Acteoside: Forschung zur antioxidativen und blutdrucksenkenden Aktivität

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Antioxidative und blutdrucksenkende Aktivitäten von Acteosid und seinen Analoga

Chao-Hsiang CHEN1,2, Yin-Shiou LIN3, Mei-Yin CHIEN2,4, Wen-Chi HOU5,6,* und Miao-Lin HU1,*

Abstrakt. Acteosid(Act), ein Phenylethanoidglykosid, ist ein Wirkstoff in mehreren Pflanzen und traditionellen pflanzlichen Arzneimitteln. Handeln Sie zusammen mit seinem Strukturisomer,Isoacteosid(Isoact) und ein Analog, 6-O-acety-Lakteosid (6-O-Acetylact), wurden in der Studie verwendet, um die zu untersuchenAntioxidans, Anti-Angiotensin-Converting-Enzym (ACE) und hämolysehemmende Aktivitätenin vitround blutdrucksenkende Aktivität gegen spontan hypertensive Ratten (SHR)in lebendig. Wir haben gezeigt, dass Act, Isoact und 6-O-acetylact 1,1-Diphenyl-2-picrylhydrazylradikale (mit IC50 bei 11,4, 9,48 bzw. 9,55 μM) und Superoxidradikale (mit IC50 bei 66,0, 38,5). bzw. 39,1 μM). Als Isoact und 6-O-Acetylact ähnliche Radikalfänger-Aktivitäten aufwies, für die folgenden Studien wurden nur Act und Isoact verwendet. Sowohl Act als auch Isoact hemmten die Xanthinoxidase-Aktivität mit IC50 bei 53,3 bzw. 62,2 μM. Sowohl Act als auch Isoact hemmten auch signifikant die ACE-Aktivität und die durch 2,2'-Azo-bis(2-amidinopropan)dihydrochlorid induzierte Hämolyse, aber die Wirkungen von Act waren stärker als Isoact. Wir verabreichten SHR dann oral eine Einzeldosis von Act oder Isoact (10 mg/kg Körpergewicht) und maßen die Änderungen des systolischen Blutdrucks (SBP) und des diastolischen Blutdrucks (DBP) über 24 Stunden. Act, aber nicht Isoact, zeigte blutdrucksenkende Wirkung bei der Senkung von SBP und DBP. Die Ergebnisse deuten auf die potenzielle Nützlichkeit des Gesetzes als gesundes Lebensmittelprodukt hinAntioxidansSchutz und Blutdruckregulierung.

Schlüsselwörter: Acteosid; Antihypertensive Aktivität; Angiotensin-Converting-Enzym (ACE); Antioxidans; Hämolyse.

Wirkstoff Acteosid in Cistanche

Einleitung

Acteosid(Act), ein Phenylethanoidglykosid, das Kaffeesäure, 3',4'-Dihydroxyphenylethanol, Glucose und Rhamnose enthält, wurde zuerst aus Blüten von isoliertSyringa Vul- garis(Birkofer et al., 1968) und zusammen mit dem Strukturisomer vonIsoacteosid(Isoact) und die Ableitung von6-O-Acetylacteosid(6-O-Acetylact), wurde in vielen Pflanzen und pflanzlichen Arzneimitteln gefunden, wie zLigstrum purpurascens(Wong et al., 2001),Callicarpa Dichotoma(Koo et al., 2006; Lee et al., 2006),Cistanche DeserticolaundBoschniakia Rossica(Wu et al., 2006),Skrophularia Ningpoenis(Huang et al., 2008),Rehmannia Glutinosa(Li et al., 2006). Es wurde berichtet, dass die Handlung antimetastatische Aktivität auf B16-Melanomzellen in C57BL/6-Mausmodellen zeigt (Ohno et al., 2002). Act, Isoact und 6-O-acetylact wurde kürzlich gezeigt, dass sie die IL-1 --aktivierte Expression von interzellulärem CAM-1 und vaskulärem CAM-1 in Endothelzellen der menschlichen Nabelvene hemmen (Chen et al., 2009). Act schützt auch Endothelzellen der Rinderlunge vor Hydroxylradikal-induziertem oxidativem Stress (Chiou et al., 2004) und hemmt die Stickoxid- und TNF-Produktion durch Blockierung der AP-1-Aktivierung in Lipopolysaccharid-stimulierten Makrophagen (Rao et al. , 2009). Act und Isoact zeigen neuroprotektive Aktivitätenin vitro(Koo et al., 2005). Kooet al. (2006) berichteten, dass Act und seine Aglykone effektiv 1,1-Diphenyl-2-picryl-hydrazyl (DPPH) und Stickoxid abfangenin vitro. Allerdings haben nur wenige Studien die nebeneinander verglichenin vitro AntioxidansAktivitäten von Act und seinen strukturell verwandten Verbindungen wie Isoact und 6-O- Acetylact.

