Studie über die schützende Wirkung von Gesamtglykosiden von Cistanche Deserticola auf Alkoholschäden von primär kultivierten Maushepatozyten
Mar 10, 2023
Zielsetzung: Es sollte die schützende Wirkung von Gesamtglykosiden von Cistanche deserticola auf primär kultivierte Hepatozyten untersucht werden. Methoden: Die primären Hepatozyten wurden durch die In-situ-Perfusionsmethode gesammelt, und die Wirkung der Gesamtglykoside von Cistanche deserticola auf die Überlebensrate von durch Alkohol geschädigten primären kultivierten Hepatozyten wurde durch die MTT-Methode bewertet; Die Wirkung der Gesamtglykoside von Cistanche deserticola auf die Morphologie von primär kultivierten Hepatozyten und Kernen, die durch Alkohol geschädigt wurden, wurde durch Fluoreszenzmikroskopie bewertet; Die Wirkung der Gesamtglykoside von Cistanche deserticola auf die Apoptose von primär kultivierten Hepatozyten, die durch Alkohol geschädigt wurden, wurde durch Durchflusszytometrie nachgewiesen; Immunzytochemische Färbung wurde verwendet, um die Wirkung von Gesamtglykosiden von Cistanche deserticola auf die Expression von bcl-2 und c-fos nachzuweisen. Ergebnisse: Nach einer Alkoholverletzung nahm die Überlebensrate der primären Hepatozyten ab und es gab offensichtliche Veränderungen in der Apoptose und Nekrose. Die Expression des Apoptose-inhibierenden Gens bcl-2 nahm ab, und die Expression des Apoptose-fördernden Gens c-fos nahm zu. Gesamtglykoside von Cistanche deserticola können die Zellüberlebensrate signifikant verbessern, Apoptose und Nekrose verbessern, die Expression von bcl-2 verstärken und die Expression von c-fos hemmen. Die Wirkung war dosisabhängig. Schlussfolgerung: Cistanche deserticola-Glykoside können primär kultivierte Hepatozyten schützen, indem sie die Expression des Apoptose-inhibierenden Gens bcl-2 erhöhen, die Expression des Apoptose-fördernden Gens c-fos verringern, Apoptose und Nekrose reduzieren und die Zellüberlebensrate erhöhen.
SchlüsselwörterGesamtglykoside vonCistanche Deserticola; Primärkultur; Hepatozyt; Alkoholische Leberschädigung; Apoptose
Cistanche-Pulver
In den letzten Jahren hat mit der Verbesserung des Lebensstandards der Menschen der Alkoholkonsum schnell zugenommen, begleitet von der Zunahme verschiedener alkoholbedingter Krankheiten, und alkoholische Leberschäden sind eines der wichtigen Probleme. Studien haben gezeigt, dass Cistanche deserticola die schützende Wirkung hat, die Immunfunktion, Anti-Aging, Anti-Strahlung, Anti-Oxidation, Anti-Lipid-Peroxidation und alkoholinduzierte Leberschäden zu verbessern [1]. Glykoside sind die Hauptwirkstoffe von Cistanche deserticola.In früheren Versuchen wurde durch Tierexperimente nachgewiesen, dass die Gesamtglykoside vonCistanche deserticola makann die Produktion freier Radikale reduzieren, die Fähigkeit zum Abfangen freier Radikale und ihrer Metaboliten verbessern, wodurch die Lipidperoxidation gehemmt wird, und eine schützende Rolle bei alkoholinduzierten Leberschäden spielen[2]. Dieses Experiment wird die schützende Wirkung von Gesamtglykosiden von Cistanche deserticola auf die alkoholische Leberschädigung auf zellulärer Ebene durch die Primärkultur von Hepatozyten untersuchen.
