Aptamer-Anwendungen in den Neurowissenschaften Teil 2

Ein weiterer Neurotransmitter, Serotonin, spielt eine Rolle bei Neuromodulationsaktivitäten, die sich auf Schlaf, Aggression, Appetit und sexuelle Aktivität auswirken. Es wird in verschiedenen Körperteilen produziert, etwa im Gehirn, Rückenmark, Blutplättchen und Darm [81–84].

Serotonin ist ein Neurotransmitter, der eine wichtige Rolle für die körperliche und geistige Gesundheit des Menschen spielt. Im menschlichen Körper reguliert Serotonin die Stimmung, steuert Appetit und Schlaf und fördert körperliches Vergnügen und Wohlbefinden. Serotonin spielt jedoch auch eine wichtige Rolle bei der Beeinflussung des Gedächtnisses.

Untersuchungen haben ergeben, dass Serotonin die Gedächtnisverbesserung fördern kann, indem es die Signalübertragung zwischen Neuronen reguliert. Wenn Menschen positiv stimuliert werden, schüttet der Körper Serotonin aus, das dabei hilft, die Verbindungen zwischen Neuronen zu stärken und die Gedächtnisleistung zu verbessern. Serotonin kann Menschen auch kreativer machen, die geistige Beweglichkeit verbessern und dazu beitragen, dass Menschen schneller lernen und denken.

Darüber hinaus kann Serotonin dazu beitragen, Symptome von Angstzuständen und Depressionen zu lindern, Stimmungsprobleme, die sich negativ auf die Konzentration und das Gedächtnis auswirken können. Eine gute Stimmung und ein guter Geisteszustand können oft die Erkennungs- und Lernfähigkeit von Menschen für Neues fördern.

Zusammenfassend lässt sich sagen, dass Serotonin eine unverzichtbare Rolle für unsere körperliche und geistige Gesundheit, unser Lernen und unser Gedächtnis spielt. Wir können die Ausschüttung von Serotonin steigern und [das Gedächtnis verbessern], indem wir unsere Essgewohnheiten, die Menge an Bewegung, Lernmethoden usw. ändern, eine positive und gesunde Mentalität pflegen und uns ständig selbst herausfordern, die Verbesserung des Gedächtnisses kontinuierlich zu fördern. Es ist ersichtlich, dass wir das Gedächtnis verbessern müssen, und Cistanche deserticola kann das Gedächtnis erheblich verbessern, da Cistanche deserticola antioxidative, entzündungshemmende und Anti-Aging-Wirkungen hat, die dazu beitragen können, Oxidations- und Entzündungsreaktionen im Gehirn zu reduzieren und so das Gehirn zu schützen Gesundheit des Nervensystems. Darüber hinaus kann Cistanche deserticola auch das Wachstum und die Reparatur von Nervenzellen fördern und so die Konnektivität und Funktion neuronaler Netzwerke verbessern. Diese Effekte können dazu beitragen, das Gedächtnis, das Lernen und die Denkgeschwindigkeit zu verbessern und können auch die Entwicklung kognitiver Dysfunktionen und neurodegenerativer Erkrankungen verhindern.

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Ungleichgewichte des peripheren Serotoninspiegels wurden mit verschiedenen Krankheitszuständen in Verbindung gebracht, darunter Bluthochdruck, Nierenerkrankungen und Depressionen. Daher ist die Verwendung von Serotonin zur Vorhersage des Krankheitszustands und zur Einleitung einer geeigneten Behandlung von klinischer Bedeutung.

Es wurde ein plasmonischer Assay für Serotonin mit einem Aptamer-AuNP-Konjugat entwickelt, dessen Aggregation in Gegenwart von Serotonin verändert wird. Die Änderung der Partikelaggregation kann als Verschiebung der Spitzenwellenlänge der Absorption gemessen werden.

Der Test zeigte eine spezifische Reaktion auf Serotonin und ergab kein statistisch signifikantes Signal mit seinen Metaboliten 5-Hydroxyindolessigsäure (5-HIAA), Adrenalin oder Noradrenalin, wenn jeder bei 1 µM getestet wurde.

Fötales Rinderserum löste als Nachahmer von menschlichem Serum ebenfalls kein Signal aus [85]. Kürzlich wurden implantierbare Aptamer-Feldeffekttransistor-Neurosonden (FET) zur Überwachung des Serotoninspiegels im Gehirngewebe entwickelt. Ultradünne In2O3-Oberflächen nanoskaliger FETs wurden mit Aptameren modifiziert und diese Neurosonden ermöglichten in vivo Nachweisgrenzen für fM-Serotonin bei minimalem Biofouling [86].

