Echinacosid fördert die Proliferation menschlicher tubulärer Epithelzellen der Niere, indem es den HBX/TREM2-vermittelten NF-κB-Signalweg blockiert

Kontakt: Audrey Hu WhatsApp/hp: 0086 13880143964 E-Mail:audrey.hu@wecistanche.com

YuFan ZHang, QinFanG Wu, liMin ZHong, donGWei Gong

Abstrakt.

Das Protein des Hepatitis-B-Virus X (HBX) wird für die Replikation von HBV benötigt und spielt eine Rolle beim Fortschreiten der Hepatitis beim Menschen. Die zugrunde liegende Funktion von HBX während HBV-induzierter chronischer Glomerulonephritis (HBV-Gn) ist jedoch unbekannt. (Echinacosid aus Cistanche)(ecH) ist ein Phenylethanoidglykosid aus der Gattung Cistanche, das starke Antiapoptose- und neuroprotektive Aktivitäten besitzt. In der vorliegenden Studie wurden die Funktion von HBX und die Beziehung zwischen HBX und ecH in humanen renalen tubulären Epithelzellen (rTecs; HK-2-Zelllinie) untersucht. reverse transkriptionsquantitative Pcr- und Western-Blot-Analysen wurden verwendet, um die mRNA- bzw. Proteinexpressionsniveaus von HBX in HK-2-Zellen zu quantifizieren. Der Cell-Counting-Kit-8-Assay wurde durchgeführt, um die Zellproliferation zu analysieren. Zur Bestimmung der Apoptoserate wurde eine Durchflusszytometrieanalyse verwendet. HBX zeigte antiproliferative und proapoptotische Wirkungen in HK-2-Zellen und war positiv mit der Auslösung der Rezeptorexpression auf myeloiden Zellen 2 (TreM2) assoziiert. Darüber hinaus störte ECH die Funktion von HBX in HK-2-Zellen, die als HBX-Suppressor fungierten. Darüber hinaus wurde ein spezifischer NF-κB-Inhibitor, PdTc, verwendet, um die Beziehung zwischen HBX und nF-κB weiter zu untersuchen. Die Ergebnisse legten nahe, dass nF-κB am HBX/TreM2-Signalweg beteiligt war und die TreM2-Expression in RTECS negativ regulierte. Die vorliegende Studie lieferte neue Einblicke in die Funktion von HBX und wies auch auf den potenziellen Wert von ECH als therapeutisches Mittel für HBV-Gn hin.

Einführung

Das Hepatitis-B-Virus (HBV) ist ein Hepadnaviridae-Virus, das beim Menschen zu akuter und chronischer Hepatitis führt (1). HBV verursacht nicht nur eine anhaltende oder vorübergehende Infektion in der Leber, sondern infiziert auch extrahepatisches Gewebe, einschließlich der Bauchspeicheldrüse, des Gallengangs, des Lymphsystems und der Nieren (2). Darüber hinaus ist eine HBV-Infektion eng mit einer chronischen Glomerulonephritis (HBV-Gn) verbunden; die molekularen Mechanismen von HBV während HBV-Gn sind jedoch nicht vollständig verstanden (3,4).

