Chemische Bestandteile der Blätter von Cistanche

Zusammenfassung: CistancheBlätter werden seit langem als traditionelle Medizin verwendetbehandelnischämischer Schlaganfall, Angina, UndHypertonieund als gesundes Getränk undKosmetik fürAntialterung. Ziel dieser Studie war es, möglichst viele Verbindungen aus einem Ethanolextrakt zu isolierender Kakiblätter, um die biologisch aktiven Verbindungen zu identifizieren. Die antioxidative Wirkungder Ethylacetatschicht aus dem Ethanolextrakt der Kakiblätter wurde nachgewiesen durch2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH)-Assay und Online-Hochleistungsflüssigkeitschromatographie-2,20 -casino-bis (3-ethylbenzothiazolin-6-sulfonsäure) (HPLC-ABTS) Analyse. Ein neues Flavonoid,kaempferol-3-O- -D-2"-Cumaroylgalactosid (1) und eine neue natürliche Verbindung, Kaempferol-3-O- -D-2"-Feruloylglucosid (3) wurden zusammen mit 25 zuvor aus der Ethylacetatschicht isoliertbekannte Verbindungen, einschließlichvierzehn Flavonoide, ein Ionon, zwei Cumarine, sieben Triterpenoide,und ein Acetophenon. Die Interpretation spektrometrischer und spektroskopischer Daten bestimmte ihre Strukturen. Alle isolierten Verbindungen wurden schnell online bewertetHPLC-ABTSTestund davon Verbindungen4–8, 11, 13, 15, Und16 deutlich gezeigtantioxidative Wirkung. DerDie Menge dieser Verbindungen betrug {{0}},3–0,65 Prozent des Extrakts.

Schlüsselwörter:Diospyros kaki; Kakiblätter; Flavonoid; Antioxidans

Klicken Sie hier, um Cistanche reich an Flavonoiden für kosmetisches Anti-Aging zu erhalten

1. Einleitung

Diospyros kakiThunb. (Kaki) gehört zur Familie der Ebengewächse und ist weit verbreitetvertrieben in Korea, China und Japan. Die Früchte werden frisch oder trocken verzehrt, die Blätter hingegen schonwird seit langem als traditionelles Arzneimittel zur Behandlung von ischämischem Schlaganfall, Angina pectoris, Bluthochdruck,Arteriosklerose und Infektionskrankheiten [1]. Darüber hinaus wurden seine Blätter genutztaufgrund ihrer Anti-Aging-Eigenschaften und ihrer Wirkung als gesunde Getränke und Kosmetikahelfen, die Ansammlung von Cholesterin und Melanin zu verhindern [1]. Neuere Forschungen haben dies nahegelegtdass die Extrakte aus Kakiblättern ein breites Spektrum an biologischen Eigenschaften besitzen,einschließlich Radikalfänger, Neuroprotektion, Thrombosehemmung, Anti-Arteriosklerose,und antiallergisch [2–6]. Eine frühere phytochemische Untersuchung ergab, dass verschiedeneArten vonFlavonoideund Terpenoide sind die Hauptbestandteile [7] und mehrere Tannine,Naphthochinone, Cumarine, Ionone und Fettsäuren wurden ebenfalls berichtet [8–12]. Reaktive Sauerstoffspezies (ROS) sind reaktive Moleküle, die in biologischen Systemen produziert werden.und das Gleichgewicht zwischen der Erzeugung und Eliminierung von ROS ist im Normalfall gut kontrolliertZellphysiologie [13]. Eine übermäßige Bildung von ROS führt jedoch zu oxidativen Schäden.und damit wiederum Alterung und altersbedingte Krankheiten wie Krebs, Diabetes und ParkinsonKrankheit [14]. Daher die Entdeckung von Antioxidantien wie Flavonoiden und Phenolverbindungenkönnte eine vielversprechende Strategie zur Behandlung dieser Krankheiten sein.

