Xinjiang Cistanche Deserticola-Polysaccharide haben eine antioxidative Wirkung
Aug 30, 2023
abstrakt
Die antioxidative Aktivität des Polysaccharids Cistanche deserticola wurde in vitro untersucht. Als experimentelles Modell dienten Ascorbinsäure als Kontrolle, die Fenton-ähnliche Reaktion zur Bildung von Hydroxylradikalen, die Autoxidationsreaktion von Dopamin zur Bildung von Superoxidanionenradikalen, die Reaktion von Natriumhypochlorit mit Wasserstoffperoxid zur Bildung von Singulettsauerstoff und Diphenylbitterhydrazinradikale , die Wirkung von Cistanche-Deserticola-Polysacchariden auf Superoxid-Anionenradikale, Hydroxylradikale DPPH · freies Radikal (Diphenylbitterhydrazinradikal), die abfangende Wirkung von Singulettsauerstoff. Die Ergebnisse zeigten, dass die Polysaccharide aus Cistanche deserticola eine offensichtliche Fängerwirkung auf die oben genannten freien Radikale hatten und dass die Fängerwirkung positiv mit der Konzentration der Polysaccharide korrelierte.
Schlüsselwörter :Cistancer tubulosa PolysaccHaride; Freie Radikale
1. Einleitung
Der Körper produziert im Prozess des oxidativen Stoffwechsels der Lebensaktivitäten kontinuierlich verschiedene reaktive freie Sauerstoffradikale (ROS), die das Zwischenprodukt der Oxidations-Reduktions-Reaktion des aeroben Stoffwechsels sind.Untersuchungen haben ergeben, dass überschüssige freie Radikale lebenswichtige Makromoleküle und verschiedene Organellen angreifen, verschiedene Schäden auf molekularer Ebene, Zellebene, Gewebe- und Organebene verursachen, den Alterungsprozess des Körpers beschleunigen und Krankheiten wie Thrombose, Diabetes, Arteriosklerose usw. auslösen. Tumore usw. [1]. Aufgrund der Toxizität chemisch synthetisierter Antioxidantien für den menschlichen Körper ist die Suche nach natürlichen Antioxidantien mit hoher Effizienz und geringer Toxizität, die freie Sauerstoffradikale entfernen können, zu einem heißen Forschungsthema in den Bereichen Medizin, Lebensmittel, Chemieingenieurwesen und anderen Bereichen geworden den letzten Jahren.
Cistanche deserticola(YCMa.)ist eine seltene traditionelle chinesische Medizin und bekannt als „Wüstenginseng" [2]. Cistanche deserticola maPolysaccharid ist einer der wichtigsten bioaktiven Bestandteile von Cistanche deserticolaEs gibt jedoch keinen Bericht darüber, ob das Polysaccharid von Cistanche deserticola die Wirkung hat, freie Radikale abzufangen. In dieser Arbeit wurden die abfangenden Wirkungen des Cistanche-Deserticola-Polysaccharids auf Superoxidanionenradikale, Hydroxylradikale, freie DPPH-Radikale und Singulettsauerstoff durch Spektralanalyse bestimmt, um seine antioxidative Aktivität zu bewerten und eine wissenschaftliche Grundlage für die vollständige Entwicklung und Nutzung zu schaffen diese natürliche Ressource.
Chinesische Kräuter-Cistanche
2. Experimenteller Teil
2.1 Instrumente und Reagenzien
UV-2401 UV-sichtbares Spektrophotometer (Shimadzu, Japan); LumatLB9507 ultraempfindliches Röhrenluminometer (Deutschland
BertholdTechnologies); RE-52CS-Rotationsverdampfer (Shanghai Yarong Biochemical Instrument Factory); Elektronisches thermostatisches Wasserbad HW-SY (Jintan Xinhang Instrument Factory); PHS-3C pH-Meter (Shanghai Precision Scientific Instrument Co., Ltd.); DZF-6020 Vakuumtrocknungsofen (Shanghai Yiheng Technology Co., Ltd.). Cistanche deserticola: gekauft von Kuitun Pharmaceutical Corporation. Luminol (Sigma, USA), Dopamin (China Institute for the Control of Pharmaceutical and Biological Products), FeSO4, EDTA, Vitamin C, H2O2, NaClO, Na2CO3, NaHCO3 usw. sind allesamt inländische Analysereagenzien. Das Versuchswasser ist durch Ionenaustausch destilliertes Wasser.
