Die Auswirkungen von Cistanche Shenqiwan auf Nierenschäden, GRP78 und Autophagie-bezogene Faktoren bei zuckerdiabetischen Fettratten mit Typ-2-Diabetes mellitus

Menge normaler Kochsalzlösung. Ratten wurden kontinuierlich 4 Wochen lang verabreicht. Der Allgemeinzustand der Ratten wurde regelmäßig beobachtet. Der Nüchtern-Blutzucker (FBG) und 24--Stunden Mikroalbuminspiegel im Urin (24 h U-mAlb) wurden gemessen. Nierengewebe wurde gefärbt und die Morphologie beobachtet. Die Ultramikrostruktur wurde durch Transmissionselektronenmikroskopie beobachtet. Die mRNA-Spiegel von GRP78, Beclin-1 und LC3 im Ratten-Nierengewebe wurden durch Echtzeit-PCR untersucht und die Proteinspiegel wurden durch Western-Blotting untersucht. Ergebnisse Im Vergleich zur Modellgruppe zeigten sich Ratten in der Shenqiwan-Gruppe

verbesserter Fellglanz, mehr Gewichtszunahme und mehr Aktivität; Sowohl die FBG- als auch die 24-h-U-mAlb-Spiegel waren erniedrigt (P < 0,05). DerNierenvon Ratten in der vorbildlichen Gruppe gezeigterweiterte glomeruläre Kapillaren, unregelmäßig verdickte Basalmembranen, verbreiterte mesangiale Bereiche und Segmentsklerose; In diesen Nieren wurden auch renale tubuläre Atrophie und renales interstitielles fibröses Gewebe beobachtet. Diese pathologischen Veränderungen wurden in der Shenqiwan-Gruppe gelindert. Verglichen mit der Modellgruppe waren sowohl die Gen- als auch die Proteinspiegel von GRP78 in der Shenqiwan-Gruppe verringert (P < 0.05); der Proteingehalt von Beclin-1

wurde verringert (P < {{0}}.05); und der Proteinspiegel von LC3 war erhöht (P < 0,05). Schlussfolgerung Shenqiwan kann Nierenschäden bei ZDF-Ratten lindern und das Fortschreiten der diabetischen Nierenerkrankung verzögern, indem es den Stress des endoplasmatischen Retikulums reduziert und die Autophagie verbessert.

 

Stichwort: Shenqiwan;Typ 2 Diabetes mellitus; diabetische Nierenerkrankung; Stress des endoplasmatischen Retikulums;Autophagie; GRP78; Zucker diabetische Fettratten

Klicken Sie hier, um weitere Informationen über Cistanche-Produkte zur Behandlung von diabetischer Nierenerkrankung zu erhalten

FRAGEN SIE NACH DETAILS:

wallence.suen@wecistanche.com 0015292862950

 

 

Diabetische Nierenerkrankung(DKD) ist eine wichtige mikrovaskuläre Komplikation vonDiabetes Mellitusund eine Hauptursache fürNierenerkrankung im Endstadium[1]. DKD ist ein wichtigermikrovaskuläre Komplikationen bei DiabetesUndeine der Hauptursachen für Nierenerkrankungen im Endstadium[1]. Patienten mit DKD können mit anhaltender Proteinurie und anhaltender Reduktion auftretenglomeruläre Filtrationsrate[2]. DerPathogenese der DKDist komplex, und neuere Studien haben gezeigt, dass endoplasmatischer Retikulumstress (ERS) in der Niere die häufigste Ursache für Nierenerkrankungen im Endstadium ist. （Der Stress des endoplasmatischen Retikulums (ERS) und die Autophagie sind ebenfalls eng mit DKD verbunden, und die Untersuchung ihrer Pathogenese kann für die Behandlung von DKD wichtig sein. DKD ähnelt eher der „unteren Extinktion“ in der Kategorie der Durststörungen in der chinesischen Medizin.
Die typischen Symptome von Durst und übermäßigem Trinken und Wasserlassen sind im Jin Kui Yao (Grundlagen des Goldenen Horoskops) festgehaltenNieren-Qi-Pillewird als wichtigste therapeutische Formel vorgeschlagen. Der Jin Kui Yao (金匮要略) zeichnete die typischen Symptome von Durst und übermäßigem Wasserlassen auf und schlug das vorNieren-Qi-Pilleals Hauptbehandlungsformel. Die Behandlung von DKD mit TCM kann tatsächlich die Nierenfunktion effektiv schützen und hat sichere und zuverlässige Eigenschaften [5-6]. Die Behandlung von DKD mit chinesischer Medizin kann die Nierenfunktion effektiv schützen und hat sichere und zuverlässige Eigenschaften [5-6]. Die Wirksamkeit der Nieren-Qi-Pille bei der Tonisierung der Niere und der Unterstützung von Yang wurde in verwandten Studien bestätigt [7]. Auch unsere vorherige Studie Unsere vorherige Studie zeigte auch, dass Nieren-Qi-Pillen gute schützende Wirkungen auf die Struktur und Funktion des Nierengewebes bei diabetischen Mäusen haben [8]. In der vorliegenden Studie beobachteten wir die Auswirkungen von Nieren-Qi-Pillen auf In der vorliegenden Studie beobachteten wir die Auswirkungen von Nieren-Qi-Pillen auf Nierengewebeschäden, ERS und Autophagie-assoziierte Faktoren bei Zucker-diabetischen Fettratten (ZDF). In dieser Studie untersuchten wir die möglichen Mechanismen der Nierenschädigung bei ZDF-Ratten, indem wir die Wirkung von Nieren-Qi-Pillen auf beobachtetenSchädigung des Nierengewebes, ERS und Autophagie-bezogene Faktoren, die durch Nieren-Qi-Pillen vermittelt werden.