1 Material und Methoden
1.1 Reagenz und InstrumentGesamtglykoside vonCistanche Deserticola, dunkelbraunes Pulver, das von der School of Pharmacy der Lanzhou University bereitgestellt wird, enthält 88,6 Prozent der gesamten Glykoside von Phenylethanol. In doppelt destilliertem Wasser auflösen und die Kulturlösung auf die erforderliche Konzentration verdünnen. Enzymmarker (Beckman Coulter AD340), Fluoreszenzmikroskop (Olympus, BX51), inverses Phasenkontrastmikroskop (Leica DMI3000B), Durchflusszytometrie (Beckman Coulter Cell, CellLabQuanta SC) etc.
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1.2 Die primären Hepatozyten wurden isoliert und durch die In-situ-Perfusionsmethode [3] kultiviert.
Eine Kunming-Maus wurde durch intraperitoneale Injektion von {{0}},5 Prozent Pentobarbital 0,5 ml anästhesiert. Nach routinemäßiger Hautdesinfektion Bauch öffnen, Magen-Darm-Trakt nach links verschieben, Pfortader freilegen, Infusionskanüle des Infusionsgeräts vorsichtig vom hinteren Ende der Pfortader punktieren, abbinden und fixieren. Drehen Sie den Fluss des Infusionssets auf das Maximum (ca. 4 ml/min) und lassen Sie die auf 37 Grad vorgewärmte kalziumfreie Präperfusionslösung fallen. Wenn die Leber geschwollen ist, schneiden Sie das distale Ende der unteren Hohlvene schnell ab und komprimieren Sie das proximale Ende der unteren Hohlvene intermittierend, so dass sich die Leber abwechselnd zurückzieht und ausdehnt. Wenn das Restblut ausgewaschen ist und die Leber gleichmäßig gelb und weiß ist, wird die warme 0,05-prozentige Kollagenase (Sigma)-Perfusionslösung für die Verdauungsperfusion verwendet. Die Verdauung stoppt, wenn die Leber weich und unelastisch wird, kleine Vakuolen unter der Leberkapsel erscheinen oder sogar Risse im Lebergewebe auftreten. Dissoziieren Sie die Leber vorsichtig, übertragen Sie sie auf eine sterile Platte, die eine angemessene Menge DMEM-Kulturmedium mit hohem Zuckergehalt (Sigma) enthält, ziehen Sie die Leberhülle ab und schütteln Sie sie vorsichtig, streuen Sie dann die Hepatozyten in das Kulturmedium und sammeln Sie sie in einem konischen Röhrchen schütteln und 10 min kultivieren (Vibrationsfrequenz 100 Mal/min), 3 min zentrifugieren (4 Grad, 1000 U/min) und Überstand verwerfen. Die Zellen wurden mit dem Kulturmedium suspendiert, mit einem 200-Mesh-Nylonsieb filtriert, und das Filtrat wurde wiederholt dreimal zentrifugiert (4 Grad, 1000 U/min), um Leberparenchymzellen zu erhalten. Stellen Sie die Zellkonzentration auf 5 × ein. Nach 106 Zellen/ml inokulieren Sie sie in eine 25-ml-Kulturflasche, die mit Rattenschwanzkollagen vorbehandelt ist, und inkubieren Sie sie dann in einem 37-Grad-Inkubator mit 5 % CO2. Ändern Sie nach 24 Stunden die Lösung, entsorgen Sie die nicht anhaftenden Zellen und fahren Sie mit der Kultur zur Verwendung in nachfolgenden Experimenten fort.
1.3 Bestimmung der Wachstumskurve von primär kultivierten Maushepatozyten
Stellen Sie die gereinigten Hepatozyten auf 5 × 1 ein06 Zellen/ml wurden auf die 24-Well-Platte inokuliert, und 1 ml Zellsuspension wurde in jede Vertiefung inokuliert. Insgesamt 21 Vertiefungen wurden inokuliert, und DMEM-Kulturmedium mit hohem Zuckergehalt, das 10 % fötales Rinderserum (Sigma) enthielt, wurde 7 Tage lang kultiviert. Nehmen Sie jeden Tag 3 Löcher nach dem Zufallsprinzip, verdauen und blasen Sie 0,25 Prozent Trypsin gleichmäßig, zählen Sie auf der Zähltafel und zeichnen Sie die Wachstumskurve
