Cistanche Tubulosa Phenylethanoid-Glykoside induzieren Apoptose in hepatozellulären H22-Karzinomzellen sowohl über extrinsische als auch intrinsische Signalwege

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Pengfei Yuan, Jinyu Li, Adila Aipire, Yi Yang, Lijie Xia, Xinhui Wang, Yijie Li und Jinyao Li

Abstrakt

Hintergrund:Cistanche tubulosa(Schenk) R. Wight ist eine traditionelle chinesische Medizin, die die Wurzeln der Tamarix-Pflanze parasitiert und zur Behandlung von männlicher Impotenz, Sterilität, Körperschwäche und als Stärkungsmittel verwendet wurde. Seine Antitumorwirkung auf das hepatozelluläre Karzinom ist jedoch noch schwer zu fassen. Hier untersuchten wir die Antitumorwirkung vonC. tubulosa Phenylethanoidglykoside(CTPG) an hepatozellulären H22-Karzinomzellen sowohl in vitro als auch in vivo und ihre Mechanismen. Methoden: Die Morphologie, Lebensfähigkeit, Apoptose, der Zellzyklus und das mitochondriale Membranpotential (Δψm) von H22-Zellen wurden jeweils durch inverse Mikroskopie, MTT-Assay und Durchflusszytometrie analysiert. Die Expression und Aktivierung von Proteinen im Apoptoseweg wurden durch Western Blot nachgewiesen. Die In-vivo-Antitumorwirkung wurde in einem Tumor-Mausmodell bewertet, das unter Verwendung männlicher Kunming-Mäuse etabliert wurde. Ergebnisse: Die CTPG-Behandlung unterdrückte signifikant das H22-Zellwachstum dosis- und zeitabhängig, was mit der erhöhten Apoptose und dem Zellzyklusarrest in den Phasen G0/G1 und G2/M korrelierte. Darüber hinaus wurde in CTPG-behandelten H22-Zellen eine chromosomale Kondensation beobachtet. Die CTPG-Behandlung erhöhte das Bax/Bcl-2-Verhältnis signifikant, reduzierte Δψm und verstärkte die Freisetzung von Cytochrom c. Die Konzentrationen von gespaltener Caspase-8 und Caspase-9 sowohl in extrinsischen als auch intrinsischen Signalwegen waren signifikant erhöht, da Caspase-7 und -3 nacheinander aktiviert wurden, um PARP zu spalten. Schließlich CTPG (CistancheTubulusPhenylethanoidglykoside) hemmte das Wachstum von H22-Zellen in Mäusen und verbesserte die Überlebensrate von Tumormäusen. Schlussfolgerungen: Diese Ergebnisse legen nahe, dass CTPG das H22-Zellwachstum sowohl über extrinsische als auch über intrinsische Apoptosewege unterdrückt.

Hintergrund

Leberkrebs rangiert weltweit an sechster Stelle bei der Krebsinzidenz und an vierter Stelle bei Krebstoten. Darüber hinaus belegte es in Ländern mit niedrigem soziodemografischen Index den vierten Platz bei der Krebsinzidenz und den ersten Platz bei der Krebssterblichkeit [1]. In China ist Leberkrebs im Jahr 2015 die dritthäufigste krebsbedingte Todesursache [2]. Mehr als 90 Prozent der primären Leberkrebserkrankungen weltweit sind hepatozelluläre Karzinome (HCC) [3]. Derzeit ist die Leberresektion die Hauptoption für die Therapie des HCC. Allerdings erfüllten weniger als 30 % der Patienten mit HCC die Kriterien einer kurativen Leberresektion, und die Gesamtüberlebensrate von 5- Jahren liegt aufgrund der hohen Rezidivrate immer noch bei nur 35-50 % [4, 5 ]. Die Verfügbarkeit von Behandlungsoptionen für Patienten mit intermediärem bis fortgeschrittenem HCC ist sehr begrenzt. Sorafenib, ein molekular zielgerichtetes Medikament, wurde von der FDA als Erstlinienbehandlung für fortgeschrittenes HCC zugelassen. Sorafenib verlängert das Überleben jedoch nur um etwa 3 Monate und die Ansprechrate beträgt weniger als 4 Prozent [6, 7]. Es ist dringend notwendig, neue Medikamente oder Strategien gegen HCC zu entwickeln. Die Traditionelle Chinesische Medizin (TCM) allein oder in Kombination mit anderen Strategien wurde zur Behandlung von HCC eingesetzt und zeigte die klinischen Vorteile, einschließlich verlängerter Überlebenszeit, verbesserter Lebensqualität, reduzierter Nebenwirkungen und so weiter [8, 9].Cistanche, eine Art TCM, hat verschiedene biologische Funktionen, wie zAnti-Oxidation, Anti-Entzündung, Anti-Aging,und Neuroprotektion [10, 11]. Phenylethanoidglykoside wurden als die wichtigsten aktiven Komponenten von angesehenCistanche, die verschiedene Aktivitäten haben, einschließlich Antioxidation, Antientzündung, Hepatoprotektion und Neuroprotektion [12–15]. Unsere Fraktion hat das gemeldetCistanche tubulosa Phenylethanoidglykoside(CTPG) konnte Apoptose in Melanom-B16-F10-Zellen induzieren und das Wachstum von Tumoren in Mäusen hemmen [16]. In dieser Studie haben wir die Antitumorwirkung von CTPG auf HCC H22-Zellen sowohl in vitro als auch in vivo gemessen und ihre Mechanismen untersucht. Wir fanden heraus, dass CTPG Apoptose in H22-Zellen sowohl über extrinsische als auch intrinsische Signalwege induzierte und das Wachstum von H22-Tumoren in Mäusen unterdrückte.

