Bestimmung von Acteosid und Echinacosid von Cistanche Tubulosa

[Abstrakt]Ziel: Aufbau einer Bestimmungsmethode (Wirksamkeitskomponente auf Staaten- und Echinacea-Seite) in Cistanche Tubulosa durch Hochleistungsflüssigkeitschromatographie. Vergleich des Hauptbestandteilgehalts in zwei Lebensräumen, vier Wirten und vier Gruppen in Cistanche tubulosa. Bereitstellung wissenschaftlicher Beweise für die Verwendung der Arten von Cistanche tubulosa. Methoden: Verwendung einer Kromasil C18 (4,6 mm×250 mm, 5 μm) Chromatographiesäule; Mobile Phase: Methanol, Acetonitril -1 Prozent Essigsäure (14∶9∶77); Flussrate: 1,0 ml·min-1; Detektionswellenlänge von 334 nm; Die Säulentemperatur betrug 30 Grad. Ergebnisse: Zwei Komponenten hatten im Test einen guten linearen Bereich der Standardkurve (r=0.999,9). Die durchschnittliche Wiederherstellungsrate beträgt 96,89 Prozent bzw. 100,7 Prozent und die RSD-Prozentzahl betrug 0,91 Prozent bzw. 1,96 Prozent. Die Ergebnisse der Analyse zeigten, dass es in verschiedenen Regionen, Chargen und Wirten bei Cistanche tubulosa einen signifikanten Unterschied zwischen dem Gehalt der Hauptwirksamkeitskomponenten (Staats- und Echinakosid) gab. Fazit: Die Methode ist einfach, genau und reproduzierbar. Es liefert die experimentelle Grundlage für den medizinischen Wert von Cistanche tubulosa.

[Schlüsselwörter] Cistanche tubulosa; Acteosid; Echinacosid; Inhaltsbestimmung

Cistanche deserticola-Experiment

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Cistanche deserticola wurde erstmals in der „Shennong Materia Medica Classic“ erwähnt und ist eines der am häufigsten verwendeten Arzneimittel in Rezepten zur Nierenstärkung und Yang-Stärkung. In den letzten Jahren hat die groß angelegte Ausgrabung von Cistanche deserticola zu einem raschen Rückgang der Wildressourcen geführt. Als Ersatz für Cistanche deserticola macht die in Xinjiang produzierte Röhrenblume Cistanche deserticola 60 Prozent des Angebots des Landes aus.

Cistanche-Pulver

Phenylethanolglycoside wie Echinacosid und Ergosterolglycoside sind einer der wichtigsten pharmakologischen Bestandteile von Cistanche tubulosa. Echinosid hat neuroprotektive Wirkungen [3], osteoprotektive Wirkungen [4] und Anti-Aging-Wirkungen [5]. Ergosterosid hat die Wirkung, Gedächtnisstörungen zu verbessern, die Alzheimer-Krankheit zu behandeln und androgenähnliche Wirkungen zu haben. Röhrenförmige Cistanche: auch bekannt als Hongliu Dayun, beherbergt verschiedene Pflanzen von Tamarix L. [8-9]. Der Autor verwendete die HPLC-Methode, um den Gehalt der beiden oben genannten Komponenten in Cistanche deserticola zu bestimmen. Die Bestimmungsmethode und die Ergebnisse bilden eine wissenschaftliche Grundlage für die Qualitätskontrolle und den medizinischen Wert dieses Arzneimittels.

Phenylethanolglycosid ist der Hauptwirkstoff von Cistanche deserticola

1 Instrument und Testmedikament

Reagenz und Testarzneimittel: Echinacetin (Chargennummer 111670-200401), Ergosterol (Chargennummer 111530-200505), Referenzsubstanz, bereitgestellt vom China Institute for the Control of Pharmaceutical and Biological Products. Acetonitril und Methanol sind chromatographisch rein, während Wasser hochreines Wasser ist; Alle anderen Reagenzien sind analytisch rein. Alle medizinischen Materialien von Cistanche deserticola wurden von Professor Ju Aihua von der Medizinischen Universität der Inneren Mongolei gesammelt und identifiziert. Instrument: American Agilent 1100 Hochleistungsflüssigkeitschromatographie.

