Anti-Aging – Klotho-Gen-aktiviertes Gerüst fördert die verjüngende Wundheilungsreaktion in menschlichen, aus Fettgewebe gewonnenen Stammzellen

3. Diskussion

Ziel dieser Studie war es, die funktionellen Auswirkungen eines Anti-Aging-Mittels zu untersuchen -Klotho-Gen-aktiviertes Gerüst auf menschlichen ADSCs für verbesserte Wundheilungsanwendungen. Insgesamt stellten wir fest, dass das genaktivierte Gerüst eine kontrollierte Aktivierung der Regenerationsfähigkeiten von ADSCs ermöglicht, wie in Abbildung dargestellt5. Insbesondere verbesserte das genaktivierte Gerüst vorübergehend die Stammzellen von ADSCs durch die Aktivierung des Transkriptionsfaktors Oct-4. Das genaktivierte Gerüst förderte auch die frühe Aktivierung des antifibrotischen Gens TGF- 3, ein entscheidender Faktor für eine kontrollierte Heilung mit reduzierter Narbenbildung. Darüber hinaus kontrollierten die aktivierten ADSCs zeitlich die endotheliale Angiogenese und unterstützten die Heilung dermaler Fibroblasten durch parakrine Signale. Zur Reifung hin kontrollierten die ADSCs auch die Aktivierung der profibrotischen Reaktion in den dermalen Fibroblasten. Unterdessen regenerierten die ADSCs auf dem genaktivierten Gerüst effektiv die dermale Basalmembran, indem sie die Laminin- und Kollagen-IV-Ablagerung verstärkten. Diese Reaktion war außerdem mit einer verringerten Narbenbildung verbunden -SMA-Proteinexpression und verbesserte qualitative Elastinmatrixablagerung. Unsere Studie hat gemeinsam festgestellt, dass die -Klotho-Gen-aktiviertCistanchebesitzt enormes Potenzial fürWundheilungund könnteWeiterentwicklung der stammzellbasierten Therapie für verjüngende Heilanwendungen.

Abbildung 5. Eine schematische Darstellung der funktionellen Auswirkungen des B-Klotho-Gen-aktivierten Gerüsts auf menschliche ADSCs für Wundheilungsanwendungen. Die wichtigsten Ergebnisse dieser Studie sind (1) die vorübergehende Verbesserung der Stammzellpluripotenz und der antifibrotischen Reaktion, (2) eine verbesserte parakrine Kontrolle in Richtung Angiogenese und profibrotischem Kollagenumbau in dermalen Fibroblasten und letztendlich (3) eine erhöhte Reifung von Die Basalmembran mit Kontrolle über die narbenassoziierte Proteinexpression. Gepunktete Linien für die Elastinmatrix deuten auf eine verbesserte qualitative Ablagerung hin.

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Bei Wundheilungsstrategien wird eine plasmidbasierte Gentherapie eingesetzt, um die zellulären Reaktionen vorübergehend zu verstärken, bis die Wundheilung abgeschlossen ist [37]. Unser genaktiviertes Gerüst zeigt auch, dass das Therapeutikum -Das Klotho-Gen wird über einen Zeitraum von 14 Tagen vorübergehend reguliert. Der deutlich verbesserte (170-fache) Ausdruck des -Klotho-mRNA am Tag 3 könnte dem unmittelbar frühen CMV-Promotor zugeschrieben werden, von dem bekannt ist, dass er die Transkriptionsaktivierung des kodierten Transgens verstärkt [38]. In den MSCs könnte das CMV jedoch einer DNA-Methylierung oder Histon-Deacetylierung unterliegen, die die Transgenexpression verringern kann [39]. Darüber hinaus handelt es sich bei den Plasmiden im Allgemeinen um nicht replizierende Episome, was die Übertragung des Transgens auf sich teilende Zellen einschränkt und mit der Zeit zu einem Rückgang der Transgenexpression führt [40]. Das Vorhandensein heterochromatischer Marker, die aus den Bakteriensequenzen stammenPlasmid könnte die Transgenexpression weiter unterdrücken [41], was insgesamt zu einer vorübergehenden Genexpression beiträgt.

