Die wissenschaftliche Grundlage für die neue Anwendung von Cistanche
Mar 09, 2022
Kontakt: Audrey Hu WhatsApp/hp: 0086 13880143964 E-Mail:audrey.hu@wecistanche.com
Sonne Weidong1, Chen fei2, Sonne yun2
(1. Yangzhou Hospital of Traditional Chinese Medicine, Yangzhou 225009, Jiangsu; 2. School of Medicine, Yangzhou University, Yangzhou 225001, Jiangsu)
ZUSAMMENFASSUNG: Das Rattenmodell mit beginnender Prostatahyperplasie (BPH) wurde etabliert, und drei Dosisgruppen von Acteosid wurden oral für 4 Wochen verabreicht, um die Wirkung von destilliertem Acteosid zu untersuchenCistanche tubulosaauf Apoptose und ultramikrostrukturierte Prostata bei Ratten mit BPH. Die ultrastrukturelle Veränderung der Prostata wurde durch Transmissionselektronenmikroskopie beobachtet. Die Ergebnisse zeigten, dass die Apoptose einer normalen Rattenprostata nicht offensichtlich war, es gab einen Tiefpunkt
Rate der Prostata-Apoptose in der Modellgruppe, in der hochdosierten Akteoside abCistanche tubulosaBehandlung war die Ratten-Prostata-Apoptose signifikant höher als die des Modells.
SCHLÜSSELWÖRTER:Cistanche, Cistanche tubulosa, Acteosid; Ratte; Prostatahyperplasie beginnen; Apoptose; ultrastrukturell
Im Verlauf der benignen Prostatahyperplasie (BPH) ist die Zellapoptose einer der Mechanismen, die derzeit Aufmerksamkeit erregen. Die Gencodierung bestimmt ihn und ermöglicht es den Zellen, den programmierten Zelltod zu kontrollieren, indem sie auf bestimmte Signale reagieren.
Nachdem sich die Prostata zu Erwachsenengröße entwickelt hat, wird die Proliferationsrate von Prostatazellen bei 1 Prozent bis 2 Prozent durch das Gleichgewicht der durchschnittlichen Apoptoserate gehalten. Sobald das Gleichgewicht gestört ist, gilt es als Ursache der BPH. Unter normalen Bedingungen sind die Östrogen- und Androgenspiegel und die normale Zirkulation in der Prostata eine Art Selbstausgleichszustand, der im Prozess der Proliferation und Apoptose besteht. Wenn das Gleichgewicht zwischen Proliferation und Apoptose aus dem Gleichgewicht gerät, führt dies zu weiterem Wachstum und Expansion der Drüse, was hauptsächlich zur Expansion des Epithelzellkompartiments führt [1].
In diesem Experiment richteten wir ein Ratten-Prostatahyperplasie-Modell ein, um die Wirkung von Acteosid (coaction-like glycosid), einer der chemischen Komponenten von, zu beobachten und zu analysierenCistancheauf die Apoptose und ultrastrukturelle Veränderungen von Ratten-Prostatazellen, um die Wirkung von Acteosid zu bewerten. Die Wirkung der Hemmung der Prostatahyperplasie bietet eine wissenschaftliche Grundlage für die Entwicklung und Nutzung neuer Anwendungen der chinesischen Medizin Cistanche.
CistancheExtrakt
1 Material und Methoden
1. 1 Versuchstier
Fünfzig männliche SD-Ratten im Alter von 6-7 Wochen, sauberer Qualität, mit einem Gewicht von 80-100 g, werden vom Center for Comparative Medicine der Yangzhou University bereitgestellt.
1. 2 Reagenzien und Medikamente
Die Testosteronpropionat-Injektion stammt von Shanghai General Pharmaceutical Co., Ltd., die Spezifikation lautet 25 mg·mL -1 und die Chargennummer lautet 060708. Die PI-Farbstofflösung stammt vom Yangzhou University Testing Center. Der Gehalt an Aktiside beträgt 945 g·kg-1, erstellt von der Abteilung für Analyse chinesischer Medizin, China Pharmaceutical University.