2 Methoden und Ergebnisse

2.1 Chromatografische Bedingungen und Systemanpassungsfähigkeitstest

Chromatografische Säule: Chromatografische Säule Kromasil C18 (4,6 mm × 25 0 mm, 5 μm）; Mobile Phase: Acetonitril-Methanol-1-prozentige Essigsäurelösung (9:14:77); Die Detektionswellenlänge beträgt 334 nm; Durchfluss Rate: 1,0 ml · min-1; Säulentemperatur 30 Grad; Injektionsvolumen 20 μL. Die theoretische Anzahl der Böden sollte basierend auf der Berechnung der Echinacea-Glykoside nicht weniger als 5000 betragen. Der Trennungsgrad der beiden pharmakologischen Komponenten ist gut, mit einem Trennungsgrad von mehr als 1,5 von benachbarten Peaks. (Siehe Abbildung 1-3)

Abbildung 1 Chromatogramm der Echinacetin-Referenzsubstanz

Abbildung 2 Chromatogramm der Referenzsubstanz Ergosterin

Abbildung 3 Chromatogramm von Cistanche deserticola

2.2 Vorbereitung der Probenlösung

Wiegen Sie etwa 0,5 g Cistanche-Deserticola-Pulver (durch ein 60-Mesh-Sieb gesiebt) genau ab und geben Sie es in einen 100-ml-braunen Erlenmeyerkolben. Fügen Sie genau 50 ml der mobilen Phase hinzu, wiegen Sie die Masse, behandeln Sie sie 40 Minuten lang mit Ultraschall und stellen Sie sie auf Raumtemperatur. Die Masse erneut abwiegen, den Gewichtsverlust mit der mobilen Phase ausgleichen, gut schütteln, filtrieren, das Filtrat erneut entnehmen und beiseite stellen.

2.3 Vorbereitung der Referenzlösung

Wiegen Sie eine geeignete Menge Echinacetin- und Ergosterol-Referenzmaterialien genau ab und fügen Sie die mobile Phase hinzu, um eine Lösung herzustellen, die jeweils etwa {{0}},14 mg Echinacetin und 0,10 mg Ergosterol pro 1 ml enthält.

2.4 Überprüfung der linearen Beziehung

6,4 mg Echinacea-Referenzsubstanz bzw. 3,{3}} mg Ergosterol-Referenzsubstanz genau abwiegen, in einen 1{5}}-ml-Messkolben geben, mit mobiler Phase verdünnen und gleichmäßig schütteln; Saugen Sie genau 0.1, 0.25, 0.5, 1.0, 2.0 und 3.0 ml auf jeweils in einen 5-mL-Messkolben füllen, mit mobiler Phase bis zur Skala verdünnen und schütteln; Nehmen Sie jeweils 20 μ auf, injizieren Sie L-Probe und messen Sie gemäß den oben genannten chromatographischen Bedingungen. Die Y-Achse repräsentiert die Peakfläche und die X-Achse repräsentiert das Injektionsvolumen. Zeichnen Sie eine Standardkurve. Die gemessenen Daten zeigen, dass die Menge an Echinacetin 0,26 μ g-7,75 μ beträgt. Es besteht eine gute lineare Beziehung zwischen der Peakfläche und dem Injektionsvolumen zwischen g und die Regressionsgleichung lautet Y=831,41X21. 88, R2=0.9999; Die Menge an Ergosterolglycosid beträgt 0,30 μ g-7.50 μ. Es besteht eine gute lineare Beziehung zwischen der Peakfläche und dem Injektionsvolumen zwischen g und die Regressionsgleichung lautet Y=671.53X plus 158,71, R{ {39}}.9999.

Echinosid, der wichtigste chemische Bestandteil von Cistanche deserticola

2.5 Präzisionstest

Wiegen Sie 0,5 g des oben genannten medizinischen Pulvers genau ab, bereiten Sie die Testlösung gemäß der in „2.2“ beschriebenen Methode vor, injizieren Sie 6 Mal hintereinander und notieren Sie die Peakflächen der beiden Komponenten. Der RSD-Prozentsatz der Peakfläche seines Echinacosids beträgt 1,46 Prozent; Der Gehalt an Ergosterolglycosid beträgt 1,62 Prozent.

2.6 Stabilitätstest

Nehmen Sie {{0}},5 g Probenpulver und bereiten Sie die Testlösung gemäß der in „2.2“ beschriebenen Methode vor. Injizieren Sie die Probe bei 0, 1, 2, 4, 8 und 12 Stunden nach der Vorbereitung. Die Ergebnisse zeigten, dass der RSD-Prozentsatz der Peakfläche von Echinacetin 1,5 Prozent betrug; Der Gehalt an Ergosteringlykosid beträgt 2,0 Prozent.

2.7 Wiederholbarkeitstest

Wiegen Sie genau 6 Pulverproben aus derselben Charge, die in Minfeng, Hotan, Xinjiang hergestellt wurden und jeweils etwa 0,5 g wiegen. Bereiten Sie die Peakfläche gemäß der Methode unter „2.2“ vor und messen Sie sie. Berechnen Sie den RSD-Prozentsatz der Peakfläche von Echinacosid in 6 Proben mit 1,85 Prozent und Ergosterol mit 1,93 Prozent.