Bei der Behandlung von Bluthochdruck wurden mehrere Klassen pharmakologischer Mittel verwendet (Mark und Davis, 2000). Eine Klasse von Antihypertonika, bekannt als Angiotensin-I-Converting-Enzym (ACE)-Hemmer (dh Peptidase-Hemmer), hat ein geringes Auftreten von unerwünschten Nebenwirkungen und ist die bevorzugte Klasse von Antihypertonika

Wirkstoffe bei der Behandlung von Patienten mit begleitenden Folgeerkrankungen (Fotherby und Panayiotou, 1999). ACE (Peptidyl-Dipeptid-Hydrolase EC 3.4.15.1) ist eine Dipeptid-freisetzende Zn-haltige Exopeptidase, die ein Dipeptid vom C-Terminus von Angiotensin I entfernt, um Angiotensin II zu bilden, eine sehr hypertensive Verbindung. MehrereAntioxidansPeptide (reduziertes Glutathion und Carnosin-verwandte Peptide) zeigen ACE-hemmende Aktivitäten (Hou et al., 2003). Der erste klinisch verfügbare, oral wirksame ACE-Hemmer, Captopril, wurde für die Behandlung von Bluthochdruck entwickelt (Ondetti et al., 1977; Borer, 2007). Es wurde berichtet, dass die Handlung durch Stickoxid vermittelte entspannende Wirkungen auf die mit Endothel intakten Aortenringe von SD-Ratten ausübt (Wong et al., 2001). Ahmad et al. (1995) haben berichtet, dass Act eine dosisabhängige Abnahme des systolischen Blutdrucks (SBP) und des diastolischen Blutdrucks (DBP) nach seiner intravenösen Injektion in normotensive anästhesierte Wistar-Ratten induziert. Es ist jedoch unklar, ob oral verabreichtes Act und/oder seine verwandten Isomere blutdrucksenkend wirkenin lebendig. In der vorliegenden Studie untersuchten wir diein vitro AntioxidansKapazität und ACE-hemmende Aktivitäten sowie diein lebendigblutdrucksenkende Aktivität von Act, Isoact und/oder 6-O-Acetylact unter Verwendung der spontanen hypertensiven Ratten (SHRs). Von diesen Studien wird erwartet, dass sie nützliche Daten für die Entwicklung von Act als Reformkostprodukt liefern.

Materialen und Methoden

Materialien

2,2'-Azo-bis(2-amidinopropan)dihydrochlorid (AAPH), ACE (I-Einheit, Kaninchenlunge), butyliertes Hydroxytoluol (BHT), DPPH, N-(3-[{{7 }}Furyl]acryloyl)-Phe-Gly-Gly (FAPGG), NADH, Phenazinmethosulfat (PMS), Xanthin und Xanthinoxidase wurden von Sigma Chemical Co. (St. Louis, MO, USA) bezogen. Captopril wurde von Calbiochem Co. (CA, USA) erworben. Act, Isoact und 6-O-Acetylact (Abbildung 1) wurden von Equal Corp. (Reinheiten > 98 Prozent, Shanghai, China) bezogen. Andere Chemikalien und Reagenzien stammten von Sigma Chemical Co. (St. Louis, MO, USA).