Das regulatorische HBV-Hepatitis-B-Virus-X-(HBX)-Protein ist für die HBV-Replikation erforderlich (5,6). Eine Reihe von Studien haben berichtet, dass HBX die Zellproliferation während eines mit einer HBV-Infektion assoziierten Hepatokarzinoms fördert (7-9). Humane renale tubuläre Epithelzellen (rTecs) sind ein Hauptbestandteil des renalen tubulären Interstitiums und spielen eine aktive Rolle bei Nierenentzündungen (10). Die rTec-Apoptose ist eng mit der Dysfunktion des tubulären Interstitiums verbunden, was in der Folge zum Fortschreiten von HBV-Gn führt (10). HBX wird hauptsächlich in rTec-Zellen exprimiert und verursacht rTec-Apoptose und Nierenschlauchläsionen bei Patienten mit HBV-Gn (11,12). Darüber hinaus wurde berichtet, dass HBX die Proliferation von Ratten-rTecs (13) unterdrückt, und eine HBX-Überexpression beschleunigt das Fortschreiten des Zellzyklus von der G1- zur S-Phase in primären rTecs, was zu einem Zellzyklusarrest in der S-Phase führt (14). Daher kann die Identifizierung eines HBX-Inhibitors ein neues Therapeutikum für HBV-Gn bereitstellen. Das genaue molekulare Netzwerk von HBX in menschlichen rTecs ist jedoch noch nicht vollständig verstanden.(Echinacosid aus Cistanche)(ecH) ist eine natürliche Verbindung, aus der extrahiert wirdCistanchePflanzen, die antiapoptotische und entzündungshemmende Wirkungen zeigen (15,16). Eine frühere Studie berichtete, dass ecH die Proliferation induziert und die Apoptose von Darmepithelzellen verhindert (17). Darüber hinaus wurde berichtet, dass ecH die Knochenregeneration beschleunigt, indem es die Proliferation von Osteoblastenzellen erhöht (18). ecH kann auch die HBV-Replikation, Antigenexpression und Entzündung in intestinalen Epithelzellen von Ratten verringern (16,19). Allerdings ist die biologische Wirkung von ecH auf rTecs noch nicht vollständig aufgeklärt.

TreM2-Überexpression förderte die Proliferation von Gliomzellen (22). Im Gegensatz dazu verringert TreM2-Knockdown die Translokation von nF-κB in den Zellkern in degenerativen menschlichen Nucleus-pulposus-Zellen (23). Darüber hinaus wurde TreM2 als neuer therapeutischer Angriffspunkt für die menschliche Bandscheibendegeneration identifiziert (23). Die biologische Funktion von TreM2 in menschlichen rTecs wurde jedoch nicht beschrieben. In der vorliegenden Studie wurde die HBX-Überexpression (oeHBX) in humanen rTecs (HK-2-Zelllinie) induziert und anschließend die Wirkung von ecH(Echinacosid aus Cistanche) auf transfizierten oeHBX-Zellen untersucht. Das Ziel der vorliegenden Studie war es, die Funktionen von HBX und den potenziellen Wert von ecH als wirksames therapeutisches Mittel für HBV-Gn zu untersuchen.

Materialien und Methoden

Zelle Kultur.Die menschliche rTec-Zelllinie HK-2 wurde von Shanghai Yaji Biotechnology Co., Ltd. erworben. HK-2-Zellen wurden in DME/F12-Medium (Kat.-Nr. SH30023.01B; Hyclone; Cytiva) kultiviert, das mit 10 % fötalem Rinderserum (Kat.-Nr. 16000-044; Gibco; Thermo Fisher Scientific, Inc.) ergänzt war .), 2 mM L-Glutamin und 1 % Penicillin/Streptomycin (Kat.-Nr. P1400-100; Beijing Solarbio Science & Technology co., Ltd.) bei 37 °C mit 5 % CO2.

