Bestimmung von Echinacosid in Cistanche durch HPLC

HPLC-Bestimmung von Echinacosid in Cistanche

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Schlüsselwörter: Zistanche, Echinacosid

Zielsetzung:

HPLC bestimmte die Menge anEchinacosidinCistanchegemahlen in flüssigem Stickstoffzustand sowie in natürlich luftgetrocknetem Zustand, verglichen mit WildZistancheund künstlich angebautCistanche.

Methoden: Es wurde das lc{{0}}a HPLC-System (Shimadzu, Japan) verwendet. Die Säule war YMC inertial ods-sp (4,6 mm × 150 mm, 5 μm; YMC Co Ltd, Japan); Mobile Phase: Acetonitril-Methanol -1 Prozent Ameisensäure (10:15:75); Detektionswellenlänge 334 nm; Durchflussrate 0,7 mg · ml^-1. Säulentemperatur 30 Grad C.

Ergebnisse: Unterschiedliche Behandlungsbedingungen hatten einen sehr deutlichen Einfluss auf dieEchinacosidInhalt, mit im Allgemeinen höheren Niveaus vonEchinacosidinCistancheBoden unter flüssigem Stickstoff als in Boden unter natürlichen luftgetrockneten Bedingungen; Der Wirkstoffgehalt von wildCistanchewar viel höher als die der künstlichen Kultur.

Cistancheist eine vom Aussterben bedrohte Art, eine parasitäre Pflanze, die die Wurzeln von Clostridium, Salix rubrum, bewohnt. In China,Cistanchewird hauptsächlich in der Inneren Mongolei, Ningxia, Gansu und Xinjiang vertrieben, mit einem ausgezeichneten Ruf für "Wüsten-Ginseng", der von großem medizinischem Wert ist. Seine wichtigsten medizinischen Inhaltsstoffe sind Phenylethanoidglykoside, die unterteilt werden könnenEchinacosid, Blatt zusammenhängend,Cistanche, und andere in Abhängigkeit von ihren Substituenten. Unter ihnen,Echinacosidhat eine verbesserte sexuelle Funktion, antioxidative und freie Radikalfängerwirkung, hat aber auch einige antiapoptotische Wirkungen. Seit den 1980er Jahren wird die HPLC-Technologie, die eine einfache und schnelle Methode zur Trennung von Phenylethanoidglykosiden bietet, in großem Umfang zur Trennung von Naturprodukten eingesetzt. Zur Analyse des Inhalts wurde ein HPLC-Verfahren gewähltCistanche, der Hauptwirkstoff von wild und künstlich kultiviertenCistanche, in verschiedenen Wachstumsperioden, die eine wissenschaftliche Grundlage für die rationelle Entwicklung und Nutzung von bietenCistancheund die effektive Bewertung ihrer Qualität.

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Instrumente und Reagenzien

Shimadzu, Japan lc-20ein HPLC-Gerät, lc-20an einer Tandem-Doppelkolbenpumpe, CTO-20ein Säulenofen, Soda-20ein UV/Vis-Detektor mit zwei Wellenlängen; Kunshan kq-100 Ultraschallreiniger; Acetonitril (chromatographisch rein, Tianjin Guangfu Chemical Research Institute); Methanol (chromatographisch rein, Tianjin Guangfu Chemical Research Institute); Ameisensäure (chromatographisch rein, Tianjin Guangfu Chemical Research Institute); destilliertes Wasser

Kontrolle:Echinacosid, Inhalt größer oder gleich 98,43 Prozent (Shanghai Yuanye Bio-Technology Co., Ltd.).

Fünf Proben vonCistanche: künstlich für ein Jahr mit den folgenden gepflanztCistanche, künstlich gepflanzt fürCistanche, künstlich getrocknetCistanche, wildCistanche, und künstlich seit mehr als drei Jahren mit gepflanztCistanche.

Methoden und Ergebnisse

Bestimmung der chromatographischen Bedingungen

Um die Spitze des Gemessenen zu trennenEchinacosidim LC-Chromatogramm von anderen Substanzen sowie zur Steuerung des Pumpendrucks und des Zeitplans auf einen geeigneten Bereich wurde die experimentelle Modifikation der chromatographischen Bedingungen durchgeführt, und nach Optimierungsexperimenten mit mobiler Phase wurde der Schluss gezogen, dass je höher die Temperatur, desto kürzer die Retentionszeit und je niedriger die Konzentration, desto kürzer der Pumpendruck und desto geringer die Retentionszeit, aber die Peakhöhe wurde geringer, was für die Messung ungünstig war. Die mobile Phase wurde schließlich als Acetonitril-Methanol -1 Prozent Ameisensäure (10:15:75), die Detektionswellenlänge 334 nm, die Flussrate 0,7 ml/min und die Säulentemperatur bestimmt 30 Grad C, entsprechend den objektiven Bedingungen von Raumtemperatur und dem maximalen Lagerdruck der Pumpe, was zu einer Fülle von Informationen mit scharfen Peakformen und einer guten Trennung der Bestandteile führte.