1 Materialien
1.1 Versuchstiere
Zwanzig 12- Wochen alte männliche SPF-ZDF-Ratten (Körpermasse 390-410 g, gefüttert mit 5C08 hochwertigem Nagetierfutter für 4 Wochen, um die Induktion von Typ-2-Diabetes abzuschließen) und sieben 12- Wochen- alte SPF männliche Zucker Lean (ZL) Ratten (Körpermasse 350-380 g) wurden von Beijing Viton Lehua Laboratory Animal Technology Co. gekauft. Alle Ratten wurden in der Barriereumgebung des Institute of Clinical Medicine, China-Japan Friendship Hospital, untergebracht , Lizenznummer: SYXK (Peking) 2016-0043, und die Plattform verfügte über ein unabhängiges Belüftungssystem innerhalb der Barriere, das einen 12- h Wechsel von Hell und Dunkel und eine Raumtemperatur von 23-25 Grad aufrechterhielt , und eine relative Luftfeuchtigkeit von 50 Prozent -60 Prozent . Alle Ratten durften während der Fütterungsperiode frei trinken und fressen.

1.2 Ethische Überprüfung
Die Tierversuche wurden vom Unterausschuss für experimentelle Tierethik des Akademischen Komitees der Beijing University of Traditional Chinese Medicine (BUCM) mit der Genehmigungsnummer BUCM-4-2021102801-4034 genehmigt.
1.3 Wichtigste Medikamente und Reagenzien
Die Tabletten (Shu Di Huang, Shan Yu Fei, Shan Yao, Mudan Pi, Fu Ling,Cistanche, Ze Xie, Gunner's Fructus, Gui Zhi) zum Abkochen vonNieren-QiPille wurde von Beijing Tong Ren Tang Co. erworben. Physiologische Kochsalzlösung, Spezifikation: 500 ml, bereitgestellt von Shandong Hualu Pharmaceutical Co. Silberfärbelösung (Beijing Regen Biotechnology Co., Ltd., Lot Nr. DG0090), Magic SYBR-Mischung (Jiangsu Kangwei Century Biotechnology Co., Ltd.), mRNA Reverse Transcription Kit (Thermo Fisher Scientific, Inc.), RNA TRIzol Reagenz (RNA TRIzol Reagenz), RNA TRIzol Reagenz (RNA TRIzol Reagenz). RNA-TRIzol-Reagenz (Beijing Solabao Technology Co., Ltd.), Rattenurin-Mikroalbumin-ELISA-Kit (Jiangsu Kote Biotechnology Co., Ltd., Lot-Nr. KT8560-A), GRP78-BiP-Antikörper, LC3B-Antikörper und Beclin{ {5}} Antikörper (Abcam, UK) (Chargennummern: ab108613, ab192890, ab207612), polyklonaler Kaninchen-Anti-GAPDH-Antikörper (Proteintech, USA), Ziegen-Anti-Kaninchen-IgG(H&L)-HRP (Beijing Baiao Yijie Technology Co. GmbH.).

 

Blutzuckermessgerät, Blutzuckerteststreifen (Shanghai Roche Diagnostic Products Co. Ltd.), Niedertemperatur-Hochgeschwindigkeitszentrifuge (Eppendorf, Deutschland), quantitatives Fluoreszenz-PCR-Gerät, doppeltes vertikales Elektrophoresegerät und Transferelektrophoresegerät (Burroughs Life Medical Products Co. Ltd.), Gelimager (Protein Simple, USA), Lichtmikroskop (Leica, Deutschland), Transmissionselektronenmikroskop (Leica, Deutschland) und Gelimager. (Leica, Deutschland), Transmissionselektronenmikroskop (Hitachi, Japan).