Im Rahmen unseres kontinuierlichen Projekts zur Suche nach biologisch aktiven Verbindungen [15], Dieantioxidative Wirkung des Ethanol (EtOH)-Extrakts und der Lösungsmittelpartien aus der KakiBlätter wurden mittels 2,2-Diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH)-Assay und Online-Hochleistungstest bewertetFlüssigkeitschromatographie-2,20 -casino-bis (3-ethylbenzothiazolin-6-sulfonsäure)(HPLC-ABTS)-Analyse. Eine phytochemische Untersuchung der Kakiblätter führte zur Isolierungeines neuen Flavonoids (1), eine neue natürliche Verbindung (3) und25 vorherbekannte Verbindungen. Die Anwendung spektroskopischer und spektrometrischer Methoden charakterisierte die Strukturen. Alle isolierten Verbindungen wurden schnell auf ihre Wirkung untersuchtantioxidative Wirkungen mittels Online-HPLC-ABTS. Darüber hinaus ist die quantitative Analyse vonDie Untersuchung aller isolierten Verbindungen wurde in der vorliegenden Studie durchgeführt.

2. Ergebnisse und Diskussion

2.1. Antioxidative Wirkung der Kakiblätter

Die antioxidative Wirkung des Ethanolextrakts (EtOH) aus Kakiblättern wurde bewertetfür ein vorläufiges Screening durch DPPH (Abbildung1A). Die 0.125 mg/ml derDer Extrakt fing etwa 80 Prozent des DPPH-Radikals und 0,025 mg/ml Ascorbinsäure abSäure machte 94 Prozent des Radikals aus. Der Online-HPLC-ABTS-Assay wurde zu schnell durchgeführtstellen Sie die Zuverlässigkeit dieser Ergebnisse sicher (Abbildung1D). Als innerlich wurden Gallussäure und Trolox verwendetStandards. Das Chromatogramm bei 734 nm (negativer Peak) deutete ungefähr darauf hinneun Bestandteile könnten antioxidative Aktivitäten haben. Gallussäure und Trolox (6-hydroxy- 2,5,7,8-tetramethyl chroman-2-carbonsäureSäure) wurden als interne Standards verwendet, um dies sicherzustellenZuverlässigkeit der Ergebnisse. Es wurde gefolgert, dass es sich bei den meisten dieser Peaks um Flavonoid-Derivate handeltewie Flavonoidglykosid und Flavanol, basierend auf der durchgeführten Dereplikationsanalysedurch Vergleich der Ultraviolett- (UV) und Massenspektren der Verbindungen mit den veröffentlichtenDaten. Bioassay-gesteuerte Fraktionierung legte nahe, dass es sich um antioxidative Verbindungen handeltein der Ethylacetatschicht (EtOAc) reichlich vorhanden, während das Wasser (H2O)-Schicht zeigte schwachAktivität (Abbildung1B,C). 

Abbildung 1. DPPH-Fängereffekte des EtOH-Extrakts (A), der EtOAc-Schicht (B) und der HO-Schicht (C). HhO-Schicht der Kakiblätter: (D) Online-ABTS-HPLC-Chromatogramm des EtOH-Extrakts.

2.2. Phytochemische Untersuchung

Zur Identifizierung dieser antioxidativen Verbindungen werden verschiedene chromatographische und spektroskopische Verfahren durchgeführtMethoden zur Isolierung und strukturellen Charakterisierung wurden durchgeführtVerbindungen. Ein neues Flavonoid (1) und eine neue natürliche Verbindung (3) wurden von der erhaltenEthylacetatschicht des Ethanolextrakts, zusammen mit 25 zuvor beschriebenen Verbindungen,nämlich Kaempferol-3-O- -2"-Cumaroylglucosid (2) [16], ( plus )-Catechin (4) [17], Hyperosid(5) [17], Isoquercitrin (6) [18], Quercetin-3-O- -2"-Galloylgalactosid (7) [19], Quercetin-3-O- -2"-Galloylglucosid (8) [20], Trifolin (9) [18], Astragalin (10) [18], kaempferol-3-O- - 2"-Galloylgalactosid (11) [21], kaempferol-3-O- -Arabinosid (12) [22], kaempferol-3-O- - 2"-Galloylglucosid (13) [23], Quercetin-3-O- -2"-Cumaroylglucosid (14) [24], Quercetin(15) [15], Kämpferol (16) [25], (6S,9S)-Roseosid (17) [26], Scopoletin (18) [27], Umbelliferon(19) [28], 1-(2,4-dihydroxy-6-methylphenyl)ethanon (20) [29], Barbinervinsäure (21) [30], Diospyrinsäure B (22) [7], Rotungensäure (23) [31], Pomolsäure (24) [32], Siaresinolsäure(25) [33], Oleanolsäure (26) [25] und Ursolsäure (27) [25] durch Verwendung spektroskopischer undspektrometrische und physikalische Daten im Vergleich mit den veröffentlichten Daten und auch mit dünnenSchichtchromatographie (TLC)-Analyse (Abbildungen2 Und3). Darunter Verbindungen2, 16, 17, 19, 20, Und24 wurden zunächst isoliertD. kaki. 

