr als eine Woche häufiger im Kot vorhanden, was auf eine verstärkte Kolonisierung im Darmtrakt hinweist. Durch Beobachtung der Lokalisierung der Luciferase-Lumineszenz durch nicht-invasive Bildgebung unter Verwendung von IVIS wurde auch festgestellt, dass AEEs dazu neigten, sich am Blinddarm und Dickdarm anzusiedeln.

[Ziel] Derzeit [Pasteurella]Pneumotropikawurde als neue Gattung Rodentibacter reklassifiziert. Von diesen sind R. pneumotropicus und R. Healy die Hauptziele für die mikrobiologische Überwachung bei Nagetieren. Wir haben eine Reihe von Rodentibacter sp. die nicht als Arten von Nagetieren identifiziert werden konnten. In dieser Studie untersuchen wir die Eigenschaften von Rodentibacter sp. isolieren, wobei der Schwerpunkt auf der bakteriellen Virulenz liegt. [Methoden] Rodentibacter sp. die aus der Luftröhre von Ratten isoliert wurden, wurden für die Studie verwendet. Auf dem Sequenzer der nächsten Generation wurde eine Entwurfsgenomsequenzierung durchgeführt, und dann wurden die Virulenz-assoziierten Gene vorhergesagt. Im Tierexperiment wurden Rag2-Mäuse für Rodentibacter sp. Infektion.|Ergebnisse| Durch den Entwurf der Genomsequenzierung wurde ein einzigartiges RTX-Toxin-codierendes Gen in Rodentibacter sp. identifiziert. Die Proteinsequenz des RTX-Toxins war homologer zu den von Enterobacteriaceae produzierten als von Pasteurellaceae. In einem Tierversuch wurde bei fast allen infizierten Rag 2-Mäusen eine tödliche Lungenentzündung oder Blutvergiftung bestätigt. Obwohl das Isolat nicht als R. pneumotropicus und R. heylii identifiziert werden konnte, kann diese eng verwandte Art bei immungeschwächten Tieren in Gegenwart von Virulenzfaktoren wie dem RTX-Toxin tödlich sein.

Im Rahmen des NBRP Basic Technology Development Program (2018-2019) haben wir die Genome von murinen opportunistisch pathogenen Bakterien sequenziert und durchgeführtRNAseqvon Protozoen in Mäusen, um PCR-Assays für diese Organismen zu entwickeln. Wir verwendeten diese Ergebnisse, um Rodentibacter spp. und Protozoen bei Ratten in Zusammenarbeit mit der Kyoto University (NBRP Rat). Hier berichten wir über die Testergebnisse in Rattenproben. [Methoden] Die 16S-rRNA-Gensequenzen von etwa 1,5 kbp wurden durch PCR für sechs Rattenisolate von Rodentibacter spp. gelesen, und die vorläufige Genomsequenz eines Isolats (#25) wurde unter Verwendung von Illumina HiSeq 2500 bestimmt durchgeführt basierend auf RNAseq-Ergebnissen von Maus-Protozoen. [Ergebnisse] Die 16S-rRNA-Gensequenzen aller Isolate waren identisch und sie wurden durch OTU-Analyse als Rodentibacter Ratti identifiziert. Die Resequenzierung von Isolat Nr. 25 ergab auch, dass es sich bei diesem Stamm um R. Ratti handelte. Die PCR für murine Protozoen ergab positive Ergebnisse für Rattenamöben. Für Trichomonas wurden keine positiven Ergebnisse erhaltenPCRauf Rattenproben. [Diskussion] Die Rattenisolate von Rodentibacter spp. In diesem Bericht untersucht wurden alle R. Ratti. Es ist wichtig, sich des Vorhandenseins von R. Ratti bewusst zu sein, wenn Rodentibacter-Tests an Ratten durchgeführt werden. Einige Kotproben von Ratten zeigten eine positive Maus-Amöben-PCR. Dies ist der erste Schritt in der Entwicklung der PCR zum Nachweis von Protozoen in Ratten.

Rodentibacter-Organismen 'Pasteurella pneumotropica' sind opportunistisch pathogene Bakterien, die Atemwegserkrankungen bei Mäusen und Ratten verursachen. Sie wurden früher in die Gattung Pasteurella eingeordnet, und mehrere Stämme wurden vorläufig als Biotypen vorgeschlagen. 2017 wurden sie gemeinsam in die Gattung Rodentibacter umstrukturiert. MaM- und MaR-Stämme wurden um die 1980er Jahre aus Mäusen bzw. Ratten isoliert. In dieser Studie bestimmten wir die Genomsequenzen beider Stämme und verglichen sie mit denen der Gattung Rodentibacter, Materialien und Methoden. Die MaM- und MaR-Stämme wurden vom National Institute of Infectious Diseases (NIAID) bezogen.

(Manabu Saito --> Yasushi Ami -->Fumio Ike). Beide Stämme wurden durch Flüssigkultur gezüchtet, um genomische DNA zu extrahieren, und die genomischen Sequenzen wurden mit Illumina Hiseq 2500 und PacBio Sequel bestimmt. [Ergebnisse] Basierend auf der 16S-rRNA-Gensequenz wurde der MaM-Stamm als R. pneumotropicus und der MaR-Stamm identifiziert als R. Ratti. Außerdem wurde die vollständige Genomsequenz (2.213.961 bp) des MaR-Stammes bestimmt (die Anzahl der rRNA-Operons betrug 6 und die Anzahl der Gene wurde auf 2.063 geschätzt). [Diskussion] Die MaM- und MaR-Stämme wurden als Standards zur Identifizierung von "Pasteurella pneumotropica" in Japan verwendet. Aus dieser Analyse haben wir die Spezies beider Stämme wie folgt bestimmt: Der MaM-Stamm ist R. pneumotropicus und der MaR-Stamm ist R. ratti. Bemerkenswerterweise zeigen diese Ergebnisse, dass R. Ratti aus Ratten in Japan isoliert werden kann.

Clostridium pili for me (CP) ist bei verschiedenen Labortieren, einschließlich Ratten und Mäusen, anfällig für Infektionen und zeigt außer bei immungeschwächten Tieren eine asymptomatische Infektion. Es wird als wichtige Differentialdiagnose angesehen, Tiereinrichtungen zu erhalten, und es ist bekannt, dass es experimentelle Daten aus Tierversuchen beeinflusst. Serodiagnostik (ELISA, IFA) und PCR werden häufig zur Diagnose von CP verwendet, da die Isolierung im künstlichen Nährmedium für CP schwierig ist. Das Vorhandensein des unspezifischen Antikörpers, der auf die Kreuzreaktivität mit CP hinweist, wird jedoch anhand der Serodiagnostik gemeldet und in einem ähnlichen Fall in unseren Einrichtungen häufig erkannt. Darüber hinaus hat die PCR-Methode als zuverlässiges diagnostisches Verfahren mit periodischer Überwachung Grenzen, da CP nach dem Anstieg des Antikörpertiters im Kot nicht mehr nachweisbar ist. Kürzlich haben wir einen anderen Ansatz untersucht, bei dem wir jeden Monat Kot von Tieren konservieren. Wir haben den PCR-Test für CP, der nicht vom Einfluss der Antikörper betroffen ist, als zuverlässigere Diagnostik unter Verwendung des kontinuierlich konservierten Kots übernommen. In diesem Bericht zeigen wir einen aktuellen Fall. (unspezifischer Antikörper) zur Untersuchung der sich in unserem Unternehmen entwickelnden Strömung.