Fortschritte in der Dermatologie unter Verwendung von DNA Aptamer "Aptamin C" Innovation: Prävention von oxidativem Stress und Wirkungsmaximierung von Vitamin C durch Antioxidation

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Sooho Choi PhD1|Jeongmin Han Ph.D. Kandidat2|Ji Hyun Kim MS-Kandidat1|A-Ru Kim Ph.D. Kandidat3|Sang‐Heon Kim Ph.D. Kandidat3|Weontae Lee Ph.D., Professor2|Moon‐Young Yoon Ph.D., Professor3|Gyuyoup Kim PhD1|Yoon‐Seong Kim Ph.D., Professor1

Abstrakt

Hintergrund:Vitamin C(auch bekannt als L‐Ascorbinsäure) spielt eine entscheidende Rolle bei der Reduktion reaktiver Sauerstoffspezies (ROS) und der Zellregeneration, indem es die Zellen vor oxidativem Stress schützt. Obwohl Vitamin C in kosmetischen und therapeutischen Märkten weit verbreitet ist, gibt es erhebliche Hinweise darauf, dass Vitamin C leicht untergehtOxidationB. durch Luft, pH-Wert, Temperatur und UV-Licht bei der Lagerung. Dieser Mangel an Vitamin C verringert seine Wirksamkeit als Antioxidans und reduziert die Haltbarkeit von Produkten, die Vitamin C als Inhaltsstoff enthalten. Um den Mangel an Vitamin C zu überwinden, haben wir Aptamin C entwickelt, ein innovatives DNA-Aptamer, das die antioxidative Wirksamkeit von Vitamin C maximiert, indem es an die reduzierte Form von Vitamin C bindet und dessen Wirkung verzögertOxidation.

Methoden:Die Bindung von Aptamin C an Vitamin C wurde mittels ITC-Analyse bestimmt. Das ITC-Experiment wurde mit 0,2 mmol/L durchgeführtVitamin Cdas 25 Mal in 2-µl-Aliquots in die 1,8-ml-Probenzelle injiziert wurde, die das Aptamin C in einer Konzentration von 0,02 mmol/l enthielt. Die Daten wurden unter Verwendung des Origin-Programms für ITC v.5.0 an eine Bindungsisotherme an einer Stelle angepasst.

Ergebnisse:Zur Untersuchung der Wirkung von Aptamin C uVitamin C-Komplex in menschlicher Haut wurden sowohl In-vitro- als auch klinische Tests durchgeführt. Wir haben beobachtet, dass der Komplex aus Aptamin C und Vitamin C bei der Faltenverbesserung, dem Aufhellungseffekt und der Erhöhung der Hydratation signifikant wirksam war. Im klinischen Test zeigten die mit dem Komplex behandelten Probanden eine dramatische Verbesserung der Hautreizung und des Juckreizes. Der Aptamin C-Komplex zeigte im Test keine nachteilige Reaktion.

Fazit:Zusammengenommen zeigten diese Ergebnisse, dass Aptamin C, eine innovative neuartige Verbindung, möglicherweise als wichtiger kosmetischer Inhaltsstoff für eine Reihe von Hauterkrankungen dienen sollte.

SCHLÜSSELWÖRTERAntioxidation, Aptamin C (Vitamin C bindendes Aptamer),Oxidation, oxidativen Stress,Vitamin C(L‐Ascorbinsäure)