Methoden

Zelllinie

Die hepatozellulären H22-Karzinomzellen der Maus wurden vom Xinjiang Key Laboratory of Biological Resources and Genetic Engineering, Xinjiang University (Urumqi, Xinjiang, China) erhalten und in RPMI 1640-Medium (Gibco), ergänzt mit 100 U/ml Penicillin und 100 ug/ml, kultiviert Streptomycin und 10 Prozent hitzeinaktiviertes fötales Rinderserum (Gibco) bei 37 Grad in einer befeuchteten Atmosphäre mit 5 Prozent CO2.

MTT-Assay

CTPG wurde von Hetian Dichen Biotech Co., Ltd. (Hetian, Xinjiang, China) bezogen, und die Hauptverbindungen von CTPG wurden durch Hochleistungsflüssigkeitschromatographie qualifiziert und quantifiziert [16]. Die Zelllebensfähigkeit wurde durch 3- (4, 5-Dimethylthiazol-2-yl)-2, 5-Diphenyltetrazoliumbromid (MTT) (Sigma, St. Louis, MO , USA)-Assay. H22-Zellen wurden in 96-Well-Platten mit einer Dichte von 2 × 104 Zellen in 100 ul Medium pro Well inokuliert und bei 37 Grad kultiviert. Nach 24 h wurden die Zellen mit verschiedenen Konzentrationen von CTPG (0, 100, 200, 300 und 400 ug/ml) oder 0,3 Prozent DMSO (entspricht dem in 400 ug/ml CTPG) für 24, 48 bzw. 72 h behandelt . Nach Zentrifugation bei 1000 U/min für 7 min wurde der Überstand verworfen und 100 ul MTT-Lösung (5 mg/ml in PBS) wurden zu jeder Vertiefung gegeben. Die Platten wurden 4 h bei 37 Grad inkubiert und 100 ul DMSO wurden zugegeben, um die gebildeten Formazan-Kristalle aufzulösen. Die OD490-Werte wurden mit einem 96--Well-Mikroplattenlesegerät (Bio-Rad Laboratories, CA, USA) nachgewiesen. Die Zelllebensfähigkeit wurde gemäß der Formel berechnet: Zelllebensfähigkeit (Prozent)=(ODbehandelt/ODunbehandelt) × 100 Prozent.

Nachweis von Apoptose

H22-Zellen wurden mit verschiedenen Konzentrationen von CTPG (0, 100, 200, 300 und 400 ug/ml) oder 0,3 % DMSO für 24 h behandelt und dann mit Annexin V FITC/ gefärbt. Propidiumiodid (PI) Apoptose Detection Kit (YEASEN, China) gemäß den Anweisungen des Herstellers. Die Proben wurden durch Durchflusszytometrie (BD FACSCalibur, USA) analysiert.

Nachweis des mitochondrialen Membranpotentials

H22-Zellen wurden mit verschiedenen Konzentrationen von CTPG (0, 200 und 400 ug/ml) für 24 h behandelt und dann für 20 h mit dem membrandurchlässigen JC-1-Farbstoff (Beyotime, China) gefärbt Minute bei 37 Grad. Nach zweimaligem Waschen mit JC-1-Puffer wurden die Proben mit 300 ul JC-1-Puffer resuspendiert und durch Durchflusszytometrie (BD FACSCalibur, USA) analysiert.