Einer der Wege, die bei der Behandlung schwer heilender Wunden verfolgt werden, ist die Anwendung von mit Zellen besäten bioaktiven Gerüsten. Ein Grund dafür ist ihre Fähigkeit, eine schnelle Wundheilung zu fördern. Stoffwechselaktive Zellen im Transplantat sezernieren parakrine Faktoren und durchlaufen eine Differenzierung, wodurch die komplexen Signalereignisse in der Wundumgebung orchestriert werden [42]. Insbesondere Stammzellen verfügen über die einzigartige Fähigkeit, äußere Reize wahrzunehmen und ihre Reaktion zu modulieren, um die Homöostase wiederherzustellen [43]. Allerdings verlieren Stammzellen ihre Stammzelleneigenschaften, wenn sie in vitro vermehrt werden, um große Zellzahlen für das Transplantat zu erzeugen. Unsere Studie zeigt, dass die Stammzellenfunktion durch den Einsatz eines genaktivierten Gerüsts, das ein Anti-Aging-Gen trägt, vorübergehend verbessert werden kann -Klotho. Insbesondere stellten wir fest, dass das Anti-Aging-Gen-aktivierte Gerüst die Expression des Stammgens Oct-4 in den ADSCs verstärkte. Oct-4 ist einer der wichtigsten Transkriptionsfaktoren in embryonalen Stammzellen und für die kontrollierte Embryonalentwicklung unerlässlich [44]. In den ADSCs kann die Aktivierung des Oct-4-Gens deren Proliferations- und Differenzierungspotential fördern [45]. Somit kann die erhöhte Expression von Oct-4 die schnelle Differenzierung der ADSCs auf dem genaktivierten Gerüst in Wirtszellen erleichtern und den Heilungsprozess unterstützen.

Nachdem wir die Aktivierung des Oct-4-Gens in den ADSCs beobachtet hatten, beurteilten wir anschließend die angiogene Wirksamkeit der ADSCs. Die Angiogenese ist entscheidend für die effiziente Integration des Transplantats in das Wirtsgewebe [46]. Zellen im Transplantat lösen die Angiogenese durch die Sekretion parakriner Faktoren aus. Die Angiogenese ist auch ein entscheidender Vorgang für die Entwicklung des Granulationsgewebes und ihre Aktivität nimmt mit zunehmender Reifung des Granulationsgewebes ab [47]. Diese programmierte Einschränkung der angiogenen Aktivität in späteren Heilungsstadien ist wichtig für die Kontrolle von Narbenbildung und Hypergranulation, die die Reepithelisierung behindern können [48]. Unser Befund zeigt auch, dass die ADSCs auf dem genaktivierten Gerüst das Endothelwachstum fördern und ihr Wachstum durch parakrine Signale steuern können. Darüber hinaus zeigen die signifikanten Steigerungen der Stoffwechselaktivität und des Keimens der Endothelzellen als Reaktion auf die CM am Tag 3 das Potenzial des ADSC-beladenen genaktivierten Gerüsts, sich schnell in das Wirtsgewebe zu integrieren. Darüber hinaus ist die Verwendung von CM-Stammzellen ein weit verbreiteter zellfreier Ansatz zur Verbesserung der Qualität der Wundheilung [49]. Als Einschränkung erkennen wir an, dass adulte dermale Endothelzellen ein besseres Zellmodell für die Untersuchung der Angiogenese darstellen würden; Um jedoch die Konsistenz mit unseren früheren Studien und den weithin als „Goldstandard“-Zellkandidaten anerkannten HUVECs zu wahren [50] haben wir den HUVECs-Angiogenese-Assay übernommen.

