Antinozizeptive und entzündungshemmende Aktivität, verursacht durch Cistanche Deserticola bei Nagetieren

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Li-Wei Lin, et al

Abstrakt

In der vorliegenden Studie werden die Rhizome vonCistancheDeserticola(Orobanchaceae, abgekürzt als CD) wurden mit 50-prozentigem Ethanol extrahiert und geordnet durch Ethylacetat, n-Butanol und Wasser isoliert. Das Analgetikum uAnti-entzündlichWirkungen von CD-Extrakt und drei Schichten wurden in mehreren Tiermodellen bewertet. CD(CistancheDeserticola)Extrakte hemmten wirksam die durch 1 Prozent Essigsäure induzierte Writhing-Reaktion und die durch 1 Prozent Formalin verursachten zweiphasigen Leckreaktionen und reduzierten auch das durch 1 Prozent Carrageen, aber nicht durch Zymosan, induzierte Ödem. Weiterhin die butanischen und wässrigen Schichten von CD(CistancheDeserticola)Extrakt reduzierte nicht nur die durch Essigsäure und Formalin induzierten Schmerzen, sondern verminderte auch das durch Carrageenan induzierte Ödem. Auswirkungen der butanoischen Schicht von CD(CistancheDeserticola)Extrakt sind besser als die der wässrigen Schicht. Hinzu kommt die Wirkung der Butanschicht von CD(CistancheDeserticola)Extrakt wurde nicht durch Naloxon abgeschafft. Diese Ergebnisse zeigten, dass Analgetikum undAnti-entzündlichEffekte, und die butanischen und wässrigen Schichten sind hauptsächlich aktive Bestandteile. Weiterhin sind die Analgetika uAnti-entzündlichAuswirkungen der butanoischen Schicht von CD(CistancheDeserticola)Extrakt waren nicht mit Opioidrezeptoren und dem Immunsystem verbunden.

Schlüsselwörter:Cistanche Deserticola; Analgetische Aktivität; Entzündungshemmende Aktivität

1. Einleitung

CistancheDeserticolaMa. (Orobanchaceae, abgekürzt als CD), ein einheimisches Kraut in China, wird in der traditionellen Medizin häufig für verschiedene therapeutische Behandlungen verwendet, einschließlich sedativer, analgetischer und immunstärkender Indikationen (Lee, 1986). Moderne pharmakologische Studien wiesen auf CD hin(CistancheDeserticola)Extrakt besaß eine immunverstärkende (Chin und Su, 1993), freie Radikalfängerwirkung (Hsu et al., 1995) und die Erhöhung der SOD-Aktivität (Chang et al., 1995). In einer neueren Studie spielte die Reaktion freier Radikale eine bedeutende Rolle bei Entzündungsprozessen (Arrigoni-Martelli, 1985). Daher wurde in der vorliegenden Studie versucht, die mutmaßlichen analgetischen Wirkungen von CD zu untersuchen(CistancheDeserticola)Extrakt bei Mäusen mit Essigsäure-induziertem Writhing-Test (Taber et al., 1969) und Formalin-induziertem Lecktest (Shibata et al., 1989). Zweitens haben wir auch das Mögliche untersuchtAnti-entzündlichAktivitäten von CD(CistancheDeserticola)Extrakt auf den klassischen Entzündungsprozess mit Carrageenan-induziertem Ödemtest (Winter et al., 1962) und alternativen Entzündungsprozess mit Zymosan-induziertem Ödemtest (Tarayre et al., 1989). Schließlich untersuchten wir aktive Schichten von CD-Extrakt, die mit verschiedenen Lösungsmitteln getrennt wurden. '

2. Materialien und Methoden

2.1. Pflanzenmaterial und Extrakte

Rhizome von CD(CistancheDeserticola)wurden auf dem taiwanesischen Markt gekauft und von Professor MT Hsieh bestätigt. Ein Belegmuster (Nr. CMC-ICPS-000626) wurde im Herbarium des Instituts für chinesische Pharmazeutische Wissenschaften des China Medical College für zukünftige Bezugnahme aufbewahrt. Extraktion und Isolierung von CD(CistancheDeserticola)wurden wie die vorherigen Berichte befolgt (Lu, 1998). CD(CistancheDeserticola)Extrakt (die Ausbeute in 34,2 Prozent) und drei Schichten*/Ethylacetatschicht, butanolische Schicht und wässrige Schicht (ihre Ausbeuten in 3,4, 10,2, 30,6 Prozent) (abgekürzt als CDE, CDB bzw. CDW)*/wurden verwendet die Herstellung von Extrakten.