Analyse des Zellzyklus

H22-Zellen wurden in 60-mm-Kulturschalen inokuliert und mit verschiedenen Konzentrationen von CTPG (0, 100, 200, 300 und 400 ug/ml) oder 0,3 % DMSO behandelt 24 Std. Alle Zellen wurden gesammelt und zweimal mit PBS gewaschen. Die Zellen wurden in 70 Prozent eiskaltem Ethanol bei –20 Grad für 2 Stunden fixiert und zweimal mit PBS gewaschen, dann in 300 μl Propidiumiodid/RNase-Färbepuffer (BD Biosciences) resuspendiert. Nach 10 min bei Raumtemperatur wurden Proben durch Durchflusszytometrie (BD FACSCalibur, USA) gesammelt und die Zellzyklusverteilung wurde mit der Software ModFit LT 3.0 analysiert.

Hoechst 33.258 Färbung

Die morphologischen Veränderungen der H22-Zellkerne wurden durch Färbung mit dem membrandurchlässigen DNA-bindenden Farbstoff Hoechst 33.258 analysiert. H22-Zellen wurden in einer 6-Well-Platte in einer Konzentration von 1 × 105 Zellen/Well in 2 ml Medium ausgesät. Nach 60 % ~ 70 % Konfluenz wurden die Zellen mit CTPG (0, 100, 200, 300 und 400 ug/ml) für 24 h behandelt. Die Zellen wurden gesammelt und mit 4 Prozent eiskaltem Paraformaldehyd bei 4 Grad für 10 Minuten fixiert. Nach dem Waschen mit PBS wurden die Zellen mit Hoechst 33.258 (Beyotime, China) bei 4 Grad für 10 Minuten gefärbt. Proben wurden durch ein invertiertes Fluoreszenzmikroskop (Nikon Eclipse Ti-E, Japan) beobachtet.

westlicher Fleck

Anti-Caspase-3, Anti-gespaltene Caspase-3, Anti-Bcl-2 und Anti-Bax wurden von Beyotime Biotech Co., Ltd. (Shanghai, China) bezogen. Anti-Caspase-7, Anti-Spalt-Caspase-7, Anti-Caspase-8, Anti-Spalt-Caspase-8, Anti-Caspase-9, Anti -gespaltene Caspase-9, Anti-PARP, Anti-gespaltenes PARP, Anti-Maus-IgG-HRP und Anti-Kaninchen-IgG-HRP wurden von Cell Signaling Technology bezogen. Anti- -actin wurde von Beijing ComWin Biotech Co., Ltd. (Peking, China) gekauft.

H22-Zellen wurden mit verschiedenen Konzentrationen von CTPG (0, 100, 200, 300 und 400 ug/ml) oder 0,3 % DMSO für 24 h behandelt. Die Zellen wurden gesammelt und mit der Cell Lysis Solution RIPA (Beijing ComWin Biotech Co., Ltd) für 30 min auf Eis lysiert. Die Proben wurden zentrifugiert (12,000 g für 15 min bei 4 Grad), um die Überstände zu sammeln, und die Proteinkonzentrationen wurden mit dem BCA-Kit (Thermo Fisher Scientific, USA) gemessen. Eine gleiche Proteinmenge in jeder Probe wurde durch 12 % SDS-PAGE isoliert und auf PVDF-Membranen (Biosharp, China) übertragen. Nach dem Blockieren mit TBST-Puffer, der 5 % fettfreie Milch enthielt, wurden die Membranen mit entsprechenden primären Antikörpern bzw. sekundären Antikörpern, die mit Meerrettichperoxidase (HRP) konjugiert waren, inkubiert. Nach dem Waschen mit TBST wurden die Zielproteine ​​mit dem ECL-Testkit (Beyotime, China) nachgewiesen.

Tiere und Ethik-Erklärung

6-8 Wochen alte männliche Kunming-Mäuse wurden vom Animal Laboratory Center der Xinjiang Medical University (Urumqi, Xinjiang, China) gekauft. Die Mäuse wurden in einer standardmäßigen temperaturgeregelten Tiereinrichtung mit Lichtzyklus der Universität Xinjiang gehalten. Alle Tierversuche wurden gemäß den Richtlinien des Animal Care and Use Committee der Xinjiang University durchgeführt. Das Protokoll wurde vom Ausschuss für Ethik bei Tierversuchen des Xinjiang Key Laboratory of Biological Resources and Genetic Engineering (BRGE-AE001) der Universität Xinjiang genehmigt.

