Antioxidative Aktivität, phenolisches Profil und nephroprotektives Potenzial von ethanolischen und wässrigen Extrakten aus Anastatica Hierochuntica gegen CCl4--induzierte Nephrotoxizität bei Ratten

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Abstrakt:Kaff-e-Maryam (Anastatica hierochuntica L.) wird ausgiebig zur Behandlung einer Reihe von Gesundheitsproblemen eingesetzt, insbesondere zur Erleichterung der Geburt und zur Linderung von Störungen des Fortpflanzungssystems. Diese Studie zielte darauf ab, die Wirkung von A. hierophantic ethanolic (KEE) und wässriger (KAE) Extraktion, CCl4--induziertem oxidativen Stress und Nephrotoxizität bei Ratten unter Verwendung der biochemischen Marker für Nierenfunktionen und zu bewertenAntioxidansStatus sowie histopathologische Untersuchungen des Nierengewebes.A. Hierophant enthielt insgesamt 67,49 mg GAE g-1phenolische Verbindungen(TPC), 3,51 µg g-1 Gesamtcarotinoide (TC) und 49,78 und 17,45 mg QE g-1 Gesamtflavonoide (TF) bzw. Gesamtflflavonole (TFL). Es ergaben sich 128,71 µmol TE g-1 von DPPH-RSA und 141,92 µmol TE g-1 von ABTS-RSA. A. hierophantic zeigte eine überlegene antioxidative Aktivität, indem es Linolsäureradikale hemmte und Oxidationsmetalle chelatisierte. Die HPLC-Analyse ergab 9 und 21Phenolsäurenund 6und 2Flavonoidein KEE und KAE mit einer Dominanz von Sinapinsäure bzw. Syringinsäure. Intramuskuläre Injektion von Vit. E plus Se und die orale Verabreichung von KEE, KAE und KEE plus KAE bei 250 mg kg-1 Körpergewicht stellten die Kreatinin-, Harnstoff-, Kalium-, Gesamtprotein- und Albuminspiegel im Serum signifikant wieder her. Darüber hinaus reduzierten sie Malondialdehyd (MOD), stellten reduziertes Glutathion (GSH) wieder her und erhöhten die Superoxiddismutase (SOD)-Spiegel. KEE, KAE und KEE plus KAE schützten die Nieren vor CCl4--Nephrotoxizität, da sie hauptsächlich induzierten oxidativen Stress abschwächten. Die Gesamtnephroprotektion betrug etwa 83,27 Prozent, 97,62 Prozent und 78,85 Prozent für KEE, KAE bzw. KEE plus KAE. Sowohl vit.E plus Se als auch A. hierophantic-Extrakte schwächten die histopathologische Veränderung bei mit CCl4- behandelten Ratten ab. Zusammenfassend lässt sich sagen, dass A. hierophantic, insbesondere KAE, die potenzielle Fähigkeit besitzt, die oxidative Stabilität wiederherzustellen und die Nierenfunktion nach einer akuten CCl4-Nierenschädigung besser zu verbessern als KEE. Daher hat A. hierophantic das Potenzial, ein nützliches therapeutisches Mittel bei der Behandlung von arzneimittelinduzierter Nephrotoxizität zu sein.

Schlüsselwörter:Kaff-e-Maryam; Polyphenole; Bioaktivität; Sekundärmetaboliten; Nierenmarker;antioxidative Enzyme; Nierenfunktionsstörung