1. 3 Experimentelle Ausrüstung
Das Transmissionselektronenmikroskop Philips Tecnai 12 ist von Philips in den Niederlanden; Das FACSAria-Durchflusszytometer ist von BD in den Vereinigten Staaten.
1. 4 Gruppierungen und Modellierung
Nach Kastration nach der Methode der Literatur [3] wurden Ratten 5 mg·(kg·d) injiziert.-1von Testosteronpropionat auf dem Rücken der Ratten für 4 Wochen, um ein Prostatahyperplasiemodell zu etablieren. Die Modellratten wurden zufällig in Modellgruppen eingeteilt: Modell plus Acteosid-Hochdosisgruppe, Modell plus Acteosid-Mitteldosisgruppe, Modell plus Acteosid-Niedrigdosisgruppe, zehn Ratten in jeder Gruppe; weitere zehn normale Ratten dienten als Kontrollgruppe.
1. 5 Verabreichungsmethode
Eine Woche nach der Modellierung erhielten die Acteosid-Gruppen mit hoher, mittlerer und niedriger Dosis 60, 30 bzw. 15 mg·(kg·d)-1 per Schlundsonde. Der Modellgruppe und der Kontrollgruppe wurde vier Wochen lang einmal täglich ein gleiches Volumen normaler Kochsalzlösung verabreicht, einmal wöchentlich gewogen und die Dosierung entsprechend dem Körpergewicht angepasst.
1. 6 Probenentnahme und -verarbeitung
1) Material- und Probenvorbereitung: 24 Stunden nach der letzten Verabreichung werden die nüchternen Ratten gewogen und die Ratten durch Genickbruch getötet. Öffnen Sie sofort den Unterbauch, ziehen Sie das Gewebe um die Prostata herum ab, befreien Sie die Prostata und nehmen Sie einen Teil der Prostata zur Verwendung in einem Eisbad. Gewebehomogenisator homogenisiert, präparierte Prostata-Einzelzellsuspension und gefärbt mit Propidiumiodid-Ein-Schritt-Methode [4]; ein anderer Teil des Prostatagewebes wurde in 25 g·L-1-Glutaraldehyd fixiert, um ultradünne Schnitte herzustellen.
2) Bereiten Sie eine Einzelzellsuspension vor: Entfernen Sie unter aseptischen Bedingungen die Rattenprostata vollständig und bewegen Sie sie in eine Petrischale, waschen Sie das Blut und Blutgerinnsel auf der Oberfläche des Prostatagewebes mit PBS und entfernen Sie das umgebende Fett, überschüssige Fasern, und Zellmembranen. Aus derselben Rattenprostata, frisches Prostatagewebe mit einer Größe von etwa 0,5 cm3wurde entnommen und in Stücke geschnitten, um eine Prostatazellsuspension herzustellen [5]. Legen Sie den Prostatagewebeblock in eine Petrischale und fügen Sie eine kleine Menge PBS hinzu; Verwenden Sie eine ophthalmologische Schere, um das Gewebe in einem Eisbad zu schneiden, mahlen Sie den Homogenisator zu einer Suspension, fügen Sie 1 0 ml PBS hinzu, pipettieren Sie das Gewebehomogenat und verwenden Sie ein Nylonnetz mit einer Porengröße von 0,074 mm, das in das Reagenzglas filtriert und zentrifugiert wurde bei 1 500 r min-1für 3 min, und der Niederschlag wurde dreimal mit PBS gewaschen, jedes Mal bei 500 U/min-1kurzzeitige Zentrifugation bei niedriger Geschwindigkeit, um Zelltrümmer zu entfernen, bis 0,037 mm Porengröße Nylonmaschenfilter, um Zellklumpen zu entfernen. Zählen Sie die Zellen und stellen Sie die Zellkonzentration auf 2×109 Zellen·L ein-1. Mit 1 ml PI-Färbelösung färben, 10 min bei 4 Grad vor Licht schützen.