Verbindung 1 wurde als gelbes Pulver erhalten, dessen Summenformel auf der Grundlage von hochauflösenden Massenspektrometriedaten (HRMS) als C3olO3 ermittelt wurde. Das Spektrum zeigte Absorptionsbanden bei 207 und 315 nm, was darauf hindeutet, dass Verbindung 1 ein Flavonol-Rückgrat hatte. Die 'H-Kernspinresonanzdaten (NMR) (Tabelle 1, Abbildung S1) zeigten ein typisches Muster von cumaroyliertem Flavonolglycosid und zeigten zwei Sätze von Signalen vom Typ AA'BB' ({{10}}.{{11 }} (2H, d, J= 8.5 Hz, H-2' und H-6 ),6,87 (2H, d, J{{20}} .5 HzH-3' und H-5')) im B-Ring von Kaempferol sowie die Signale (0 7.45 (2H, d, J=8. 5 HzH-2 und H{{3{{104}}}}"), 6,81 (2H, d, J=8,5 Hz, H-3 und H-5 Prozent) im aromatischen Ring der Cumaroylgruppe. Zwei Dublettsignale (8H 7,65 (1H, d, J=15,5 Hz, H-7"") und 6,35 (1Hd, J=16.0 Hz, H-8") wurden beobachtet, was auf transolefinische Protonen der Ländergruppe hinweist. Zusätzlich wurde ein anomeres Protonensignal (0H 5,57 (1H, d, J=8.0 Hz, H-1) wurde in der Zuckerregion beobachtet, was auf das Vorhandensein der B-konfigurierten zyklischen Zuckergruppe schließen lässt. Die 13C- und verzerrungsfreie Verstärkung durch Polarisationstransfer-NMR-Daten (Iable 1Abbildung S2) zeigte 30 Resonanzen, die zwei transolefinische Kohlenstoffe, zehn aromatische Kohlenstoffe und sechs Kohlenstoffe der Glucosyleinheit sowie zehn nicht protonierte Kohlenstoffe, darunter zwei Carbonylkohlenstoffe, umfassten. Insbesondere die chemischen Verschiebungen bei C-2, C-3 und C-4 (8c 158,1, 134,9 und 179,2) waren charakteristische Signale von Flavonol3-0-glycosid. Zusätzlich das Carbonylkohlenstoffsignal bei C-1" (8c 168,7) und zwei transolefinische Kohlenstoffsignale bei C-2'" und C-3"(6 146,9 , 115,2) waren typische chemische Verschiebungen der Cumaroylgruppe. Das anomere Kohlenstoffsignal bei C-1(6C 100,4) und andere Signale für die Glycosyleinheit von C-2" nach C-6" ' (6c74.3, 73.4, 70.5, 77.4 und 62.0) wurden beobachtet. Diese eindimensionalen (1D) NMR-Daten konnten mit denen von Kaempferol-3-0-B-2"-coumaroylglucosid (2) überlagert werden. (16). Der sorgfältige Vergleich der 13C-NMR-Daten zwischen den beiden Verbindungen deutete jedoch darauf hin, dass Verbindung 1 eine Galactose-Einheit hatte, was durch die NMR-Daten der nuklearen Overhauser-Verstärkungsspektroskopie (NOESY) weiter gezeigt wurde (Abbildung S6). Während die NOES-Korrelation zwischen H-2 und H-4 wurden in Verbindung 2 beobachtet, es gab keine Korrelation zwischen diesen Protonen in Verbindung 1. Im Allgemeinen ist die Interpretation von 13C-NMR- und NOESYNMR-Daten eine effektive Methode, um die Art der Glykosyleinheit zu bestimmen . Aufgrund der Tieffeldverschiebung von C-2 und C-4 wurde abgeleitet, dass sich die Galactose-Einheit bei C-3 befindet, was durch die heteronukleare Mehrfachbindungskorrelation (HMBCzwischen H{ {123}}" und C-3 (Abbildung S5). Basierend auf der Tieffeldverschiebung (0 5.36 (1H, dd, J=10.0, 8,0 Hz, H{ wurde gezeigt, dass die Position der Cumaroylgruppe bei C-2" liegt. {134}}")) und die HMBC-Korrelation zwischen H-2' und C-1. Als Ergebnis wurde die Struktur von Verbindung 1 als Kaempferol-3-0-B-2"-Cumaroylgalactosid bestimmt. Obwohl Verbindung 2 zuvor aus verschiedenen Quellen isoliert wurde, darunter Ouercus suber (16] und Alliumporrum (34), Verbindung 1 wurde erstmals isoliert und strukturell charakterisiert.