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Einführung

Nierenerkrankungen sind die neunthäufigste Todesursache, wobei schätzungsweise mehr als 1 von 7, d. h. 15 Prozent der Erwachsenen in den USA oder 37 Millionen Menschen, an einer chronischen Nierenerkrankung (CKD) leiden [1]. Bemerkenswerterweise ist Diabetes mellitus, gefolgt von Bluthochdruck und Glomerulonephritis, die häufigste Ursache für CKD, wie im Jahr 2015 erfasst wurde [2]. Andere Ursachen für CKD sind idiopathische Erkrankungen (häufig verbunden mit kleinen Nieren im Nieren-Ultraschall) [3]. Zuvor wurde CCl4 zur Metallentfettung, Trockenreinigung, Stofffleckenentfernung, Feuerlöschflüssigkeiten und Getreidebegasung verwendet [4]. Es verursacht schwere Störungen in Leber, Lunge und Hoden sowie im Blut, indem es aktive freie Radikale erzeugt [5]. Nach den Erkenntnissen von Ogeturk et al. [6] führt die Exposition gegenüber diesem Lösungsmittel zu akuten und chronischen Nierenschäden. Es wird angenommen, dass die durch freie Radikale induzierte Lipidperoxidation eine der Hauptursachen für Zellmembranschäden ist, die zu einer Vielzahl von pathologischen Zuständen führt [7]. Die Erzeugung reaktiver Radikale wurde mit der CCl4--induzierten Nephrotoxizität in Verbindung gebracht, die an der Lipidperoxidation und Ansammlung von funktionsgestörten Proteinen beteiligt ist, was zu Nierenschäden führt [8]. Erstaunliche, traditionelle Anwendungen von Heilpflanzen haben in den letzten Jahren zugenommen, und zahlreiche Untersuchungen haben ihre therapeutische Rolle gegen verschiedene Krankheiten bestätigt [9–12]. Kaff-e-Maryam (Anastatica hierochuntica) ist ein Wüstenheilkraut, das zur Familie der Brassicaceae gehört. Sie wächst in verschiedenen Regionen der Welt, insbesondere in arabischen Ländern (z. B. Saudi-Arabien, Ägypten, Oman, Libyen, Irak, Vereinigte Arabische Emirate, Kuwait) sowie in einigen asiatischen, europäischen und afrikanischen Ländern. A. Hierophantikum wird ein überlegenes medizinisches Potenzial zugeschrieben und es wird bevorzugt für verschiedene Erkrankungen konsumiert [13]. Es wird hauptsächlich zur Erleichterung des Geburtsvorgangs und zur Behandlung von Störungen des Fortpflanzungssystems und Stoffwechselstörungen, hauptsächlich Diabetes mellitus, eingesetzt [14]. Es wird als Analgetikum und zur Behandlung von Epilepsie, Magen-Darm-Erkrankungen, Arthritis, Bronchialasthma, Geschwüren im Mund, Malaria und psychischen Depressionen eingesetzt [15–17]. A. hierophantic enthält erhebliche Mengen an Mineralien wie Mg, Ca, Mn, Fe, Cu und Zn, die mit denen vieler Kräuterpflanzen vergleichbar oder größer sind und Metallen chelatbildende Eigenschaften verleihen können [18]. Yoshikawaet al. [19] kamen zu dem Schluss, dass das Vorhandensein von Flavanonen wie Anastasia A und B mit starken hepatoprotektiven Wirkungen korreliert, indem sie die D-Galactosamin-induzierte Zytotoxizität in primär kultivierten Maus-Hepatozyten hemmen. Die Produktion von reaktiven Sauerstoffspezies (ROS) und Zytokinen wie Tumornekrosefaktor und Interleukin-1 durch Kupffer-Zellen in der Leber tragen zur Hepatozytenzerstörung bei D-Galactosamin-Hepatotoxizität bei [20]. Die antioxidativen und entzündungshemmenden Eigenschaften von A. hierophantic-Komponenten können helfen, die D-Galactosamin-induzierte Hepatotoxizität zu reduzieren [21]. A. hierophantic kann je nach Schutz gegen CCl4--Hepatotoxizität einen Extrakt leisten [22]. Obwohl die Literatur vielversprechende Potenziale im Zusammenhang mit der Verwendung von A. hierophantic zeigt, muss das nephroprotektive Potenzial von ethanolischen (KEE) und wässrigen (KAE) Extrakten von A. hierophantic sorgfältig untersucht werden. Darüber hinaus hob die Literaturrecherche hauptsächlich die hepatoprotektive Effizienz von A. hierophantic hervor, aber das nephroprotektive Potenzial wurde bisher nicht untersucht, was diese Arbeit motivierte. Daher zielt die aktuelle Studie darauf ab, die Veränderungen der antioxidativen Abwehrenzyme zu beobachten, die Veränderungen der Nierenmikroskopie nach CCl4-Verabreichung bei Ratten zu erkennen und die möglichen Schutzwirkungen von A. hierophantic-Extrakten gegen CCl4--induzierte Nierenschäden zu untersuchen.