Zistanchebesitzen eine starke Antioxidationsfähigkeit

1|EINLEITUNG

Reaktive Sauerstoffspezies (ROS) sind chemisch reaktive chemische Spezies, die Sauerstoff enthalten, der eine wichtige Rolle bei der Zellsignalisierung und Homöostase spielt.1-3 Dazu gehören nicht nur positive Effekte wie die Induktion von Wirtsabwehrgenen und die Mobilisierung von Ionentransportsystemen, sondern auch spielt auch eine Rolle bei der Apoptose (programmierter Zelltod).4,5ROS-Spiegel können durch Umweltstress erhöht werden, was zu Schäden an den Zellstrukturen führt.3 Dieses Phänomen wird „oxidativer Stress“ genannt. Oxidativer Stress ist eine der Hauptursachen für verschiedene Krankheiten, darunter neurodegenerative Erkrankungen, Lou-Gehrig-Krankheit, Autismus, Multiple Sklerose und Hautkrankheiten.6-15 Darüber hinaus hat oxidativer Stress einen direkten Einfluss auf den Hautalterungsprozess16; Proteine, Lipide und DNA reagieren empfindlich auf oxidativen Stress, der durch ROS verursacht wird.17 Antioxidantien sind hochwirksam im Hautschutz, da sie direkt auf ROS reagieren und sie daran hindern, die biologischen Zielmoleküle zu erreichen.18,19 Antioxidantien wie zVitamin C, Vitamin E, Coenzym Q10 und polyphenolische Verbindungen schützen die Haut vor Schäden durch ROS. Antioxidantien helfen dadurch, verschiedenen Hautkrankheiten vorzubeugen und sie zu behandeln und den Hautalterungsprozess zu verlangsamen.20 Die Verwendung von Vitamin C in der Industrie beruht vor allem auf seinen antioxidativen Eigenschaften, die sich daraus ergebenVitamin Cdie Fähigkeit von , freie Sauerstoffradikale durch einen als Radikalfänger bezeichneten Prozess zu neutralisieren.21,22 Aufgrund dieser gleichen antioxidativen Eigenschaften ist das Molekül selbst jedoch anfällig für Abbau durchOxidation. Um dieses Problem zu lösen, haben wir Aptamin C entwickelt, ein DNA‐Aptamer, das spezifisch an Vitamin C bindet und die Oxidation von Vitamin C hemmt. Aptamere sind einzelsträngige DNA‐ oder RNA‐basierte Oligonukleotide, die in der Lage sind, eine Vielzahl von Molekülen selektiv zu binden. Aptamere werden üblicherweise durch ein In-vitro-Selektionsverfahren identifiziert, das als systematische Evolution von Liganden durch exponentielle Anreicherung oder "SELEX" bezeichnet wird. Wir haben festgestellt, dass Aptamin C das hemmtOxidationvon Vitamin C aus mehreren Oxidationsmitteln und behält die antioxidative Aktivität während der Langzeitlagerung bei. Um die Sicherheitsbewertung von Aptamin C zu bestätigen, wurden Experimente auf zellulärer Ebene durchgeführt und direkt auf Menschen angewendet, und es wurde keine Toxizität beobachtet. Hauterkrankungen wie atopische Dermatitis, Psoriasis und Akne stehen im Zusammenhang mit der Immunantwort und ROS.23Vitamin Chat die Fähigkeit, ROS zu entfernen und hat eine entzündungshemmende Wirkung.24 Aptamin C verhindertOxidationvon Vitamin C und maximiert seine Wirksamkeit durch langsame Freisetzung. Wir erwarten daher, dass der Aptamin C-Vitamin C-Komplex die synergetische Wirkung zeigen wird.