Mit zusätzlichen Neurosonden werden raumzeitliche Aufzeichnungen neuronaler Aktivität möglich, sodass Gehirnfunktionen auf einer viel tieferen Ebene verstanden werden können. Adrenalin ist ein Katecholamin-Neurotransmitter mit einer Vielzahl physiologischer Funktionen, bei denen abnormale Werte gesundheitliche Probleme wie Herzrhythmusstörungen, Herzinfarkt und Blut verursachen können Druckanstieg und Lungenödem.

Für die Beobachtung dieser damit verbundenen Krankheitszustände ist es wichtig, das zirkulierende Adrenalin zu quantifizieren. Zu diesem Zweck wurde eine kolorimetrische Nachweismethode entwickelt, die auf der Wechselwirkung von Adrenalin mit Aptamer-funktionalisiertem Au-NP basiert. Das System ist kostengünstiger und spezifischer als andere Techniken zur Quantifizierung von Adrenalin, beispielsweise durch Flüssigkeitschromatographie und Spektrophotometrie.

Außerdem wurde durch UV-sichtbare Spektroskopie eine Nachweisgrenze von 0,9 nM bestimmt. Dies ist die niedrigste Nachweisgrenze, die für Adrenalin mit einer kolorimetrischen Methode aufgezeichnet wurde. Analoga von Adrenalin, 3,4-Dihydroxyphenylessigsäure (DOPAC), Tryptophan, Ascorbinsäure, Dopamin, Tyrosin und Homovanillinsäure zeigten nur eine sehr geringe oder keine Reaktion, was auf eine hohe Spezifität des Aptasensors hinweist [87].

Eine Veränderung des Spiegels eines einzelnen Neurotransmitters kann auf eine von mehreren Krankheiten hinweisen, weshalb es höchst unwahrscheinlich ist, dass eine Krankheitsdiagnose auf der Grundlage der Messung eines einzelnen Neurotransmitters erfolgen kann. Daher wird die Fähigkeit der meisten Aptasensoren, in eine Multiplex-Plattform integriert zu werden, zu Diagnosetools führen, die besser für Kliniken geeignet sind und das Potenzial haben, eine genauere Krankheitserkennung zu unterstützen.

2.3. Biomarker-Erkennung
Ein Biomarker ist jede Substanz, Struktur oder jeder Prozess im Körper, der entweder zu einem Ergebnis führt oder auf das Vorliegen einer bestimmten Krankheit hinweist. Viele Biomarker sind Substanzen, die in Bioflüssigkeiten wie Blut, Speichel und Urin gemessen werden können.

Das Hauptproblem bei der Charakterisierung von Biomarkern für neurologische Erkrankungen ist die Blut-Hirn-Schranke (BBB), durch die viele Moleküle, darunter viele Proteine, nicht passieren können. Obwohl Proteine ​​die dominierenden Biomarker für bestimmte Krankheiten sind, ist es wahrscheinlicher, dass kleine Peptide wie das Neuropeptid Y oder Proteinfragmente die Blut-Hirn-Schranke passieren und im Blutkreislauf entdeckt werden.

Metaboliten sind eine weitere wichtige Gruppe von Biomarkern für neurologische Erkrankungen. NeoVentures Biotechnology Inc. hat einen Aptamer-Auswahlansatz namens FRELEX entwickelt, der die Auswahl von Aptameren auf der Grundlage der Konkurrenz zwischen einem an einer Oberfläche befestigten kurzen Oligonukleotid und dem Ziel ermöglicht. Wie bei Zell-SELEX und anderen Formen von strukturveränderndem SELEX kann dieses Protokoll mit einer Probe durchgeführt werden, die eine Mischung von Komponenten enthält, ohne vorherige Kenntnis der Ziele, für die Aptamere ausgewählt werden sollen.

Bei diesen SELEX-Formen werden Gegenselektionen mit bestimmten Teilmengen von Komponenten durchgeführt, um die Auswahl von Aptameren voranzutreiben, die die gewünschten Spezifitäten erfüllen. Mit FRELEX wurden Aptamere gegen Serum von transgenen Mäusen selektiert, die das menschliche Tau-Protein überexprimierten.

