Hat Cistanche Total Glycosid Auswirkungen auf den Geruchssinn?

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Die Wirkung von Cistanche-Gesamtglykosiden auf Riechzellen der Ratte und ihre Sekretion von neurotrophen Faktoren

Li Chuangfeng, Guo Jinyu, Zhang Xu, Liu Yunnan

Rückenmarksverletzung (SCI) ist eine schwere Verletzung des zentralennervöses System, was {{0}},2 Prozent bis 0,5 Prozent des gesamten Traumas ausmacht. Bei Wirbelsäulenfrakturen werden 16 Prozent – ​​40 Prozent durch eine Rückenmarksverletzung kompliziert, was oft zu schweren Behinderungen führt, was zu Schwierigkeiten im täglichen Leben führt, die die Lebensqualität der Patienten beeinträchtigen, und eine große Belastung für die Familie und die Gesellschaft darstellt.OlfaktorischHüllzellen (OECs) sind eine besondere Art von Nervenkleber. Plasmazellen können mit ins Gehirn einwandernolfaktorischNervenaxone und kann viele Wachstumsfaktoren wie NGF, GDNF, BDNF, NT-3, Neuropeptid-Y und S-100 absondern. Aufgrund dieser Eigenschaften vonolfaktorischUmhüllungszellen gelten OECs als eine der vielversprechenden Saatzellen für die Zelltransplantation zur Reparatur von SCI. Derzeit basiert die Behandlung von QSL im Bereich der Rehabilitationsmedizin hauptsächlich auf einer umfassenden Rehabilitation. Um eine effektivere Methode zu finden, wurden die folgenden Untersuchungen zur Wirkung von durchgeführtZistanchegesamtGlykosidezu OECs:

Cistanche Gesamtglykosid für Riechzellen

1 Material und Methoden

1.1 Versuchsmaterialien

Wistar-Ratte (bereitgestellt vom Animal Center der Inner Mongolia University);ZistanchegesamtGlykoside, DMEM/F12-Medium, fötales Kälberserum (FCS), Poly-D-Lysin, Arabinosid (Ara-C), Trypsin, D-Hanks-Lösung, Kaninchen-anti-p75NGFR (Santa Cruz), ELISA-Kit (Promega), Zellinkubator (Thermo-HEPA Klasse 100), inverses Phasenkontrastmikroskop (Olympus CKX41, Japan), ultrareine Werkbank (Suzhou Antai Air Technology Co., Ltd.) Die Firma SW-CJ-2FD), Enzym Etikettenanalysator (Wellscan MKH), Durchflusszytometer usw.

1.2 Forschungsmethoden

1.2.1 OECs-Kultur, Reinigung und Identifizierung: Wistar-Ratten wurden durch Enthauptung getötet und 5 Minuten lang in Wein eingeweicht. Der vordere Schädel wurde geöffnet, um die freizulegenolfaktorischBirne. Die ZweiolfaktorischZwiebeln wurden vollständig unter einem Präpariermikroskop entfernt. In D-Hanks-Lösung waschen; Schneide dasolfaktorischZwiebel mit einer mikrochirurgischen Schere, 2 ml 0,25 % Pankreatin zugeben und 20 Minuten bei 37 Grad inkubieren; D MEM/F12-Kulturmedium mit 10 Prozent Kälberserum in ein 2-ml-Zentrifugenröhrchen geben. Der Verdau wurde in der Mitte beendet; die Bus-Pipette saugte das unvollständig verdaute Gewebe bei 800 U/min an und zentrifugierte für 5 min, verwarf den Überstand; schließlich verwendet das konditionierte Medium (20 Prozent FCS plus 20|i,mol/LForskolin plus 20|ig/mlBPE plus DMEM/F12) Zu lx 107ml Einzelzellsuspension verarbeiten, in eine Polylysin-beschichtete Zellkulturflasche inokulieren, platzieren es in einem Inkubator mit 37 Grad, 5 Prozent CO2, und dann füge Arac hinzu. Die Reinigung wurde bei 36 h durchgeführt. Verwenden Sie Kaninchen-Anti-p75E und FITC-markierten Ziegen-Anti-Kaninchen-IgG-Sekundärantikörper zur immunhistochemischen Zellidentifikation und Fluoreszenzmikroskopie-Beobachtung.