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2. Materialien und Methoden

2.1. Probenvorbereitung Eine Probe der Pflanze Kaff-e-Maryam (A. hierophantic L.) wurde von einem einheimischen Markt in der Stadt Buraydah, Region Qassim, Saudi-Arabien, gekauft. Das Pflanzenmaterial wurde vom Department of Plant Production and Protection, College of Agriculture and Veterinary Medicine, Qassim University, Saudi-Arabien, authentifiziert. Die Probe wurde mit sauberem Leitungswasser gewaschen, um Sand und Schmutz von den Blättern zu entfernen, und dann wurde luftgetrocknetes Pflanzenmaterial (bei 28 ± 1 °C für 48 h) mechanisch pulverisiert und in undurchsichtigen Polyethylenbeuteln bei 4 ± 1 °C aufbewahrt bis zum Gebrauch. 2.2. Herstellung von ethanolischen und wässrigen Extrakten Ungefähr 200 g getrockneter A. hierophantic wurden mit 3{{1{{106}}4}}0 extrahiert ml 7{{150}} Prozent Ethanol in einem Soxhlet-Extraktor zur Vorbereitung der ethanolischen Extraktion (KEE). Der Extrakt wurde durch einen Rotationsverdampfer bei 40°C konzentriert, um das restliche Lösungsmittel zu verdampfen, dann unter einem N2-Strom zur Trockne. Die wässrige Extraktion (KAE) wurde mit geringfügigen Modifikationen wie von Asuzu [23] beschrieben durchgeführt. 200 g getrocknetes Pflanzenmaterial wurden zu 500 ml heißem sterilem destilliertem Wasser gegeben. Die Mischung wurde dann gut geschüttelt und 1 h stehengelassen. Dann wurde ein Rückflusskühler auf den Kolben aufgesetzt und dann 10 min lang bis zum leichten Sieden erhitzt, abgekühlt, gut geschüttelt und durch Whatman Nr. 1 Filterpapier filtriert. Das Filtrat wurde mit einem Rotationsverdampfer eingedampft, dann unter einem N 2 -Strom zur Trockne. Die alkoholischen und wässrigen Extrakte (250 mg ml –1 ) wurden frisch in destilliertem Wasser formuliert, um für die orale Verabreichung verwendet zu werden. 2.3. Total Phenolic Content (TPC) Der TPC-Gehalt von A. hierophantic wurde nach der adaptierten Methode von Bettaieb et al. [24]. Die Ergebnisse wurden mit einer aufgetragenen Gallussäure (GA)-Standardkurve verglichen, die im Bereich von 50–500 mg mL−1 (R2=0.99) erstellt wurde, und die TPC wurde als mg Gallussäureäquivalent (GAE ) pro Gramm A. hierophantic (mg GAE g-1 ). 2.4. Gesamtcarotinoide (TC), Gesamtflavonoide (TF) und Gesamtflavonole (TFL) Wie von Al-Qabba et al. [10] wurden 5 g A. hierophantic mehrfach mit einem Aceton-Petrolether-Gemisch (1:1, v/v) extrahiert. Der Gesamtgehalt an Carotinoiden (TC) wurde spektrophotometrisch bei 451 nm bestimmt. TC wurde als mg g-1 DW ausgedrückt. Der TF-Gehalt von A. hierophantic wurde gemäß dem beschriebenen Protokoll von Mohdaly et al. [25]. Der TF-Gehalt wurde als mg Quercetin-Äquivalent (QE) pro 100 g−1 dw berechnet. Im gleichen Zusammenhang wurde der TFL-Content durchgeführt [26]. Die Extinktion bei 440 nm wurde aufgezeichnet und TFL wurde als mg Quercetin-Äquivalent (QE) pro 100 g –1 DW berechnet. 2.5. Bestimmung der Antioxidans-Kapazität DPPH-Radikalfänger-Assay: Das RSA wurde spektrophotometrisch in Abhängigkeit vom Bleichen der purpurfarbenen DPPH-Lösung gemäß einer veränderten Technik von Lu et al. [27]. Die Antiradikalkapazität wurde als µmol Trolox-Äquivalente (TE) pro Gramm A. hierophantic (µmol TE g-1 ) angegeben. Radikalfänger-Aktivität von ABTS: Die RSA von A. hierophantic gegen ABTS-Radikale wurde nach der angepassten Methode von Lu et al. [27]. Die Ergebnisse wurden als µmoL TE g-1 ausgedrückt. -Carotin-Linolsäure-Bleichassay: Der Antioxidans-Prozentsatz von A. hierophantic wurde im Hinblick auf die -Carotin-Bleiche im Vergleich zu butyliertem Hydroxyanisol (BHA) unter Anwendung eines angepassten spektrophotometrischen Protokolls von Koleva et al. [28]; die Ergebnisse wurden als auf BHA bezogener Prozentsatz angegeben. Chelatisierende Wirkung von A. hierophantic auf Eisen(II)-Ionen: Die chelatisierende Aktivität von A. hierophantic wurde gemessen, wie von Zhao et al. [29]. Die prozentuale Hemmung von Ferrozin-Fe2 plus Komplexbildung als Metallchelatierungswirkung wurde gemessen und als mg mL−1 dargestellt, wenn Ethylendiamintetraessigsäure (EDTA) als Positivkontrolle verwendet wurde. 2.6. Fraktionierung von Polyphenolverbindungen von wässrigen und ethanolischen Extrakten von A. hierophantic Die Bestimmung von Polyphenolen aus ethanolischen und wässrigen Extrakten wurde mit einem HP1100 (Agilent Technologies, Palo Alto, CA, USA) HPLC-System durchgeführt, das mit einem Autosampler, einer quaternären Pumpe und einem Diodenarray ausgestattet war Detektor (Hewlett Packard 1050) unter Verwendung einer Säule (Altima C18 150 × 4,6 mm, 5 µm) mit einer 5 mm Altima C18 Vorsäule (Alltech, Nettetal, Deutschland) nach Goupy et al. [30]. Das verwendete Lösungsmittelsystem war ein Gradient von A (Essigsäure 2,5 Prozent), B (Essigsäure 8 Prozent) und C (Acetonitril). Die Lösungsmittelmitwirkungsrate betrug 1 mL min−1, und die Trennung wurde bei 35 ◦C durchgeführt. Das injizierte Volumen betrug 10 &mgr;l. Phenolische Verbindungen wurden durch externe Standardkalibrierung getestet und als mg g−1 DW Äquivalente ( plus )-Catechin für Flavan-3-ole und äquivalentes Cumarin für polare aromatische Verbindungen ausgedrückt. Bei fünf Extraktionen von Phenolen aus derselben Probe wurde eine Variabilität von 8 Prozent festgestellt. Alle Werte waren Mittelwerte von doppelten Injektionen. Polyphenole und ihre Derivate wurden bei 280 und 320 nm identifiziert und quantifiziert, während Flavonoide bei 360 nm identifiziert wurden. 