3) Präparation von Ultradünnschnitten: Zur Präparation von Ultradünnschnitten siehe Literatur [6].
2 Ergebnisse und Analyse
Fig. 1 Apoptose des BPH-Rattenmodells und induzierte Wirkung von Acteosid
a. Normale Gruppe; b. Modellgruppe; c. Acteosid-Hochdosisgruppe; d. Acteoside niedrig dosierte Gruppe
2. 1 Die Wirkung von Acteosid auf die Apoptose der Rattenprostata
Abbildung 1 zeigt den durch Durchflusszytometrie nachgewiesenen Apoptosepeak, der zeigt, dass Acteosid eine pro-apoptotische Wirkung hat. Die statistische Analyse der Ergebnisse der Zellapoptose zeigte, dass die Apoptoserate der Rattenzellen nach der Behandlung mit hohen, mittleren und niedrigen Dosen von signifikant erhöht war (24,7 ± 1,85) Prozent und (16,1 ± 1,0} 4). Acteosid. , (14,5±0,68) Prozent und die normale Gruppe (1,1±{{20}},06) Prozent, die Modellgruppe (9,5±0,5) Prozent, die positive Gruppe (9,83± 0,76) Der Unterschied im Prozentvergleich ist signifikant (P<0.01), indicating="" that="" aktidine="" can="" induce="" cell="" apoptosis,="" the="" effect="" is="" stronger="" than="" that="" of="" the="" positive="" control="" drug="" qianliekang="" (figure="">
Fig. 2 Das Radio der Apoptose im BPH-Rattenmodell und Wirkung von Acteosid
2.2 Die Wirkung von Acteosid auf die Ultrastruktur von Prostatahyperplasiezellen.
Elektronenmikroskopische Beobachtungen zeigen, dass die normale Rattenprostata vollständige Kerne, offensichtlich Nukleolen, und eine gleichmäßige Kernchromatinverteilung aufweist; das raue endoplasmatische Retikulum hat die gleiche Größe, ist ordentlich angeordnet und hat keine Vakuolisierung. Es gibt keine fingerartigen Mikrovilli auf der Oberfläche des Epithels, keine Schwellung der Mitochondrien und wenige Sekrete in der Höhle. Die Kerne der Prostatazellen in der Modellgruppe waren deformiert und geschrumpft, und das Zytoplasma war reichlich vorhanden. Das rauhe endoplasmatische Retikulum war zystenartig erweitert und die Zyste war mit hochdichten Proteinpartikeln gefüllt. Die Mitochondrien waren leicht geschwollen (es gab auch Vakuolen), es gab Sekrete mittlerer Dichte in der Höhle, und in einigen Zellen wurden dichte runde Sekretkörner gefunden. Bei mit Acteosid behandelten Ratten war der Zellkern im Vergleich zur Modellgruppe intakt. Der Zellkern war konzentriert, die Kerndichte erhöht, Heterochromatin akkumuliert, das Zytoplasma hatte Vakuolen und die Vakuolen des rauen endoplasmatischen Retikulums waren reduziert. Die niedrig dosierte Acteosid-Gruppe wies eine leicht faltige Kernschrumpfung, ein unregelmäßiges, reicheres Zytoplasma und ein reduziertes raues endoplasmatisches Retikulum auf (Abbildung 3).
Der Vorteil von Cistanche: Anti-Apoptose
3 Diskussion
Apoptose ist ein Prozess des programmierten Zelltods in vielzelligen Organismen, der die Entwicklung des Körpers reguliert und die Stabilität der inneren Umgebung aufrechterhält, und genetische Codes bestimmen dies.
Apoptotische Zellen haben ihre einzigartigen morphologischen und biologischen Eigenschaften: nukleare Chromatinschrumpfung, umfangreiche DNA-Degradation und -Fragmentierung, vollständige Schrumpfung von Zellen, Schrumpfung von Zellmembranen und äußeren Vorsprüngen, die Organellen (wie Mitochondrien und Ribosomen) bedecken, und die Bildung von charakteristischen nuklearen Fragmente Apoptotische Körper, apoptotische Zellen behalten nicht nur eine vollständige Zellmembranstruktur und -funktion bei, sondern haben auch eine vollständige Struktur von Organellen, die sich von der Zellnekrose unterscheidet.
