Veränderungen der antioxidativen Aktivität während der Enzymfermentation

Kapitel 4 Änderungen der antioxidativen Aktivität während der Enzymfermentation

Früchte sind reich an Nährstoffen und kommen in vielen Sorten. Die Produktion von Substanzen während der Fermentation ist komplex und unterschiedlich, und es gibt viele Studien zu ihrenAntioxidative Aktivität. Die Menschen erforschen und entdecken immer, suchen nach Lebensmitteln, die von Vorteil sindmenschliche GesundheitSo sind Enzyme in den letzten Jahren zu einem heißen Thema geworden. Der traditionelle Enzymproduktionsprozess besteht darin, Enzyme durch natürliche Fermentation von Obst und Gemüse zu erhalten. Basierend auf früheren Untersuchungen fügt dieser Artikel 4 nützliche Fermentationsbakterien hinzu. Diese Bakterien selbst existieren auch im Enzym. Nach der zusätzlichen Zugabe von Bakterien werden die Anzahl und Art der Mikroorganismen im Fermentationsprozess geändert. Welche Auswirkung wird diese Änderung auf seine antioxidative Aktivität haben? Im vorherigen Kapitel haben wir Äpfel als Beispiel für eine detaillierte Erklärung genommen. Der Vergleich der antioxidativen Aktivität der Versuchsgruppe und der Kontrollgruppe in verschiedenen Enzymkonzentrationen zeigte, dass die antioxidative Aktivität des Enzyms in der Versuchsgruppe größer war als die der Kontrollgruppe. Die Intensität der antioxidativen Aktivität spiegelt auch die Zuverlässigkeit des Enzyms auf eine bestimmte Weise wider.

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Dieses Kapitel fügt dem ursprünglichen Experiment gemeinsame Früchte Birnen und Zitrusfrüchte hinzu und verfolgt und erkennt die Änderungen in ihrenAntioxidative AktivitätWährend der Fermentation. Auf der Grundlage der Reduzierung der Kosten hoffen wir durch Experimente, die biologische Aktivität von Enzymen nach Zugabe von Bakterien umfassender widerzuspiegeln und eine bestimmte theoretische Grundlage und Datenunterstützung für die Produktion von mikrobiellen Enzymen B zu lieferny künstliche Inokulation von Stämmen.

 

 

 

4.1 Materialien und Methoden

4.1.1 Materialien

(1) Experimentelle Materialien

Waschen Sie frische Äpfel, Birnen und Zitrusfrüchte mit sterilem Wasser unter sterilen Bedingungen, trocknen Sie sie auf natürliche Weise auf einem sterilen Operationstisch, schälen Sie sie und schneiden Sie sie für die spätere Verwendung in Scheiben. Fügen Sie Weißzucker und Früchte in ein sterilisiertes Glas mit einem Massenverhältnis von 1: 1 hinzu. Aktivieren Sie die für das Experiment erforderlichen Bakterien und inokulieren Sie sie gemäß dem optimalen Schema in das Enzym (dieser Betriebsschritt wird für die Kontrollgruppe weggelassen), versiegeln Sie es und legen Sie es an einem kühlen und trockenen Ort. Nehmen Sie Proben zu verschiedenen Zeiträumen der Fermentation bei Raumtemperatur, um die gesamte Enzymflüssigkeit zu erhalten, die Obstzellstoff enthält, und filtern Sie es. Nehmen Sie den Überstand als experimentelle Stichprobe und messen Sie sie nach dem Zentrifugieren von 000 RPM in einer Hochgeschwindigkeitszentrifuge für 15 Minuten, um relevante Daten zu messen. Es ist erwähnenswert, dass bei der Herstellung von Enzymen, um unnötige Kontaminationen zu vermeiden, alle unsere Operationen unter sterilen Bedingungen durchgeführt werden.

(2) Hauptinstrumente

Die für das Experiment erforderlichen Instrumente sind die gleichen wie 3.1.1 (2).

 

4.1.2 Methoden

(1) Änderungen des Gesamtphenolgehalts während der Fermentation

Mit destilliertem Wasser wurden 450 μl Probenlösung zugegeben, um das Volumen 46 ml zu machen, und dann wurden 1 ml Folin-Phenol-Reagenz zugesetzt. Gut mischen und für 3 Minuten reagieren. Dann wurden 3 ml 20% NACO3 hinzugefügt. Die Mischung wurde 2H in einem Wasserbad mit konstanter Temperatur mit 25 Grad geschüttelt. Destilliertes Wasser wurde als leere Kontrolle verwendet. Die Absorption A wurde mit einem Spektrophotometer bei 760 nm gemessen. Für jede Behandlung wurden drei Replikate durchgeführt. Der Gesamtphenolgehalt wurde gemäß der Standardkurvengleichung berechnet.

(2) Änderungen der Reduzierung der Leistung während der Fermentation

Fügen Sie 45 0 μl Probe zu 2,5 ml Phosphatpuffer mit einer Konzentration von 0}} hinzu. (W/V) Mit einer Massenkonzentration von 10%, zentrifugieren Sie bei 3000 U/min 10 Minuten lang und ziehen Sie 2,5 ml Überstand in einen Volumendolben, 2,5 ml destilliertes Wasser und 0,5 ml Eisen Chlorid (W/V) mit einer Massenkonzentration von 0,1%. Verwenden Sie destilliertes Wasser als leere Kontrolle und messen Sie die Absorption A bei einer Wellenlänge von 700 nm mit einem Spektrophotometer. Führen Sie 3 Replikate für jede Behandlung durch. Die Stärke der Reduzierung der Leistung wird auf der Grundlage des Absorptionswerts bestimmt.