2|MATERIALEN UND METHODEN

2.1|Aptamer‐Screening gegen Vitamin C mit reduziertem Graphenoxid

Dieses Verfahren wurde durchgeführt, indem das Verfahren der vorherigen Forschung modifiziert wurde.25 Die ssDNA-Kandidaten, die spezifisch an binden könnenVitamin Cwurden aus einer zufälligen ssDNA-Bibliothek entwickelt, die aus etwa 1X1018 verschiedenen Sequenzen besteht. Für die ssDNA-Bibliothek verwendeten wir eine speziell angefertigte Sequenz, die 60mer groß ist und 30 zufällig generierte Nukleotidsequenzen und eine Primerstelle für die Amplifikation enthält (5′‐ATGCGGATCCCGCGC‐(N)30‐GCGCGAAGCTTGCGC‐3′). Wir führten insgesamt fünf Runden durch, während wir die experimentellen Bedingungen änderten, um eine spezifischere Sequenz auszuwählen. Das Gesamtvolumen für die Reaktion betrug 200 &mgr;l. Etwa 20 μl 10× Bindungspuffer (10× PBS mit 10 mmol/l MgCl2), 80 μl rGO (5 mg/ml, verdünnt in Wasser) und 200 Picomol ssDNA-Bibliothek (20 μl 100 μmol/l Stammlösung). ) wurden zugegeben und dH2O auf 200 μL aufgefüllt. Die Reaktion lief 30 Minuten lang ab, um die ssDNA-Bibliothek an rGO zu binden, und dann wurde das Gemisch 20 Minuten lang bei 20 000 g zentrifugiert, um den Überstand zu entfernen. Das rGO-Pellet wurde 1 Mal mit 200 &mgr;l Bindungspuffer gewaschen, der die gleiche Konzentration wie die Zielbindungsbedingung jeder Runde hat. Um die Kandidaten zu eluieren, werden 200 Nanomol vonVitamin Cverdünnt in 200 μl Bindungspuffer wurden zu dem rGO-Pellet gegeben, und der Elutionsschritt dauerte 1 Stunde. Eluierte ssDNA wurde durch 20-minütige Zentrifugation bei 20 000 g geteilt und amplifiziert. Wir haben eine EtOH-Präzipitation durchgeführt, um Verunreinigungen mit Ausnahme von ssDNA vor der Amplifikation zu eliminieren. Wir haben asymmetrische PCR durchgeführt, um amplifizierte ssDNA zu erhalten. Das Verhältnis von Forwarding-Primer zu Reverse-Primer der asymmetrischen PCR betrug 10:1. Wir führten eine Elektrophorese auf 2,5-prozentigem Agarosegel durch, um das PCR-Produkt mit einigen Mikrolitern davon zu bestätigen. Asymmetrische PCR kann nicht nur ssDNA produzieren. Also haben wir die Crush-and-Soak-Methode durchgeführt, um die ssDNA-Kandidaten zu isolieren. Für das Verfahren führten wir eine Elektrophorese auf einem 12-prozentigen nativen Polyacrylamidgel durch und färbten das Gel mit Ethidiumbromid (EtBr). Zur Trennung von doppelsträngiger DNA (dsDNA) und ssDNA wurde der mit ssDNA gefärbte Teil des Gels ausgeschnitten, pulverisiert und ssDNA mit Crush-and-Soak-Puffer (500 mmol/L NH4OAc, 0,1 % SDS, 0,1 mmol/L EDTA) extrahiert. über Nacht. Das pulverisierte Gel wurde durch Zentrifugation abgetrennt. Der Überstand, der ssDNA enthält, wird konzentriert und gereinigt, indem eine EtOH-Präzipitation durchgeführt wird. Getrocknete ssDNA wurde mit sterilisiertem dH 2 O gesammelt und für die nächste Runde als Bibliothek verwendet.

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2.2|Experiment zur isothermen Titrationskalorimetrie (ITC).

Isothermes Titrationskalorimetrie-Experiment wurde unter Verwendung eines VP-ITC-Systems (MicroCal Inc Northampton) bei 25 Grad in einer phosphatgepufferten Kochsalzlösung durchgeführt, die aus 1 mmol/L Magnesiumchlorid (pH 7,4) bestand. Vor jedem Titrationsversuch Aptamin C 2 mL uVitamin C600 µL-Proben wurden für 30 Minuten unter Vakuum ohne Rühren bei einer Temperatur einige Grad unter der des Experiments entgast. Wir bereiteten 0,2 mmol/L Vitamin C vor, das 25 Mal in 2-µL-Aliquots in die 1,8-ml-Probenzelle injiziert wurde, die das Aptamin C in einer Konzentration von 0,02 mmol/L enthielt. Die Daten wurden unter Verwendung des Origin-Programms für ITC v.5.0 (MicroCal Inc.) an eine Bindungsisotherme an einer Stelle angepasst.