Tumor-Maus-Studie

Zur Induktion des Tumormausmodells wurden männlichen Kunming-Mäusen subkutan 1 × 106 H22-Zellen in 100 ul PBS in die rechte Flanke injiziert. Nach 3 Tagen wurden die Mäuse zufällig in 3 Gruppen (7 Mäuse/Gruppe) eingeteilt. Der Kontrollgruppe wurde 0,1 ml DMSO subkutan um den Tumor injiziert. CTPG-200- und CTPG- 400-Gruppen wurden subkutan 200 oder 400 mg/kg CTPG in 0,1 ml DMSO um den Tumor herum injiziert. Mäuse wurden alle 2 Tage für bis zu 21 Tage behandelt. Die Tumorgrößen wurden unter Verwendung von Messschiebern bis zu 25 Tagen gemessen und das Tumorvolumen wurde gemäß der Formel berechnet: Tumorvolumen (mm 3 )=(Länge × Breite 2 )/2. Nach 25 Tagen wurde das Überleben der Tumormäuse jeden Tag bis zum Ende dieser Studie überwacht.

statistische Analyse

Die statistische Signifikanz wurde durch eine Einweg-Varianzanalyse zwischen den Behandlungs- und Kontrollgruppen berechnet. Alle Daten wurden als Mittelwert ± Standardabweichung (SD) ausgedrückt. p < 0,05="" wurde="" als="" statistisch="" signifikant="">

Ergebnisse

CTPG verringerte die Lebensfähigkeit von H22-Zellen in vitro

Um die Antitumorwirkung von CTPG auf HCC zu untersuchen, wurden H22-Zellen mit verschiedenen Konzentrationen von CTPG (0, 100, 200, 300 und 400 ug/ml) in vitro behandelt. Nach 24 h wurde die Morphologie der H22-Zellen unter Verwendung eines Umkehrmikroskops beobachtet. Wir fanden heraus, dass die Morphologie von H22-Zellen durch die CTPG-Behandlung dramatisch verändert wurde. Mit zunehmender CTPG-Konzentration wurden die Zellen klein und rund und die Zellzahl war ebenfalls stark reduziert (Abb. 1a). Der MTT-Assay wurde verwendet, um die Lebensfähigkeit von H22-Zellen nach CTPG-Behandlung für 24, 48 bzw. 72 h zu analysieren. CTPG verringerte die Lebensfähigkeit von H22-Zellen dosis- und zeitabhängig signifikant (Abb. 1b). CTPG mit 300 ug/ml erreichte die beste Hemmungsrate (Fig. 1c). Die IC50-Werte von CTPG für H22-Zellen betragen 236 ug/ml nach 24 h und 169,8 ug/ml nach 48 h.

CTPG induzierte Apoptose in H22-Zellen

Um zu untersuchen, ob die verringerte Lebensfähigkeit von H22-Zellen durch die Induktion von Apoptose vermittelt wird, wurden H22-Zellen mit verschiedenen Konzentrationen von CTPG (0, 100, 200, 300 und 400 ug/ml) für 24 h behandelt und gefärbt mit PI und Annexin V. Die Ergebnisse der Durchflusszytometrie zeigten, dass CTPG die Apoptose von H22-Zellen (einschließlich früher und später Apoptose) in dosisabhängiger Weise signifikant induzierte ( 2a ). Obwohl die hohe Dosis von CTPG auch die Nekrose von H22-Zellen signifikant erhöhte, spielt die Nekrose aufgrund ihres geringeren Anteils (8,3 Prozent) im Vergleich zu dem der Apoptose (52,6 Prozent) eine untergeordnete Rolle bei der Hemmung des H22-Zellwachstums. Weiterhin wurden Gesamtproteine ​​von H22-Zellen nach CTPG-Behandlung isoliert und die Expression von anti-apoptotischem B-Zell-Lymphom 2 (Bcl-2) und pro-apoptotischem BCL-2--assoziiertem X-Protein (Bax) wurde nachgewiesen durch Westlicher Fleck. Graustufenscandaten zeigten, dass die Expressionsniveaus von Bax und Bcl-2 erhöht bzw. erniedrigt waren. Das Bax/Bcl-2-Verhältnis war signifikant erhöht (Abb. 2b). Diese Ergebnisse legen nahe, dass CTPG Apoptose in H22-Zellen induziert.

