Chemische Eigenschaften eines Mannoglucans aus Cistanche Deserticola

Kontakt: Audrey Hu WhatsApp/hp: 0086 13880143964 E-Mail:audrey.hu@wecistanche.com

1. Materialien

Es wurden Pasten zum Eingeben für Pferde von zwei verschiedenen Herstellern verwendet, die 10 mg/g (A) bzw. 20 mg/g (B) Ivermectin enthielten. Der quantitative Test auf Ivermectin wurde durchgeführt und der Gehalt betrug 104,4–107,7 Prozent der deklarierten Konzentration.

2. Auflösungstest

Der Test wurde mit einem Ph. Eur. durchgeführt. Paddelapparat (Pharma Test, Heinberg, Deutschland), bei Rührbewegungen von 75 U/min oder 5 0 U/min, bei 37 -0,5 C. Natriumlaurylsulfat (BDH Chemicals, Poole, England) 0,5 Prozent (w /v) wässrige Lösung wurde als Auflösungsmedium verwendet (900 ml). Die Paste (4 g A oder 2 g B) wurde mit einer Spritze mit einer Kanüle (A) in das Gefäß gegeben oder die Probe auf die Oberfläche des Auflösungsmediums (B) getropft. Nach den Zeitintervallen (15, 30, 45, 60 min und 2 h) wurde eine Probe des Auflösungsmediums entnommen (2 ml), durch einen Glasfilter filtriert und analysiert.

3. HPLC-Analyse

Die Bestimmung von Ivermectin erfolgte mit einer modifizierten HPLC-Methode wie in Ph. Eur. beschrieben. Die analysierten Lösungen wurden mit Methanol (1:10) verdünnt. Das HPLC-System bestand aus einer Octadecylsäule (250 -4 mm; 5 mm; Lichrospher RP-18; Merck), einem Integrator D-12500 A, einem Detektor UV-Vis L{{7} }, Pumpe L-6200A (Merck-Hitachi, Darmstadt, Deutschland). Als mobile Phase wurde ein Gemisch aus Acetonitril:Methanol:Wasser (64:24:16) mit einer Flussrate von 1,9 ml/min verwendet. Das Volumen der injizierten Probe betrug 20 ml und die Detektion wurde bei 254 nm durchgeführt.

4. Löslichkeitsstudien

Ein Ansatz der Substanz wurde in fest verschlossenen Glaskolben mit einem geeigneten Lösungsmittel (Tabelle 1) 20 h bei 37 0,1 C geschüttelt. Die Suspensionen wurden filtriert und das Filtrat nach Verdünnung in Methanol mittels HPLC analysiert .

5. Stabilität in saurer Lösung

Lösungen von Ivermectin in HCl {{0}},1 M wurden in dicht verschlossenen Glasfläschchen bei 20 C und 37 C gelagert. Chromatogramme der Lösungen wurden bei t ¼ 0 und nach 1, 2 und 6 h aufgenommen. Die Fläche des Ivermectins (Retentionszeit 10,5 min) und zusätzliche Peaks wurden berechnet.

Verweise

FDA-Richtlinie für die Industrie: SUPAC-SS unsterile halbfeste Darreichungsformen. Scale-up und Änderungen nach der Zulassung: Chemie, Herstellung und Kontrollen; In-vitro-Freisetzungstests und In-vivo-Bioäquivalenzdokumentation. Mai 1997. FIP-Richtlinien für Auflösungstests von festen oralen Produkten (1997) Dissolute. Technologie 4: 5–14. Siewert M, Dressman J, Brown C, Shah VP (2003) FIP/AAPS-Richtlinien zu Auflösungs-/In-vitro-Freisetzungstests von neuartigen/speziellen Dosierungsformen, AAPS PharmSciTech, 4 (1) Artikel 7 Modern Research Center for Traditional Chinese Medicine, School of Pharmaceutical Sciences, Gesundheitswissenschaftszentrum der Universität Peking, Peking, China

Xiang mei Wu, Pengfei Tu Erhalten am 13. Februar 2004, angenommen am 4. April 2004, Prof. Dr. Pengfei Tu, Modernes Forschungszentrum für Traditionelle Chinesische Medizin, Fakultät für Pharmazeutische Wissenschaften, Zentrum für Gesundheitswissenschaften der Universität Peking, Nr. 38, Xueyuan Road , Bezirk Haidian, Peking 100083, China Pengfeitu@bjmu.edu.cn Pharmazie 59: 815–816 (2004)

Ein neues Mannoglucan vonCistanche Deserticolaaus China ist gekennzeichnet. Die Verbindung ist für eine milde Stimulierung der mitogeninduzierten Proliferation von T- und B-Lymphozyten verantwortlich.