2.7. Experimentelles Design Alle Experimente wurden vom Institutional Animal Ethics Committee (IAEC) von QU (Nr. 15-4-2017), KSA, genehmigt, das durch den Zweck der Kontrolle und Überwachung von Tierversuchen (CPCSEA) Committee reguliert wird das Nationale Komitee für Bioethik (NCBE), Ausführungsbestimmungen zum Gesetz über die Ethik der Forschung an Lebewesen. Insgesamt 36 männliche Albinoratten wurden in der aktuellen Studie verwendet und in 6 Gruppen zu je 6 Tieren aufgeteilt und wie folgt behandelt: Gruppe I (Kontrolle) erhielt eine intraperitoneale Injektion (ip) von Olivenöl (1,0 ml kg–1 zweimal täglich Woche) und 0,5 ml destilliertes Wasser oral/täglich an 21 aufeinanderfolgenden Tagen. Gruppe II erhielt eine ip-Injektion einer frischen Mischung aus gleichen Volumina von CCl4 und Olivenöl (in einer Dosis von 1,0 ml kg–1 zweimal pro Woche) und 0,5 ml destilliertem Wasser oral/täglich gemäß Al-Qabba et al. [10] mit geringfügigen Änderungen. Gruppe III (Referenzgruppe) erhielt eine intramuskuläre Injektion (im) von 50 mg kg-1 Vit. E plus Se (Selepherol, Vetoquinol Co., Magny-Vernois, Frankreich) zweimal wöchentlich, laut Asuka et al. [31] und El-Desoky et al. [32] und 0,5 ml destilliertes Wasser oral/täglich. Gruppe IV diente als Test und erhielt 250 mg kg-1 KEE oral/täglich zusammen mit CCl4 ip zweimal pro Woche. Gruppe V erhielt 250 mg/kg KAE oral/täglich zusammen mit CCl4 ip zweimal pro Woche. Gruppe VI erhielt 250 mg kg-1 KEE plus KAE (1:1) oral/täglich zusammen mit CCl4 ip zweimal pro Woche. 24 Stunden nach der letzten Behandlung (Tag 21) wurden die Ratten durch das Gemisch (Alkohol:Chloroform:Ether, 1:2:3) anästhesiert. Blutproben aus der Herzpunktion wurden für alle Tiere gesammelt, und das Serum wurde durch 10-minütige Zentrifugation bei 4 000 U/min abgetrennt und für die biochemische Untersuchung bei –20 °C aufbewahrt. 2.7.1. Biochemische Analyse der Niere Serumkreatinin, Harnstoff, Gesamtprotein und Albuminkonzentrationen wurden durch automatisierte spektrophotometrische Verfahren (BM/Hitachi Autoanalyzer -911; Boehringer Mannheim, Deutschland) gemäß den Anweisungen des Herstellers bestimmt. Kaliumgehalte wurden durch Flammenphotometrie bei 766 nm bestimmt. 2.7.2. Abschätzung der renalen antioxidativen Aktivität Nach dem Sammeln von Blutproben wurden Tiere aller Gruppen getötet; Die rechten Nieren wurden schnell isoliert und mit eiskalter Kochsalzlösung gespült. Das Gewebe wurde dann abgeschnitten, in kalter Kochsalzlösung gespült, trocken getupft und sofort auf Eis gelegt. Unter Verwendung eines elektrischen Gewebehomogenisators wurden Portionen des Gewebes (1,0 g) gewogen und mit 9 Volumina eiskaltem 0,05 M Phosphatpuffer bei pH 7,4 homogenisiert. Zelltrümmer wurden durch 20-minütige Zentrifugation bei 12.000 U/min (4 °C) entfernt, um Überstände zur Bestimmung der Malondialdehyd (MDA)-Konzentration [33], der Superoxid-Dismutase (SOD)-Aktivität [34] und des Gehalts an reduziertem Glutathion (GSH) zu sammeln [ 35]. Die Proteinkonzentration im Nierenhomogenat wurde nach der Bradford-Methode bestimmt [36]. 2.7.3. Nephroprotektionsprozentsatz Der Nephroprotektionsprozentsatz (F) von Vit. E plus Se, KEE, KAE und KEE plus KAE wurden nach Wakchaure et al. für jeden biochemischen Parameter separat berechnet. [37] unter Verwendung der folgenden Gleichung: F Prozent=[1 − (T − N) (C − N)] × 100 (1) wobei T=Mittelwert der Behandlungsgruppe, C {{ 171}} Mittelwert der positiven Kontrollgruppe und N= Mittelwert der negativen Kontrollgruppe. Darüber hinaus wurde der Gesamtnephroprotektionsprozentsatz (TFP-Prozent) damit verglichen. E plus Seas folgt TFP Prozent=Summe von F Prozent der biochemischen Parameter jedes Extrakts Summe von F Prozent der biochemischen Parameter davon. E plus Se × 100 (2) 2.7.4. Histopathologische Studien Autopsieproben wurden von der linken Niere getrennter Rattengruppen gesammelt und in 10-prozentiger Formalin-Kochsalzlösung für 24 Stunden fixiert. Dem Waschen mit Leitungswasser folgte eine Dehydratisierung mit Reihenverdünnungen von Alkohol (Methyl, Ethyl und absolutes Ethyl). Die Proben wurden in Xylol gereinigt und für 24 h bei 56 ◦C in einem Heißluftofen in Paraffin eingebettet. Paraffinbienenwachs-Gewebeblöcke wurden zum Schneiden mit einer Dicke von 4- Mikron unter Verwendung eines Schlittenmikrotoms präpariert. Gewebeschnitte wurden auf Objektträgern aus Glas gesammelt, entparaffiniert und mit Hämatoxylin und Eosin gefärbt, um sie regelmäßig unter einem elektrischen Lichtmikroskop zu untersuchen [38]. 2.8. Statistische Analyse Die Ergebnisse sind als Mittelwert ± Standardfehler (SE) gezeigt. Die Signifikanz der Unterschiede zwischen den Mittelwerten in verschiedenen Gruppen wurde unter Verwendung einer Einweg-Varianzanalyse (ANOVA) gefolgt von Duncan-Test untersucht, und ein p-Wert zwischen den Mittelwerten wurde auf dem Niveau von p < 0,05="" angegeben="" [39].="" 3.="" ergebnisse="" 3.1.="" phytochemikalien="" und="" antioxidative="" kapazität="" von="" a.="" hierophantic="" die="" quantitative="" analyse="" der="" phytochemikalien="" von="" a.="" hierophantic="" und="" verwandter="" antioxidativer="" aktivitäten="" unter="" verwendung="" von="" dpph-="" und="" abts-radikalfängern,="" -carotin-linolsäure-bleichaktivitäten="" und="" chelatisierungsfähigkeit="" (ca)="" wurde="" durchgeführt.="" wie="" aus="" tabelle="" 1="" deutlich="" ersichtlich,="" betrug="" der="" tpc-gehalt="" 67,49="" mg="" gae="" g-1.="" der="" tc-gehalt="" betrug="" 3,51="" µg="" g−1.="" die="" tf-="" und="" tl-gehalte="" betrugen="" 49,78="" bzw.="" 17,45="" mg="" qe="" g−1.="" darüber="" hinaus="" wurden="" dpph-rsa="" und="" abts-rsa="" verwendet,="" um="" das="" fortschreiten="" der="" antioxidativen="" aktivitäten="" zu="" messen.="" die="" ergebnisse="" zeigten="" 128,71="" µmol="" te="" g-1="" und="" 141,92="" µmol="" te="" g-1="" für="" dpph-rsa="" bzw.="" abts-rsa.="" zusätzlich="" ist="" die="" antioxidative="" aktivität="" (aoa)="" von="" a.="" hierophantic="" in="" tabelle="" 1="" dargestellt.="" der="" hemmungsprozentsatz="" von="" linolsäureradikalen="" wurde="" als="" 45,74="" prozent="" im="" vergleich="" zu="" bha="" unter="" verwendung="" eines="" -carotin-bleichtests="" (="" -cb)="" berechnet.="" darüber="" hinaus="" ergab="" die="" bewertung="" der="" metallchelatisierenden="" aktivität="" 42,89="" mg="" g-1,="" was="" die="" bildung="" von="" fe2="" plus="" ferrozin-komplexen="" zu="" beeinträchtigen="" scheint,="" was="" auf="" seine="" fähigkeit="" hindeutet,="" oxidationsmetalle="" zu="" chelatieren.="" tabelle="" 1.="" gesamtphenolgehalt,="" gesamtcarotinoide,="" gesamtflavonoide,="" gesamtflflavonole="" und="" relative="" potenzielle="" antioxidative="" aktivitäten="" von="" a.="" hierophantic="" (mittelwert="" ±="" se),="" n="">