CTPG induziert Chromosomenkondensation und Zellzyklusstillstand in H22-Zellen

Es wurde berichtet, dass durch Medikamente induzierte DNA-Schäden und Zellzyklusarrest das Tumorzellwachstum hemmen und Apoptose in Tumorzellen verursachen können [17, 18]. Um die Morphologie der Zellkerne in H22-Zellen nach CTPG-Behandlung für 24 h nachzuweisen, wurden H22-Zellen nach Hoechst 33,342 gefärbt und unter Verwendung von invertierter Fluoreszenzmikroskopie beobachtet. Mit CTPG behandelte Zellen zeigten eine dosisabhängige Zunahme von hell kondensiertem Chromatin der Kerne, während die unbehandelten Zellen homogen gefärbte Kerne zeigten (Fig. 3a). Die Zellzyklusverteilung in H22-Zellen wurde weiter durch PI-Färbung nach CTPG-Behandlung für 24 h analysiert. Wie in Abb. 3b gezeigt, erhöhte die CTPG-Behandlung den Anteil von G0/G1-- und G2/M-Phasenzellen signifikant und verringerte den Anteil von S-Phasenzellen signifikant, was darauf hindeutet, dass CTPG G 0/G1- und G2/M-Phasenarrest in H22-Zellen. Die hohe Dosis von CTPG erhöhte auch signifikant den Anteil von Sub-G1-Zellen.

CTPG verringerte das mitochondriale Membranpotential und erhöhte die Freisetzung von Cytochrom c

Der mitochondriale Signalweg spielt eine wichtige Rolle bei der Induktion der Apoptose [19, 20]. Die Änderungen des mitochondrialen Membranpotentials (Δψm) können durch JC-1-Färbung überwacht werden, da das JC-1-Aggregat (rote Fluoreszenz) mit der Verringerung von Δψm in Monomer zerfallen kann (grüne Fluoreszenz) [21]. Nach 24-stündiger CTPG-Behandlung wurden H22-Zellen mit JC- 1-Farbstoff gefärbt. Die durchflusszytometrischen Daten zeigten, dass die rote Fluoreszenz im FL-2-Kanal und die grüne Fluoreszenz im FL-1-Kanal bei der CTPG-Behandlung signifikant abnahmen und zunahmen. Der Anteil an PE-FITC plus-Zellen war signifikant erhöht (Abb. 4a), was darauf hindeutet, dass CTPG das Δψm in H22-Zellen verringerte. Dies steht im Einklang mit dem erhöhten Bax/Bcl-2-Verhältnis. Folglich beobachteten wir, dass die Freisetzung von Cytochrom c nach CTPG-Behandlung signifikant erhöht war (Abb. 4b). Diese Ergebnisse deuteten darauf hin, dass CTPG über einen von Mitochondrien abhängigen (intrinsischen) Weg teilweise Apoptose in H22-Zellen induzieren könnte.

CTPG aktivierte den Caspase-Weg und verhinderte die DNA-Reparatur

Als nächstes wurde die durch CTPG induzierte Aktivierung von Caspase über sowohl extrinsische als auch intrinsische Signalwege analysiert. Nach 24-stündiger CTPG-Behandlung wurden Gesamtproteine ​​aus H22-Zellen isoliert und die Konzentrationen an pro- und gespaltenen Caspasen wurden durch Western Blot nachgewiesen. Verglichen mit der unbehandelten oder der DMSO-Kontrolle regulierte die CTPG-Behandlung signifikant nicht nur den Spiegel an gespaltener Caspase -8 (extrinsischer Weg), sondern auch den Spiegel an gespaltener Caspase -9 (intrinsischer Weg) (Abb. 5). Sequenziell spalteten aktivierte Caspase-8 und -9 die stromabwärts gelegene Pro-Caspase-3 und -7, die in Fig. 5 beobachtet wurden. Aktivierte Caspase-3 spaltete die DNA Reparaturenzym der Poly(ADP-Ribose)-Polymerase (PARP), um DNA-Reparatur zu verhindern und DNA-Schäden zu akkumulieren, wie in Fig. 3a beobachtet.

Diese Ergebnisse zeigten, dass CTPG Apoptose in H22-Zellen sowohl über extrinsische als auch über intrinsische Signalwege induzierte.