1.4 Etablierung eines alkoholischen Hepatozytenverletzungsmodells.
Die durch das obige Verfahren erhaltenen logarithmischen Hepatozyten wurden in die mit Rattenschwanzkollagen vorbehandelte {{0}}-Well-Platte inokuliert, und 100 Zellen wurden in jede Vertiefung inokuliert wurde für 24 Stunden kultiviert und dann für weitere 24 Stunden gewechselt. Eine leere Gruppe wurde eingerichtet und fünf Alkoholinterventionsgruppen (50, 75, 100, 125, 150 mmol/L) wurden eingerichtet, und jede Gruppe wurde mit fünf Reperforationen eingerichtet. Nachdem Hepatozyten mit unterschiedlichen Alkoholkonzentrationen für 24 h kultiviert worden waren, wurde 0,5 % MTT (Sigma) 20 zu jeder Vertiefung μ 50 zugegeben. Setze die Kultivierung für 4 h fort, verwerfe den Überstand und füge DMSO150 zu jeder Vertiefung μ 50 hinzu. Gib es in a Schütteltisch und mischen Sie es für 15 Minuten, messen Sie den Extinktionswert bei 570 nm und berechnen Sie die Zellüberlebensrate. Wert der Zellüberlebensrate der Verabreichungsgruppe/Kontrollgruppe × 100 Prozent
1.5 Wirkung der Gesamtglykoside von Cistanche deserticola auf die Überlebensrate von primär kultivierten Hepatozyten
Durch Alkohol verletzt Die durch die obigen Methoden erhaltenen Hepatozyten in die mit Rattenschwanzkollagen vorbehandelte {{0}}-Well-Platte inokulieren und jede Vertiefung mit 100 μ 50 inokulieren. Das DMEM Kulturmedium aus 10 Prozent fötalem Rinderserum wurde 24 Stunden kultiviert und dann gewechselt. Nach weiteren 24 Stunden wurden GCs mit einer Endkonzentration von 0,2, 0,4 bzw. 0,8 g/l der Verabreichungsgruppe zugesetzt. Die Ethanol-Modellgruppe und die Blindgruppe kultivierten ohne Zugabe von Arzneimitteln weiter, und jede Gruppe wurde mit fünf Mehrfachvertiefungen ausgestattet. Nach 24 Stunden wurde der Modellgruppe und der GCs-Interventionsgruppe Alkohol mit einer Endkonzentration von jeweils 100 mmol/L zugesetzt. Nach 12 Stunden Kultivierung wurde die Zellüberlebensrate durch das MTT-Verfahren gemessen.
1.6 Wirkung der Gesamtglykoside von Cistanche deserticola auf die Morphologie von primär kultivierten Hepatozyten und Kernen, die durch Alkohol geschädigt wurden
Platzieren Sie das vorsterilisierte Deckglas in einer 6-Well-Platte mit der Inokulationskonzentration von 5 × 106 Zellen/ml Zellsuspension, Modellgruppe, Cistanche-Deserticola-Gruppe（0.2 , 0.4, {{20}}.8 g/L) und die leere Gruppe. Nach 24 h Kultur 100 mmol/L Alkohol mit Endkonzentration zugeben. Nehmen Sie nach 24 h Kultur 95-prozentiges Ethanol aus dem Glasobjektträger und fixieren Sie es für 15 Minuten. PBS wird zweimal gewaschen und dann erneut in PBS dispergiert. Stellen Sie die Zellkonzentration auf 5 × 104 Zellen/ml ein, fügen Sie 10 μl Acridinorange-Ethylidenbromid-Mischung (Sigma) hinzu (0,01 μG/ml Acridinorange-Lösung, 0,02 μG/ml Promethazin-Lösung, gemischtes Volumenverhältnis: 1/ 1), 30min inkubiert, unter dem Fluoreszenzmikroskop beobachtet und fotografiert.