3.2. Quantifizierung von hierophantischen Phenolverbindungen von A. Die quantitative Analyse von Phenolverbindungen auf KEE und KAE durch HPLC-Analyse wurde durchgeführt, und die Daten sind in Tabelle 2 tabelliert. Neun getrennte Phenolsäuren und sechs Flavonoide wurden in nachweisbaren Mengen aus dem KEE von A. identifiziert. Hierophant. Die am häufigsten vorkommenden Phenolsäuren waren Hydroxyzimtsäuren wie Sinapinsäure (28,704 mg 1{{50}}0 g−1 ), gefolgt von Kaffeesäure (6,621 mg 1{ {63}}0 g−1 ), Rosmarinsäure (2,884 mg 100 g−1 ), Ferulasäure (1,854 mg 10{{85} } g−1 ) und Zimtsäure (0.094 mg 100 g−1 ); und Hydroxybenzoesäuren wie p-Hydroxybenzoesäure (3,440 mg 100 g-1), Protocatechusäure (1,811 mg 100 g-1), Vanillinsäure (3,326 mg 100 g-1) und Syringasäure (1,083 mg 100 g −1 ). Flavonoide wie Myricetin (16,269 mg 100 g-1), D-Catechin (2,410 mg 100 g-1), Kämpferol (0,434 mg 100 g-1), Rutin (0,539 mg 100 g-1), Apigenin{{58} }-Glucosid (0,192 mg 100 g-1) und Quercetin (0,184 mg 100 g-1) wurden unschätzbare Mengen nachgewiesen. Die Phenolverbindungen in KAE von A. hierophantic wurden ebenfalls bestimmt, und die Daten sind in Tabelle 2 tabelliert. Syringinsäure wurde als die höchste Phenolsäure unter den 21 identifizierten Phenolen aufgezeichnet. Brenzcatechin und Pyrogallol waren 2,526 bzw. 1,589 mg 100 g-1. Die Daten zeigten, dass einige Phenolsäuren wie Kaffee-, Catechin-, Chlorogen-, Epicatechin-, E-Vanillinsäure, p-Hydroxybenzoe- und Protocatechinsäure in moderaten Mengen von 0,725, 0,256, 0,136, 0,193, 0,443, 0,223 und 0,454 mg 100 nachgewiesen wurden g−1. Im gleichen Zusammenhang geringe Mengen an 3,4,5-Trimethoxyzimtsäure, 4-Aminobenzoesäure, Benzoesäure, Zimtsäure, Cumarin, Ellagsäure, Ferulasäure, Gallussäure, Isoferulasäure, -Cumarinsäure, p-Cumarinsäure und Salicylsäuren wurden nach ihrer Identifizierung quantifiziert. Epicatechin und D-Catechin als Flavonoide wurden auch in KAE von A. hierophantic quantifiziert.