2.2. Zubereitung von Extrakten und Drogen

CD(CistancheDeserticola)Extrakt ({{0}}.1, 0,3, 1 g/kg) und drei Lagen CD(CistancheDeserticola)Extrakte ({{0}}.03, 0.1, 0.3 g/kg) wurden in 0,5 % Carboxymethylcellulose gelöst und 60 Minuten vorher oral verabreicht bis zur Injektion eines Induktors. Acetylsalicylsäure (ASA) (100, 300 mg/kg) und Indometacin (IN DOL) (10 mg/kg) wurden als Suspension mit 0,5 % Carboxymethylcellulose hergestellt und vor der Injektion eines Induktors intraperitoneal verabreicht. Naloxon (1 mg/kg) wurde mit normaler Kochsalzlösung gelöst.

2.3. Tiere

Männliche Sprague-Dawley-Ratten (200-250 g) wurden für die Untersuchung von verwendetAnti-entzündlichAktivitäten. Männliche ICR-Mäuse (20-25 g) wurden zum Testen der analgetischen Wirkung verwendet. Alle Tiere wurden gemäß den Leitlinien zur Pflege und Verwendung von Versuchstieren in den Versuchen eingesetzt. Sie wurden mindestens eine Woche vor Beginn des Experiments in einer Umgebung mit einer Temperatur von 239 /1 8 C und einer Luftfeuchtigkeit von 60 % mit freiem Zugang zu Standardfutter in Pellets (geliefert und entwickelt von Fwusow Industry Co. LTD., Taiwan) untergebracht ) und Leitungswasser, wobei ein 12-12 h Hell-Dunkel-Wechsel (Hellphase: 08:00-20:00 h) eingehalten wurde. Dann wurden Medikamente verabreicht und das Analgetikum undAnti-entzündlichDie Assays wurden nach dem Doppelblindverfahren durchgeführt. Nach der Verhaltensmessung wurden alle Tiere durch Kohlendioxid getötet.

2.4. Antinozizeptive Studie

2.4.1. Essigsäure-induzierte Bauchkrümmungsreaktion bei Mäusen

Die Mäuse wurden zufällig in mehrere Gruppen eingeteilt. Jeder Maus wurde intraperitoneal 1-prozentige Essigsäurelösung (10 ml/kg Körpergewicht) verabreicht. Die Mäuse wurden in die einzelnen Beobachtungsboxen gesetzt. Die Symptome der Essigsäure-induzierten Bauchkrämpfe ähnelten denen, die von Taber et al. (1969). Kontrolltiere erhielten in den gleichen Experimenten Vehikellösungen. Fünf Minuten nach der Injektion von Essigsäure wurde die Anzahl der Writhing-Antworten pro Maus während 10 min während des durch Essigsäure induzierten Abdominalkrämpfens gezählt. Schließlich erlaubte uns die Anzahl der sich windenden Reaktionen, den Prozentsatz des Schutzes unter Verwendung des folgenden Verhältnisses auszudrücken: (Mittelwert der Kontrolle – Mittelwert der Behandlung) /100/Mittelwert der Kontrolle.

2.4.2. Formalininduzierte Leckreaktion bei Mäusen

Dieses Verfahren stellte eine Modifikation des von Shibata et al. (1989). Jede Maus wurde vor der Formalininjektion für 5 min in die Beobachtungskammer auf einem transparenten Acrylplattenboden gesetzt. Unter dem Boden war ein großer Spiegel in einem Winkel von 45° geneigt, um eine klare Beobachtung der Pfoten des Tieres zu ermöglichen. Den Tieren wurden 25 ml 1-prozentiges Formalin rechts subplantar verabreicht. Dann wurde jedes Tier in die Kammer zurückgebracht und die zwei unterschiedlichen Perioden der intensiven Leckreaktion wurden beobachtet. Die erste Periode (frühe Phase) wurde 0/5 min nach der Injektion von Formalin aufgezeichnet und die zweite Periode (späte Phase) wurde 10/35 min nach der Injektion aufgezeichnet. Die Zeit(en), die mit Leckreaktionen der injizierten Pfote verbracht wurden, wurde als Indikator für die Schmerzreaktion gemessen.