Verbindung3 wurde als gelbes Pulver isoliert und die Summenformel ermitteltals C31H28O14 durch Analyse von HRMS-Daten. Das UV-Spektrum zeigte UVAbsorption bei 210 und 327 nm aufgrund des gleichen Aglykons mit Verbindungen1 Und2. Der1H NMR-Daten (Tabelle1, Abbildung S10) ähnelten denen von Compound2, aber zusammengesetzt3 hatte eine Feruloylgruppe anstelle der Cumaroylgruppe, was durch die Anwesenheit von bewiesen wurdezusätzliche Methoxygruppe (δH 3.91 (3H, s, 3000 -OCH3)). Zusätzlich ein anomeres ProtonSignal (δH 5.64 (1H, d, J {{0}}.0 Hz, H-100 )) wurde beobachtet, was darauf hindeutet, dass die Glykosylbindung vorliegtwar ein-Aufbau, und das tieffeldverschobene Signal (5.03 (1H, t,J = 8,5 Hz, H-200 )) wurde im Zuckerbereich wie bei der Verbindung gezeigt1. Der13C-NMR-Daten (Tabelle1, FigurS11) zeigte 31 Resonanzen, bestehend aus zweitrans-Olefinische Kohlenstoffe, zehn quartäre Kohlenstoffe,zehn aromatische Kohlenstoffe, sechs Kohlenstoffe der Glucosyleinheit und ein Methoxykohlenstoff sowie zehn nicht protonierteKohlenstoffe, darunter zwei Carbonylkohlenstoffe entsprechend Kaempferol, Feruloyl,und Glukosegruppen. Insbesondere Kohlenstoffsignale von C-200 zu C-600 (δC 75.8, 76.3, 71.5, 78.8 und 62.5) deuteten auf das Vorhandensein einer Glucoseeinheit hin. Die Positionen der Glukoseeinheitund Feruloylgruppe wurden durch die weitreichenden HMBC-Korrelationen zwischen H-1 zugeordnet.00 UndC-3 (δC 134.8) und H-200 und C-1000 (δC 168.4) (Abbildung S14). Die Position eines zusätzlichenDie Methoxygruppe wurde durch die Schlüsselkorrelation zwischen 3 bestimmt000 -OCH3 und C-3000 (δC 149,4). Die obigen Ergebnisse legen die Struktur der Verbindung nahe3 als Kaempferol-3-O- - 2"-Feruloylglucosid. Nach unserem besten Wissen, Verbindung3 wurde nur als a gemeldetProdukt der Hydrolyse von 3-O- -(2-O-feruloyl)-glucosyl-7,40 -di-O- -glucosyl kaempferol, isoliert vonAllium tuberosum[35]. Daher ist die Struktur von3 wurde als neu aufgeklärtnatürliche Verbindung.