1.7 Wirkung der Gesamtglykoside von Cistanche deserticola auf die Apoptose von primär kultivierten Hepatozyten, die durch Alkohol geschädigt wurden
Stellen Sie die Dichte der verdauten Zellsuspension auf 5 × 106 Zellen/ml ein, inokulieren Sie sie in einer Platte mit sechs Vertiefungen und kultivieren Sie sie für 24 Stunden, bauen Sie eine Modellgruppe auf, Cistanche Deserticola-Gruppe (0.2 , 0.4, 0,8 g/L) und Blindgruppe. Nach 24 Stunden Kultur Alkohol mit einer Endkonzentration von 100 mmol/L zugeben, 24 Stunden inkubieren, Zellen verdauen und sammeln, zweimal mit PBS waschen, über Nacht bei 4 Grad mit 70-prozentigem vorgekühltem Ethanol fixieren, mit PBS waschen Lösung zweimal, fügen Sie RNA-Enzym (Sigma), PI (100 μG/ml) (Sigma) hinzu und legen Sie es für 30 Minuten in ein 37-Grad-Wasserbad. Die Apoptoserate wurde durch Durchflusszytometrie gemessen.
1.8 Gesamtglykoside von Cistanche deserticola können die Apoptose von primär kultivierten Hepatozyten hemmen, die durch Alkohol, bcl-2 und das pro-apoptotische Gen c-fos geschädigt wurden
Die Wirkung der fos-Expression wurde von drei Kulturplatten mit sechs Vertiefungen genommen, von denen jede eine Gruppe von drei Vertiefungen war. Die Modellgruppe, die Cistanche-Deserticola-Gruppe (0,2, 0,4, 0,8 g/l) und die Blindgruppe wurden eingerichtet. In jedes Loch wurde ein steriler Objektträger gegeben. Die Zellen der logarithmischen Wachstumsphase wurden entnommen, und der Trypsinverdau wurde verwendet, um die Einzelzellsuspension herzustellen, und die Zelldichte wurde auf 5 × 106/ml eingestellt und auf eine 6--Well-Platte, 2 ml/Well, inokuliert. Nach 24 Stunden Kultivierung Alkohol mit einer Endkonzentration von 100 mmol/l zugeben und 24 Stunden lang weiter kultivieren. Nehmen Sie die Objektträger voller Zellen heraus, waschen Sie sie zweimal mit PBS und färben Sie sie mit der routinemäßigen immunhistochemischen ABC-Methode. Die kurzen Schritte sind wie folgt: Fixieren Sie sie 10 Minuten lang mit 40 Prozent Paraformaldehyd, versiegeln Sie sie 30 Minuten lang mit normalem Schafserum, tropfen Sie sie ab und fügen Sie bcl-2 polyklonalen Antikörper (Invitrogen) (1:75) oder c-fos hinzu polyklonaler Antikörper (Invitrogen) (1:50), reagieren bei Raumtemperatur für 1,5 Stunden, fügen ABC-Komplex bei Raumtemperatur für 2 Stunden hinzu, färben DAB und versiegeln sie mit Gelatine. Die Expression von Bcl-2- und c-fos-Protein wurde durch Lichtmikroskopie und Fotografie verglichen.
1.9 Statistische Verarbeitung Die experimentellen Daten wurden mit SPSS13.5-Software verarbeitet. Sie wird als Mittelwert ± Standardabweichung (x ± s) ausgedrückt, und ein t-Test wird zum Vergleich zwischen den Gruppen verwendet. P<0.05 indicates that the difference is statistically significant.
2 Ergebnisse
2.1 Die Wachstumskurve von primär kultivierten Maus-Hepatozyten ist in Fig. 1 dargestellt. Es ist ersichtlich, dass die Zahl der Hepatozyten mit der Inkubationszeit zunahm und am 4. Tag in die logarithmische Wachstumsphase eintrat.
