3.3. In-vitro-Studien

3.3.1. Bewertung der Zytotoxizität in menschlichen Keratinozyten

Laut einschlägigen StudienCistancheist ein weit verbreitetes Kraut, das als „Wunderkraut, das das Leben verlängert“ bekannt ist. Sein Hauptbestandteil istCistanosid, was verschiedene Auswirkungen hat, wie zAntioxidans, Antiphlogistikum,UndFörderung der Immunfunktion. Der Mechanismus zwischen Cistanche undHautaufhellungliegt in der antioxidativen Wirkung vonCistanche-Glykoside. Melanin in der menschlichen Haut entsteht durch die katalysierte Oxidation von TyrosinTyrosinaseDa die Oxidationsreaktion die Beteiligung von Sauerstoff erfordert, werden die sauerstofffreien Radikale im Körper zu einem wichtigen Faktor, der die Melaninproduktion beeinflusst. Cistanche enthält Cistanosid, das ein Antioxidans ist und somit die Entstehung freier Radikale im Körper reduzieren kannHemmung der Melaninproduktion.

Klicken Sie auf Cistanche Powder Bulk

Für mehr Information:

david.deng@wecistanche.com WhatApp:86 13632399501

Der MTT-Assay wurde verwendet, um zu testen, ob PPEE, PPEE-SLNs und KDPAG die Lebensfähigkeit der Zellen unter Verwendung menschlicher Keratinozyten beeinflussen könnten. Verschiedene Konzentrationen von PPEE, PPEE-SLNs, extraktfreien SLNs und KDPAG bei 0.{{10}}625–1 mg/ml wurden über 24 Stunden mit einer menschlichen Keratinozyten-Zelllinie inkubiert (Figur 2). Über 24 Stunden wurde keine signifikante Verringerung der Lebensfähigkeit menschlicher Keratinozytenzellen im Konzentrationsbereich von 0.0625–0,5 mg/ml (p < 0,05) beobachtet. Nach der Behandlung mit 1 mg/ml PPEE, PPEE-SLNS, Extract-free-SLNs und KDPAG über 24 Stunden wurde jedoch eine signifikante Verringerung der Zelllebensfähigkeit menschlicher Keratinozyten beobachtet, 93 Prozent, 90 Prozent, 95 Prozent 89 Prozent der Zellen überlebten jeweils. Daher wurden für nachfolgende Studien Konzentrationen von PPEE, PPEE-SLNs und KDPAG von 0,5 mg/ml oder weniger verwendet.

Die antioxidative Aktivität wurde mithilfe von DPPH-, ABTS-Systemen und dem -Carotin-Bleichtest bewertet. In allen untersuchten Proben wurde eine konzentrationsabhängige Wirkung festgestellt. Im DPPH-Assay zeigte KDPAG die höchste Abfangaktivität, gefolgt von PPEE-SLNs und dann PPEE. Die IC50-Werte betrugen 6,35 ± 3,4{{30}} µg/ml, 8,79 ± 2,70 µg/ml bzw. 10,5 ± 1,81 µg/ml im Vergleich zu Vitamin C als Standard mit einem IC50 von 2 ± 0,01 µg/ml verwendet. Dieser Trend wurde auch bei ABTS-Radikalen mit einem Wert von 3,91 ± 1,43 µg/ml, 4,29 ± 1,12 µg/ml bzw. 6,10 ± 0,62 µg/ml im Vergleich zum Standard-Vit beobachtet. C mit einem IC50 von 0,96 ± 0,02 µg/ml, was die Ergebnisse des DPPH-Assays bestätigt. Auf eine solche Abfangaktivität für PP-Blattextrakte und deren Fraktionen wurde bereits für beide Tests hingewiesen, jedoch mit höheren Werten als den erhaltenen [14,49]. Diese Ergebnisse legen nahe, dass die Aktivität von Antioxidantien durch Umweltbedingungen, Pflanzenteile, Reifegrad, Erntemethode und für die Extraktion verwendete Lösungsmittel beeinflusst wird. Diese Ergebnisse stimmen mit der Literatur überein, da PP-Blattextrakt in beiden Tests eine bessere antioxidative Kapazität als Samen-, Schalen-, Fruchtfleisch- und Fruchtextrakte aufwies [14,20,50]. Außerdem wurde angenommen, dass der berichtete hohe Flavonoidgehalt der PP-Blätter, insbesondere Flavonole, für die antioxidative Aktivität verantwortlich ist [20].