2 Methoden
2.1 Herstellung experimenteller Medikamente
Die Abkochung vonNieren-Qi-Pillewurde durch Umrechnen der Dosis der Nieren-Qi-Pille im Jin Kui Yao [9] gemäß den alten und modernen Verhältnissen des Han-Systems der Metrologie in der ersten Ausgabe von "Study on the Dose and Proportion of Typhoid Prescriptions" [2015] hergestellt ], und die für das Experiment erforderliche Dosis des Suds war wie folgt: Shu Di Huang 24 g, Shan Yu Fei 12 g,Cistanche10 g, Shan Yao 12 g, Mudan Pi 9 g, Fu Ling 9 g, Ze Xie 9 g, Gunnera 3 g und Gui Zhi 3 g. Die Arzneimittel wurden für 2 h in destilliertem Wasser eingeweicht. Der Sud wurde dann für 30 min konzentriert und durch sterile Gaze filtriert. Die Kräuter 30 min abkochen, dann die restlichen Drogen zugeben und 1 h abkochen. Nachdem die Temperatur der Lösung auf Raumtemperatur gesenkt wurde, wird die Lösung konzentriert und durch sterile Gaze filtriert, und das Filtrat wird verpackt und bei -20 Grad gelagert. Das Medikament sollte nicht länger als 1 Woche gelagert werden, und die Lösung sollte vor der Verabreichung auf Raumtemperatur gebracht werden.

2.2 Einrichtung und Gruppierung von Tiermodellen
Die ZDF-Ratten wurden 4 Wochen lang mit einer 5C08-fettreichen Diät induziert, und der Blutzucker wurde durch Blutentnahme aus der Schwanzspitze im Alter von 12 Wochen gemessen. Den Ratten in der Nieren-Qi-Pillen-Gruppe wurde eine wässrige Abkochung der Nieren-Qi-Pille verabreicht, und die tägliche Dosis von 8,12 g/kg pro Ratte wurde gemäß der Formel in "Krankheitsmodelle bei Versuchstieren" [10] und der Dosierungskonzentration berechnet betrug 0,812 g/ml, und die Ratten in den Modell- und Kontrollgruppen erhielten 4 Wochen lang Kochsalzlösung im entsprechenden Volumen.

2.3 Allgemeiner Zustand und Nüchtern-Blutzucker (FBG)-Test von Ratten
Der Allgemeinzustand der Ratten wurde täglich beobachtet und aufgezeichnet, und die Körpermassen wurden regelmäßig gewogen. Am Ende der 12. und 16. Lebenswoche wurde den Ratten nach 8-stündigem Fasten Blut aus der Schwanzspitze entnommen, und FBG wurde mit einem Roche-Blutzuckermessgerät und Teststreifen gemessen. 2.4 Das 24- h Mikroalbumin im Urin (24- h U-mAlb) wurde am Ende der 16. Lebenswoche gemessen, und die 24- h U-mAlb-Konzentration wurde gemäß den Anweisungen gemessen des LISA-Kits.

2.5 Entnahme von Nierengewebeproben
Am Ende der 16. Lebenswoche fasteten alle Ratten für 8 h. Nach der Anästhesie wurde die Bauchhöhle geöffnet und die bilateralen Nieren wurden freigelegt und das Peritoneum wurde intakt entfernt und abgezogen. Die Nierenrinde wurde abgetrennt und teilweise in 4-prozentigem Paraformaldehyd zur Herstellung von 3-μm-Paraffinschnitten fixiert; teilweise in 1 mm3 große Gewebeblöcke zerschnitten und in 2,5 % Glutaraldehyd fixiert für die Anfertigung von Ultradünnschnitten. Die verbleibenden Nierengewebe wurden bei -80 Grad für Realtime-PCR- und Western-Blotting-Assays gelagert.

 

2.6 Anwendung der morphologischen Beobachtung von Nierengewebe
Zur Beobachtung wurden PAS-Färbung, Masson-Färbung und Hexaammonium-Silber-Hämatoxylin-Eosin-Färbung verwendetrenale histopathologische Veränderungenunter einem Lichtmikroskop und zur Aufnahme von Bildern. Transmissionselektronenmikroskopie wurde angewendet, um die ultrastrukturellen Veränderungen des Nierengewebes zu beobachten, und es wurden Bilder gesammelt.

 

2.7 Echtzeit-PCR-Assay
GefrorenNierengewebewurden auf Eis gemahlen und TRIzol-Reagenz wurde hinzugefügt, um Gesamt-RNA zu extrahieren, und bei 4 Grad mit einem Radius von 9,5 cm zentrifugiert. Der Überstand wurde durch Zentrifugation bei 12 000 U/min für 10 min extrahiert und dann für 15 min mit Chloroform zentrifugiert. Der Überstand wurde erneut für 15 min bei Raumtemperatur für 10 min zentrifugiert und der Überstand wurde mit 75-prozentigem Ethanol gewaschen. Expression auf mRNA-Ebene. Die Primer wurden unter Verwendung der Software Primer Premier 5.0 entworfen und von Shanghai Bioengineering Co. Ltd. synthetisiert. Die Primersequenzen sind wie folgt.