1.2.2 Verwenden Sie MTT und Durchflusszytometrie, um die Wirkung von zu bestimmenCistanche Gesamtglykosideanolfaktorischumhüllende Zellen: beimpfen Sie die kultivierten und gereinigtenolfaktorischZellen in einer 96-Well-Platte bei 1 X 106 umhüllen und hinzufügenCistanche Gesamtglykoside(Einwirkungskonzentrationen sind Ijig/ml, 10 mg/ml, 100 mg/ml), den OD-Wert messen und die Zelldurchflusszytometrie nach 24 h Einwirkung messen. Steuergruppe einrichten undCistanche Gesamtglykosideverschiedene Konzentrationsgruppen: Gruppe A (Kontrollgruppe): Als Negativkontrolle wird serumhaltiges Kulturmedium verwendet; Gruppe B (Cistanche Gesamtglykosideniedrige Konzentrationsgruppe: llig/ml); Gruppe C (Cistanche Gesamtglykoside mittlere Konzentration Gruppe: L10jxg/MK); Gruppe D (Cistanche Gesamtglykosidehohe Konzentrationsgruppe: 100|xg/mlo): 15 Ratten in jeder Gruppe.

1.2.3 Bestimmung des Gehalts an neurotrophen Faktoren im Überstand durch ELISA: Angezüchtete und gereinigte Proben werden inokuliertolfaktorischZellen in einer 6-Well-Platte bei 1 x 106 umhüllen, hinzufügenCistanche Gesamtglykoside(die gleiche Konzentration wie oben) nach 24 Stunden und 24 Stunden einwirken lassen und den Überstand separat sammeln, gespeichert bei -80 Long. Der Gehalt an Nervenwachstumsfaktoren in der Flüssigkeit wurde durch das ELISA-Verfahren bestimmt.

1.3 Statistische Analyse

Die Daten in dieser Studie werden als Messdaten behandelt und die erhaltenen Daten werden als Mittelwert ± Standardabweichung ausgedrückt, und die Statistiksoftware SPSS 11.0 wird für die statistische Analyse verwendet. Die erhaltenen Daten werden durch Varianzanalyse analysiert und P<0.05 indicates="" that="" there="" is="" a="" significant="">

2 Ergebnisse

2.1 Die Wirkung vonZistancheGesamtglykoside aufolfaktorischumhüllende Zellen

2.1.1 Ergebnisse der Bestimmung nach der Methyloxazolyltetrazol-Methode (MT): Gruppe A: 0.617±0.149; Gruppe B: 0.589±0.147; Gruppe C: 0.761±0.138; Gruppe D: 0.732±0.234. Vergleich zwischenCistanche Gesamtglykoside group (B) and Control group (A), P>0.05, der Unterschied war nicht signifikant;Cistanche Gesamtglykoside10 mg/ml, 100 mg/ml Konzentrationsgruppe (C, D) verglichen mit Kontrollgruppe (A) P<0.05, the="" difference="" is="">

2.1.2 Das Ergebnis der durchflusszytometrischen Bestimmung ist in Abbildung 1 dargestellt. Verglichen mit der Kontrollgruppe, dieCistanche GesamtglykosideGruppe war höher als die Kontrollgruppe, und der Prozentsatz an apoptotischen Zellen war niedriger als in der Kontrollgruppe.

2.2 Ergebnisse des Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA).

Die Testergebnisse zeigten, dass der Gehalt an Gliazelllinien-abgeleitetem neurotrophem Faktor (GDNF): vor Dosierung: 302,1 ± 16,6 pg/ml, Gruppe A: 340,5 ± 13,2 pg/ml; Gruppe B: 333,2 ± 23,6 pg/ml; Gruppe C: 355,2 ± 17,6 pg/ml; Gruppe D; 379,2 ± 15,3 pg/ml. Im Vergleich zur Vorgabe war der GDNF-Gehalt signifikant erhöht; verglichen mit der Kontrollgruppe (A), der GDNF-Gehalt derCistanche Gesamtglykoside100 mg/ml Konzentrationsgruppe (D) war signifikant erhöht.

3 Diskussion

Die Schwierigkeit bei der Regeneration von Axonen ist einer der Hauptgründe, warum es schwierig ist, sich nach einer Rückenmarksverletzung zu erholen. OECs spielen eine Rolle bei der Regeneration von Axonen zentraler Neuronen, die andere Zelltypen nur schwer ersetzen können. In den letzten Jahren wurde die Forschung vonolfaktorischumhüllende Zellen ist zu einem Hotspot geworden.OlfaktorischHüllzellen sind eine spezielle Art von Gliazellen, die die Eigenschaften von Schwann-Zellen und Astrozyten haben. Sie stammen aus derolfaktorischBasalmembran und sind weit verbreitet auf der Oberfläche derolfaktorischSchleimhaut,olfaktorischNerv undolfaktorischBirne. Es hat die Fähigkeit, sich lebenslang zu teilen und zu regenerieren und kann das begleitenolfaktorischNervenaxone ins Gehirn wandern. Die Axone derolfaktorischNerv kann alle 30-60 Tage die Verbindungsstelle zwischen dem peripheren Nervensystem und dem zentralen Nervensystem passieren und in die neu wachsenolfaktorischumhüllen und synaptische Verbindungen herstellen4.OlfaktorischHüllzellen können viele Wachstumsfaktoren wie NGF, BDNF, GDNF, NT-3, Neuropeptid-Y und S-100 absondern. Studien haben gezeigt, dass der Nervenwachstumsfaktor (NGF) die Atrophie der roten Kernneuronen des Rückenmarks verhindern und den Kortikospinaltrakt stärken und die Regeneration des Nervenwegs des roten Kerns des Rückenmarks fördern kann; Sowohl der aus dem Gehirn stammende neurotrophe Faktor (BDNF) als auch Neurotrophin-3 (NT-3) können die Apoptose der Rückenmarkszellen des roten Kerns bei erwachsenen Ratten mit axotomisierter Verletzung verhindern und sterbende Neuronen retten und die axonale Regeneration fördern P. Zusätzlich,olfaktorischHüllzellen exprimieren auch andere Faktoren auf ihren Zellmembranen, wie den Nervenzelladhäsionsfaktor (N-CAM), der an der Zelladhäsion und dem Axonwachstum beteiligt ist. Aufgrund dieser Eigenschaften vonolfaktorischUmhüllungszellen gelten OECs als eine der vielversprechenden Saatzellen für die Zelltransplantation zur Reparatur von SCI.