Bestimmung der Spalten

YMC-Inertsil ODS-SP (4,6 mm × 150 mm, 5 μm; YMC Co Ltd, Japan).

experimentelle Lösungsherstellung

von Standardlösungen

Eine angemessene Menge des Echineosid-Standards wurde genau abgewogen und mit Acetonitril-Methanol -1-prozentiger Ameisensäure (10:15:75) als mobile Phase versetzt, um 0 herzustellen.0 6 mg · ML - 1, 0.05 mg · ML {{1{{20}}}}, 0,04 mg · ML - 1 , 0,03 mg · ML - 1, 0,02 mg · ML - 1, 0,01 mg · ML - 1 und 0,005 mg · ML - 1 Lösungen vonEchinacosidStandard.

Vorbereitung der Testlösung

Angemessene Mengen an künstlich gepflanztem frischemCistanche(unter einem Jahr), künstlich frischCistancheund wild frischCistanchewurden unter Verwendung eines Mörsers unter flüssigem Stickstoff zu Pulver gemahlen; Außerdem wurde eine geeignete Menge der oben genannten 3 Cistanche in Blöcke geschnitten, auf natürliche Weise bei schattiger Belüftung luftgetrocknet und nach dem Trocknen pulverisiert und zu Pulver gemahlen. Künstlich trockenZistancheund wild über drei Jahre trockenCistanchewurden direkt in das Pulver gemahlen. {{0}},5 g des oben hergestellten Cistanche-Pulvers wurden genommen und in ein Zentrifugenröhrchen gegeben, 25 ml mobile Phase wurden hinzugefügt, gewogen und 30 min eingeweicht, 40 min beschallt, gekühlt und dann erneut gewogen, um das fehlende Gewicht mit mobiler Phase auszugleichen, geschüttelt und zentrifugiert, und der Überstand wurde für eine 0,45 &mgr;M mikroporöse Filtermembranfiltration genommen.

Plots von Regressionskurven für die Standardstichprobe vonEchinacosid

Die vorbereiteten Standardproben vonEchinacosidwurden separat in die LC-Apparatur injiziert, und die Konzentration der Kontrolle (mg·L-1) wurde als Abszisse verwendet, und die entsprechenden Peakflächen wurden geordnet, um die Standardkurve zu zeichnen, was zu der Regressionsgleichung führte: y=66 867 100x-46 360.83, R2=0.98637, was die zeigteEchinacosidbei 0,1 ~ 1,2 ug innerhalb einer guten linearen Beziehung.

Diskussionen

Echinacosidist einer der Hauptwirkstoffe vonCistanche, die die chemische Grundlage der pharmakologischen Wirkung gut darstellen könnenCistanche, die Qualitätsbewertung des Arzneimittels und seiner pharmakologischen Wirkung in Einklang zu bringen und die Relevanz zu verbessernCistancheQualitätsbewertung.

Die unterschiedlichen Behandlungsbedingungen hatten einen deutlichen Einfluss auf dieEchinacosidInhalt, mit im Allgemeinen höheren Niveaus vonEchinacosidinCistancheBoden unter flüssigem Stickstoff als in Boden unter natürlichen luftgetrockneten Bedingungen. Gemeinsame Lufttrocknung verringerte die Menge anEchinacosid, die möglicherweise während der Lufttrocknung verbraucht oder umgewandelt wurden. Um die Abnahme des Wirkstoffgehalts zu verhindern und die Wirksamkeit zu gewährleistenCistanche, sollte eine geeignete Behandlung ausgewählt werden.

Konsequenterweise glaubten die meisten, dass die künstliche Kultivierungsumgebung vonCistanche, sowie Wachstumsgewohnheiten, waren ohne Qualitätsunterschied nicht von der Wildnis zu unterscheiden, neigten dazu, nur den Schwerpunkt auf den Ertrag zu legen, und analysierten die Qualität nicht. Die vorliegende Studie zeigte, dass die Menge der künstlich angebautenCistancheEchinacosidwar niedriger als die von WildCistancheEchinacosid. Der höchste Wert war 0,3360 Prozent WildZistancheund der niedrigste war 0,007 0 Prozent künstlichCistanche. Daher muss in der Anbautechnologie noch untersucht werden, um den Gehalt an Wirkstoffen zu verbessern.

Die Qualität vonCistanchehängt von der Menge seines Wirkstoffs ab,Echinacosid, was wiederum eine starke Beziehung zur Jahreszeit, Zeit und Methode der Ernte hat, also Ernte vonCistanchesollte den Akkumulationsstatus des Wirkstoffs und das Wachstums- und Entwicklungsstadium berücksichtigen. Berücksichtigen Sie sowohl die Qualität als auch den Ertrag.

Die in diesem Artikel erwähnte Methode ist einfach, präzise, ​​reproduzierbar und genau zur Bestimmung von Echinacosid. Nützlich zumCistancheFestlegung.