Aufräumen Aktivität von Gesetz, Isoakt, und 6-O- Acetylakt gegen dPPH Radikale durch Spektrophotometrie

Ein Volumen (0,3 ml) Act, Isoact und 6-O-Acetylact (Endkonzentrationen waren 1,56 bis 5 0 µM), BHT und Ascorbinsäure (Endkonzentrationen waren 2,4 bis 6 0 µM) wurden zu 0,1 ml 1 M Tris-HCl-Puffer (pH 7,9 ) und dann mit 0,6 ml 100 µM DPPH in Methanol auf eine Endkonzentration von 60 µM für 20 min unter Lichtschutz bei Raumtemperatur gemischt (Liu et al., 2004; Lin et al., 2008). Die Abnahme der Extinktion bei 517 nm wurde gemessen und als ΔA517 nm ausgedrückt. Als Blindversuch wurde deionisiertes Wasser verwendet. Die Abfangaktivität des DPPH-Radikals (Prozent) wurde mit der Gleichung berechnet: (ΔA517Leerwert – ΔA517Probe) ÷ ΔA517Leerwert × 100. Der IC50 steht für die Konzentration der halben Hemmung.

Hemmend Aktivität von Gesetz und Isoact gegen Xanthin Oxidase

Die Xanthinoxidaseaktivität wurde durch Bestimmung der Harnsäurebildung bei 295 nm unter Verwendung von Xanthin als Substrat gemessen (Kalckar, 1947). Die unterschiedlichen Mengen an Act und Isoact (die Endkonzentrationen waren 25, 50 und 75 µM) wurden mit 50 µl 1 mU/ml Xanthinoxidase bei 4 Grad für 1 h und dann mit 300 µl 1 mM Xanthin vorgemischt wurden hinzugefügt. Die Absorptionsänderungen bei 295 nm wurden über 2 min aufgezeichnet und als ΔA295 nm/min ausgedrückt. Die Xanthinoxidase-Hemmaktivität (Prozent) wurde wie folgt berechnet: (ΔA295 nm/min Schwarz – ΔA295 nm/min Probe) ÷ ΔA295 nm/min Schwarz × 100. Als Blindversuch wurde entionisiertes Wasser anstelle der Probenlösung verwendet. IC50 steht für die Konzentration der Halbinhibition.

Aufräumen Aktivität von Gesetz, Isoakt, und 6-O- Acetylakt gegen Superoxid Radikale durch Spektrophotometrie

Das Superoxidradikal wurde durch das PMS-NA-DH-System erzeugt (Liu et al., 2004; Lin et al., 2008). Alle 0,2-ml-Proben mit unterschiedlichen Mengen an Act, Isoact und 6-O-acetylat (die Endkonzentration betrug 15,6, 31,3, 62,5, 125 und 25 0 µM) wurden nacheinander zu 0,2 ml 630 µM Nitroblautetrazolium, 0,2, gegeben ml 33 uM PMS und 0,2 ml 156 uM NADH in 100 mM Phosphatpuffer (pH 7,4). Als Blindversuch wurde entionisiertes Wasser anstelle von Probenlösung verwendet. Ascorbinsäure (die Endkonzentration war 6, 9, 12 und 24 &mgr;M) wurde als positive Kontrolle verwendet. Die Absorptionsänderungen bei 560 nm wurden während 2 min aufgezeichnet und als ΔA560 nm/min ausgedrückt. Die Abfangaktivität von Superoxidradikalen (Prozent) wurde wie folgt berechnet: (ΔA560 nm/min Schwarz – ΔA560 nm/min Probe) ÷ ΔA560 nm/min Schwarz × 100. IC50 steht für die Konzentration der halben Hemmung.