2.8 Probenzugabe und Wiederherstellungstest

Wiegen Sie 6 medizinische Pulverproben aus derselben Charge, die in Minfeng, Hotan, Xinjiang hergestellt wurde, genau ab, wobei jede Probe etwa 0,1 g wiegt. Fügen Sie eine bestimmte Menge Echinacetin und Ergosterol hinzu und bereiten Sie die Testlösung gemäß der in „2.2“ beschriebenen Methode vor. Die durchschnittlichen Wiederherstellungsraten betrugen 96,89 Prozent bzw. 100,7 Prozent, wobei der RSD-Prozentsatz 0,91 Prozent bzw. 1,96 Prozent betrug. (Siehe Tabellen 1-2)

Tabelle 1 Ergebnisse des Ananassaft-Glucosid-Wiederherstellungstests

Tabelle 2 Ergebnisse des Ergosterolglycosid-Wiederherstellungstests

2.9 Probenbestimmung

Nehmen Sie das medizinische Pulver von Cistanche deserticola aus jeder Tube und verfahren Sie nach der Methode in „2.2“. Die Messergebnisse sind in Tabelle 3 dargestellt.

Tabelle 3 Bestimmung von Echinacetin und Ergosterosid in Cistanche deserticola

3 Diskussion

3.1 Auswahl der mobilen Phase

Es wurden zwei Sätze mobiler Phasen verglichen: 1) Methanol-Acetonitril-1-prozentige Essigsäurelösung (14:9:77); (2) Methanol: 1 Prozent Ameisensäure (21,5:78,5). Die Ergebnisse zeigten, dass die Elution mit der mobilen Phase (1) zu einer moderaten relativen Retentionszeit, weniger Verunreinigungspeaks und einer guten Trennung der beiden Komponenten führte.

3.2 Auswahl der Extraktionsbedingungen

Die Auswirkungen verschiedener Extraktionsmethoden (Heizrückfluss, Ultraschall) und Extraktionszeiten (40 Min., 50 Min.) auf den Wirkstoffgehalt wurden unter Verwendung der mobilen Phase als Extraktionslösungsmittel verglichen. Schließlich wurde festgestellt, dass der höchste Gehalt zwar nach 50-minütigem Erhitzen und Rückflussieren gemessen wurde, es jedoch aufgrund der schlechten Peakform keine Auswahl gab. Der mit Ultraschall über 40 Minuten und Ultraschall über 50 Minuten gemessene Gehalt ist ähnlich, daher wurde Ultraschall über 40 Minuten als Extraktionsbedingung ausgewählt.

3.3 Untersuchungen haben ergeben

Chinesische Kräuter-Cistanche

Dass unterschiedliche Wirte und Lebensräume erhebliche Unterschiede im Gehalt an Echinacosid und Ergosterol in Cistanche deserticola aufweisen, weist darauf hin, dass die Qualität des medizinischen Materials erheblich vom Standort und Wirt abhängt. Daher ist die systematische Untersuchung des Zusammenhangs zwischen Herkunft, Wirt und Qualität des medizinischen Materials von Cistanche tubulosa von großer Bedeutung für die Auswahl der optimalen Wirtspflanzen und die Bewertung der Qualität von Cistanche tubulosa.

Referenz

[1] Chen Fei, Chen Zhuo, Xing Xuefei et al. Forschungsfortschritt zu Cistanche deserticola [J]. Drug Evaluation Research, 2013, 36 (6): 469-475

[2] Song Hailong, Jia Xiaoguang, Xie Haihui. Forschungsfortschritte zu den chemischen Bestandteilen von Cistanche tubulosa [J]. Xinjiang Traditional Chinese Medicine, 2010, 28 (01): 76-78

[3] ZHU M,LUC,LIW. Eine vorübergehende Exposition gegenüber Echinacosid reicht aus, um die Trk-Signalübertragung zu aktivieren und neuronale Zellen vor Rotenon zu schützen [J].J Neurochem,2013,124(4): 571-580. [4] LIF YANG

[5] XIE H, ZHU H, CHENG C, et al. Echinacosid verzögert die Zellalterung menschlicher fibroblastischer Zellen MRC-5[J]. Pharmazie,2009,64(11):752-754.

[6] Park Jinghua, Pu Xiaoping, Ma Jian et al. Die Verbesserung der Scopolamin-induzierten Gedächtnisstörung durch Coeliaoside [J]. Chinese Pharmacological Bulletin, 2001, 17 (6): 625-626

[7] Lai Qinghai, Wang Linlin, Ding Hui et al. Forschungsfortschritte zur Behandlung von Osteoporose mit Cistanche deserticola [J]. Journal of Liaoning University of Traditional Chinese Medicine, 2016, 18 (3): 102-104

[8] Wang Changlin, Guo Yuhai, Tu Pengfei et al. RAPD-Analyse von parasitärem Cistanche deserticola an verschiedenen Tamarix-Arten [J]. Chinese Journal of Traditional Chinese Medicine, 2009, 34 (3): 264-268

[9] Huang Xiaofang, Xu Rong, Chen Jun et al. Forschungsstand und Perspektiven zu Lebensraumeigenschaften, parasitären Mechanismen und Nährstofftransport von Cistanche deserticola [J] Chinese Journal of Traditional Chinese Medicine, 2012, 37 (19): 2831-2835