Ein Anstieg der Fibroblasten-Remodellierungsaktivität ist ein allgemeines Merkmal der Reifung von Granulationsgewebe [51]. In diesem Stadium werden die Kollagen-III-Matrizen nach und nach durch stärkere Kollagen-I-Fasern ersetzt [51]. Kollagenfasern fördern dann die Wundkontraktion [52] und eine Wundkontraktion ist für den vollständigen Wundverschluss unabdingbar [53]. Allerdings kann ein aggressiver, anhaltender Anstieg der Kollagen-I-Ablagerung die Narbenbildung verstärken [54]. Die Kontrolle der Narbenbildung ist von entscheidender Bedeutung, da sie die Entwicklung anderer Hautanhangsgebilde wie Haarfollikel, Talgdrüsen und Schweißdrüsen, beispielsweise bei Brandwunden, hemmen kann [54]. Unser Befund zeigt, dass das gealterte (Tag 14) CM aus der Gruppe der genaktivierten Gerüste die Expression von profibrotischem Kollagen I in erwachsenen dermalen Fibroblasten steuern könnte. Dieser kontrollierte Effekt auf die Fibroblasten trat ohne weiteren Einfluss auf die Migration der Fifibroblasten oder ihre antifibrotische Kollagen-III-Expression im Vergleich zur genfreien Gerüstgruppe auf. Daher schlagen wir vor, dass das mit ADSCs beladene genaktivierte Gerüst möglicherweise eine bessere Kontrolle bei der Begrenzung der Narbenbildung in vivo durch kontrollierte Kollagen-I-Expression bietet. Li et al. haben auch gezeigt, dass die ADSCs CM die Kollagen-I-Expression in Fibroblasten, die aus hypertrophen Narben stammen, deutlich reduzieren können [55]. Eine andere Studie von Wang et al. zeigte eine ähnliche Verringerung der Kollagen-I-Expression in von Keloiden abgeleiteten Fibroblasten [56], was insgesamt das antifibrotische Potenzial des CM der ADSCs demonstriert.

Eine der wesentlichen Erkenntnisse, die wir bei der Anwendung des festgestellt haben -Klotho-Gen-aktiviertes Gerüst ist die verstärkte Regeneration der Basalmembran in den ADSCs. Die Regeneration der Basalmembran ist für die Reifung der Blutgefäße und die vollständige Reepithelisierung unerlässlich [57,58]. Wichtig ist die Entwicklung der Proteine ​​Laminin(2,1-fach) und Kollagen IV (8,8-fach) hochreguliert sind, weist weiter auf eine erhöhte Reifung der Basalmembran in der genaktivierten Gerüstgruppe hin [59]. Neben der Wirkung als Anti-Aging-Faktor [60], das Beta-Klotho dient dazu, die Empfindlichkeit der FGF-Rezeptoren gegenüber dem Fibroblasten-Wachstumsfaktor (FGF) zu erhöhen [61]. Darüber hinaus wurde festgestellt, dass ein Anstieg der FGF-Signalisierung die Reifung der Basalmembran durch die Ablagerung von Laminin und Kollagen IV fördert [62]. In Anbetracht der Rolle von Beta Klotho als Co-Rezeptor von FGF wird die erhöhte Basalreifung in der genaktivierten Gerüstgruppe möglicherweise durch eine Zunahme der FGF-Signalübertragung von ADSCs vermittelt.

Die Basalmembrankomponente, die in der genaktivierten Gerüstgruppe bemerkenswert hochreguliert ist, ist das Kollagen-IV-Protein. Das Kollagen-IV-Protein macht 50 Prozent aller Basalmembranen aus [63] und verleiht der Basalmembran strukturelle Stabilität [59]. Allerdings verringert sich mit zunehmendem Alter die Kollagen-IV-Expression im dermal-epidermalen Übergang deutlich [58,64] und der Mangel an Kollagen IV kann die Narbenentstehung fördern [65]. Unsere Ergebnisse legen daher nahe, dass die erhöhte Regenerationsfähigkeit der Basalmembran des mit ADSCs beladenen genaktivierten Gerüsts die Heilung bei älteren Patienten erheblich verbessern kann. Andere Studien haben auch gezeigt, dass aus Fettgewebe gewonnene ECM ein enormes therapeutisches Potenzial für die Hautreparatur besitzt [66]. Darüber hinaus sind aus Gewebe hergestellte Transplantate, die reich an Laminin und Kollagen IV sind, auch für die Reparatur des respiratorischen Epithels von Interesse [67]. 