Festlegung von As hemmend Aktivität von Gesetz und Isoact durch HPLC

Jeweils 50 µl Act (0,2, 0,4, 0,5 und 2,0 µmol) und Isoact ({{ 11}}.1, 0.2, 0.5, 1.0 und 2.0 µmol) wurden mit 15 µl 1U/ml ACE vorgemischt für 5 min, und dann wurden 200 µL 0,5 mM FAPGG hinzugefügt und bei Raumtemperatur für 10 min umgesetzt (Anzenbacherova et al., 2001). Die 800 &mgr;l Methanol wurden zugegeben, um die Reaktion zu stoppen. Das Blindexperiment war nur FAPGG. Im Kontrollexperiment reagierte ACE unter den gleichen Bedingungen mit FAPGG. Die chromatographische Trennung von FAPGG und FAP wurde auf dem chromatographischen System von Hitachi (Japan) mit einer 10 &mgr;l-Schleife durchgeführt. Die HPLC-Analyse wurde auf einer Biosil Aqua-ODS-W 5 &mgr;-Säule (Biotic Chemical Co., Ltd., Taiwan, 250 × 4,6 mm ID), Partikelgröße 5 &mgr;m durchgeführt. Die Reaktionsmischung wurde isokratisch mit einem Laufmittel bestehend aus 0,02 M Nonylamin (mit Phosphorsäure auf pH 2,4 eingestellt) und Acetonitril im Verhältnis 67,5:32,5 (V/V) getrennt (Anzenbacherova et al., 2001). Die Fließgeschwindigkeit betrug 1 ml/min; das Injektionsvolumen betrug 10 &mgr;l; der Detektor wurde auf 345 nm eingestellt. Die ACE-Hemmungen (Prozent) von Act und Isoact wurden wie folgt berechnet: [(FAPGG-Leerwert – Bereich der FAPGG-Kontrolle) – (FAPGG-Leerwert – Bereich der FAPGG-Probe) ÷ (FAPGG-Leerwert – Bereich der FAPGG-Kontrolle) × 100.

Hemmend Aktivität von Gesetz und Isoact gegen AAPH-vermittelt Hämolyse

Die Oxidation freier Radikalketten von roten Blutkörperchen der Ratte (RBC) durch AAPH-vermittelte Hämolyse (Miki et al., 1987). Rattenblut wurde in heparinisierte Röhrchen gegeben und bei 1000 × zentrifugiertgfür 10 min. Nach dreimaligem Waschen mit 0,15 M NaCl wurden die gepackten RBC durch Zentrifugation bei 1000 × erhaltengfür 10 min. Die unterschiedlichen Mengen an Act und Isoact (die Endkonzentrationen waren 2, 5 und 10 µM) wurden mit 25 µl einer 20-prozentigen RBC-Suspension (V/V, in 10 mM PBS) und 25 µl einer 500 mM AAPH-Lösung bei 37 Grad für 0 gemischt , 1, 1,5, 2, 2,5, 3 und 3,5 h unter leichtem Schütteln. Jede Mischung wurde bei 1000 × zentrifugiertgfür 10 min, und der Überstand wurde bei 536 nm gemessen. Als Blind- bzw. Kontrollgruppe wurde entionisiertes Wasser anstelle von AAPH-Lösung bzw. Probenlösung verwendet. Die Hämolysehemmung (Prozent) von Act und Isoact bei 3 h oder bei 3,5 h wurde wie folgt berechnet: (ΔA536 nmKontrolle – ΔA536 nm Probe) ÷ ΔA536 nmKontrolle × 100.

Antihypertensivum Auswirkungen von Gesetz und Isoact an SHr

Die Wirkungen von oral verabreichtem Act, Isoact und Captopril über eine Ernährungssonde (2,0 × 80 mm) auf den reduzierten SBP und den reduzierten DBP wurden nach der Methode früherer Berichte bestimmt (Lin et al., 2006; Lin et al., 2008; Han et al., 2011). Alle tierexperimentellen Verfahren folgten den veröffentlichten Richtlinien (National Science Council, 1994). Die männlichen SHRs (8 Wochen alt, National Laboratory Animal Center, Taipei) wurden einzeln in Stahlkäfigen gehalten, die bei 24 Grad mit einem 12--h-Hell-Dunkel-Zyklus gehalten wurden, und hatten freien Zugang zu einem Standard-Maus-/Rattenfutter ( Prolab RMH2500, 5P14 Diet, PMI Nutrition International, Brentwood, MO) und Wasser. SHRs wurden zufällig in Kontroll- und Probenbehandlungen für SBP- und DBP-Bestimmungen aufgeteilt (sechs Ratten pro Gruppe). Für ein kurzfristiges antihypertensives Experiment wurden 0,5 ml von 10 mg Act oder Isoact/kg SHR oder 5 mg Captopril/kg SHR einmal oral verabreicht, und der Schwanzblutdruck wurde bei 2, 4, 6 und 24 gemessen h nach einmaliger oraler Verabreichung. Die 0,5 ml destilliertem Wasser wurden für einen Blindversuch verwendet. Ein indirektes Blutdruckmessgerät (BP-98A, Softron Co. Ltd. Tokyo, Japan) wurde verwendet, um SBP und DBP viermal bei jeder Bestimmung für jede Behandlung zu messen.