2.5. Entzündungshemmende Studie an Ratten

DasAnti-entzündlichDie Aktivität wurde bei Ratten bestimmt, indem die mittlere Zunahme des Hinterpfotenvolumens nach subplantarer Injektion von Entzündungsmitteln wie Carrageenan (Winter et al., 1962) oder Zymosan (Tarayre et al., 1989) gemessen wurde. Den Tieren wurde 0,1 ml 1 % Carrageenan oder 2 % Zymosan in den rechten Hinterfuß unter der Plantaraponeurose injiziert. Die Entzündung wurde in Millilitern unter Verwendung eines Plethysmometers (7150 Ugo Basile) quantifiziert, das kleine Unterschiede im Wasserspiegel aufzeichnete, die durch Volumenverdrängung verursacht wurden. Vor jeder Behandlung wurde das durchschnittliche Volumen der Hinterpfoten jedes Tieres bestimmt (Vo) mit drei Messungen, die sich nicht um mehr als 4 Prozent unterschieden (Genauigkeit des Geräts). Dann wurde 30, 60, 90, 120, 150, 180, 210, 240 min nach der Injektion der Entzündungsmittel das durchschnittliche Volumen der Hinterpfoten jedes Tieres bestimmt (Vt) mit drei Messungen, die sich nicht mehr als unterschieden 4 Prozent.

Die Ödemprozentsätze bei jeder Aufzeichnung wurden berechnet, indem das durchschnittliche Volumen der Hinterpfoten jedes Tieres (Vt) nach der Injektion der Entzündungsmittel mit dem durchschnittlichen Volumen der Hinterpfoten jedes Tieres (Vo) vor jeglicher Behandlung (Palanichamie und Nagarajan, 1990). Prozentsätze der Hemmung wurden für jede Gruppe unter Verwendung des folgenden Verhältnisses erhalten: [(Vt-Vo)Kontrolle/(Vt-Vo)behandelt]-100/(Vt-Vo)Kontrolle.

2.6. statistische Analyse

Alle während der analgetischen und erhaltenen DatenAnti-entzündlichDie Aktivität wurde als Mittelwert und Standardfehler ausgedrückt und weiter analysiert, indem eine ANOVA-Einweg-Varianzanalyse, gefolgt von einem Scheff-Test, verwendet wurde. Wenn die Wahrscheinlichkeit (P) kleiner als 0,05 war, wurde der Unterschied als signifikant angesehen.

3. Ergebnisse und Diskussion

Die Vorbehandlungstiere mit oralen Dosen von CD(CistancheDeserticola)Extrakt (0,1-1 g/kg) führte zu einer dosisabhängigen und signifikanten Hemmung der Essigsäure-induzierten Writhing-Reaktion (Tabelle 1) und der zweiphasigen Phasen der Formalin-induzierten Leckreaktionen bei Mäusen ( Abb. 1(A)). Die durch CD verursachte Hemmung(CistancheDeserticola)Extrakt bei 1 g/kg auf Essigsäure-induzierte Writhing-Reaktion und Formalin-induzierte Leck-Reaktionen betrugen etwa 54 bzw. 45 Prozent. Die positive Kontroll-Acetylsalicylsäure bei 0,1-0,3 g/kg verringerte auch die durch Essigsäure induzierte Writhing-Reaktion mit einer Hemmung von 45-64 Prozent (Tabelle 1). Jedoch hemmte die andere Positivkontrolle Indomethacin bei 10 mg/kg nur die späte, aber nicht die frühe Phase der Formalin-induzierten Leckreaktion bei Mäusen mit einer maximalen Hemmung von 32 Prozent (Fig. 1(A)). Außerdem nur butanolische und wässrige Schichten unter drei CD-Schichten(CistancheDeserticola)Extrakt bei 0.1-0,3 g/kg erzeugte ebenfalls eine signifikante Antinozizeption, und diese analgetischen Wirkungen der butanolischen Schicht waren besser als die der wässrigen Schicht (Tabelle 1 und Abb. 1(B)) . Zweitens haben wir die bewertetAnti-entzündlichTätigkeit der CD(CistancheDeserticola)Extrakt und drei Schichten gegen klassische (Carrageenan-induzierte) und alternative (Zymosan-induzierte) Ödembildung. Wir haben diese CD gefunden(CistancheDeserticola)Extrakt bei 0,1-1 g/kg hemmte auch signifikant die Carrageenan-induzierte Ödembildung in dosisabhängiger Weise und Indomethacin bei 10 mg/kg hemmte auch wirksam die Carrageenan-induzierte Ödembildung bei Ratten (Abb. 2). Die Zymosan-induzierte Ödembildung wurde jedoch nicht durch CD gehemmt(CistancheDeserticola)Extrakt bei 0,1-1 g/kg bei Ratten (Daten nicht gezeigt). Außerdem nur die butanolische Schicht unter drei CD-Schichten(CistancheDeserticola)Extrakt bei 0,1-0,3 g/kg hemmte auch signifikant die Carrageenan-induzierte Ödembildung bei Ratten (Fig. 2). Laut phytochemischen Berichten gehören Acteosid und Bernsteinsäure zu den Bestandteilen der butanolischen Schicht von CD(CistancheDeserticola)Extrakt (Hsu et al., 1994, 1995), besaß dieAnti-entzündlichAktivität auf chemikalieninduzierte Ödembildung (Murai et al., 1995; Kabachnyi et al., 1987). Aus unseren aktuellen Daten und anderen früheren Berichten haben wir Rhizome von CD vorgeschlagen(CistancheDeserticola)besaß Analgetikum undAnti-entzündlichAktivität in Nagetieren, und die aktiven Bestandteile treten hauptsächlich in der butanolischen Schicht von CD aus(CistancheDeserticola)Extrakt. Ob Acteosid und Bernsteinsäure Wirkstoffe von CD sind(CistancheDeserticola), isolieren und bewerten wir ihre Analgetika undAnti-entzündlichTätigkeit in der Zukunft.