Um die Aptamer-Selektion in Richtung menschliches Tau und die Folgen einer Tau-Überexpression voranzutreiben, wurde bei der Gegenselektion Serum von Wildtyp-Mäusen verwendet. Die Gruppe identifizierte die angereicherten Aptamersequenzen mithilfe von NGS und charakterisierte bestimmte Aptamere für transgene Mäuse im Spätstadium und Wildtyp-Mäuse durch Vergleich ihrer relativen Häufigkeit.

Sie stellten die Hypothese auf, dass der Unterschied in der Häufigkeit die jeweilige Konzentration der Epitope (erhöht als Reaktion auf Tau-Überexpression) widerspiegelt, mit denen die Aptamere interagieren können [29].

3. Diagnostische und therapeutische Anwendungen

Bei neurodegenerativen Erkrankungen (NDs) kommt es zur Degeneration von Neuronen im Gehirn, was zum Verlust von Strukturen und Funktionen des Zentralnervensystems führt. ND kann durch Alterung, genetische Faktoren und Umweltfaktoren verursacht werden.

Demenz ist neben der Alzheimer-Krankheit (AD) eine der häufigsten altersbedingten NDs. Die Parkinson-Krankheit (PD) kann auf genetische Mutationen und/oder Umweltgifte zurückzuführen sein. Amyotrophe Lateralsklerose (ALS), Multiple Sklerose (MS), die Huntington-Krankheit (HD) und Prionenerkrankungen sind weitere häufige NDs mit genetischen Verbindungen.

Leider gibt es für diese Krankheiten weder wirksame Heilmittel noch Früherkennungsstrategien. Wie die weit verbreiteten Antikörper sind Aptamere zu attraktiven Wirkstoffen für die Entwicklung neuartiger Biosensoren zur Frühdiagnose von NDs und zur Heilung dieser Krankheiten geworden [88].

3.1. Alzheimer-Krankheit

Als altersbedingte fortschreitende Hirnstörung, die zu geistigen Beeinträchtigungen führt, ist AD die häufigste Form der Demenz. Seine Pathologie ist durch die Aggregation von Amyloid (A) gekennzeichnet, das aus dem Amyloid-Vorläuferprotein (APP) stammt und in der Gehirnregion des Hippocampus initiiert wird.

Obwohl Wissenschaftler die Hypothese aufstellten, dass A-induzierte Neurotoxizität mit unlöslichen A-Plaques (AP) und Fibrillen (AF) korreliert, deuten neuere Erkenntnisse darauf hin, dass lösliche A-Oligomere (AO) auch mit dem Ausbruch von AD verbunden sind.
Daher wurde AO als attraktiver Biomarker für die Frühdiagnose von AD identifiziert, und A und Tau gelten als wichtige therapeutische Ziele für die Behandlung von AD [89].

3.1.1. AD-Diagnose

Früher beschriebene Aptamere gegen AO hatten geringe Affinitäten und Spezifitäten, aber spätere Studien waren erfolgreicher bei der Identifizierung von Aptameren, die selektiv Fibrillen einer 40--Restform von A (A 40), aber nicht von A 40-Polymeren erkannten [90].

Den Aptameren fehlte jedoch eine hohe Spezifität für A 40 -Fibrillen im Vergleich zu den Fibrillen mehrerer anderer getesteter amyloidogener Proteine. Es wurde auch gezeigt, dass ein DNA-Aptamer, das für die Wechselwirkung mit -Synuclein (-syn)-Oligomer mit 68- nM-Affinität ausgewählt wurde, AO mit 25- nM-Affinität bindet [91]. Im Jahr 2019 wurde unter Verwendung derselben von Tsukakoshi et al. erhaltenen Aptamere ein markierungsfreier elektrochemischer Aptasensor für eine spezifischere Erkennung von AO entwickelt [92].

Das Aptamer organisiert sich über Thiol (-S)-Wechselwirkung selbst auf Goldstabelektroden und das System hat eine Nachweisgrenze von 30 ppm, bestimmt durch EIS. Dies war der erste Aptasensor, der erfolgreich zur Überwachung der A-Proteinaggregation auf Basis von EIS eingesetzt wurde, was aufgrund der hohen Selektivität des Aptamers zwischen A-Spezies möglich war. Aufgrund seiner einfachen Herstellung und effektiven Regeneration könnte dieser Aptasensor ein vielversprechendes diagnostisches Instrument zur Früherkennung von AD und zum Nachweis der A-Protein-Akkumulation sein [92].