Daten Analyse

Die Werte werden als Mittelwerte ± Standardabweichung dargestellt und unter Verwendung einer einfachen ANOVA analysiert, gefolgt vom Post-hoc-Tukey-Test für mehrere Mittelwertvergleiche. Die Studentent-Test durchgeführt, wenn nur zwei Datengruppen verglichen wurden (z. B. zwischen Act und Isoact bei gleicher Konzentration). Ein p-Wert < 0,05="" gilt="" als="" statistisch="" signifikant.="" die="" statistische="" auswertung="" erfolgte="" mit="" spss="" für="" windows,="" version="" 10="" (spss,="" inc.,="" chicago,="" il,="">

Acteosidin Cistanche, um das Gedächtnis zu verbessern

Ergebnisse

Aufräumen Aktivität von PPH und Superoxid Radikale

Act, Isoact und 6-O-Acetylact zeigte dosisabhängige DPPH-Abfangaktivitäten bei pH 7,9 (Fig. 2). Die IC50-Werte waren 11,4, 9,48 bzw. 9,55 µM für Act, Isoact und 6-O-Acetylact. Die IC50-Werte der Positivkontrollen von Ascorbinsäure und BHT betrugen 13,1 bzw. 18,5 µM.

Hemmung von Xanthin Oxidase Aktivität

Es wurde gezeigt, dass Act und Isoact eine dosisabhängige Hemmung der Xanthinoxidase aufweisen (Abbildung 3). Die IC50 wurde mit 53,3 bzw. 62,2 µM für Act und Isoact berechnet.

Hemmung von Superoxid Dismutase Aktivität

Da sowohl Act als auch Isoact die Aktivität der Xanthinoxidase hemmten, verwendeten wir das PMS-NADH-System, um Superoxidradikale zu erzeugen (Liu et al., 2004; Lin et al., 2008). Gesetz,

Isoakt und 6-O-Acetylact zeigte dosisabhängige Superoxid-Radikalfänger-Aktivitäten (Fig. 4). Die IC50-Werte waren 66,0, 38,5 bzw. 39,1 µM für Act, Isoact und 6-O-Acetylact. Die IC50-Werte der Positivkontrolle von Ascorbinsäure betrugen 9,0 µM. Aus den Ergebnissen der Abbildungen 2 und 4 war klar, dass Isoact und 6-O-acetylat hatte ähnliche radikalfangende Aktivitäten gegen DPPH- und Superoxidradikale, und daher wurden nur Act und Isoact für weitere Screenings auf biologische Aktivität ausgewählt.

As hemmend Aktivitäten von Gesetz und Isoact

In dem vorläufigen Test fanden wir heraus, dass Act und Isoact die Extinktion des ACE-Substrats FAPGG und seines hydrolysierten Produkts FAP bei 345 nm störten, wie es für einen kontinuierlichen spektrophotometrischen Assay verwendet wurde (Holmquist et al., 1979). Daher wurde die Trennung gekoppelt mit dem Nachweis von Act oder Isoact und FAPGG durch HPLC verwendet, um ACE-Hemmungsaktivitäten zu überwachen. Abbildung 5A bis Abbildung 5D sind typische HPLC-Chromatogramme von 1 0 ul Reaktionsmischungen eines Blindtests (nur FAPGG, Abbildung 5A); Kontrolltest (ACE reagierte mit FAPGG, um FAP zu produzieren, Fig. 5B); 0,5 µmol Act (312,5 µg), ACE und FAPGG (Abbildung 5C); und 0,5 µmol Isoact (312,5 µg), ACE und FAPGG (Fig. 5D). Die Fläche von FAPGG in Fig. 5B war die niedrigste und die in Fig. 5A die höchste von vier typischen HPLC-Chromatogrammen. Die Bereiche von FAPGG in den Fig. 5C und Fig. 5D hängen von den ACE-Hemmaktivitäten unterschiedlicher Konzentrationen von Act und Isoact ab. Die berechneten ACE-Hemmungen von Act und Isoact sind in Abbildung 5E dargestellt. Das Act zeigte höhere ACE-Hemmungsaktivitäten als Isoact, und der IC50 des ersteren wurde mit 472 µM pro Fläche in den HPLC-Chromatogrammen berechnet.