Abb. 1. Wirkung von CD(CistancheDeserticola)Extrakt ({{0}}.1, 0,3 und 1 g/kg), Ethylacetat, butanolische und wässrige CD-Schichten(CistancheDeserticola)Extrakt (CDE, CDB und CDW) ({{0}}.03, 0.1 und 0.3 g/kg) und Indomethacin (INDOL, 10 mg/kg) in der frühen (0/5 min) und späten Phase (10/35 min) der Formalin-induzierten Leckreaktion bei Mäusen. Jeder Wert wird als mean9/SE (N/7) dargestellt. *PB/0,05, *** PB/0,001, im Vergleich zur VEH-Gruppe.

Abb. 2. Wirkung von CD(CistancheDeserticola)Extrakt ({{0}}.1, 0,3 und 1 g/kg), Ethylacetat, butanolische und wässrige CD-Schichten(CistancheDeserticola)Extrakt (CDE, CDB und CDW) ({{0}}.03, {{10}}.1 und 0,3 g/kg) und Indomethacin (INDOL, 10 mg/kg) auf das Carrageenan-induzierte Pfotenödem bei Ratten. Jeder Wert wird als mean9/SE (N/6) dargestellt. *PB/0,05, ** PB/0,01, im Vergleich zur VEH-Gruppe

Darüber hinaus haben Shibata et al. (1989) legen nahe, dass die frühe Phase der durch Formalin induzierten Leckreaktion mit Bradykinin und Substanz P zusammenhängt und die späte Phase mit Bradykinin, Autokrin und Prostaglandin. Unsere aktuellen Daten wiesen darauf hin, dass Naloxon dies nicht aufhobAnti-entzündlichAktivität der Butanolschicht von CD(CistancheDeserticola)Extrakt auf beide Phasen der Formalin-induzierten Leckreaktion (Fig. 3) und die analgetische Wirkung auf die Essigsäure-induzierte Writhing-Reaktion (Tabelle 1). Daher das Analgetikum undAnti-entzündlichDie Wirkungen der Butanolschicht des CD-Extrakts stehen möglicherweise nicht im Zusammenhang mit Opioidrezeptoren. Außerdem CD(CistancheDeserticola)Extrakt und seine butanolische Schicht hemmten nur die Carrageenan-induzierte Ödembildung bei Ratten. Carrageenan-induzierte Ödeme über polymorphkernige Leukozyteninfiltration und aktiviertes Kininsystem, insbesondere Bradykinin, unterscheiden sich von Zymosan-induzierten Ödemen über Monozyteneinstrom und aktiviertes Immunsystem (Damas et al., 1990; Dawson et al., 1991). Bernsteinsäure, ein Inhaltsstoff der butanolischen Schicht des CD-Extrakts, hemmte die polymorphkernige Leukozytenfunktion (Rotstein et al., 1985). Diese Ergebnisse zeigten, dass das Analgetikum undAnti-entzündlichAuswirkungen der Butanolschicht von CD(CistancheDeserticola)Extrakt könnte mit dem Kinin-System verwandt sein, aber nicht mit Opioidrezeptoren und Immunsystemen, obwohl CD(CistancheDeserticola)besaß die immunverstärkende Wirkung (Chin und Su, 1993). Für detaillierte den Mechanismus von Analgetikum undAnti-entzündlichAktivität werden wir mit Wirkstoffen oder Inhaltsstoffen von CD-Extrakt weiter untersuchen.

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