CTPG unterdrückt das Wachstum von H22 HCC in vivo und verbessert die Überlebensrate von Tumormäusen

Schließlich wurde die Antitumorwirkung von CTPG auf HCC in einem Tumormausmodell bewertet, das durch subkutane Injektion von H22-Zellen etabliert wurde. Nach 3 Tagen Injektion von H22-Zellen wurden Tumormäuse 8-mal mit CTPG behandelt. Das Körpergewicht der Mäuse und Tumorgrößen wurden zu den angegebenen Zeitpunkten überwacht. Wie in 6a gezeigt, weist das Körpergewicht der Mäuse in jeder Gruppe keinen signifikanten Unterschied auf, was darauf hindeutet, dass die ausgewählten Dosen von CTPG keine offensichtlichen Nebenwirkungen haben. Interessanterweise wurde das Tumorwachstum bei Mäusen, die sowohl mit 200 mg/kg als auch mit 400 mg/kg CTPG behandelt wurden, signifikant gehemmt (Fig. 6b). Darüber hinaus verbesserten die beiden Dosen der CTPG-Behandlung das Überleben der Tumormäuse (3/7, 3/7) im Vergleich zur Kontrollgruppe (0/7) am Ende des Experiments erheblich ( 6b ). Wir fanden auch heraus, dass CTPG die Proliferation von Splenozyten, die aus männlichen Kunming-Mäusen isoliert wurden, in dosisabhängiger Weise signifikant verstärkte ( 6c ), was darauf hindeutet, dass CTPG eine immunstimulatorische Wirkung hat.

Diskussion

TCM wird seit langer Zeit zur Behandlung verschiedener Krankheiten, einschließlich Krebs, eingesetzt. Es wurde berichtet, dass TCM Apoptose in verschiedenen Arten von Tumorzellen sowohl über extrinsische (Todesrezeptor-vermittelte) als auch intrinsische (Mitochondrien-abhängige) Signalwege induzieren kann, um Antitumorwirkungen auszuüben [22–25]. Die beiden Wege können Caspase -8 bzw. -9 aktivieren [24, 26]. Hier fanden wir heraus, dass CTPG das H22-Zellwachstum durch Induktion von Apoptose und Zellzyklusarrest signifikant unterdrückte. Die Spiegel der gespaltenen Caspase -8 und -9 wurden durch die CTPG-Behandlung signifikant hochreguliert, was darauf hindeutet, dass sowohl extrinsische als auch intrinsische Signalwege an der Induktion der Apoptose beteiligt waren. Unsere frühere Studie zeigte, dass CTPG die Apoptose in Melanom-B16-F10-Zellen über den mitochondrienabhängigen Weg induzierte, der den Spiegel der gespaltenen Caspase-9, aber nicht der Caspase-8 erhöhte [16]. CTPG könnte unterschiedliche Signalwege in verschiedenen Arten von Tumorzellen aktivieren.

Die Integrität der mitochondrialen Membran wird durch die Mitglieder der BCL-2-Proteinfamilie, einschließlich Bax und Bcl-2, streng reguliert [27, 28]. Das Verhältnis von Bax zu Bcl-2 spielt eine entscheidende Rolle im mitochondrienabhängigen Apoptoseweg [29]. In mit CTPG behandelten H22-Zellen war das Bax/Bcl-2-Verhältnis signifikant hochreguliert, was die in dieser Studie beobachtete Verringerung von Δψm und die Freisetzung von Cytochrom c verursachen könnte. Folglich wurde Pro-Caspase-9 gespalten und aktiviert. Schließlich aktivierten die Initiatoren der aktiven Caspase-8 und -9 den Vollstrecker der Caspase-3, um PARP zu spalten, um die DNA-Reparatur zu verhindern. Zusammengenommen legten diese Ergebnisse nahe, dass CTPG die Apoptose in H22-Zellen sowohl über extrinsische als auch über intrinsische Signalwege induzierte.

Im Tumormausmodell unterdrückte CTPG signifikant das Wachstum von H22 HCC und verbesserte das Überleben von Tumormäusen erheblich. Interessanterweise förderte CTPG dosisabhängig die Proliferation von Splenozyten von Kunming-Mäusen, was mit unserer früheren Studie übereinstimmt [16].

Diese Ergebnisse legten nahe, dass CTPG das Wachstum von H22 HCC in Mäusen sowohl durch direkte Antitumorwirkung als auch durch indirekte Immunverstärkung unterdrücken könnte.

Schlussfolgerungen

CTPG unterdrückte das Wachstum von H22-Zellen sowohl in vitro als auch in vivo und induzierte Apoptose in H22-Zellen sowohl über extrinsische als auch über intrinsische Signalwege. Diese Daten deuteten darauf hin, dass CTPG ein potenzieller Kandidat für die Behandlung von HCC sein könnte.