Hemmend Aktivität von Gesetz und Isoact gegen AAPH-vermittelt Hämolyse

Die inhibitorischen Aktivitäten von Act und Isoact gegen AAPH-vermittelte Hämolyse bei Konzentrationen von 2, 5 und 10 &mgr;M wurden über 3,5 h bewertet (Miki et al., 1987). Die Ergebnisse von Abbildung 6A zeigen, dass die Hämolyse in Ratten-RBC nach 3--stündigen oder 3,5--stündigen Reaktionen in Gegenwart von AAPH-Radikalen (als Kontrollgruppen, weißes Zyklussymbol ). In Abwesenheit von AAPH-Radikalen wurde während der 3,5--stündigen Reaktion wenig oder keine Hämolyse beobachtet (als leere Gruppen, schwarzes Kreissymbol). Daher wurde die Hämolysehemmung von Act und Isoact bei 3 h oder bei 3,5 h wie folgt berechnet: (ΔA536 nmcontrol – ΔA536 nmsample) ÷ ΔA536 nmcontrol × 100. Abbildung 6B

zeigt, dass sowohl Act als auch Isoact bei 2, 5 und 10 &mgr;M eine konzentrationsabhängige Hemmung der AAPH-induzierten Hämolyse zeigten, wobei die inhibitorischen Wirkungen von Act signifikant stärker waren als die von Isoact bei jeder verwendeten Konzentration.

Antihypertensivum Auswirkungen von Gesetz und Isoact an SHr

SHRs erhielten eine einzelne orale Verabreichung von Act und Isoact (10 mg/kg SHR), und Änderungen in SBP und DBP wurden über 24 h aufgezeichnet. Wir berichteten zuvor, dass der Blutdruck (SBP und DBP) von SHR während 24- h änderbar war (Lin et al., 2006; Han et al., 2011). Daher wurde ein Vergleich zu einem festgelegten Zeitpunkt (z. B. 2, 4, 6, 8 und 24 h) zwischen Leerwert und Probe statt vor und nach der oralen Verabreichung selbst verwendet. Es wurde festgestellt, dass Act, aber nicht Isoact, SBP und DBP von SHR im Vergleich zur Blindgruppe (destilliertes Wasser) effektiv reduzierte. Der systolische Blutdruck war in der Act-Gruppe nach 2, 4 und 6 h um 18,8, 16,5 bzw. 14,9 mmHg signifikant reduziert, aber die Senkung des systolischen Blutdrucks (3,3 mmHg) 24 h nach der Act-Behandlung war nicht stabil.

künstlerisch bedeutsam (Abbildung 7A). Wie in Abbildung 7B gezeigt, war DBP in der Act-Gruppe nach 2, 4 und 6 h (um 8,5, 7,6 bzw. 12,0 mmHg) verringert, obwohl nur das nach 6 h erhaltene Ergebnis statistisch signifikant war (P< 0.05).="" es="" wurde="" festgestellt,="" dass="" act="" und="" captopril="" (als="" positive="" kontrolle)="" in="" frühen="" stadien="" (2,="" 4="" und="" 6="" h)="" nach="" oraler="" verabreichung="" ähnliche="" wirkungen="" auf="" den="" sbp="">

