Chinesische Medizin Cistanche Chemische Zusammensetzung und Analyse der Bestandteile im Körper Ⅲ

Kapitel 2 Qualitative Studie zur chemischen Zusammensetzung von Cistanche deserticola

Cistanche ist der trockene, schuppige, fleischige BlattstielCistanche deserticola YC.MaUnd Cistanche tubulosa (Schenk) R.Wight. Es ist eines der bekanntesten Nieren-Yang-nährenden traditionellen chinesischen Arzneimittel. Es hat die Funktionen vonnährendes Nieren-YangEs wirkt abführend und wird häufig zur Behandlung von Impotenz, Unfruchtbarkeit, Schmerzen in Taille und Knien, Muskel- und Knochenschwäche, Darmtrockenheit und Verstopfung usw. eingesetzt. Es hat pharmakologische Wirkungen wie anti- Demenz, Anti-Parkinson-Krankheit, Schutz vor zerebraler Ischämie und Verbesserung der Lern- und Gedächtnisfähigkeiten. Um die materielle Grundlage dafür zu klärenWirksamkeit von Cistanche deserticolaIn diesem Kapitel werden HPLC und LC-IT-TOF-MS verwendet, um das umfassend zu charakterisierenchemische Bestandteile von Cistanche. Basierend auf einer systematischen Zusammenfassung der Crackregeln verschiedener Arten chemischer Komponenten werden die Eigenschaften von Cistanche deserticola systematisch analysiert. Chemische Zusammensetzung, um umfangreiche Daten aus zuverlässigen Quellen bereitzustellenausführliche Aufklärungder medizinischen Eigenschaften vonCistanche deserticolain vivo.

WIE LANGE DAUERT ES, BIS CISTANCHE WIRKT?

Abschnitt 1 Experimentelle Materialien

1.Instrument

Shimadzu HPLC-IT-TOF-MS-Flüssigkeitsmassenspektrometer (ausgestattet mit 2 LC-20ADXR-Pumpen, SIL-20AC-Automatikprobenehmer, CTO-20AC-Säulenofen, SPD-M20A UV-Detektor, DGU-20A3R-Dekontaminationsgasmaschine, CBM-20A-Controller, ESI-Ionenquelle, Shimadzu Company, Japan), Milli-Q-Reinstwasserreinigungssystem (Milipore Company, USA): Mettler ME204 elektronische Analysenwaage ( Mettler Toledo Company, Schweiz).

2. Reagenzien

Methanol in Chromatographiequalität und Massenspektrometriequalität, Acetonitril und Ameisensäure in Massenspektrometriequalität wurden von Thermo-Fisher Company (Pittsburgh, PA, USA) bezogen. Das Wasser war Milli-Q-Reinstwasser, hergestellt im Labor (Millipore, Bedford, MA, USA). Die übrigen Reagenzien sind alle von analytischer Qualität.

Salidrosid, 6-Desoxycatalpol, 8-epi-Logansäure, Echinacosid, Acteosid, Isosid Verbascosid (Isoacteosid) und Pinoresinol- -D-Glucopyranosid (Pinoresinol- -D-Glucopyranosid) wurden beide von der Forschungsgruppe von Professor Tu Pengfei am Key Laboratory of Natural and Biomimetic Drugs der Peking-Universität bereitgestellt. Sarkosid F (CistanosidF) wurde von Chengdu Mansite Biotechnology Co., Ltd. gekauft, Cistanosid A (Cistanosid A), 2'-Acetylacteosid (2'-Acetylacteosid), 2'-Acetylpoliumosid (2'-Acetylpoliumosid), Cistanosid Polyglucosid (Poliumosid). ), Cistanosid E (CistanosideE), Isocistanosid E (IsocistanosideE), Cistanosid C (CistanosideC), Isocistanosid C (IsocistanosideC) und Cistanosid D (CistanosideD) wurden alle von Shanghai Shidande Biotechnology Co., Ltd. gekauft, Tubulosid A (TubulosidA) und Tubulosid B (TubulosidB) wurden von Chengdu Weikeqi Biotechnology Co., Ltd. erworben.

Abschnitt 2 Experimenteller Inhalt

1. Probenvorbereitung

1.1 Herstellung der Referenzsubstanz

Wiegen Sie die entsprechenden Mengen verschiedener Referenzsubstanzen im oben genannten „Abschnitt 1 Experimentelle Materialien“ genau ab und bereiten Sie 10 mM Stammlösungen mit DMSO vor. Pipettieren Sie genau 2 ml jeder Stammlösung und verdünnen Sie sie mit 25 % Acetonitril, um eine 2 μM gemischte Kontrolllösung herzustellen. 1.2 Vorbereitung der Testlösung

Der wässrige Extrakt von Cistanche deserticola wurde von unserem Labor hergestellt und die Probe wird im Modernization Research Center of Traditional Chinese Medicine, School of Traditional Chinese Medicine, Beijing University of Chinese Medicine gelagert. Nehmen Sie 20 mg Cistanche-Deserticola-Pulver, geben Sie 40 ml Wasser zum Auflösen hinzu, rühren Sie vor und mischen Sie, zentrifugieren Sie 10 Minuten lang bei 10.000 U/min und nehmen Sie den Überstand ab. Das heißt, die Testlösung wird erhalten.