RNS Isolation und umkehren Transkription – quantitativ PCR (RT‑qPCR).Gesamt-RNA wurde aus HK-2-Zellen unter Verwendung von Trizol® (Kat.-Nr. 1596 -026; Invitrogen; Thermo Fisher Scientific, Inc.) gemäß dem Protokoll des Herstellers extrahiert. Gesamt-RNA wurde unter Verwendung des First-Strand-cDNA-Synthesekits gemäß dem Protokoll des Herstellers (Kat.-Nr. K1622; Thermo Fisher Scientific, Inc.) revers in cDNA transkribiert. qPCR wurde unter Verwendung von SYBr-Green-Vormischung gemäß dem Protokoll des Herstellers (Kat.-Nr. K0223; Thermo Fisher Scientific, Inc.) auf einem ABI-7300-Echtzeitdetektor (Applied Biosystems; Thermo Fisher Scientific, Inc.) durchgeführt. Die PCR-Bedingungen waren: 95 °C für 10 min, gefolgt von 40 Zyklen bei 95 °C für 15 s, 60 °C für 45 s. Für jede Reaktion wurden drei Wiederholungen benötigt. Die folgenden Primerpaare wurden für die qPCR verwendet: HBX forward, 5'-GGcTGcTaGGTTGTacTG-3' und reverse, 5'-caGaGGTGaaGcGaaGTG -3'; TreM2 vorwärts, 5'-TGGcacTcTcaccaTTacG-3' und rückwärts, 5'-ccTccc aTcaTcTTccTTcac-3'; und GaPdH vorwärts, 5'-AAT cccaTcaccaTcTTc-3' und rückwärts, 5'-aGGcTGTTG TcaTacTTc-3'. Die mRNA-Spiegel wurden mit der 2-ΔΔCq-Methode quantifiziert und auf das interne Referenzgen normalisiertGAPDH (24).

Überexpression und niederschlagen.Um die Überexpression von HBX und TreM2 zu induzieren, wurden die HBX- oder TreM2-cDNA-Sequenzen voller Länge in den plVX-puro-Vektor (Cleantech Laboratories, Inc.) durch doppelten Verdau inseriert (Hindiii undEcoRI). Anschließend wurde das rekombinierte Plasmid (1,5 &mgr;g) in HK-2-Zellen (2 × 10 5 ) transfiziert. Das Scheinplasmid (ein leerer Vektor, 1 µg) wurde transient in HK-2-Zellen (2x105) als Negativkontrolle (oenc) unter Verwendung von Lipofectamine® 2000 (Kat.-Nr. 11668-027, Invitrogen, Thermo Fisher Scientific, Inc.). ech(Echinacosid aus Cistanche)(Kat. Nr. 82854-37-3; Biopurify Phytochemicals, Ltd.) wurde in DMSO (Kat. Nr. d2650; Sigma-Aldrich; Merck KGaa) in einer Konzentration von 1, 2,5, 5, 10, 20 und gelöst

jeweils 50 mg/l; und zu der Kultur von transfizierten oeHBX- oder oeTreM2-Zellen gegeben. Das anschließende Experimentieren begann 48 h später.

Um die TreM2-Expression zu unterdrücken, wurden drei kleine interferierende (si)RNAs (siTreM2-1, siTreM2-2 und siTreM2-3; 20 µM) synthetisiert, die auf TreM2 abzielen (Shanghai Majorbio Bio-Pharm Technology co ltd.) und anschließend in HK-2-Zellen (2x105) unter Verwendung von Lipofectamine® 2000 gemäß dem Protokoll des Herstellers (Invitrogen; Thermo Fisher Scientific, Inc.) transfiziert. Als Negativkontrolle wurde eine unspezifische verschlüsselte siRNA-Sequenz (5'uucuccGaacGuGucacGu3, 25 nM) si-negative Kontrolle (nc) verwendet. Der Zielort und die Sequenzen der TreM2-Sirnas sind in Tabelle Si bereitgestellt. Der anschließende Versuch wurde 48 h später durchgeführt.