Verbindung11 wurde als gelbes Pulver isoliert. Der1H-NMR-Daten (Abbildung S19)zeigte einen Satz AA an0 BB0 -Typ-Signale (δH 8.06 (2H, d, J {{0}}.0 Hz, H-20 , H-60 ), 6.87 (2H, d, J {{0}}.0 Hz, H-30, H-50 )) im B-Ring von Kaempferol und ein Singulettsignal beiδH 7.02 (2H, s, H-3000 , H-7000 ) einer Galloyleinheit im aromatischen Bereich, was ein charakteristisches Signal istdes zugeteilten Flavonols. Ein anomeres Protonensignal (δH 5.78 (1H, d, J {{0}}.0 Hz, H-100 )) zeigte an, dass es sich bei der Glykosylbindung um a handelte-Aufbau. Darüber hinaus ein Downfieldverschobenes Protonensignal (5.27 (1H, t,J = 9,5 Hz, H-200 )) schlug vor, dass die Galloylgruppewurde an die Hydroxylgruppe von C-2 gebunden00 weil diese Verschiebung darauf zurückzuführen sein könnteder anisotrope Einfluss derO-Galloyl-Einheit [21]. Der13C-NMR-Daten (Abbildung S20)zeigte 26 Resonanzen, was auf ein zugewiesenes Flavonolglycosid hinweist. Die Kohlenstoffsignaleaus C-200 zu C-600 (δC 71.1, 72.7, 68.2, 76.0 und 60.1) deuteten auf die Anwesenheit einer Galaktose hinEinheit. Daher die Struktur der Verbindung11 wurde als Kaempferol bestätigt-3-O- -200 - Galloylgalactosid. Obwohl zusammengesetzt11 wurde zuvor aus verschiedenen Quellen isoliert,einschließlichD. kaki[21,36], nur der1H-NMR- und MS-Daten wurden bereits berichtet. Daher,Die13In dieser Studie wurden erstmals C-NMR-Daten veröffentlicht

2.3. Antioxidative Aktivitäten der isolierten Verbindungen

Alle isolierten Verbindungen wurden mittels Rapid On auf ihre antioxidative Wirkung untersuchtLinien-HPLC-ABTS-Analyse, um zu bestimmen, welche Verbindungen zum Antioxidans beitrugenWirkung der Kakiblätter. Verbindungen4–8, 11, 13, 15, Und16 zeigte starkes Antioxidative Aktivitäten (Abbildung4). Die meisten dieser Verbindungen waren Kaempferol und QuercetinDerivate, aber einige Derivate (1–3, 9, 10, 12, Und14) zeigte keine Aktivitäten. DerDie Struktur-Aktivitäts-Beziehung wurde nicht vollständig geklärt, konnte aber teilweise aufgedeckt werden. Ininsbesondere Quercetin und Kaempferol mit Galloyleinheiten (7, 8, 11, Und13) wurden gefundenhaben starke Aktivitäten, aber diejenigen mit Cumaroyl- oder Feruloyl-Einheiten (1–3 Und16) nichtalle Aktivitäten anzeigen.

Figur 4.Radikalfängeraktivitäten der isolierten Verbindungen (4–8, 11, 13, 15, Und16) wurden online bewertetHPLC-ABTS-Assay.

2.4. Quantitative Analyse isolierter Verbindungen

Die quantitative Analyse aller isolierten Verbindungen im EtOAc-löslichen Extraktwurde durchgeführt, um zu bestätigen, dass die Kakiblätter eine antioxidative Wirkung haben könntenverursacht durch diese Wirkstoffe. Eine spezifische HPLC-Methode mit Diodenarray-Detektion undFür die simultane Bestimmung wurde ein Verdunstungslichtstreudetektor entwickeltvon 27 Verbindungen. Der Gehalt aller isolierten Triterpenoide betrug etwa 5,9 Prozentder Extrakt und davon die von Siaresinolsäure (25), Oleanolsäure (26) und ursolischSäure (27) machte einen erheblichen Teil aus, wie in früheren Studien berichtet [7]. DerDer Gehalt an Flavonoiden lag bei etwa 5,4 Prozent, davon an Wirkstoffenbetrugen 3,2 Prozent (Tabelle2). Insbesondere der Inhalt von Kaempferol-3-O- -200 -Galloylgalactosid(9), kaempferol-3-O- -2"-Galloylglucosid (10), Isoquercitrin (13) und Quercetin-3-O- -2"- Galloylglucosid (15) waren mehr als 0,3 Prozent . Die Analysemethode wurde mit a verifiziertEinfaches Validierungsverfahren zur Sicherstellung der Relevanz der Methode, die sich als ausreichend erwiesSpezifität, Linearität, Genauigkeit und Präzision.

Frage nach mehr:

E-Mail:wallence.suen@wecistanche.com WhatsApp plus 86 15292862950