3. Bedingungen der Massenspektrometrie

Elektrospray-Ionenquelle (ESI), der Scanmodus besteht darin, positive und negative Ionen gleichzeitig zu scannen und automatisch eine mehrstufige Massenspektrometrie auszulösen. Der Massenscanbereich von MS'~MS' beträgt für positive Ionen m/z50~800 und für negative Ionen m/z100~1000. Die Spannungen der Sprühkammer betragen 4,5 kV bzw. -3,5 kV: Die Durchflussrate des Zerstäubungsgases (Nz) beträgt 1,5 lmin; der Trocknungsgasdruck beträgt 110 MPa; die Erkennungsspannung beträgt 1,55 kV; Die Temperaturen des gebogenen Entlösungsmittelrohrs (CDL) und des Heizmoduls betragen beide 200 Grad. Der Druck in der Kollisionskammer beträgt 1,5 e-Pa; der Ionenfallendruck beträgt 2,8e-Pa; die Anzahl der Wiederholungen der positiven und negativen ersten Stufen beträgt 1 und die Ionenakkumulationszeit beträgt 30 ms; Die Anzahl der Wiederholungen der positiven und negativen zweiten Stufe beträgt 2 und die Ionenakkumulationszeit beträgt 20 ms. ; Die Energie der kollisionsinduzierten Dissoziation (CID) beträgt 50 %.

Abschnitt 3 Ergebnisse und Diskussion

Spaltenauswahl

Um eine bessere chromatographische Trennung zu erreichen, haben wir Chromatographiesäulen verschiedener Hersteller und Spezifikationen umfassend gescreent, wie z. B. die Chromatographiesäule ACEUltraCore 2.5 SuperC8 (3,{4}}x150 mm, 2,5 µm, Advance Chromatography Technologies Ltd., Aberdeen, Schottland). Shiseido Capcell Core Ci8 (2,1 mm x 150 mm, 2,7 μm), Waters Acquity UPLC HSS T3-Säule (2,1 x 100 mm, 1,8 μm, Milford, MA, USA) und Capcell Core ADME-Säule (2,1 x 150 mm, 2,7 μm, Shiseido Corporation, Japan). Durch systematischen Vergleich wurde festgestellt, dass bei Verwendung der Capcell Core ADME-Chromatographiesäule (2,1 x 150 mm, 2,7 μm, Shiseido Co., Ltd., Japan) jedes chromatographische Signal besser getrennt werden kann (Abbildung 3-1).

2. Auswahl der Flüssigphasenbedingungen

Da die wichtigsten chemischen Bestandteile vonCistanche deserticolaSind Phenylethanolglykoside, Lignane, Iridoide und andere Verbindungen, reagiert es im Allgemeinen besser unter negativen Ionenbedingungen. Um chemische Bestandteile in geringer Menge im Wasserextrakt von Cistanche deserticola zu identifizieren, wird vermutet, dass der mobilen Phase möglicherweise Säuren zugesetzt werden müssen, um die Wirksamkeit zu erhöhen. Daher wurden in diesem Experiment Wasser-Methanol, Wasser-Acetonitril, 0,1 % Ameisensäure-Wasser-Methanol und 0,1 % Ameisensäure-Wasser-Acetonitril als mobile Phasensysteme für die Untersuchung verwendet. Es wurde festgestellt, dass 0,1 % Ameisensäure-Wasser-Acetonitril die beste Trennwirkung hatte, mit guter Peakform und großer Peakkapazität, daher wurden 0,1 % Ameisensäure-Wasser und Acetonitril als ausgewählt Mobile Phase. 3. Qualitative Analyse chemischer Komponenten. Verwenden Sie 19 vorhandene Referenzsubstanzen, um die massenspektrometrischen Fragmentierungsregeln verschiedener Arten von Verbindungen in Cistanche deserticola zu untersuchen. Die gemischten Referenzsubstanzen sind PDA-Chromatogramme bei 340 nm auf der ADME-Säule und BPC-Diagramme im positiven und negativen Ionenmodus. Siehe Abbildung 3-1. Wir haben relevante Literatur bei PubMed, RSC, CNKl, Springer, ScienceDirect, VIP und Wanfang usw. durchgesehen und eine selbst erstellte Datenbank mit chemischen Bestandteilen von Cistanche deserticola erstellt. Basierend auf dem Vergleich der Fragmentierungsregeln der Massenspektrometrie und der Retentionszeiten bekannter Verbindungen haben wir vorläufig 45 Verbindungen in Cistanche deserticola identifiziert. Verbindungen, darunter 31 Phenylethanolglycoside, 9 Iridoide, 3 Benzylglycoside und 2 Lignane, wie in Tabelle 3-1 gezeigt.

Durch Vergleich der Vertraulichkeitszeit, des MS-Spektrums und des MS-Spektrums der Referenzsubstanz, Verbindungen 11, 12, 13, 17, 21, 22, 24, 25, 26, 28, 29, 32, 33, 36, 37, 38 wurden nacheinander genau identifiziert als Genipin, Cistanchein F, Cistancheosid E, Echinaceaside, Chrysantosid, Cistanchein A, Tuberosin A, Larchresinol 4-0- -D-Glucosid, Königskerzenglycoside, Isocannabinoidglycosid, Pinoresinmonomethyletherglycosid, 2'-Acetylverbascosid, Cistancheglycosid C, Isocistancosid C, Tuberosin B und Cistancheglycosid D.

Dieses Experiment nutzt die HPLC-IT-TOF-MS-Technologie, um die komplexen chemischen Komponenten im Wasserextrakt von Cistanche deserticola schnell und genau systematisch zu analysieren, was eine Grundlage für eine umfassende Qualitätsanalyse von Cistanche deserticola und die Erforschung pharmakologischer Substanzen in vivo bietet.

Abbildung 3-1 Chromatogramm der gemischten Referenzsubstanz Oben: BPC-Diagramm im Positivionenmodus: Unten: BPC-Diagramm im Negativionenmodus

Abbildung 3-1 Chromatogramm der gemischten Referenzsubstanz Oben: BPC-Diagramm im Positivionenmodus: Unten: BPC-Diagramm im Negativionenmodus