3.3. Serum-Kreatinin-, Harnstoff-, Kalium-, Gesamtprotein- und Albuminspiegel Die CCl4-Injektion erhöhte die Serum-Kreatinin-, Harnstoff- und k-Spiegel bei GII-Ratten im Vergleich zu Kontrollratten (GI). Umgekehrt waren die Gesamtprotein- und Albuminspiegel bei mit CCl4- behandelten Ratten signifikant erniedrigt (Tabelle 3). Vit. E plus Se und A. hierophantische Extrakte (G III, IV, V und VI) reduzierten die durch die CCl4-Injektion verursachten Veränderungen von Kreatinin und Harnstoff erheblich, während sie Albumin und Gesamtproteine ​​auf nahezu normale Werte im GI erhöhten (Tabelle 3 ). Der Serum-k-Spiegel war bei mit CCl4- behandelten Ratten (GII) im Vergleich zu GI deutlich erhöht (Tabelle 3). Die Injektion von Vit. E plus Se und die Verabreichung von A. hierophantischen alkoholischen und wässrigen Extrakten (G IV, V und VI) verbesserten den k-Spiegel im Vergleich zu GI ebenfalls positiv (Tabelle 3).

3.4. Biomarker für renale Antioxidantien Wie in Tabelle 4 gezeigt, verringerte die Verabreichung von CCl4 signifikant die SOD- und GSH-Spiegel und erhöhte den MDA-Spiegel in homogenisiertem GII-Nierengewebe. Jedoch verglichen mit GI, Ratten, die mit beiden Vit. E plus Se und A. hierophantische Extrakte (GIII, VI, V und VI) zeigten eine wesentliche Verbesserung der Aktivität der antioxidativen Enzyme SOD und GSH sowie eine Verringerung der MDA-Spiegel (Tabelle 4). A. hierophantischer alkoholischer Extrakt (GIV) übertraf A. hierophantischer wässriger Extrakt (GV) und kombinierte A. hierophantischer alkoholischer und wässriger Extrakt bei der Abschwächung des Antioxidansspiegels, und die Bekämpfung des Autoxidationsprozesses führte zu niedrigen MDA-Spiegeln im Vergleich zu GI.

3.5. Nephroprotektionsprozentsatz Der Nephroprotektionsprozentsatz (relativ zu den negativen Kontrollgruppen (GI) und positiven (GII) Gruppen) von Nierenfunktionen wie Kreatinin, Harnstoff, k, TP und Albumin sowie antioxidativen Aktivitäten im Nierenhomogenat (MDA, SOD, GSH ) ist in Tabelle 5 dargestellt. Der prozentuale Nephroschutz verzeichnete die höchsten Werte als Kreatinin, Harnstoff, k in GIII, TP und Albumin in GV, MDA und GSH in GIII und SOD in GV (Tabelle 5). Der prozentuale Gesamtnephroschutz relativ zu Vit. Die Behandlung mit E plus Se registrierte maximale Konzentrationen in der mit KAE behandelten Gruppe (GV, 97,62 Prozent), dann KEE (GIV, 83,27 Prozent) und dann KEE plus KAE (GVI, 78,85 Prozent), wie in Tabelle 5 gezeigt.

Diskussion

überlegene Antioxidantien. Polyphenolen werden beim Menschen antikanzerogene und antimutagene Eigenschaften zugeschrieben [40]. Ein wertvoller TPC-Gehalt in A. hierophantic war etwas höher als der von Mohamed et al. [21] als 51,97 mg GAE g−1 in A. hierochuntica-Kraut und von AlGamdi et al. [41], die 4 mmol L-1 GAE in A. hierophantic-Samen fanden. Kürzlich haben Zin et al. [42] wiesen auf das Vorhandensein von Tanninen in A. hierophantic als bioaktive Verbindung hin und empfahlen ihre Bioaktivität, die gründlich untersucht werden muss. Der -Carotingehalt, als Teil der gesamten Carotinoide, betrug 2,27 µg g−1, wie von Mohamed et al. [21], und sogar aktuelle Ergebnisse zeigten Gesamtcarotinoide mit 3,51 µg g-1. Ähnliche Befunde im Flavonoid- und Flavonolgehalt wurden von Mohamed et al. [21]. Biologisch aktive Komponenten, wie phenolische Verbindungen, weisen eine antioxidative Aktivität als Abbau von Lipidoxidationskettenreaktionen auf, indem sie Wasserstoff an aktive freie Radikale abgeben. Dieses Abfangpotential von Phenolen zur Hemmung von Radikalen wurde durch ihre phenolischen Hydroxylgruppen aufgeklärt [8,10,22]. Diese Phenolsäure wurde als wirksame antioxidative Komponente beschrieben, einschließlich Wasserstoffperoxid, Hydroxylradikal und Superoxidanion [43]. A. hierophantische Metall-Chelatisierungsaktivität scheint in der Lage zu sein, die Komplexkonstruktion „Fe2 plus – Ferrozin“ zu stören, was darauf hindeutet, dass es in der Lage ist, „Eisen“-Ionen vor „Ferrozin“ einzufangen. Eine positive Beziehung zwischen einem Anstieg ihres Gehalts an phenolischen Verbindungen wird direkt mit ihrer antioxidativen Kapazität angezeigt [42]. Andjelković et al. [44] stellten die Aktivität zahlreicher Phenolsäuren fest, Komplexe mit Metallen zu bilden. Die wertvollen TPC- und relevanten antioxidativen Aktivitäten unter Verwendung verschiedener Messansätze geben ein klares Bild ab und bestätigen die Bioaktivität von A. hierochuntica als Heilkraut für Lebensmittel- oder Getränkeanwendungen. Biologisch aktive Komponenten wie Phenolverbindungen zeigen eine antioxidative Aktivität als Abbau von Lipidoxidationskettenreaktionen, indem sie Wasserstoff an aktive freie Radikale abgeben [45]. Dieses Abfangpotential von Phenolen zur Hemmung von Radikalen wurde aufgeklärt