Ein Aptasensor zum Nachweis von A-Oligomeren wurde unter Verwendung des -syn-DNA-Aptamers [91] im Komplex mit Methylenblau (MB) entwickelt und an nanoporöses anodisches Aluminiumoxid gebunden. Der hohe Absorptionskoeffizient von MB für weißes Licht führte zu einer geringen Intensität des reflektierten weißen Lichts.

In Gegenwart von A-Oligomeren dissoziierte der Aptamer/MB-Komplex und der Anstieg des reflektierten Lichts wurde durch interferometrische Reflexionsspektroskopie (IRS) nachgewiesen [93]. Der Aptasensor hatte eine Nachweisgrenze von 8 pM und eine gute Reaktion auf die A-Oligomere im Konzentrationsbereich von 0,5 bis 50 nM. Neurofibrillenbündel (NFTs) sind pathologische Kennzeichen von AD.

Die Bildung von NFTs wird im Hippocampus initiiert und das Ausmaß der NFT-Bildung hängt mit der Schwere der Demenz bei AD zusammen. Die Hyperphosphorylierung des Mikrotubuli-assoziierten Proteins Tau fördert dessen Fähigkeit, normales Tau zu rekrutieren und zu Filamenten zu organisieren, die zu den NFTs werden. Daher wird die Hyperphosphorylierung von Tau als eine der Hauptursachen für AD vorgeschlagen.

Zusätzlich zu seiner normalen Rolle bei der Förderung der Mikrotubuli-Assemblierung und der Stabilisierung der zusammengesetzten Mikrotubuli wurde durch Nichtgleichgewichts-Kapillarelektrophorese (CE) beobachtet, dass Tau drei zufällig ausgewählte ssDNA-Oligonukleotide bindet, von denen eines, ssDNA1, mit hoher Affinität an Tau381 gebunden ist (Kd {{ 3}} nM) [94].

Unter Verwendung von ssDNA1 wurde ein Aptamer/Antikörper-Sandwich-Assay entwickelt, um femtomolare Konzentrationen von Tau-Protein im menschlichen Plasma durch Oberflächenplasmonresonanz (SPR) nachzuweisen [95].

In einer anderen Studie wurden DNA-Aptamere gegen das gesamte Tau-Protein von 441 Aminosäuren (Tau441) durch eine schnelle Selektionstechnik basierend auf der Kapillarelektrophorese-Partitionierung mit drei Selektionsrunden an einem einzigen Tag selektiert. Fünf Aptamere, die aus den Ergebnissen der Hochdurchsatzsequenzierung ausgewählt wurden, wurden von SPR auf ihre Fähigkeit zur Tau-Erkennung untersucht.

Das analytische Potenzial des Aptamers mit höherer Affinität wurde durch einen Fluoreszenzanisotropietest in homogener Phase nachgewiesen. Dieses hochaffine Aptamer band in diesem Assay das Tau441-Protein und die kürzeren Isoformen Tau352, Tau381 und Tau383 mit Nachweisgrenzen von 28 nM, 6,3 nM, 3,2 nM bzw. 22 nM [96].

3.1.2. AD-Therapeutika

Als eine der möglichen Therapien wurden RNA-Aptamere ausgewählt, um die A 40-Aggregation zu hemmen. Während der Auswahl wurde ein A-Oligomer an Goldnanopartikel (A-AuNPs) konjugiert und zwei Aptamere wurden nach SELEX als Aptamerkandidaten identifiziert.

Die Kinder der 10–20 nM. Diese Aptamere hemmten die A-Plaque- und Fibrillenbildung, wie durch Transmissionselektronenmikroskopie und einen A 40-Enzym-Immunoassay (ELISA) nachgewiesen wurde [97].

Das Decoy-Peptid (DP) der Alkoholdehydrogenase (ABAD), das mit A interagiert, antagonisiert die Zytotoxizität des A-Peptids. Die ABAD-DP-Sequenz wurde zwischen zwei Thiolen eingefügt, die in Thioredoxin (TRX) eine Disulfidbindung bilden, um das TRX1-ABAD-DP-TRX2-Peptid-Aptamer zu erzeugen. Seine stabile Expression in NIH 3T3-Zellen unter Verwendung von Adeno-assoziierten Viren wurde durch Immunfluoreszenzfärbung verifiziert.