 

(3) Änderungen der Fähigkeit zur radikalen Abfängerung von Superoxidanionen während der Fermentation während der Fermentation
Platzieren Sie 4,5 ml 0. {{1 0}} 5 mol/l Ph 8.2 Tris-HCl-Puffer in einem Wasserbad konstanter Temperatur und passen Sie die Temperatur auf 25 Grad ein. Fügen Sie nach 20 min 1 ml Enzymprobenlösung und 0,4 ml Pyrogallol -Lösung mit einer molaren Konzentration von 25 mmol/l hinzu. Gut mischen und 5 Minuten lang in einem 25 -Grad -Wasserbad platzieren. Fügen Sie 1,0 ml 8 mol/l HCl hinzu, um die Reaktion zu beenden. Verwenden Sie den TRIS-HCL-Puffer als Referenz und messen Sie ein Spektrophotometer, um die Absorption A bei 299 nm zu messen, um die Spulenrate zu berechnen. Die leere Kontrollgruppe verwendet 1 ml Lösungsmittel anstelle von Probe. Die radikale Spulenrate von Superoxidanionen wird gemäß der Formel 4.1 berechnet: Superoxid -Anion -Radikalfängerrate (%)=(a 1- A2)/a1 × 100 (4.1), wobei: a1 die Absorption der Blindkontrollgruppe ist; A2 ist die Absorption der Enzymprobenlösung der Versuchsgruppe.

 

(4) Änderungen der Fähigkeit zur Fermentation von Hydroxylradikalen während der Fermentation

 

Add water to 450μL sample solution to 2mL, then add it to 1.4mL of hydrogen peroxide with a molar mass concentration of 6mmol/L, then add 0.6mL of sodium salicylate with a molar mass concentration of 20mmol/L and 2mL of ferrous sulfate with a molar mass concentration of 1.5mmol/L, and heat in a constant temperature water bath at 37 degree for 1H. Null mit destilliertem Wasser und messen Sie die Absorption A bei einer Wellenlänge von 562 nm mit einem Spektrophotometer. Für jede Behandlung wurden drei Replikate durchgeführt. Die Hydroxylradikalfängerrate wurde gemäß der Formel 4.2: Hydroxylradikal -Scavenging -Rate (%)=[(a 1-} a2)/a1] × 100 (4.2) berechnet, wobei: a1 die durchschnittliche Absorption des Blankes ist; A2 ist die durchschnittliche Absorption der Probenlösung.

 

(5) Änderungen der DPPH -Fähigkeit zur Fermentation während der Fermentation
Übertragen Sie 2 ml Enzymprobenlösung genau auf einen 1 0 ml Volumetrin, und fügen Sie dann 2 ml 80% DPPH -Ethanol -Wässrigkeit in den volumetrischen Kolben mit einer Molmassenkonzentration von 2 × {5}}}}}}}}}}}} hinzu. Gut mischen und 30 Minuten bei Raumtemperatur stehen lassen. Nehmen Sie 80% Ethanollösung als Referenz und messen Sie die Absorption der Probe bei einer Wellenlänge von 517 nm, die als A1 aufgezeichnet wird. Mischen Sie 2 ml DPPH -Lösung und 2 ml 80% Ethanollösung und messen Sie ihre Absorption bei derselben Wellenlänge, die als A0 aufgezeichnet wird. Mischen Sie 2 ml Enzymlösung und 2 ml 80% Ethanollösung und messen Sie ihre Absorption bei derselben Wellenlänge, die als A2 aufgezeichnet wird. Für jede Behandlung wurden drei Replikate durchgeführt. Berechnen Sie die DPPH Free Radical Scavenging Rate gemäß der Formel 4.3:
DPPH Free Radical Scavenging Rate (%) {{0}} [1- (a 1- a2)/a 0] × 100 (4,3), wobei: a1 die durchschnittliche Absorbanz von 2 ml DPP -DPP -80% Ethan Ethan Ethan Ethan Ethan Ethan acquous ist und 2 ml Supant -Subance von 2 ml DPPH 80% Ethan Ethan Ethan acquous ist und 2 ml Probe von 2 ml 20% Ethan Ethan Ethan acquous und 2 ml Supant -Supant -Supant -Lösung und 2 ml -Subjekte von 2 ml -Supant -Lösung ist. A2 ist die Absorption von 2 ml Enzymlösung und 2 ml 80% Ethanol -gemischte Lösung; A0 ist die Absorption von 2 ml DPPH -Lösung und 2 ml 80% Ethanol -gemischter Lösung.

(6) Änderungen der Fähigkeit zur Fermentation der Fermentation von ABTS frei Radikal
8 & mgr; l Probenlösung wurde mit Phosphatpuffer (5 mmol/l pH 7,4) auf 10 & mgr; l ergänzt und dann gleichmäßig mit 10 ml Kaliumsulfat und ABTS gemischt, um bei einer Reaktionstemperatur von 30 Grad und einer Reaktionszeit von 5 min zu reagieren. Null die Lösung mit destilliertem Wasser und messen Sie die Absorption A bei einer Wellenlänge von 734 nm mit einem Spektrophotometer. Für jede Behandlung wurden drei Replikate durchgeführt. Die Abt -Radikalfängerrate wurde gemäß der Formel 4.4 berechnet:
ABTS Free Radical Scavenging Rate (%) {= [(a 1- A2)/A1] × 100 (4.4) wobei: a1 die Absorption der Blindkontrollgruppe ist; A2 ist die Absorption der Probenversuche.