Der molekulare Mechanismus der Zellapoptose ist bisher noch nicht vollständig aufgeklärt. Studien [7] haben gezeigt, dass viele Gene an der Genregulation der Zellapoptose beteiligt sind.
Apoptose ist der Prozess der BPH, der derzeit mehr Aufmerksamkeit auf sich zieht. Sie wird durch die Kodierung von Genen bestimmt und ermöglicht Zellen, den Zelltod zu kontrollieren, indem sie auf spezifische Signale reagieren [1]. Nachdem sich die Prostata zu Erwachsenengröße entwickelt hat, wird die Proliferationsrate von Prostatazellen durch das Gleichgewicht der Apoptoserate bei 1 Prozent bis 2 Prozent gehalten. Die Zerstörung dieses Gleichgewichts wird seit jeher als Ursache der BPH angesehen [8]. Unter normalen Bedingungen sind der Östrogen- und Androgenspiegel und die regelmäßige Zirkulation in der Prostata eine Art Selbstausgleichszustand, der im Prozess der Proliferation und Apoptose existiert. Wenn Proliferation und Apoptose aus dem Gleichgewicht geraten, führt dies dazu, dass die Drüsen wachsen und sich weiter ausdehnen, hauptsächlich aufgrund der Expansion des Epithelzellkompartiments [9]. Die Unterbrechung dieses Gleichgewichts kann auf Änderungen der Androgenspiegel oder -funktionen zurückzuführen sein; Es kann auch auf eine Reaktion zurückzuführen sein, die durch AR-Stimulation von DHT oder Änderungen der DHT-vermittelten Wachstumsfaktorspiegel hervorgerufen wird [2]. In dieser Studie entdeckte FCM Zellapoptose und stellte fest, dass die Apoptoserate von Prostatazellen bei Ratten, denen hohe Dosen von Acteosid verabreicht wurden, signifikant anstieg. Elektronenmikroskopische Ergebnisse zeigten, dass die Kerne der Prostatazellen in der Modellgruppe deformiert waren, das raue endoplasmatische Retikulum in einer zystenartigen Form stark ausgedehnt war und die Zyste mit hochdichten Proteinpartikeln gefüllt war und eine Vakuolisierung gefunden wurde. Die Mitochondrien waren leicht geschwollen und verwandte Studien[ 10-11 ] Der Bericht ist konsistent.
Nach einer Acteosid-Intervention war der Grad der Prostatahyperplasie bei Ratten geringer. Auch die Hochdosisgruppe zeigte frühe Anzeichen von Apoptose: Der Zellkern der Prostatazellen blieb intakt, und die Vakuolen des endoplasmatischen Retikulums waren signifikant geringer. Kondensation von Kernen, erhöhte Kerndichte, Akkumulation von Heterochromatin, ähnlich der Charakterisierung von Prostatagewebezellen bei Ratten nach Kastration [12-13]. Es zeigt, dass Acteosid aus demZistanchekann bei Ratten mit Prostatahyperplasie Zellapoptose induzieren, das Gleichgewicht von Prostatazellapoptose und -proliferation regulieren und wiederherstellen und eine Rolle bei der Hemmung der Prostatazellproliferation spielen. Die Ergebnisse dieser Studie und früherer Studien [14] weisen darauf hin, dass die hemmende Wirkung von Acteosid, einem chemischen Bestandteil vonCistanche tubulosa, auf Prostatahyperplasie, kann mit der Förderung der Zellapoptose, der Verringerung der AR- und TGF-UR1-Überexpression zusammenhängen. Der genaue Wirkungsmechanismus muss noch weiter untersucht werden.
Cistanche-Vorteil: Verbesserung der Immunität
Verweise:
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