Abb. 1 Wachstumskurve von primär kultivierten Maushepatozyten
2.2 Die Wirkung unterschiedlicher Alkoholkonzentrationen auf die Überlebensrate von primär kultivierten Maushepatozyten
Aus Tabelle 1 ist ersichtlich, dass Alkohol eine starke schädigende Wirkung auf primär kultivierte Hepatozyten hat und die Wirkung dosisabhängig ist. Entsprechend den Anforderungen des Tests werden 100 mmol/L als Arbeitskonzentration im nachfolgenden Test verwendet, und die Zellüberlebensrate beträgt 43,40 Prozent.
2.3 Die Wirkung von Gesamtglycosiden vonCistanche Deserticolaauf die Überlebensrate primär kultivierter Hepatozyten, die durch Alkohol geschädigt wurden
Kann in Tabelle 2 gesehen werden. Nach einer Alkoholverletzung ist die Überlebensrate von Hepatozyten signifikant reduziert. Gesamtglykoside von Cistanche deserticola können die Überlebensrate von Hepatozyten (P<0.05), and the effect is dose-dependent (P<0.05).
Wüstenlebende Cistanche
2.4 Wirkung von Gesamtglycosiden vonCistanche Deserticolazur Morphologie primär kultivierter Hepatozyten und alkoholgeschädigter Zellkerne.
Azidin Orange zeigt nach Eintritt in die Zellen eine grüne Fluoreszenz, während Promethazin nur die nekrotischen Zellen mit unvollständiger Zellmembran anfärben kann. Durch Beobachtung (Fig. 2) wurde festgestellt, dass die Hepatozyten in der Blindgruppe einheitlich grün waren und es keine Bromrotfärbung der nekrotischen Zellen (A) gab; Nach der Behandlung mit Alkohol wurden die Hepatozyten kleiner, und eine große Anzahl von nekrotischen Zellen, die mit Bromrot gefärbt waren, und apoptotische Zellen mit Chromatinkonzentration im Zellkern (der Zellkern war hellgrün) (B) trat auf. Daher wird angenommen, dass Alkohol auch Zellnekrose verursachen kann, während er Hepatozytenapoptose induziert. GCs können Nekrose und Apoptose signifikant reduzieren, und die Wirkung korreliert positiv mit der Dosis (C, D, E).
Abb. 2 Beobachtung der Wirkung von Gesamtglycosiden von Cistanche deserticola auf die Morphologie von primär kultivierten Leberkernen unter dem Fluoreszenzmikroskop (Acridinorange-Färbung, 400)
A: Leere Gruppe; B: Modellgruppe; C:{{0}},2 g/L-GCs; D: 0,4 g/l-GCs; E: 0,8 g/L-GCs
2.5 Die Wirkung von Gesamtglycosiden vonCistanche Deserticolaüber die Apoptose alkoholgeschädigter primär kultivierter Hepatozyten
Cistanche-Extraktpulver
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Wie in Abbildung 3-B zu sehen ist, ist die Apoptoserate von Hepatozyten nach einer Alkoholschädigung signifikant erhöht (34,7 Prozent), und die Gesamtglykoside von Cistanche Deserticola können die Überlebensrate von Hepatozyten dosisabhängig signifikant erhöhen, was stimmt mit den unter dem Fluoreszenzmikroskop beobachteten Ergebnissen überein.
Fig. 3 Wirkung der Gesamtglykoside von Cistanche deserticola auf die Apoptose von primär kultivierten Hepatozyten, die durch Alkohol geschädigt wurden
A: Leere Gruppe; B: Modellgruppe; C:{{0}},2 g/L-GCs; D: 0,4 g/l-GCs; E: 0,8 g/L-GCs
Durch Immunzytochemie wurde festgestellt, dass die Expression des Apoptose-inhibierenden Faktors bcl-2 abnahm (4-B) und die Expression von c-fos zunahm (5-B), nachdem Leberzellen verletzt wurden durch Alkohol. Gesamtglykoside von Cistanche deserticola können die Expression von bcl-2 (4-C, D, E) signifikant verstärken und die Expression von c-fos (5-C, D, E) hemmen. Die Ergebnisse sind in Abb. 4-5 dargestellt.