2.3|Fluoreszenzbasierte Mikroplatten‐Assays für die Vitamin C‐Oxidation

OxidationvonVitamin Cwurde durch Nachweis des oxidierten Produkts Dehydroascorbat (DHA) unter Verwendung einer modifizierten Version der von Vislisel et al. beschriebenen Methode gemessen.7 Bei dieser Methode wird DHA durch Reaktion mit o‐Phenylendiamin (OPDA) unter Bildung des fluoreszierenden Kondensationsprodukts 3‐( Dihydroxyethyl)furo[3,4‐b]chinoxalin‐1‐on. Der Assay wurde wie folgt in schwarzen 384-Well-Platten (Greiner Bio-One) durchgeführt. Aptamere wurden zuerst in phosphatgepufferter Kochsalzlösung, pH 7,2, die 1 mM MgCl2 enthielt, in einer Konzentration von 200 µmol/L gelöst, dann durch Erhitzen auf 95 Grad gefaltet und 15 Minuten lang langsam auf Raumtemperatur abkühlen gelassen. Die gefalteten Aptamere wurden dann 1:1 (v:v) in eine frisch zubereitete Lösung von 5 mmol/L verdünntVitamin Cin Assay-Puffer [50 mmol/L Natriumacetat, 1 Prozent (w/v) BSA, 0,05 Prozent (v/v) Tween 20, 1 mM MgCl2 (Sigma, alle Komponenten), eingestellt auf pH 5,5] und die Mischung wurde 30 Minuten lang bei Raumtemperatur inkubiert, um zu ermöglichen, dass Aptamere vor der Zugabe von Oxidationsmittel binden. Oxidationsmittel wurden dann zu den Vitamin C/Aptamer-Lösungen in Konzentrationen von (EM) H2O2 (Sigma) hinzugefügt. Oxidationsmittel wurden in Assaypuffer auf ihre Arbeitskonzentrationen vorverdünnt. Die Proben wurden dann 10 Minuten lang bei Raumtemperatur inkubiert, bevor OPDA (Sigma) in einer Konzentration von 5,5 mmol/l in Assaypuffer zugegeben wurde. Unmittelbar nach der Zugabe von OPDA wurde die Fluoreszenz der Proben bei 425 nm unter Verwendung eines SpectraMax® i3X-Plattenlesegeräts (Molecular Devices) mit Anregung bei 345 nm über einen Zeitraum von 45 Minuten mit Messungen alle 60 Sekunden bestimmt. Alle Proben und Reagenzien enthaltenden Gefäße wurden in Folie eingewickelt, um sie während aller Inkubationen, die für die Fluoreszenzassays durchgeführt wurden, vor Licht zu schützen.

2.4|Messung der Vitamin-C-Reduktion mittels DCPIP (2,6-Dichlorphenolindophenol)

Um die Reduzierung von zu bestimmenVitamin Chaben wir die Experimente unter Verwendung der DCPIP-Reaktion durchgeführt. Vitamin C reagiert mit DCPIP und verändert die Farbe von blau nach farblos. Das hergestellte Vitamin C wurde mit 5 % Aptamin CTM behandelt, und das unbehandelte Vitamin C wurde 8 Wochen bei Raumtemperatur inkubiert. Die Probe wurde nach 2, 4 und 8 Wochen gemessen. Etwa 2 ml DCPIP wurden mit einer Pipette in den Erlenmeyerkolben gegeben und das erste unbehandelte Vitamin C wurde hinzugefügt, bis die Lösung farblos wurde. Die Menge anVitamin Chinzugefügt wurde gemessen und mit anderen Proben wiederholt. Der Reduktionsgrad jeder Probe wurde gemäß diesen Daten berechnet.

2.5|In‐vitro‐Studie zur Anti‐Falten‐Wirkung an menschlichen dermalen Fibroblasten

Um die Zelllebensfähigkeit in humanen dermalen Fibroblasten zu bewerten, wurden Zellen mit unterschiedlichen Endkonzentrationen von Aptamin C mit behandeltVitamin C(Aptamin C ug plus Vitamin C ug/ml) {{0}}.01 plus 0,5 ug/ml, 0,1 plus 5 ug/ml, 0,5 plus 25 ug /ml, 1 plus 50 ug/ml und 2 plus 100 ug/ml. Und dann wurden die Zellen bei Konzentrationen von Aptamin C mit Vitamin C behandelt, um intrazelluläre Kollagen-, intrazelluläre Kollagenase- (MMP-1) und Elastase-Aktivität nachzuweisen.

Humane dermale Fibroblasten (HDFs) wurden auf der Grundlage der „Guidelines for Effectiveness Evaluation of Functional Cosmetics (I)“ von MFDS ausgewählt. HDFs wurden in einer DMEM/F12 3:1-Mischung mit hohem Glukosegehalt, ergänzt mit 10 % FBS und 1 % Antibiotikum-Antimykotikum, in einer befeuchteten Atmosphäre mit 5 % CO2 bei 37 °C kultiviert.

Die HDFs (5 × 104 Zellen/Vertiefung) wurden in Platten mit 24 Vertiefungen ausgesät und für 24 Stunden inkubiert und mit verschiedenen Konzentrationen von Aptamin C behandeltVitamin Cund 24 Stunden inkubiert. Nach 24 Stunden wurde der Überstand gesammelt und die Menge des in das Medium freigesetzten Prokollagens bei 450 nm unter Verwendung des Prokollagen Typ IC-Peptid (PIP) ELISA Kit gemessen. Der Grad der Kollagenproduktion wurde anhand des Gesamtproteingehalts kalibriert und mit TGF‐1 als Positivkontrolle verglichen. Als Lösungsmittelkontrolle wurden Medien ohne Testmaterialien verwendet.