Zusätzlich zur profibrotischen Kontrolle gegenüber den Fibroblasten zeigt unsere Studie außerdem, dass die ADSCs im genaktivierten Gerüst auch eine 2-fach geringere Expression des narbenassoziierten Proteins exprimieren -SMA [68]. Obwohl wir die Auswirkungen in vivo nicht bewertet haben, ist die Verringerung lokal -SMA-Expression ist entscheidend für eine verbesserte qualitative Heilung [69]. Verwendung von fibrotischen Wirkstoffen wie Bleomycin [70] könnte eine Möglichkeit sein, die antifibrotischen Eigenschaften des ADSCs/genaktivierten Gerüstkonstrukts in vitro besser zu bewerten; Unser Schwerpunkt lag jedoch auf der Feststellung des vorläufigen therapeutischen Potenzials des Konstrukts.

Ein weiterer Indikator dafür, dass das mit ADSCs beladene genaktivierte Gerüst die qualitative Heilung verbessern kann, ist die Ablagerung einer faserigen Elastinmatrix anstelle von fleckigen extrazellulären Sekreten in der genfreien Gerüstgruppe. Die Elastinablagerung ist eine der Hauptaktivitäten, die die narbenfreie Wundheilung des Fötus vorantreiben [71]. Allerdings fehlt der Haut von Erwachsenen die Ablagerung von Elastin [71]. Daher wird Tropoelastin, eine Vorstufe von Elastin, häufig in Biomaterialgerüste eingebaut, um die Narbenbildung bei der Wundheilung zu kontrollieren [72]. Zusammenfassend deuten unsere Ergebnisse darauf hin, dass die ADSCs/ -Klotho-Gen-aktiviertes Gerüstkonstrukt kann in vivo eine starke antifibrotische Reaktion hervorrufen.

4. Materialien und Methoden

4.1. Herstellung eines genaktivierten Gerüsts

Das genaktivierte Gerüst wurde mithilfe eines 2-stufigen Prozesses entwickelt. Zunächst wurden feste poröse Kollagen-Chondroitinsulfat-Gerüste durch eine gefriergetrocknete Aufschlämmung aus Rindersehnenkollagen Typ 1 und Chondroitin-6-sulfat aus Haifischknorpel (Sigma, UK) hergestellt. Zur Herstellung der Gerüste wurde ein optimierter Gefriertrocknungsprozess zur Erzeugung gleichmäßiger Poren eingesetzt [73]. Basierend auf unserem veröffentlichten Protokoll [74] wurden die gefriergetrockneten Gerüste anschließend bei 105 dehydrothermisch (DHT) behandelt◦C unter Vakuum zur Sterilisation und mechanischen Verbesserung. Die sterilisierten Gerüste wurden dann mit einer 14 mM N-(3-Dimethylaminopropyl)-N'-ethylcarbodiimid-Hydrochlorid- und 5,5 mM N-Hydroxysuccinimid-Lösung (2,5 Molverhältnisse EDC/NHS) (Sigma, UK) chemisch vernetzt die mechanische Stabilität weiter verbessern [75]. Die vernetzten Gerüste wurden dann mit PBS (Gibco, Paisley, UK) gewaschen, um restliche Chemikalien zu entfernen. Sobald die Gerüste fertig waren, wurden Polyplexe im N/P10-Verhältnis (Stickstoff-zu-Phosphat-Verhältnis) hergestellt, indem ein vorgegebenes Volumen verzweigter Polyethyleniminlösung (PEI) mit Plasmid-DNA (pDNA) gemischt wurde, die für das menschliche Beta-Klotho-Gen kodiert ( -Klotho), erhalten von SinoBiological, Peking, China. Das N/P10-Verhältnis wurde auf der Grundlage unserer früheren Studien gewählt, die ergaben, dass Polyplexe, die mit einem N/P 10-Verhältnis formuliert wurden, effektiv kleine, stabile kationische Nanopartikel mit Plasmiden von der Größe GLuc (5,76 kb) bilden können [21,23]. Vor der Verwendung wurden die Plasmide in endotoxinfreiem Wasser verdünnt, um eine Arbeitskonzentration zu erhaltenvon 0.5µg/µL. Das Plasmid enthält humanes verstärktes Immediate-Early-Cytomegalievirus(CMV3)-Promotor zur Förderung einer stabilen und vorübergehenden Expression des kodierten Proteins auf hohem NiveauGen in Säugetierzellen.