2.2 Experimentelle Methode
2.2.1 Extraktionsmethode vonCistanche deserticolaPolysaccharid
Nehmen Sie 30 g Cistanche-Deserticola-Pulver und geben Sie es in einen 500 ml Erlenmeyerkolben. Tauchen Sie es jeweils 6 Stunden lang in Petrolether (60-90 Grad), Ether und 80 %ige Ethanollösung (30 Grad) und verdampfen Sie den Rückstand, um das Lösungsmittel zu trocknen. Weichen Sie den Filterrückstand 24 Stunden lang in Wasser im Verhältnis 1 ∶ 10 ein, erhitzen Sie ihn auf 30 Grad und extrahieren Sie ihn 100 Minuten lang. Nach der Extraktion zentrifugieren, um den Überstand zu erhalten. Nachdem der Überstand unter vermindertem Druck eingeengt wurde, wird er mit 95 %igem Ethanol im dreifachen Volumen ausgefällt. Man lässt es 24 Stunden lang bei 4 Grad stehen. Nach der Zentrifugation wird es gesammelt und ausgefällt. Nach Vakuumtrocknung kann das rohe Polysaccharid von Cistanche deserticola gewonnen werden. Wiegen Sie 1,00 g rohes Polysaccharid ab, lösen Sie es mit Wasser auf und geben Sie es für den Standby-Modus in einen 50-ml-Messkolben.
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2.2.2 Prüfung der Spülfähigkeit vonCistanche deserticolaPolysaccharid zu O-2 · freies Radikal
Die Fähigkeit des Polysaccharids Cistanche deserticola, O{{0}} · abzufangen, wurde durch die Produktion freier Superoxidradikale (O-2 ·) aus der Autoxidation von Dopamin getestet [3]. Fügen Sie 3,0ml {{10}},1mmol/LpH=10,12 Carbonatpufferlösung, 3,0ml Wasser und {{18 }},5 ml Polysaccharid-Probenlösung unterschiedlicher Konzentration im Trockenreagenzglas mit Skala. Nach 5-minütigem Vorwärmen in einem 3{25} Grad warmen Wasserbad 1,0ml 2,0 mmol/L Dopamin hinzufügen, das in einem 30 Grad warmen Wasserbad vorgewärmt wurde, sofort mischen und die Reaktion bei 30 Grad halten für 5 Minuten und stoppen Sie die Reaktion sofort mit 2 Tropfen 10 mol/L HCl. Verwenden Sie die Pufferlösung als Referenz, messen Sie die Absorption (Probe A) bei 221 nm, ersetzen Sie die Probe (Blindwert A) durch 0,5 ml Wasser in der Blindgruppe und ersetzen Sie die Probe durch 0,5 ml Ascorbinsäure in der Kontrollgruppe , messen Sie jede Probe dreimal parallel und ermitteln Sie den Durchschnittswert. O-2 · Clearance-Rate (%)=(Ein Blindwert – Eine Probe)/Ein Blindwert × 100 %
2.2.3 Prüfung der Spülfähigkeit vonCistanche deserticolaPolysaccharid zu · OH-Radikal
Desert lebendes Cistanche-Kraut—Antioxidans
Das EDTA-Fe (Ⅱ)-Methylenblau-H2O2-System wurde verwendet, um die Abfangfähigkeit des Cistanche deserticola-Polysaccharids gegenüber Hydroxylradikalen zu testen. Das Prinzip besteht darin, dass EDTA-Fe (Ⅱ) mit Wasserstoffperoxid reagiert und freie OH-Radikale erzeugt, die den charakteristischen Absorptionspeak der Methylenblaulösung bei 660 nm reduzieren.