Acteosidin Cistanche haben gute Wirkungen auf Antioxidantien

DISKUSSION

Aktive Sauerstoffspezies und durch freie Radikale vermittelte Reaktionen sind an degenerativen oder pathologischen Prozessen wie Alterung, Krebs, koronarer Herzkrankheit und Alzheimer-Krankheit beteiligt (Ames, 1983; Gey, 1990; Smith et al., 1996). Mehrere Berichte haben sich auf das Screening konzentriertAntioxidansAktivitäten aus natürlichen Ressourcen. In der vorliegenden Studie verglichen wir zunächst dieAntioxidansAktivitäten von Act, Isoact und 6-O-acetylieren. Act und Isoact sind Strukturisomere, bei denen der Bestandteil der Kaffeesäureeinheit im ersteren an die C-4-Hydroxylgruppe von Glucose und im letzteren an die C-6-Hydroxylgruppe von Glucose gebunden ist. Während die Bestandteile von Rhamnose bzw. 3',4'-Dihydroxyphenylethanol an die C-3- und C-1-Hydroxylgruppen der Glucoseeinheit in demselben Act- und Isoact-Molekül gebunden sind, { {8}}O-Acetylact ist ein Act-Derivat, in dem Essigsäure an die C-6-Hydroxylgruppe in der Glucoseeinheit gebunden ist (Abbildung 1). Kooet al. (2006) berichteten, dass Act und seine Aglykone DPPH-Abfangaktivitäten zeigten, und die Reihenfolge dieser Aktivitäten (ausgedrückt als IC50) war Act (1,28 µM) > Kaffeesäure (2,22 µM) > 3',4'-Dihydroxyphenylethanol ( 7,72 µM) > -Tocopherol (15,1 µM). Im vorliegenden Bericht (Abbildung 2) ist die Reihenfolge der DPPH-Abfangaktivitäten (ausgedrückt als IC50) 6-O-Acetylat (9,55 µM) ≈ Isoact (9,48 µM) > Act (11,4 µM). Diese Werte waren vergleichbar oder besser als die von Ascorbinsäure (IC50 von 13,1 &mgr;M) und BHT (IC50 von 18,5 &mgr;M) zum Abfangen von DPPH-Radikalen. Der höhere IC50-Wert von Act in dem vorliegenden Bericht könnte von der Endkonzentration von 60 µM DPPH anstelle von 30 µM stammen, die von Koo et al. berichtet (2006). Da der DPPH-Radikalassay zur Elektronentransferreaktion gehört (Huang et al., 2005), wird spekuliert, dass das Derivat der C-6-Hydroxylgruppe der Glucoseeinheit, wie die Acetylgruppe in {{21 }}O- Acetylat- und Kaffeesäureeinheit in Isoact, können leichter eine Elektronentransferreaktion bereitstellen als diejenigen der C-6-freien Hydroxylgruppe in der Glucoseeinheit von Act für den DPPH-Abfangassay.

Handlung, 6-O-Acetylat und Isoact wurde berichtet, dass sie in vitro unter Verwendung des Xanthin/Xanthinoxidase-Systems zur Erzeugung von Superoxidradikalen Superoxid-fangende Aktivität besitzen (Wang et al., 1996; Gao et al., 1999). Unsere vorliegende Studie zeigte jedoch, dass Act Xanthinoxidase-hemmende Wirkungen zeigte (Fig. 3). Daher wurde das Superoxidradikal durch Verwendung des PMS-NADH-Systems im vorliegenden Bericht (Liu et al., 2004; Lin et al., 2008) anstelle des Xanthin/Xanthinoxidase-Systems erzeugt. Tatsächlich nutzten Wang et al. das Xanthin/Xanthinoxidase-System zur Erzeugung von Superoxidradikalen. (1996) erhielten einen IC50-Wert von 63 µM Act gegen Superoxid-Radikale, und dieser Wert liegt nahe bei dem für die Hemmung der Xanthinoxidase-Aktivität durch Act, wie in der vorliegenden Studie berichtet (53,3 µM). Es wurde berichtet, dass Kaffeesäure Xanthinoxidase-hemmende Aktivitäten zeigte (Chiang et al., 1994). Es kann spekuliert werden, dass die Superoxid-fangenden Aktivitäten unter Verwendung des Xanthin/Xanthinoxidase-erzeugenden Systems einiger Phytochemikalien mit Strukturen, die mit Kaffeesäuren assoziiert sind, wie Act oder Isoact (Wang et al., 1996; Gao et al., 1999), haben könnten zumindest teilweise zur Hemmung der Xanthinoxidase beigetragen. Interessanterweise haben Wang et al. (1996) fanden heraus, dass Act (0,5 und 2,5 mM) die Xanthinoxidaseaktivität nicht hemmte, die durch eine Sauerstoffelektrode für den Sauerstoffverbrauch während der Xanthinoxidation bestimmt wurde. Daher ist es wichtig zu bedenken, dass verschiedene Methoden zur Bestimmung der Superoxid-Abfangaktivität widersprüchliche Daten liefern können.