Cistanche DeserticolaYC Ma ist ein Holoparasit, der an den Wurzeln der zweikeimblättrigen Pflanze Haloxylon ammodendron Bunge wächst, die im Nordwesten Chinas weit verbreitet ist. Da es ein wichtiges Stärkungsmittel in der orientalischen Medizin ist, wurden viele aktive Komponenten und pharmakologische Aktivitäten beansprucht (Karasawa et al. 1986; Yoshizawa et al. 1990). Diese Eigenschaften könnten mit einigen der Polysaccharidkomponenten von in Verbindung gebracht werdenCistanchedie noch nicht untersucht wurden. Mitogene pektische Polysaccharide und neutrale Polysaccharide wurden isoliert und charakterisiertCistanche Deserticolaaus der Mongolei (Radna et al. 1996; Anna et al. 1997; Bozena et al. 1999). Hier berichten wir über die chemischen Eigenschaften eines neuen Mannoglucans ausCistanche Deserticolaaus China, das für eine leichte Stimulation der mitogeninduzierten Proliferation von T- und B-Lymphozyten verantwortlich ist. Nach den Stielen vonCistanche DeserticolaYC Ma wurden mit 95-prozentigem Ethanol extrahiert, kaltes destilliertes Wasser wurde verwendet, um den Rückstand zu extrahieren. Der Kaltwasserextrakt wurde mit EtOH ausgefällt, das Protein wurde entfernt und dialysiert, wodurch das rohe Polysaccharid CCDP erhalten wurde. Das rohe Polysaccharid wurde auf einer DEAE-Säule und einer Sephadex G-150-Säule fraktioniert, um ein proteinfreies Polysaccharid (CDP-6) zu ergeben, das aus Glucose (89,2 Prozent) und Mannose (1{{58}) bestand. }.4 Prozent ), und von denen der durchschnittliche Mr auf 6,8 -104 geschätzt wurde. Das Polysaccharid CDP-6 zeigte [a 20 D 42 (c 1, H2O). Die absoluten Konfigurationen der Zucker wurden durch GC von TMS (– )-2--Butylglykosiden bestimmt. CDP-6 wurde methyliert (Needs et al. 1993), hydrolysiert, in die Alditolacetate umgewandelt und durch GC und GC-MS analysiert (Tabelle). Dieses Ergebnis zusammen mit Molverhältnisdaten aus der Methylierungsanalyse legt nahe, dass CDP-6 ein überwiegend 1,6--verknüpftes Glcp und ein Rückgrat 1,6- aufweist, das in geringerem Maße an O{{ verzweigt ist 24}} Mannose. Die Methylierungsanalyse von zwei Polymeren (CDP-6-1, CDP-6–2) aus partieller Hydrolyse bestätigte, dass CDP-6 ein Rückgrat hat, das aus 1,6-verknüpften Glucosylresten und besteht 1,6--verknüpfte Mannosylreste, die am O-3 von Mannose durch Verzweigungen, bestehend aus den endständigen, 1,6--verknüpften Glucosylresten, und 1,3,{{38} }verknüpfte Mannosylreste. Entsprechend den Molverhältnissen und der Literatur (Bozena et al. 1999; Bacon et al. 1996) zeigte das 13C-NMR-Spektrum von CDP-6 Signale aufgrund anomerer Kohlenstoffe des a-d-Glcp (C{{45 }} bei 98,4 ppm), bd-Map (C-1 bei 104,3–104,9 ppm) und ad-Map (C-1 bei 100,0 ppm). Das 1 H-NMR-Spektrum von CDP-6-2 in D2O zeigte Protonensignale entsprechend ad-Glcp (H-1 bei 4,94–4,95 ppm) und a-d-Map (H-1 bei 4,96–5,00 ppm). Das 13C-NMR-Spektrum von CDP-6-2 in D2O zeigte Protonensignale, die aD-Glcp (C-1 bei 98,6 ppm) und ad-Map (C-1 bei 98,4 ppm) entsprachen. Es wird berichtet, dass Mannoglucane ein 1,4--verknüpftes Glucopyrannan- und ein 1,4--verknüpftes Mannopyrannan-Rückgrat haben (Radjabi Nassab et al. 1984; Tanabe et al. 2000). CDP-6 hat einige unterschiedliche Strukturmerkmale durch sein a-1,6-verknüpftes Glcp- und b-1,6-verknüpftes Map-Rückgrat, und es ist durch Mannoglucan-Zweige ersetzt (Feige.). Um die Verwendung von zu untersuchenCistanche DeserticolaIn der Volksmedizin wurde die Wirkung von CDP-6 auf das T- und B-Zellsystem untersucht. Es wurde festgestellt, dass es die mitogeninduzierte Proliferation von T- und B-Lymphozyten leicht stimuliert.