Fügen Sie 1,0ml 5 mmol/L LFeSO4-Lösung, 1,2 ml 5 mmol/L LEDTA-Lösung, 2,0ml 0.03mol/L NaH2PO{ hinzu. {12}}Na2HPO4 (pH=7.4) Pufferlösung und 1,3 ml 20mmol/L Wasserstoffperoxidlösung in eine Reihe von 10ml-Reagenzgläsern mit Stopfen, Gut schütteln, 0,7 ml 0,2 mmol/L Methylenblaulösung hinzufügen und dann 1,0 ml der zu testenden Lösung und Vitamin C1.0 in unterschiedlichen Konzentrationen hinzufügen und auf 10 verdünnen.00 ml mit Wasser, gut mischen, 30 Minuten bei 37 Grad halten und den Absorptionswert jeder Lösung bei 660 nm messen. Die Blindgruppe ersetzte die Probenlösung durch Wasser. Jede Probe ist dreimal parallel zu messen und der Mittelwert zu bilden. · OH-Radikalabfangrate der Probe (%)=[(A2-A1)/(A0-A1) × In der Formel von 100 %: A0 -- Absorption Wert der unbeschädigten Röhre; A1 - Absorptionswert des beschädigten Röhrchens; A2 -- Photometrischer Wert nach Zugabe der Probe.
2.2.4 Test auf DPPH · Abfangfähigkeit vonCistanche deserticolaPolysaccharid
Nehmen Sie {{0}},1 ml der Polysaccharidlösung von Cistanche deserticola und geben Sie sie in eine 5,0 mlLDPPH-Lösung, mischen Sie sie schnell und lassen Sie sie 10 Minuten lang bei Raumtemperatur stehen.
Bestimmen Sie die Absorptionsänderung bei einer Wellenlänge von 517 nm [4]. Jede Probe ist dreimal parallel zu messen und der Mittelwert zu bilden. Die Probenclearance-Rate von DPPH · (%)=1 - [(AB)/A0] × In der Formel von 100 %: A0 -- Absorptionswert von DPPH · (1,9 mLDPPH ·+0,1 ml 50 % Ethanol) ohne Probe; A – Absorptionswert der Probe nach Reaktion mit DPPH ·; B -- Absorptionswert der Leerprobe (Probe 0,1 ml+1,9 ml 50 % Ethanol).
2.2.5Cistanche deserticolaPolysaccharid-abfangender Singulett-Sauerstoff-1O2-Test
Einliniensauerstoff (1O2) entsteht durch die chemische Reaktion von NaClO und H2O2 bei 37 Grad [5]. Die zur Bestimmung von 1O2 verwendete Lösung ist 100 μ L2,8 mmol/L NaClO-Lösung, 400 μ L5 mmol/LNaOH-Lösung, 300 μ L10 mmol/LH2O2-Lösung, 50 μ L1 mmol/Luminol-Lösung. Während der Reaktion wird die Reaktionslösung zur Probenlösung gegeben und das Chemilumineszenzgerät zeichnet gleichzeitig automatisch den Reaktionsprozess auf. Nehmen Sie NaClO-H2O2-NaOH-Luminol als Blindkontrolle. Starten Sie die Reaktion und geben Sie die Reaktionslösung entsprechend der durch das Verfahren festgelegten Menge aus der Vorratsflasche des Chemilumineszenzinstruments in das Probenröhrchen. Anschließend wird alle 5 Sekunden die Chemilumineszenzintensität der Reaktionsmischung auf dem Aufzeichnungspapier aufgezeichnet, jede Probe dreimal parallel gemessen und der Durchschnittswert ermittelt.
Die Clearance-Rate wird nach folgender Formel berechnet: Clearance-Rate (%)=(Kontrolllichtstärke – Probenlichtstärke)/Kontrolllichtstärke × 100 %
3. Ergebnisse und Diskussion
3.1 Spülwirkung vonCistanche deserticolaPolysaccharid auf O-2 ·
Vorteile von Cistanche tubulosa – Antioxidant
Die chemische Eigenschaft von O-2 · ist aktiv, wodurch die Fettsäuren auf dem Biofilm Peroxid produzieren und dann die Zellen zerstören können [6]. In dieser Arbeit wurde die Dopamin-Methode verwendet, um die Fängerfähigkeit von O-2 · zu bestimmen. Die Abfangfähigkeit von Cistanche deserticola für O-2 · ist in Abbildung 1 dargestellt. Die Ergebnisse zeigten, dass das Polysaccharid von Cistanche deserticola das durch die Autoxidation von Dopamin erzeugte O-2 · hemmen konnte und mit zunehmendem Anstieg zunahm Konzentration innerhalb des gemessenen Konzentrationsbereichs (0-8mg/ml), aber die Abfangfähigkeit war geringer als die von Ascorbinsäure.