PPEE, PPEE-SLNs und KDPAG zeigten Anti-Elastase-, Anti-Kollagenase- und Anti-Tyrosinase-Aktivität mit einer hohen prozentualen Hemmung bei 300 µg/ml und relativ niedrigen IC50-Werten (Tabelle 3) im Vergleich zu ihren jeweiligen Positivkontrollen.

3.4. Bewertung von PPEE-SLNs und PPEE-SLNs-Creme

Die hergestellten PPEE-SLNs-Formulierungen zeigten Partikelgrößen von 170 nm bis 176 nm; Dies weist darauf hin, dass die Zugabe von Tensid zu festen Lipid-Nanopartikelsystemen dazu führt, dass der Grenzflächenfilm kondensiert und sich stabilisiert. Formulierungen zeigen niedrige Werte des Polydispersitätsindex (0.23{{10}}–0,450), was auf eine Homogenität der Partikelgrößenverteilung mit einem ZP zwischen −21,8 und −22,0 hinweist, was eine hohe Stabilität der Produkte gewährleistet (Abbildung 3a, B). Die aufgezeichnete 70–77-prozentige Verkapselungswirksamkeit von PPEE-SLNs ist auf die Art des Lipids (Glycerinmonostearat) zurückzuführen, das in der Lage ist, die Oberflächenporen in den Kügelchen zu schließen. TEM- und SEM-Aufnahmen zeigten die Bildung von Nanopartikeln mit enger Partikelgrößenverteilung, glatten, kugelförmigen und homogenen Nanovesikeln (Abbildung 3c,d). Im FTIR zeigt PPEE charakteristische Peaks bei 3352 cm-1, was der NH-Streckung des aromatischen sekundären Amins entspricht, 2974,23 cm-1, was der aromatischen CH-Streckung entspricht, 1735,93 cm-1, was der C=O-Streckung entspricht, und 1257,59 cm- 1 entspricht der Streckung des CN-aliphatischen Amins, wie in (Abbildung 4) dargestellt. Die FTIR-Spektren von PPEE und der physikalischen Lipidmischung zeigen die gleichen charakteristischen Peaks aufgrund der Streckung des aromatischen sekundären Amins NH bei 3348,42 cm−1, der Streckung von C=O bei 1735,93 cm−1 und der Streckung des aliphatischen CN-Amins bei 1257,59 cm −1. Somit ist es offensichtlich, dass alle charakteristischen Peaks, die in den Spektren von PPEE vorhanden waren, fast in der gleichen Region in den Spektren der physikalischen Mischung von PPEE und SLNs repliziert wurden, was darauf hindeutet, dass es keine signifikante Wechselwirkung zwischen den Arzneimitteln und den Lipiden gibt. PPEE-SLNs-Cremes (2 Prozent und 5 Prozent) waren gelblich mit glattem Aussehen, glatter Oberfläche und einem geeigneten pH-Wert im Bereich von 5–5,8 ± 0,15, was die Verträglichkeit der Formulierungen mit Hautsekreten bestätigt, nicht reizend für die menschliche Haut, nein Vorhandensein von Rötungen oder Ödemen, leicht mit Wasser abwaschbar und guter Verteilbarkeitswert im Bereich von 10–13 g cm/s, mit einer Viskosität im Bereich von 500 ± 6,24 bis 600 ± 7,52 CPS bei 10 U/min, keine Anzeichen einer Phasentrennung und gute Konsistenz während der Studienzeit. Die Gesamtmenge an Bakterien und Schimmelpilzen betrug weniger als 100 KBE/ml und lag im Akzeptanzbereich für Hautpflegeprodukte. Die 2-prozentige Creme zeigte eine anfängliche stoßartige Freisetzung von PPEE-SLNs von etwa 15,21 ± 1,44 Prozent während der ersten Stunde; Anschließend wurden die in der Creme eingeschlossenen PPEE-SLNs nach und nach freigesetzt; 60,32 ± 2,54 Prozent wurden nach 12 und 62 ± 1,44 Prozent fast nach 24 Stunden freigesetzt. Andererseits zeigte die 5-prozentige Creme eine anfängliche stoßartige Freisetzung von PPEE-SLNs von etwa 20,21 ± 2,70 Prozent während der ersten Stunde; Anschließend wurden die in der Creme eingeschlossenen PPEE-SLNs nach und nach freigesetzt, 77,12 ± 2,88 Prozent wurden nach 12 bzw. 80 ± 2,91 Prozent fast nach 24 Stunden freigesetzt. Beide Cremeformeln zeigten eine verlängerte Freisetzung von PPEE über 24 Stunden (Abbildung 5). Darüber hinaus zeigte unsere Forschungsstudie, dass Cremeformulierungen (2 Prozent und 5 Prozent) zwei Monate lang stabil sind.