wirksame antioxidative Komponente, einschließlich Wasserstoffperoxid, Hydroxylradikal und Superoxidanion [43,45,47]. Die identifizierten und quantifizierten Verbindungen durch HPLC in KAE von A. hierophantic waren höher als die Anzahl der identifizierten Verbindungen in KEE, aber identifizierte Verbindungen in KEE von A. hierophantic wurden in höheren Mengen präsentiert [22]. Die Ergebnisse spiegeln wider, dass die konsumierende A. hierophantic viele Komponenten sowohl in polarer als auch in nicht-polarer Form präsentieren könnte. Diese Ergebnisse werden ähnlich von AlGamdi et al. [41], als sie 20 polyphenolische Verbindungen in Samen von A.hirrochuntica identifizierten und quantifizierten. Der Extrakt enthielt Chlorogensäuren und Hydroxybenzoesäuren, aber die Hauptbestandteile waren Flavon-C-Glykoside, C-Glykoside, O-Glykoside und O-Glykosid-C-Glykoside, die überwiegend als Luteolin-Konjugate vorkommen. Darüber hinaus zeigten 14 der 20 Verbindungen im A. hierophantic-Extrakt antioxidative Aktivität unter Verwendung eines HPLC-Online-Antioxidans-Nachweissystems [41]. Interessanterweise bestätigten aktuelle Daten, dass A. hierophantic reich an sekundären Pflanzenstoffen ist und eine gute Quelle für natürliche Antioxidantien mit potenziellen gesundheitlichen Vorteilen darstellt, wie dies bisher in Samen kaum hervorgehoben wurde [41]. Daher ist Tee, der aus dem ganzen Pflanzenpulver zubereitet wird, die traditionelle Form des Konsums; Daten veranschaulichten neu identifizierte bioaktive Verbindungen in KEE und KAE von A.hirochuntica, die sich von denen unterschieden, die in AlGamdi et al. gefunden wurden. [41] In zahlreichen Studien wird die CCl4--induzierte Nephrotoxizität als Modellsystem zum Testen der nephroprotektiven Wirkung von Pflanzenextrakten/Arzneimitteln verwendet [48,49]. Die aktuelle Studie untersuchte die Wirkung von A. hierophantic-Extrakten auf CCl4--induzierte Nierenschäden sowie ihr nephroprotektives und antioxidatives Potenzial bei Ratten. In der aktuellen Studie erhöhte die CCl4-Behandlungsgruppe (GII) die Kreatinin-, Harnstoff- und K-Spiegel signifikant und verringerte die Gesamtprotein- und Albuminkonzentrationen im Vergleich zu GI. Dies könnte daran liegen, dass eine CCl4-Intoxikation eine Hauptquelle für die Produktion freier Radikale in zahlreichen Organen ist, einschließlich Leber, Nieren, Lunge, Gehirn und Blut [50]. Es wurde auch beobachtet, dass nach CCl4-Injektion bei Ratten die CCl4-Konzentration in den Nieren gleichmäßiger verteilt ist als in der Leber [51], da die Niere eine hohe Affinität zu CCl4 hat und Cytochrom P450 vor allem im Kortex enthält. Die häufigsten freien Radikale von CCl4 sind das Trichlormethylradikal (CCl3• ) und das Trichlormethylperoxylradikal (CCl3O2• ) [52]. Diese Radikale heften sich an ein intrazelluläres Protein, Zellmembranlipide und DNA und verursachen eine Proteindenaturierung, Lipidperoxidation und oxidative DNA-Schäden, die zum Zelltod führen [53]. Im Gegensatz dazu behandelt man CCl4-Ratten damit. E plus Se (GIII) und A. hierophantische Extrakte (GVI: VI) dämpften diese Anstiege der Kreatinin- und Harnstoffspiegel sowie die Erhöhung des Serumalbumins und der Gesamtproteine, um sehr nahe an ihren Spiegeln im GI zu liegen. Dies kann auf die antioxidativen Eigenschaften und den reichen Phenolgehalt von A. hierophantic-Extrakten und deren antioxidativen Kapazität und chelatbildenden Aktivität zurückzuführen sein. E plus Se, das freie Radikale abfängt und dadurch die Nierenschädigung hemmt. Phytochemikalien sind die wirksamsten Radikalfänger und gelten als überlegene Antioxidantien aus Pflanzen [54]. Die am häufigsten vorkommenden Phenolverbindungen waren Hydroxyzimtsäuren, wie Sinapinsäure, unter den neun identifizierten Phenolverbindungen in KEE, während Syringinsäure die höchste Phenolsäure unter den 21 identifizierten Phenolsäuren in KAE war. Mittels HPLC-Analyse wurden sechs Flflavonoide in KEE und zwei in KAE identifiziert [55]. Darüber hinaus ist es als Antioxidans. Es wird angenommen, dass E Gewebe vor Schäden schützt, die durch reaktive Sauerstoffmetaboliten verursacht werden. Selen ist auch als essentielles Spurenelement für die menschliche Gesundheit anerkannt, das Zellen vor den schädlichen Auswirkungen freier Radikale schützt [22]. In der aktuellen Studie verringerte die CCl4-Verabreichung deutlich GSH und SOD und erhöhte die MDA-Spiegel in Nierenhomogenaten im Vergleich zu GI. Vit. E plus Se und A. hierophantische Extrakte verbesserten die vielfältigen Wirkungen von CCl4, indem sie die veränderte Aktivität von Antioxidantien wie SOD und GSH wiederherstellten, und können den Prozess der Produktion von MDA deaktivieren, wie kürzlich berichtet wurde [15,21,40,41]. . GSH ist ein nicht-enzymatisches Antioxidans, das in allen Säugetierzellen vorkommt. Mit seiner oxidierten Form, GSSG, wirkt GSH als Cofaktor für zahlreiche entgiftende Enzyme (GPx, GST und andere) gegen oxidativen Stress und hält das zelluläre Redoxgleichgewicht aufrecht [47]. Dieser Befund steht im Einklang mit denen von Khan und Siddique [56] und Makni et al. [57], die berichteten, dass CCl4 den GSH-Spiegel in Rattennieren senkte. Behandlung damit. E plus Se und A. hierophantische Extrakte zeigten einen Schutz gegen die durch CCl4 ausgelöste Verringerung des GSH-Spiegels. Im gleichen Zusammenhang katalysiert SOD die Dismutation von zwei Molekülen des Superoxid-Anions (*O2) zu Wasserstoffperoxid (H2O2) und molekularem Sauerstoff (O2), wodurch das potenziell schädliche Superoxid-Anion weniger gefährlich wird [58,59]. Eine CCl4-Intoxikation verändert das Genexpressionsniveau durch Verringerung der renalen SOD [60]. Eine Abnahme der SOD-Aktivität ist ein empfindlicher Index für Zellschäden. Unsere getesteten A. hierophantic-Extrakte verbesserten die Nierentoxizität, indem sie den SOD-Spiegel verringerten. Es ist an verschiedenen enzymatischen Prozessen beteiligt, um die Konzentration von Entsäuerungsreaktionen zu reduzieren [61]. MDA ist das erste Produkt der Lipidperoxidation und einer der wichtigen Marker für oxidativen Stress. A. hierophantische Extrakte verringerten den Anstieg der MDA-Spiegel und stellten die gesamte antioxidative Kraft in den mit CCl4- behandelten Rattennieren wieder her. Diese Schutzwirkung kann auf die starke antioxidative Aktivität von A. hierophantic-Extrakten zurückzuführen sein [15,21,40,41]. Diese Ergebnisse deuten auch darauf hin, dass A. hierophantic-Extrakte oxidativen Stress abschwächen können, indem sie die Lipidperoxidspiegel in CCl4--exponierten Rattennieren senken und Nierenschäden verhindern. Diese Ergebnisse stimmten mit den Ergebnissen der antioxidativen Aktivitäten von Zn auf CCl4--induzierte akute Nephrotoxizität überein [62,63]. A.hirochuntica-Extrakte zeigten eine wertvolle Nephroprotektionskapazität in Bezug auf Nierenfunktionstests (Kreatinin, Harnstoff, K, TP und Albumin) und antioxidative Aktivitäten von Nierenhomogenaten (GSH, SOD, MDA) in GIV, V bzw. IV. Der prozentuale Gesamtnephroschutz relativ zu Vit. Die Behandlung mit E plus Se registrierte Höchstwerte in der mit KAE behandelten Gruppe (GV, 97,62 Prozent), dann KEE (GIV, 83,27 Prozent) und dann KEE plus KAE (GVI, 78,85 Prozent), jeweils in absteigender Reihenfolge. Dies kann auf Unterschiede in Quantität und Qualität des phenolischen und antioxidativen Gehalts von A.hirrochuntica-Extrakten zurückzuführen sein, die eine Beziehung zur antioxidativen Kapazität haben [15,19,22,40,42]. Die histopathologischen Befunde in den Nieren stimmen mit den biochemischen Einschätzungen der untersuchten Versuchsgruppen überein. Die Verabreichung von CCl4 (GII) verursachte eine glomeruläre und tubuläre Läsion mit Vasokongestion in den Nieren. Dogukan et al. [64] entdeckten ein ähnliches histologisches Muster im Nierengewebe von Ratten als Reaktion auf eine verlängerte CCl4-Behandlung. Es wird auch angenommen, dass histologische Veränderungen durch funktionelle Überlastung der Nephrone verursacht werden, was zu Nierenfunktionsstörungen führt [65], und/oder auf die Zerstörung von Gewebe zurückzuführen sind, die als Folge der Bildung freier Radikale über den CCl4-Metabolismus hervorgerufen wird [56,66]. . Die Wirkung davon. E plus Se und A. hierophantische Extrakte zur Reparatur und Wiederherstellung der Zerstörungswirkung von CCl4 auf die Nieren waren bemerkenswert. Das mag daran liegen. E plus Se (als starkes Antioxidans) wirkt auf ROS, das durch CCl4 induziert wird [67]. A. hierophantische Extrakte unterdrücken die CCl4--induzierte akute Nephrotoxizität aufgrund der antioxidativen Rolle und der Radikalfängereigenschaften der in A.hirochuntica-Extrakten vorhandenen phenolischen Verbindungen [22]. Unsere Ergebnisse stimmen mit denen anderer Forscher überein, die gezeigt haben, dass verschiedene Pflanzenderivate pharmakologische Wirkungen haben, indem sie CCl4-Missbrauch beseitigen und die Normalität wiederherstellen [6].