Abb. 4 Wirkung der Gesamtglykoside von Cistanche deserticola auf die Expression von bcl-2 in primär kultivierten, durch Alkohol geschädigten Hepatozyten (400)
A: Leere Gruppe; B: Modellgruppe; C:{{0}},2 g/L-GCs; D: 0,4 g/l-GCs; E: 0,8 g/L-GCs
Abb. 5 Wirkung der Gesamtglykoside von Cistanche deserticola auf die c-fos-Expression in primär kultivierten, durch Alkohol geschädigten Hepatozyten (400)
A: Leere Gruppe; B: Modellgruppe; C:{{0}},2 g/L-GCs; D: 0,4 g/l-GCs; E: 0,8 g/L-GCs
3 Diskussion
Chinesische Kräutercistanche
Beere et al. etablierte zuerst die In-situ-Perfusionsmethode zur Verwendung von Kollagenase zur Perfusion der Leber, um Hepatozyten unter physiologischen Bedingungen zu erhalten, und wurde später von Seglen et al. [4], um diese Kollagenase-Perfusionstechnologie perfekter zu machen. Dieses Verfahren hat eine hohe Zellausbeute und eine hohe Überlebensrate. In diesem Experiment wurden primäre Hepatozyten durch In-situ-Perfusion von Maus-Hepatozyten erhalten und kultiviert. Das Verfahren war stabil und die Zellaktivität war stark. Durch den Wachstumskurventest wurde festgestellt, dass die erhaltenen primären Hepatozyten nach 4 Tagen in die logarithmische Wachstumsphase eintraten.
Die kolorimetrische MTT-Mikroanalyse ist eine empfindliche Methode zum Nachweis von Zellwachstum und -überleben mit guter Wiederholbarkeit. Succinatdehydrogenase in den Mitochondrien lebender Zellen kann gelbes MTT zu blauvioletten Kristallen reduzieren, während tote Zellen keine solche Funktion haben [5]. Die Zellaktivität kann durch Messung der optischen Dichte widergespiegelt werden. In diesem Experiment wurde die MTT-Methode verwendet, um nachzuweisen, dass die Überlebensrate von Hepatozyten nach einer Alkoholschädigung signifikant reduziert war und die Gesamtglykoside von Cistanche deserticola die Überlebensrate von Hepatozyten signifikant erhöhen konnten (P<0.05), and the effect was dose-dependent (P<0.05).
Apoptose ist eine besondere Form des Zelltods. Wenn Zellen einer Apoptose unterliegen, treten spezielle morphologische und biochemische Veränderungen auf [6-8]. Das Experiment bestätigte, dass die meisten Hepatozyten nach Alkoholbehandlung apoptotisch waren, und die Zellen zeigten offensichtliche morphologische Veränderungen, die wie folgt waren: Die Zellen wurden kleiner, die Mikrovilli auf der Zelloberfläche verschwanden, die Zelloberfläche schrumpfte, es gab Vakuolen, Kern Kondensation und die Bildung apoptotischer Körper; Es wird von Nekrose begleitet. Nach Behandlung mit Gesamtglykosiden von Cistanche deserticola nahm die Apoptoserate signifikant ab und auch die Nekrosesituation entspannte sich.