Liet al. (1993) haben über ein ähnliches Ausmaß der Hemmung von Act und Isoact gegen AAPH-vermittelte Hämolyse in den RBC von Mäusen berichtet. Wir haben hier jedoch gezeigt, dass Act eine viel höhere inhibitorische Aktivität gegen AAPH-induzierte Hämolyse in RBC von Ratten aufwies als Isoact ( 6 ). Es ist unklar, ob eine solche Inkonsistenz möglicherweise auf den Unterschied zwischen den Nagetierarten zurückzuführen ist.

Kanget al. (2003) berichteten, dass Act ACE-hemmende Aktivitäten zeigte und der IC50-Wert 373,3 µg/ml betrug, was unter Verwendung von Hip-His-Leu als Substrat zu 598 µM berechnet wurde. Im vorliegenden Bericht zeigte das Act höhere ACE-Hemmungsaktivitäten als Isoact, und der IC50 des ersteren wurde mit 472 µM pro Fläche in den HPLC-Chromatogrammen berechnet (Abbildung 5). Es wurde berichtet, dass die Wirkung durch Stickoxid vermittelte entspannende Wirkungen auf Endothel-intakte Aortenringe von SD-Ratten ausübt (Wong et al., 2001). Obwohl gezeigt wurde, dass Act bei Wistar-Ratten blutdrucksenkend wirkt,

die Studie verwendete eine intravenöse Injektion von Act in eine anästhesierte Ratte, um den Adsorptionsfaktor auszuschließen (Ahmad et al., 1995). Hier verabreichten wir Act oral an SHRs und bestimmten Veränderungen des Blutdrucks. Wir fanden heraus, dass die orale Verabreichung, nicht aber Isoact, blutdrucksenkende Wirkungen zeigte, indem SBP und DBP über 24 Stunden nach einer einzigen Verabreichung gesenkt wurden (Abbildung 7). Act bei einer Dosis von 10 mg/kg Körpergewicht hatte eine ähnliche Wirkung wie Captopril in einer Dosis von 5 mg/kg SHR bei der Senkung des SBP und war besser als Captopril bei der Senkung des DBP.

Abschließend Act ausgestelltAntioxidansAktivitäten, ACE-hemmende Aktivitäten und blutdrucksenkende Wirkungen auf SHRs. Die hier vorgestellten Ergebnisse werden den Bemühungen zugute kommen, pflanzliche Arzneimittel oder verwandte Produkte unter Verwendung des Act, der in vielen Pflanzen und pflanzlichen Arzneimitteln gefunden wurde, für den antioxidativen Schutz und die therapeutische Wirkung in der Zukunft zu entwickeln.

CistancheActeosidfür Antioxidation und Anti-Aging

1Abteilung Lebensmittelwissenschaft und Biotechnologie, National Chung Hsing University, Taichung, Taiwan

2Ko Da Pharmaceutical Co., Ltd, Tao-Yuan, Taiwan

3School of Pharmacy, Taipei Medical University, Taipei, Taiwan

4 Graduate Institute of Biomedical Materials and Engineering, Taipei Medical University, Taipei, Taiwan

5Traditional Herbal Medicine Research Center, Taipei Medical University Hospital, Taipeh, Taiwan

6 Graduate Institute of Pharmacognosy, Taipei Medical University, Taipei, Taiwan

(Eingegangen am 12. März 2012; Akzeptiert am 20. April 2012)

ZITIERTE LITERATUR

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