Die HDFs (5 × 104 Zellen/Vertiefung) wurden in Platten mit 24 Vertiefungen ausgesät und für 24 Stunden inkubiert und mit verschiedenen Konzentrationen von Aptamin C behandeltVitamin Cund 48 Stunden inkubiert. Nach 48 Stunden wurde die Aktivität der Kollagenase bei 450 nm unter Verwendung des MMP-1 Human ELISA Kit gemessen. Die MMP-1-Aktivität wurde anhand des Gesamtproteingehalts bewertet und mit TGF-1 als Positivkontrolle verglichen. Als Lösungsmittelkontrolle wurden Medien ohne Testmaterialien verwendet.

Alle Daten wurden als Mittelwert ± Standardabweichung ausgedrückt und stammten aus 3 unabhängigen Experimenten. Die statistische Analyse wurde mit dem t-Test unabhängiger Stichproben unter Verwendung des SPSS®-Softwareprogramms (IBM) auf dem Signifikanzniveau P < 0,05="">

2.6|Messung von Hautfalten durch 3D-Bildanalysesystem

An dieser Studie nahmen 22 weibliche Probanden (Durchschnittsalter: 50,05 ± 2,94 Jahre) teil. Die Hautfalten der Krähenfüße wurden durch ein 3D-Bildanalysesystem zu Beginn, nach 4 und 8 Wochen bewertet. Die Hautfeuchtigkeit wurde mit der Kapazitätsmethode und der TEWL mit der Wasserdiffusionsmethode der Hautoberfläche und die Hautelastizität mit der Saugmethode zu Studienbeginn sowie 2, 4 und 8 Wochen nach der Behandlung bewertet. Auch Selbstfragebögen zur Wirksamkeit wurden von den Probanden 2, 4 und 8 Wochen ausgefüllt, und der Fragebogen zur Verwendbarkeit wurde von den Probanden 8 Wochen nach der Behandlung ausgefüllt. Alle erhaltenen Daten wurden mit der SPSS®-Software statistisch analysiert. Die Faltenparameter der Krähenfüße wurden mit PRIMOS® Premium (GFMesstechnik GmbH) ausgewertet. Dieses System ermöglichte die quantitative Analyse der Rauhigkeit, Tiefe, Fläche und des Volumens der auf der Haut hervorstehenden Falte. Das Bild wurde im selben Bereich in Bezug auf Hautfaltenparameter analysiert (1, durchschnittliche Faltentiefe; 2, mittlere Tiefe der größten Falte; 3, max. Tiefe der größten Falte; 4, Gesamtfaltenfläche; 5, Gesamtfaltenvolumen; 6 , Gesamtformfaktor Falten; 7, Gesamtlänge der Falten; 8, Ra; 9, Ry; und 10, Rz) zu Studienbeginn, 4 und 8 Wochen nach der Behandlung mit Primos 5.8 E ver. Software.

3|ERGEBNISSE

3.1|Um rGO‐SELEX erfolgreich mit einem instabilen Ziel durchzuführen, war ein rigoroses Herangehen an die Pufferherstellung erforderlich

Die ssDNA-Bibliothek, die über π‐π‐Stapelwechselwirkungen zwischen den aromatischen Ringen der Graphenoberfläche und den DNA‐Basen 26,27 und nicht gebundener ssDNA auf rGO an rGO gebunden war, wurde getrennt und durch Zentrifugation entfernt. An der rGO-Oberfläche adsorbierte ssDNA wurde durch Behandlung mit der Zielverbindung eluiert. Literaturberichten zufolge ändert sich die Konformation des Aptamers nach der Bindung an das Ziel und durch Schwächung der π‐π‐Stapelwechselwirkungen mit rGO.28-31 Dieser Vorgang wurde fünf Runden lang wiederholt. Jede nachfolgende Runde wurde mit härteren Pufferbedingungen und kürzeren Elutionszeiten fortgesetzt. Diese Leistung ermöglichte es uns, ssDNA mit besserer Spezifität für die Zielverbindungen aufrechtzuerhalten.