Experimental

1. Allgemeine Verfahren

Die optische Rotation wurde mit einem automatischen W22-1S-Polarimeter gemessen. IR-Spektren wurden auf einem Perkin-Elmer 599B-Spektrometer bestimmt. Die GC-Analyse wurde auf einem Agilent HP6890N-Instrument durchgeführt, das mit einem FID-Detektor ausgestattet war. GC-MS wurde auf einem Finnigan Trace GC-MS-Instrument durchgeführt. Homogenität und Mr von CDP-6 wurden aus der Kalibrierungskurve des Elutionsvolumens von Standarddextranen geschätzt, die durchgeführt wurde

ein Gerät der Serie Agilent 1100 mit einer Shodex KS-805-Säule. 1 H-NMR- und 13C-NMR-Spektren wurden mit einem INOVA-500-Instrument aufgenommen. Der Proteingehalt wurde nach der Methode von Bradford (Andre et al. 1975) analysiert. Monosaccharide wurden auf ihr Alditolacetat analysiert, nachdem sie hydrolysiert (2 M TFA, 2 h, 110°C), reduziert und acetatiert worden waren. Die Hydrolysate wurden mittels TLC auf einer Kieselgelplatte analysiert, die 5 Prozent Natriumdihydrogenphosphat in BuOH-EtOAc-Isopropylalkohol-HOAC––H2Opyridin (3,5: 10: 6: 3,5: 3: 3) enthielt, und Zucker wurden durch Besprühen mit Orcin nachgewiesen -H2SO4. Die resultierenden Alditolacetate wurden durch GLC unter Verwendung einer HP-5-Kapillarsäule (30 m 0,32 mm) analysiert. CDP-6 wurde nach dem Ciucanu-Verfahren methyliert, gefolgt von einer Hydrolyse, und wurde als teilweise methylierte Alditolacetate durch GC-MS analysiert. Nach partieller Hydrolyse wurden die Produkte dialysiert und getrennt, wodurch zwei Polymere, CDP-6-1 und CDP-6–2, erhalten wurden.

2. Pflanzenmaterial

Die Pflanze wurde im August 2001 in der Provinz Innere Mongolei in China gesammelt und von Hu-Biao Chen, Department of Natural Medicine, School of Pharmaceutical Sciences, Health Science Center der Universität Peking, identifiziert. Ein Belegexemplar [E-1-(9)] dieser Pflanze wurde an der School of Pharmaceutical Sciences der Peking University hinterlegt. 3. Extraktion, Isolierung und Reinigung des Polysaccharids CDP-6 Der Stamm vonCistanche DeserticolaYC Ma (1500 g) wurden mit 95-prozentigem Ethanol (6 l) unter Rückfluss extrahiert. Der getrocknete, in Ethanol unlösliche Rückstand wurde dreimal mit kaltem destilliertem Wasser alle 12 h mazeriert. Der Kaltwasserextrakt wurde filtriert und das Filtrat zentrifugiert. Nach Fällung mit vier Volumina EtOH (Rühren und Stehen für 24 h bei 4°C) wurde das Präzipitatprodukt (35,5 g) erhalten. Das Protein im Präzipitat wurde durch das Verfahren von Savage entfernt. Nach Auflösung in destilliertem Wasser wurde der Rückstand (25,5 g) dialysiert und lyophilisiert (Ausbeute: 10,6 g). Das rohe Polysaccharid (8 g) wurde in destilliertem Wasser (100 ml, 8 Prozent w/v) gelöst und unter Verwendung einer DEAE-Säule (70 5 cm, Gradient von 0–2 M NaCl, pro 1,5 l) getrennt. Eine mit Wasser eluierte Fraktion (600 mg) wurde erhalten. Eine Probe (250 mg) wurde durch Säulengelpermeationschromatographie auf Sephadex G- 150-Säulen (4 - 80 cm, 1600 ml, 5 ml pro Fraktion) gereinigt. Fraktionen von CDP-6 (1500–1600 ml) wurden gepoolt, dialysiert und gefriergetrocknet. Nach der Entsalzung durch Sephadex G-25 (60 1 cm). CDP-6 (110 mg) wurde erhalten und als einzelner Peak durch HPSGC bestimmt.

Wissen:Der Autor dankt Dr. Baomei Shao und Prof. Xiaoming Gao, School of Basic Medical Sciences, Peking University Health Science Center, für die Messung der immunmodulierenden Aktivität von CDP-6.