Man ließ die Plasmid/PEI-Mischung 30 Minuten lang absetzen, um sich selbst zu einem Polyplex zusammenzusetzenNanopartikel. Anschließend wurden die Nanopartikel durch Pipettieren auf die Gerüste aufgetragengleiche Volumina der Polyplexlösung pro Seite des Gerüsts. Insgesamt 2µg pDNA warpro Gerüst verwendet, um das genaktivierte Gerüst zu entwickeln.

4.2. Zellaussaat läuft -Klotho-Gen-aktiviertes Gerüst

Menschliche ADSCs (iXCells Biotechnologies, San Diego, CA, USA) wurden im vom Unternehmen bereitgestellten ADSCs-Wachstumsmedium (Kat.-Nr. MD0003) bis zur Passage 4 erweitert. Insgesamt 5× 105 ADSCs (2.5× 105 pro Seite) wurden dann pro genfreiem Gerüst ausgesät (Kontrolle,n = 3) oder genaktiviertes Gerüst (Test,n = 3). Nachdem man die Zellen etwa 20 Minuten lang absetzen ließ, wurden 2 ml Transfektionsmedium OptiMEM (Gibco, UK) hinzugefügt und die zellularisierten Gerüste wurden bei 37 °C inkubiert◦C für 24 Stunden. Nach der 24-stündigen Inkubation wurden die zellularisierten genfreien oder genaktivierten Gerüste in neue 12-Well-Platten überführt und mit 2 ml ADSCs-Wachstumsmedium gefüttert. Anschließend wurde alle 3–4 Tage bis zum 14. Tag ein Medienwechsel durchgeführt, indem 1 ml des konditionierten Mediums (CM) gesammelt und durch das gleiche Volumen an frischem Medium ersetzt wurde. Alle CM wurden bei gelagert−80 ◦C bis zur Analyse.

4.3. qRT-PCR-Analysen zur Bestimmung -Klotho-Gen-Überexpression und Aktivierung funktioneller Gene

Um die vorübergehende Regulation der Zielgene zu bestimmen, wurden die Zellen am Tag 3 (früh) und 14 (spät) nach der Aussaat auf den genfreien oder genaktivierten Gerüsten geerntet. Die Zellen wurden zunächst mit dem Qiazol-Lysereagenz (Qiagen, Germantown, MD, USA) lysiert. Anschließend wurde Chloroform zugegeben, um das Zelllysat in Protein-, DNA- und RNA-Phasen aufzutrennen. Mit dem RNeasy Kit (Qiagen, Manchester, UK) wurde die RNA extrahiert und ihre Qualität und Quantität mit einem Multiskan Go-Plattenlesegerät (Thermo Scientific, UK) bestimmt, wobei die Absorption auf 260 nm eingestellt war. Anschließend wurde die genomische DNA durch Mischen der RNA mit einem Puffer zum Auslöschen der genomischen DNA (Qiagen, Manchester, UK) und Erhitzen auf 42 °C entfernt◦C für 2 Min. Anschließend wurde eine reverse Transkription durchgeführt, um die cDNA herzustellen. Duplikate der cDNA pro Replikat (n = 3) wurden in die qRT-PCR-Platten geladen und dann wurde der Assay mit den in der Tabelle aufgeführten Primern durchgeführt1. Die fache Änderung der mRNA-Expression relativ zu den Zellen auf dem genfreien Gerüst wurde unter Verwendung der 2 berechnet−∆∆CTMethode aus Durchschnittswerten von drei Wiederholungen pro Gruppe. Als Housekeeping-Gen wurde menschliches GAPDH (Hs_GAPDH_1_SG, Kat.-Nr. QT00079247) verwendet.