Die NGS-Daten der durch das rGO-SELEX-Verfahren erzeugten angereicherten Bibliothek ergaben 404071 Sequenzen. Wir haben 119 Sequenzen aus diesen Daten ausgewählt, diese in 11 Gruppen basierend auf Strukturähnlichkeit sortiert und repräsentative Sequenzen für Aptamerkandidaten ausgewählt (Abbildung 1A).

3.2|Aptamin C auswählen

Die Sekundärstrukturen von Aptamin C-Kandidaten wurden mithilfe der kostenlosen Software M‐Fold vorhergesagt.32,33 Die Kandidaten wurden nach ihrer Position, Länge, Form und Anzahl von Stamm und Schleife der Struktur mit dem höchsten Potenzial gruppiert (Abbildung 1B). DHA, Oxid vonVitamin C, wird durch seine Reaktion mit o‐Phenylendiamin (OPDA) nachgewiesen, das die Rolle eines Indikators spielt.34 Wenn Aptamer bindet und seineOxidation, zu Vitamin C und verhindert dessen Oxidation, ist das Fluoreszenzsignal von 3‐(Dihydroxyethyl)‐furo‐[3,4‐b]chinoxalin‐1‐on, dem Kondensationsprodukt von Vitamin C und OPDA, niedriger als das von Kontrolle ohne Aptamer. Eine Parzelle jedes Aptamer-Kandidaten, gemischt mit Vitamin C und Oxidationsmittel, mit den positiven Kontrollen,Vitamin Cplus Oxidationsmittel und Scramble-Sequenzen gemischt mit Vitamin C und Oxidationsmittel (Abbildung 1C). Es wurde gezeigt, dass fünf Aptamere, Aptamin Cb, Cc, Cf, Cg und Ck, Antioxidationswirkungen haben.

3.3|Hemmung der Vitamin-C-Oxidation durch Aptamin C

Aptamin C hat eine hohe Bindungsaffinität fürVitamin C. Die Bindung von Aptamin C an Vitamin C wurde mittels ITC-Analyse bestimmt. Aus der Bindungsisotherme können die Enthalpie (ΔH), Entropie (ΔS) und Stöchiometrie (n) der Bindungsreaktion erhalten werden. Die exotherme Bindung von Aptamin Cb wurde aus der ITC-Messung nachgewiesen, und die Enthalpie (ΔH) wurde als 302,5 ± 3,788 berechnet, die Entropie (ΔS) wurde als 18,9 berechnet, die Stöchiometrie (n) wurde als 56,7 ± {{21 }}.426, und die Dissoziationskonstanten (Kd) wurden als 2,13 uM für Vitamin C berechnet. Die exotherme Bindung von Aptamin Cf wurde aus der ITC-Messung nachgewiesen, und die Enthalpie (ΔH) wurde als 279,2 ± 2,992 berechnet, die Entropie (ΔS) wurde berechnet als 18,4, die Stöchiometrie (n) wurde als 167 ± 1,15 berechnet, und die Dissoziationskonstanten (Kd) wurden als 0,89 uM für Vitamin C berechnet. Die exotherme Bindung von Aptamin Ck wurde aus der ITC-Messung nachgewiesen, und die Enthalpie (ΔH ) wurde als 250,4 ± 3,742 berechnet, die Entropie (ΔS) wurde als 19,8 berechnet, die Stöchiometrie (n) wurde als 82,2 ± 0,732 berechnet und die Dissoziationskonstanten (Kd) wurden als 0,90 µmol/L für berechnet Vitamin C (Abbildung 2A). Die ITC-Messungen zeigen, dass die Änderung der Entropie bei Assoziation mit dem Aptamin C eine Hauptantriebskraft für istVitamin C. VerhindernOxidationvon Vitamin C in flüssigem Zustand wurden alle Lösungen mit deionisiertem Wasser hergestellt, das mit Stickstoff behandelt wurde. Die Fluoreszenz wurde ausgedrückt und quantitativ analysiert, wenn OPDA (o‐Phenylendiamin) an DHA gebunden erzeugt wurdeOxidationvon Vitamin C. Der Oxidationsgrad von Vitamin C gemäß der Konzentration von Aptamin C (125, 250, 500 und 1000 nmol/l) wurde verglichen und durch einen OPDA-Assay bestätigt. Die Ergebnisse zeigten, dass dieVitamin CDie Umwandlung in Dehydroascorbinsäure war langsamer, wenn die Konzentration von Aptamin C höher war. (Abbildung 2B). Diese Daten belegen, dass Aptamin C ein dosisabhängiger Inhibitor der Vitamin-C-Oxidation ist.