Die chemischen Bestandteile vonCistancheumfassen hauptsächlich Phenylethanoidglykoside, Iridoide, flüchtige Komponenten, Lignane, Polysaccharide und Alkaloide. Das hat die Studie herausgefundenCistancheund seine chemischen Bestandteile haben neuroprotektive Wirkungen. Deng et al. untersuchten die Wirkung von Tubulosa B auf die durch Tumornekrosefaktor (TNF) induzierte Apoptose von SH-SY5Y-Neuronen. Die Ergebnisse zeigten, dass nach 100 ug/SH-SY5Y-Neuronen nach 36 Stunden TNF-Behandlung durch L typische Apoptose-Charakteristika zeigten, während die Behandlung mit Tubulin B für 2 Stunden die durch TNF induzierte Apoptose signifikant verringern konnte. Darüber hinaus haben Studien auch gezeigt, dass Phenylethanoidglykoside die Apoptose von Körnerzellen des Kleinhirns von Ratten hemmen können, indem sie Caspase-3 und Caspase-8 hemmen, und gegen das durch Methylphenyltetrahydropyridin (MPTP) verursachte C57-Mausschwarz. Die Schädigung hochwertiger dopaminerger Neuronen hat eine schützende Wirkung. Nicht nur das, sondernCistanchekann auch verschiedene Schäden wie Ischämie-Reperfusion des Nervensystems lindern. Das Hirnischämie-Verletzungsexperiment der Maus zeigt, dass der Infarktbereich von 24 h und 48 h nach der Ischämie in der zerebralen Ischämie-Reperfusionsgruppe im Durchschnitt 72,98 Prozent und 60,45 Prozent beträgt. Im Gegensatz dazu dieZistancheGesamtglykoside große, mittlere und niedrige Dosisgruppen (250,0mg·kg/d; 125,0mg·kg/d; 62,5mg·kg/d) können das Gehirn von Mäusen bilden nach zerebraler Ischämie-Reperfusion 24 h Die Infarktgröße war auf 25,94 Prozent, 25,81 Prozent und 31,13 Prozent reduziert, und die Größe des zerebralen Infarkts war auf 22,14 Prozent, 20,06 Prozent und 22,27 Prozent nach 48 Stunden reduziert. Es gab einen signifikanten Unterschied zwischen den beiden, der eine signifikante inhibitorische Wirkung auf die neuronale Apoptose zeigte.

In dieser Studie wurden verschiedene Konzentrationen vonCistanche Gesamtglykosidewurden auf OECs angewendet. Die MTT-Methode und die Durchflusszytometrie-Messung bestätigten, dass 10 mg/ml100 mg/mlCistanche Gesamtglykosidekann die Verbreitung fördernolfaktorischumhüllende Zellen. Das zeigten die Ergebnisse der DurchflusszytometrieCistanche Gesamtglykosidekann die Verbreitung fördernolfaktorischUmhüllende Zellen Es fördert hauptsächlich die Proliferation des G1-Zyklus vonolfaktorischSpermien und reduziert apoptotische Zellen signifikant. Deswegen,Cistanche Gesamtglykosidekann nicht nur die Verbreitung von fördernolfaktorischZellen umhüllen, sondern auch die Zellaktivität erhöhen und deren Apoptose hemmen. Das beweist der Enzyme-linked Immunosorbent AssayCistanche Gesamtglykosidekann die Sekretion von GDNF dadurch deutlich fördernolfaktorischumhüllende Zellen. Die obigen Ergebnisse liefern eine experimentelle Basis für die klinische Anwendung vonCistanche Gesamtglykoside.

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