3.5. In-vivo-Studien

Nach zwanzig Tagen Behandlung mit der Creme wurden die Anti-Falten-Scores beurteilt. Die Anti-Falten-Wirkung der PPEE-SLNs-Creme war dosisabhängig und die beobachtete Wirkung in der Gruppe mit 5 Prozent PPEE-SLNs-Creme (G5) war vergleichbar mit dem Ergebnis in der Positivkontrollgruppe (G3), die mit a behandelt wurde Marktprodukt (Abbildung 6) und zeigte deutlich bessere Anti-Falten-Werte im Vergleich zu Standard-Anti-Falten-Creme. Die Fotos sind in Abbildung 7 dargestellt. Die Gruppen (G3–G5) zeigten sehr glatte und verbesserte Hautoberflächen. Bei G1-Tieren traten keine Hautveränderungen auf. Im Gegensatz dazu zeigte G2 dicke und tiefe Falten.

Die elastischen Fasern wurden durch UV-Bestrahlung im Vergleich zu denen der Normalgruppe deutlich verringert. Hautbilder von unbehandelten und behandelten Mäusen wurden mit dem Mikroskop beobachtet (Abbildung 8). G1 hatte eine normale Hautdicke sowohl der Dermis als auch der Epidermis und enthielt Fibroblasten zusätzlich zu einer normalen Dicke der elastischen Fasern ohne Fragmentierung. Im Vergleich zu G1 zeigte die Haut der UV-bestrahlten Mäuse (G2) eine signifikante Zunahme der Verdickung sowohl der Epidermis als auch der Dermis sowie einen Rückgang der Bildung von Fibroblasten und der elastischen Fasern durch UV-Bestrahlung. Die topische Anwendung der 5-prozentigen (G5) und 2-prozentigen (G4) PPEE SLNs-Creme war vergleichbar mit der von G3, die das kommerzielle Produkt erhielt. Alle G4 und G5 verringerten die Dicke der Dermis und Epidermis erheblich und erhöhten den Gehalt an Fibroblasten, da deren Anzahl den Gehalt an Kollagenfasern bestimmt, was zur Reparatur geschädigter Haut beitrug und den Alterungseffekt der Haut verringerte (Abbildung 9a,b). . Außerdem zeigten beide Gruppen vorbeugende Wirkungen gegen den Abbau elastischer Fasern durch UV-Bestrahlung, sodass wir schlussfolgern können, dass die Behandlung mit beiden Dosen der PPEE-SLNs-Creme eine schützende Wirkung gegen UV-Bestrahlung zeigte.

Für weitere Informationen: david.deng@wecistanche.com WhatApp:86 13632399501