3.2 Spülwirkung vonCistanche deserticolaPolysaccharid · OH
·OH ist eines der aktivsten freien Sauerstoffradikale unter den aktiven Sauerstoffspezies. Es kann mit fast jedem biologischen Makromolekül in lebenden Zellen reagieren und im Körpergewebe zu biochemischen Prozessen wie Lipidperoxidation, Proteinpolymerisation und -depolymerisation, Nukleinsäurebruch usw. führen, die Gewebe- und Zellkrankheiten verursachen und zum Auftreten von führen verschiedene Krankheiten und beschleunigen die Alterung des Körpers [7]. Die Abfangfähigkeit von Cistanche-Deserticola-Polysaccharid gegenüber · OH ist in Abbildung 2 dargestellt. Die Ergebnisse zeigten, dass Cistanche-Deserticola-Polysaccharid eine gute Abfangwirkung auf · OH hatte und diese mit zunehmender Konzentration zunahm.
3.3 Die Fähigkeit des Polysaccharids Cistanche deserticola, DPPH abzufangen ·
DPPH · (Diphenylbitterhydrazinradikal) ist ein stabiles freies Radikal, das in organischen Lösungsmitteln violett ist und eine starke Absorption in der Nähe von 517 nm aufweist. Nach der Zugabe von Antioxidantien werden einige freie Radikale entfernt, was die Absorption schwächt, was zur Bewertung der antioxidativen Aktivität dieser Substanz herangezogen werden kann [8]. Siehe Abbildung 3 für die DPPH-Fängerkapazität des Cistanche deserticola-Polysaccharids. Die experimentellen Ergebnisse zeigten, dass die Abfangkapazität des Polysaccharids Cistanche deserticola auf DPPH · positiv mit seiner Konzentration korrelierte und die Abfangkapazität größer war als die von Ascorbinsäure.
3.4 Abfangfähigkeit des Polysaccharids Cistanche deserticola gegenüber 1O2
Einliniensauerstoff ist angeregter molekularer Sauerstoff mit aktiven chemischen Eigenschaften. Da ungepaarte Elektronen dazu neigen, sich zu paaren, weisen freie Radikale aktivere chemische Eigenschaften auf [9]. Die Abfangfähigkeit von Cistanche-Deserticola-Polysaccharid gegenüber 1O2 ist in Abbildung 4 dargestellt. Die experimentellen Ergebnisse zeigten, dass die Abfangkapazität von Cistanche-Deserticola-Polysaccharid im Bereich von 0-4,0mg geringer war als die von Ascorbinsäure /ml, und die Abfangkapazität von Cistanche deserticola-Polysaccharid war höher als die von Ascorbinsäure, wenn die Konzentration mehr als 4,0mg/ml betrug.
4. Fazit
Die antioxidative Aktivität der Polysaccharide von Cistanche deserticola in vitro wurde anhand verschiedener reaktiver Sauerstoffradikalsysteme detailliert untersucht.Aus den experimentellen Ergebnissen ist ersichtlich, dass der Polysaccharidextrakt von Cistanche deserticola innerhalb des experimentellen Konzentrationsbereichs eine abfangende Wirkung auf O-2 ·, · OH, DPPH · und 1O2 hat, und die abfangende Wirkung ist für jeden unterschiedlich Systeme.Das zeigten die ErgebnisseCistanche-Deserticola-Polysaccharid ist ein wirksames exogenes natürliches Antioxidans, das weiterer Forschung, Entwicklung und umfassender Nutzung würdig ist.
Cistanche tubulosa 200 mg–Antioxidant