Das bcl-2-Gen ist ein Proto-Onkogen. Derzeit wurden fünf bcl-2-Genfamilien (bcl-2, bcl-2 x, bax, mcl-1 und A1) gefunden, in denen bcl{{7 }} kann den programmierten Zelltod (PCD) hemmen. Die Arbeit von bcl-2Der Mechanismus kann umfassen: (1) Hemmung der Freisetzung von Ca2 plus . Bcl-2 ist ein Transmembranprotein, das hauptsächlich auf der Kernmembran lokalisiert ist. Die inneren und äußeren Kernmembranen sind durch das Lumen des endoplasmatischen Retikulums verbunden. Letzteres ist der Hauptspeicherort für intrazelluläres Ca2+, das eine wichtige Rolle im Prozess der Zellapoptose spielt. Unter Verwendung transgener Methoden wurde festgestellt, dass die hohe Expression von bcl-2 die Freisetzung von Ca2 plus aus dem endoplasmatischen Retikulum hemmen könnte, daher wurde spekuliert, dass die hemmende Wirkung von bcl-2 auf die Apoptose zusammenhängen könnte zu Ca2 plus im endoplasmatischen Retikulum [9]. (2) Bcl-2 spielt eine anti-apoptotische Rolle, indem es die Signalübertragung von pro-apoptotischen Genen blockiert oder diese induzierbaren Genprodukte blockiert. Studien haben gezeigt, dass bcl-2-Protein die durch P53 und c-fos induzierte Apoptose hemmen kann [10]. (3) Bcl-2 kann eine antiapoptotische Rolle spielen, indem es freie Radikale hemmt. bcl-2 hat die Rolle eines Antioxidans, das die Produktion und Wirkung von Superoxid hemmen kann und somit das Auftreten von Apoptose hemmt [11].
Frühe Sofortgene (IEGs) sind Gene, die früh erscheinen und unter verschiedenen schädlichen Stimuli eine kurze Dauer haben. c-fos ist eines der Proto-Onkogene, das sich auf Chromosom 14q21-q31 befindet. Es ist eine 9-kb-DNA, die aus vier Exons und drei Introns besteht [12]. Die grundlegende Transkription ist gering, kann aber durch verschiedene Second-Messenger-Moleküle für eine schnelle und vorübergehende Expression ausgelöst werden. Das Proteinprodukt von c-fos ist FOS, und das vom Proto-Onkogen c-Jun codierte Protein ist JUN. FOS enthält eine Leucin-Antikette (LZ) [13]. FOS und JUN bilden im Zellkern durch die LZ-Struktur ein Heterodimer, genannt Transkriptionsfaktor AP-1, das sich mit der AP-1-Stelle des Zielgens verbindet und als dritter Botenstoff des Zellkerns fungiert, der es ermöglicht die Expression des Effektgens für eine lange Zeit [14]. Morgan glaubt, dass die verschiedenen Ausdrücke von c-fos die Vielfalt und Komplexität seiner Funktionen anzeigen. Die vorübergehende Expression kann am Zellschutz, der Reparatur, dem Umbau und der Regeneration beteiligt sein, während eine anhaltende Überexpression mit sekundären Schäden verbunden ist. Der Expressionsmechanismus der beiden ist unterschiedlich. Daher kann davon ausgegangen werden, dass IEGs wie c-fos eine Doppelrolle spielen. Wenn das Reparatur-Abwehrsystem vollständig gehemmt ist, nehmen sie an der Apoptose teil; Wenn es nicht gehemmt wird, hat es eine schützende Wirkung auf die Zellen um die Läsion herum und ist am Prozess der Zellreparatur und -regeneration beteiligt [15]. WebsterKR verwendet Antisense-Nukleotide, um die Transkription von c-fos zu reduzieren und das Auftreten von Apoptose zu verhindern, was darauf hinweist, dass die Überexpression von c-fos untrennbar mit dem Auftreten und der Entwicklung verschiedener Krankheiten verbunden ist [16].
In diesem Experiment war nach Schädigung der Leberzellen durch Alkohol die Expression des Apoptose-inhibierenden Faktors bcl-2 signifikant reduziert und die Expression von c-fos erhöht, was darauf hindeutet, dass die Gesamtglykoside von Cistanche deserticola die Leber schützen könnten Zellen durch Verstärkung der bcl-2-Expression, Hemmung der c-fos-Expression, Verringerung von Leberzellschädigung und Apoptose.
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