4.4. Bioaktivitätsanalysen sekretierter Faktoren aus den ADSCs -Klotho-Gen-aktiviertes Gerüst

4.4.1. Proangiogene Bioaktivitätsanalysen

4.4.2. Heilungs- und Reifungsanalysen dermaler Fibroblasten

Nach dem Angiogenese-Assay untersuchten wir die Wirksamkeit des CM für die Hautheilung mithilfe eines Scratch-Assays an dermalen Fibroblasten menschlicher Erwachsener (iXcells, Kat.-Nr. 10 HU-014). Für diese Studie haben wir speziell den gealterten CM ab dem 14. Tag ausgewählt, um seinen Einfluss auf den Wundverschluss von Fibroblasten während der Reifung zu untersuchen. Insgesamt 1× 104 Zellen/Well in einer 96-Well-Platte wurden ausgesät und über Nacht im Fibroblasten-Wachstumsmedium inkubiert. Am nächsten Tag wurde eine Wunde auf der Monoschicht erzeugt, indem eine 200-µL-Pipettenspitze horizontal über die Vertiefung gekratzt wurde. Die Monoschicht wurde dann mit PBS gespült, um etwaige Rückstände zu entfernen, und mit dem CM gefüttert. Der Wundverschluss wurde zwischen 12 und 16 Stunden nach dem Kratzer aufgezeichnet. Mithilfe der Immunfärbung wurde die Expression von pro-fibrotischem Kollagen I (1:100, Novusbio, UK) und anti-fibrotischem Kollagen III (1:100, Novusbio, UK) in den Fibroblasten untersucht. Die Fibroblasten wurden zur F-Aktin-Bildgebung mit Rhodamin (1:800, Abcam, UK) gegengefärbt. Die Immunfärbung wurde wie im Abschnitt beschrieben durchgeführt4.5, mit Ausnahme der Gewebeverarbeitung und Entparaffinierung. Sowohl HUVECs als auch die Fibroblasten wurden in Passage 4 verwendet.

4.5. Immunfluoreszenz-Bildgebung extrazellulärer Matrixproteine

Nach 14 Tagen Kultur wurden die zellularisierten genfreien oder genaktivierten Gerüste zum Nachweis der Matrixablagerung mittels Immunfluoreszenz geerntet. Die Verarbeitung der Proben erfolgte wie zuvor beschrieben. Kurz gesagt, die Gerüste wurden zunächst mit PBS gewaschen und 20 Minuten lang in 10 Prozent neutral gepuffertem Formalin fixiert. Die fixierten Proben wurden dann unter Verwendung des Standardprotokolls zur Entparaffinierung verarbeitet. Die Blöcke wurden dann in 7- geschnitten.µm dicke Scheiben geschnitten und auf geladenen Objektträgern gesammelt. Die Schnitte wurden dann mit Xylol entparaffiniert, gefolgt von einer Rehydratisierung des Schnitts mit abnehmenden Ethanolgradienten. Anschließend wurden die Zellen mit 0,2 Prozent Tween permeabilisiert®20-Lösung (Sigma-Aldrich, Frankreich) in PBS für 30 Minuten (10 Minuten waschen).× 3) und unter Verwendung von 10 Prozent NGS (Normal Goat Serum, Invitrogen, Rockford, IL, USA)/5 Prozent BSA/0,3 M Glycin (hergestellt in permeabilisierender Lösung) für 1 Stunde blockiert. Nach dem Blockieren wurden die Objektträger in PBS gespült und dann bei 4 °C inkubiert◦C über Nacht mit den in der Tabelle aufgeführten Antikörpern gegen Zielmatrixproteine2. Am nächsten Tag wurden die Objektträger dreimal jeweils 2–3 Minuten lang in PBS gespült, um alle ungebundenen Primärantikörper zu entfernen. Anschließend wurden die Objektträger entweder in Alexa 488-konjugiertem Ziegen-Anti-Maus-IgG (A32723, Invitrogen, UK) oder Alexa 594-konjugiertem Ziegen-Anti-Kaninchen-IgG (A11012, Invitrogen, UK) bei 1 inkubiert: 800-Verdünnung bei Raumtemperatur für 1 Stunde im Dunkeln. Der Spülschritt wurde wie zuvor durchgeführt und die Kerne wurden mit dem Eindeckmedium mit DAPI (ab104139, Abcam, UK) gegengefärbt. Die Objektträger wurden dann mit einem Fluoreszenzmikroskop (Olympus BX43, Japan) bei 20°C abgebildet× Zielsetzung. Als Kontrollen dienten Proben, die nur mit sekundären Antikörpern inkubiert waren.