Wir führten Experimente durch, um festzustellen, ob Aptamin C das verhindern könnteOxidationvon Vitamin C über einen langen Zeitraum. Aptamin C co-behandeltVitamin Cund unbehandeltes Vitamin C wurden Licht ausgesetzt und 8 Wochen bei Raumtemperatur stehen gelassen. Als Ergebnis wurde, wenn unbehandeltes Vitamin C allein gelassen wurde, der Reduktionsgrad in 2 Wochen auf weniger als die Hälfte verringert, und fast alle waren nach 4 Wochen oxidiert. In Anwesenheit von Aptamin C wurde Vitamin C nach 8 Wochen auf etwa die Hälfte reduziert (Abbildung 2C). Dies deutet darauf hin, dass Aptamin C die Oxidation von Vitamin C über einen langen Zeitraum verhindert.

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3.4|Analyse der Aktivität von intrazellulärer Kollagenase (MMP‐1) und Kollagen

Bei der Analyse der Kollagenaseaktivität war die Produktion von Matrix-Metalloproteinase-1 (MMP-1) dosisabhängig signifikant reduziert, mit 7,06 Prozent, 9,29 Prozent und 31,81 Prozent bei Konzentrationen von {{1{ {12}}}}.01 plus 0,5 ug/ml, 0,1 plus 5 ug/ml und 0,5 plus 25 ug/ ml, bzw. (Abbildung 3A). Bei der Analyse der Kollagensynthese war das carboxyterminale Peptid (PIP) des Typs Prokollagen Typ Ι dosisabhängig signifikant erhöht, mit einem Anstieg von 25,{{20}} Prozent bei 0,01 plus 0,5 ug/ml , 41,99 Prozent bei 0,1 plus 5 ug/ml und 71,18 Prozent bei 0,5 plus 25 ug/ml (Abbildung 3B).

3.5|Eine klinische Studie über die Auswirkungen der Hautfaltenverbesserung auf die menschliche Haut

Eine statistische Analyse der Faltenparameter wurde durch ein 3D-Bildanalysesystem durchgeführt, um die Hautfaltenverbesserungswirkungen des Testprodukts auf menschlicher Haut zu bewerten. Im Vergleich zur Kontrollgruppe war der Parameter „Durchschnittliche Faltentiefe“ nach 4 Wochen um 4,77 Prozent und nach 8 Wochen um 4,25 Prozent verringert, der Parameter „Mittlere Tiefe der größten Falte“ war nach 4 Wochen um 3,37 Prozent und nach 8 Wochen um 4,53 Prozent verringert. Der Parameter „Maximale Tiefe der größten Falte“ war nach 4 Wochen um 4,36 Prozent und nach 8 Wochen um 7,19 Prozent verringert, der Parameter „Gesamtlänge der Falten“ war nach 4 Wochen um 1,61 Prozent und nach 8 Wochen um 2,67 Prozent verringert, der Parameter „Ra“ war um 4,22 Prozent verringert nach 4 Wochen und 3,90 Prozent nach 8 Wochen war der „Ry“-Parameter nach 4 Wochen um 2,66 Prozent und nach 8 Wochen um 7,11 Prozent verringert, der „Rz“-Parameter war nach 4 Wochen um 3,69 Prozent und nach 8 Wochen um 6,22 Prozent verringert, die Abnahme betrug 3,69 Prozent -7,11 Prozent (Abbildung 4).

4|FAZIT

Vitamin Cist ein kommerziell wichtiges, aber instabiles Molekül, daher ist die Verbesserung seiner Stabilität für verschiedene Marktsektoren von Interesse. Unsere Arbeit zeigt, dass Aptamin C, DNA‐Aptamere, möglicherweise die Haltbarkeit verlängert und die Wirksamkeit solcher Produkte durch Verzögerung erhöhtVitamin C Oxidationin einer Lösung. Wir zeigten die klinische Wirksamkeit des Aptamin C-Komplexes bei der Faltenverbesserung und Hautfeuchtigkeit. Der Aptamin-C-Komplex könnte auch helfen, die Haut bei Hautreizungen zu entlasten.

Verbesserung der Hautaufhellung