Das exprimierte Aptamer könnte das A-Peptid binden und die Lebensfähigkeit der Zellen verbessern. Diese Untersuchung bestätigte die wirksame Hemmung der zytotoxischen Wirkung des A-Peptids durch Peptidaptamere [98]. Tau-Proteine ​​assoziieren normalerweise mit Mikrotubuli und stabilisieren diese, aber ihre Hyperphosphorylierung kann zu Proteinaggregaten führen, die als „Tauopathie“ bezeichnet werden und toxisch sind.

Das DNA-Aptamer Tau-1, das gegen das menschliche Tau441 selektiert wurde, hemmt die Tau1-Oligomerisierung in vitro [99]. Diese Hemmung wurde auch in Zellkulturstudien mit HEK293-Zellen validiert [100]. Beta-Sekretase (BACE1) spielt eine Rolle bei der A-Produktion und die Hemmung der BACE1-Expression ist bei Mäusen tödlich. Die Behandlung von AD könnte eine BACE1-Modulation umfassen.

Aufgrund seines großen aktiven Zentrums ist BACE1 jedoch ein anspruchsvolles Ziel für niedermolekulare Inhibitoren. Um dies zu umgehen, könnten Nukleinsäureaptamere neue Werkzeuge zur Hemmung der BACE1-Aktivität sein. Dieses Enzym verfügt über einen zytoplasmatischen Schwanz, B1-CT, der als Andockstelle für Proteine ​​wie das Kupfer-Chaperon für Superoxiddismutase-1 (CCS) und das ADP-Ribosylierungsfaktor-bindende Protein (GGA1) dient.

Die physiologische Rolle des B1-CT ist weitgehend unbekannt. RNA-Aptamer, die die B1-CT-Bindung an die membranproximale Hälfte des C-Terminus von BACE1 angreifen, verhinderten die Rekrutierung von CCS, während sie gleichzeitig die Bindung von GGA1 an BACE1 ermöglichten und den BACE1-Transport zu Recycling-Endosomen regulierten [101].

Um gezielt auf BACE1 abzuzielen, wurden die DNA-Aptamere BI1 und BI2 gegen BACE1 erzeugt, die zwar BACE1, aber weder die Alpha- noch die Gamma-Sekretase hemmten. Mithilfe einer stabiltransfizierten HEK293-Zelllinie exprimierten sie den Amyloid-Protein-Vorläufer (APP) und zeigten mithilfe eines In-vitro-Fluoreszenzresonanzenergietransfer-Assays (FRET), dass der A-Spiegel verringert und der Zellmangel in einer primär kultivierten neuronalen Zelllinie behoben wurde [102]. Die Aptamereffizienz wurde durch die Zugabe von Cholesteryltetraethylenglykol (TEG) weiter verbessert.

3.2. Parkinson-Krankheit

Die Parkinson-Krankheit (PD) ist die zweithäufigste neurodegenerative Erkrankung und betrifft weltweit etwa sieben Millionen Menschen. Obwohl es sich um eine fortschreitende Krankheit handelt, die durch motorische und nichtmotorische Merkmale gekennzeichnet ist, hat sie aufgrund des Verlusts der Beweglichkeit und Muskelkontrolle erhebliche klinische Auswirkungen auf die Patienten.

Der Verlust striataler dopaminerger Neuronen und der neuronale Verlust in nichtdopaminergen Bereichen kennzeichnen die Parkinson-Krankheit. Der Verlust von Neuronen ist im Allgemeinen mit der charakteristischen Bildung von Lewy-Körpern verbunden. Daher wird das Vorhandensein von Lewy-Körpern, die -syn-Oligomere enthalten, im Gehirn als mögliches therapeutisches und diagnostisches Ziel für Parkinson angesehen.

3.2.1. PD-Diagnose

Dem ersten Aptamer, „M5-15“, das gegen -syn selektiert wurde, fehlte die Spezifität für Oligomere und es konnte auch an -syn-Monomere binden [103]. Es wurde gezeigt, dass DNA-Aptamere, die dann ausgewählt wurden, mit -syn-Oligomeren und nicht mit -syn-Monomeren interagieren, aber A 1–40-Oligomere binden.

Die Forscher untersuchten auch die Spezifität des Aptamers für -syn-Oligomere gegenüber anderen Proteinen mit Strukturen, die überwiegend aus -Faltblatt-Strukturen bestehen, wie beispielsweise der -Faltblatt-Propellerstruktur der Pyrrolochinolin-Chinin-Glucose-Dehydrogenase (PQQH), und zeigten, dass das Aptamer kein PQQH bindet [91].Eine Sorte Es wurde berichtet, dass Aptasensoren in der Lage sind, Synoligomere zu quantifizieren.