Bildquantifizierung

Image]-Software (Image, NIH, MD, USA) wurde verwendet, um die Menge der exprimierten Proteine ​​semiquantitativ zu bestimmen. Für jeden Marker wurde zunächst durch vorläufige Bildgebung verschiedener Abschnitte ein konstanter Schwellenwert ermittelt. Unter Verwendung des eingestellten Schwellenwerts wurde die integrierte Dichte (gefärbte Fläche x mittlerer Grauwert) der Bilder bestimmt und dann auf die Anzahl der Zellen normalisiert (DAPI-Zählung), um eine endgültige mittlere Fluoreszenzdichte pro Zelle zu erhalten. Ein Durchschnitt wurde aus 8-10 zufälligen Bildern pro Replikat mit mindestens drei Replikaten pro Gruppe quantifiziert. Die aus den drei Wiederholungen/Gruppe erhaltenen Durchschnittswerte wurden dann zur Messung der relativen Expression zwischen den Gruppen verwendet.

4.6. Statistische Analyse

Alle Ergebnisse werden als Mittelwert plus Standardabweichung ausgedrückt. Zur Berechnung der statistischen Signifikanz zwischen Gruppen wurde im Allgemeinen ein ungepaarter zweiseitiger t-Test verwendet, wobei p < 0.05 als signifikant angesehen wurde

Diese Studie zeigte, dass dieAntialterung -Klotho-Gen-aktivierte CistancheAngebote kontrolliert Aktivierung der Regenerationsfähigkeit von ADSCs. Die wichtigsten Ergebnisse dieser Studie sind (1)vorübergehende Verstärkung der Stammzellpluripotenz und der antifibrotischen Reaktion, (2)verbesserte parakrine Kontrolle in Richtung Angiogeneseund profibrotischer Kollagenumbauin dermalen Fibroblasten und letztendlich (3)erhöhte Reifung der Basalmembranmit Kontrolle über die Expression narbenassoziierter Proteine. Abschließend legen diese Ergebnisse nahedass die ADSCs beladen sind -Klotho-Gen-aktiviertes Gerüst könnte großes Potenzial besitzen aBehandlung einer Vielzahl von Hautwunden.

Ressourcen, ALL, FJO und MBK; Datenkuration, ALL und MBK; Schreiben – Originalentwurf vorbereitention, ALLE; Schreiben – Überprüfen und Bearbeiten, ALL, FJO und MBK; Visualisierung, ALLE; Aufsicht,FJO und MBK; Projektadministration, MBK; Fördermitteleinwerbung, FJO und MBK Alle Autorenhaben die veröffentlichte Version des Manuskripts gelesen und ihr zugestimmt.

Interessenskonflikte:Die Autoren erklären, dass kein Interessenkonflikt besteht.

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