Schlussfolgerungen

Die Ergebnisse dieser Studie zeigten deutlich, dass die A. hierophantic-Pflanze reich an polaren und unpolaren Phenolverbindungen mit einer überlegenen antioxidativen Kapazität ist, die in direktem Zusammenhang mit dem phytochemischen Gehalt steht. A. hierophantic (insbesondere wässriger Extrakt) schützt Ratten vor CCl4--induziertem oxidativem Stress und akuter Nierenschädigung, was durch einen signifikanten Abfall der MDA-Spiegel und eine erhöhte GSH- und SOD-Aktivität sowie das Aufhören von biochemischen und histologischen Wirkungen belegt wird Veränderungen in den Nieren. Die Schutzwirkung könnte aus den antioxidativen und Radikalfängereigenschaften der in den A. hierophantic-Extrakten vorhandenen phenolischen Verbindungen resultieren. Diese Eigenschaften helfen, die medizinische Wirksamkeit der Pflanze als pflanzliches Medikament zu erklären. Weitere Forschung ist erforderlich, um die aktiven Prinzipien von A. hierophantic vollständig zu beschreiben, und diese Studie soll eine umfassendere verwandte Forschung anregen, um ausreichende Daten und Empfehlungen zur Definition ihrer Mechanismen und sicheren Dosen bereitzustellen.

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