Ein kolorimetrischer Aptasensor, der ein DNA-Aptamer gegen das -Synoligomer verwendet, wurde an Goldnanopartikel (AuNPs) adsorbiert, was eine salzinduzierte Aggregation der Nanopartikel verhinderte. Seine Bindung an das -syn-Oligomer verhindert die Absorption des Aptamers auf der Oberfläche von AuNPs, wodurch die Aggregation von AuNPs in hohen Salzkonzentrationen ausgelöst werden kann und zu einer Farbänderung führt.

Dieses System wurde mit einer LoD von 10 nM angegeben. Allerdings trug Serum (sogar bei 2 %) zur Absorption von Verbindungen im Bereich der Farbveränderung im Test bei und störte die salzabhängige Aggregation der Aptamer-Au-NPs.

Aptasensoren mit EIS und SPR waren empfindlicher, mit LoDs von 1 pM bzw. 8 pM [104]. Ein EIS-Aptasensor erwies sich als äußerst spezifisch für Oligomere gegenüber Monomeren und wurde durch die Anwesenheit von Serum nicht beeinträchtigt [104]. Ein aufwändiger Entwurf für einen elektrochemischen Aptasensor zum Nachweis von -syn-Oligomeren umfasste einen Hybrid, der durch die Komplementärsequenz zu einem -syn-Oligomer-Aptamer gebildet wurde, das über eine Thiolbindung an eine Goldoberfläche gebunden war, und umfasste terminale Desoxynukleotidyltransferase (TdT) und dTTP, um die Enden des Aptamers und seiner zu verlängern Ergänzung mit zusätzlichem Polypen.

Die verlängerte ssDNA band Methylenblau und förderte dessen Assoziation mit der Goldoberfläche, wodurch ein elektrochemisches Signal erzeugt wurde. Darüber hinaus enthielt das System Exonuklease I (Exo I), die spezifisch für ssDNA ist. Als das Aptamer aus dem binären Komplex mit seinem Komplement durch seine Bindung an das -syn-Oligomer entfernt wurde, wurden die komplementären Stränge durch Exo I verdaut, wodurch die Ansammlung von Methylenblau an der Goldoberfläche verhindert und somit das elektrochemische Signal verringert wurde.

Die Nachweisgrenze lag bei 10 PM (S/N=3) und die Wiederherstellung des Signals in Gegenwart von 10 % und niedrigeren Serumkonzentrationen betrug sehr akzeptable 95,3–107 % [105]. Aufgrund seiner Komplexität und des Einbaus von Enzymen ist dieses System jedoch weniger lagerstabil und im Feld reproduzierbar. Eine Kombination aus Kapillarelektrophorese-Massenspektrometrie (CE-MS) und Festphasenextraktion (SPE) zur Vorkonzentrierung des Ziels mit einer Aptamer-modifizierten Mikrokartusche in einem großen Volumen injizierter Proben verringerte sich die Nachweisgrenze um das 100-Fache im Vergleich zu CE-MS-Systemen.

In diesem neuartigen System wird die Probe gereinigt und das Volumen für eine verbesserte Analyse minimiert, indem eine Mikrokartusche verwendet wird, die das Ziel selektiv zurückhält. Ein Aptamer-Affinitätssorbens (AA) in der Kartusche erwies sich als überlegene Alternative zu einem Antikörper -basiertes Immunaffinitätssorbens (IA), da die Hintergrundelektrolyte, die zum Spülen des Systems erforderlich sind, auch die Antikörper denaturieren.

Die Entwicklung eines AA-SPE-CE-MS gelang durch Modifizierung der Mikrokartusche mit dem M5-15-DNA-Aptamer. Das System wies eine LoD von 2,8 nM auf und hatte einen linearen Nachweisbereich zwischen 7 und 140 nM -syn in der Blutprobe.

Außerdem war die Identifizierung von freien und N-acetylierten -syn-Proteoformen aufgrund der hochpräzisen Massendetektion und Auflösungsleistung des MS möglich. Schließlich erwies sich die Mikrokartusche auch bei saurem BGE als stabil und konnte für etwa 20 Analysen verwendet werden, wobei die Wahrscheinlichkeit einer fehlerhaften Quantifizierung des Ziels gering war [106].

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