Western beflecken.Gesamtprotein wurde aus HK-2-Zellen extrahiert

unter Verwendung von RIPA-Lysepuffer (Kat. Nr. BY140825; Jrdun Biotech Co., Ltd.). Das Gesamtprotein wurde unter Verwendung des Bicinchoninsäure-Assay-Kits (Kat.-Nr. PICPI23223; Thermo Fisher Scientific, Inc.) gemäß dem Protokoll des Herstellers quantifiziert, und 20 &mgr;g Protein/Spur wurden über SDS-Page auf einem 15-prozentigen Gel getrennt. Die Densitometrie der Proben wurde mit einem Mikroplattenlesegerät (dnM-9602, Pulangxin) bestimmt. Anschließend wurden die aufgetrennten Proteine ​​auf eine PVDF-Membran übertragen. Nach dem Blockieren mit 5 % fettfreier Trockenmilch für 1 h bei Raumtemperatur wurde die Membran mit primären Antikörpern (Tabelle SII) bei 4 °C über Nacht inkubiert und mit dem sekundären Antikörper Anti-Maus-igG (1:1, 000, Kat. Nr. a0216, Beyotime Institute of Biotechnology) für 1 h bei 37 °C. Die immunreaktiven Proteinbanden wurden unter Verwendung eines ecl-Systems (Cytiva) sichtbar gemacht. Blots wurden dreifach durchgeführt.GAPDHund H3 wurden als Ladekontrollen für zytoplasmatische bzw. Kernproteine ​​verwendet.

Ergebnisse

EM (Echinacosid aus Cistanche)unterdrückt die Funktion von HBX in HK-2 Zellen.Zu beurteilen

die Funktion von HBX, HBX-Überexpression wurde in HK-2-Zellen induziert. Die relativen mRNA- und Proteinspiegel von HBX waren in oeHBX-Zellen im Vergleich zu oenc-Zellen signifikant hochreguliert (Abb. 1a und B). Anschließend wurden oeHBX-Zellen mit unterschiedlichen ecH-Konzentrationen (1, 2,5, 5, 10, 20 und 50 mg/l; e1, e2,5, e5, e10, e20 bzw. e50) kultiviert. Die HBX-Überexpression reduzierte signifikant die Proliferation von HK-2-Zellen, und diese Abnahme wurde durch ecH dosisabhängig nach 24 und 48 h rückgängig gemacht (Abb. 1c).

Darüber hinaus zeigte die Proliferationsrate von oeHBX-Zellen keinen signifikanten Unterschied im Vergleich zu E1‑behandelten Zellen (Abb. 1c). Im Gegensatz dazu erhöhte die e10-Behandlung signifikant die Proliferationsrate von oeHBX-Zellen im Vergleich zur E20- und E50-Behandlung, die keinen signifikanten Unterschied aufwies (Abb. 1c). Daher wurde die Wirkung von ecH auf die Apoptose in mit e2.5, e5 und e10- behandelten Zellen untersucht. Die HBX-Überexpression erhöhte die Apoptose von HK-2-Zellen signifikant, und die Apoptoserate von oeHBX-Zellen nahm mit der ecH-Behandlung dosisabhängig ab (Abb. 1d). Insgesamt legten die Ergebnisse nahe, dass ecH die Funktion von HBX in HK-2-Zellen dosisabhängig hemmte.

TREM2 Ausdruck ist gehemmt durch EM(Echinacosid aus Cistanche) in transfiziert oeHBX

Zellen.rT-qPcr und Western Blotting wurden verwendet, um die relativen mRNA- bzw. Proteinexpressionsniveaus von TreM2 in oeHBX-Zellen zu untersuchen. TreM2 mrna- und Proteinexpressionsniveaus waren in oeHBX-Zellen im Vergleich zu oenc-Zellen signifikant hochreguliert (Abb. 2a und B). ecH verringerte jedoch die Expressionsniveaus von TreM2 in transfizierten oeHBX-Zellen in dosisabhängiger Weise (Fig. 2a und B). Daher legten die Ergebnisse nahe, dass die HBX-Expression positiv mit der TreM2-Expression assoziiert war, und zeigten ferner die unterdrückende Wirkung von ecH auf HBX in HK-2-Zellen.

Niederschlagen und Überexpression von TREM2 in HK-2 Zellen.Um die Funktion von TreM2 weiter zu beurteilen, wurden TreM2-Knockdown und -Überexpression in HK-2-Zellen unter Verwendung von RNA-Interferenz bzw. eines lentiviralen Vektors induziert. Für den Knock-down-Assay drei siRNAs, die auf das menschliche Gen abzielenTREM2(siTreM2-1, siTreM2-2 und siTreM2-3) wurden in HK-2-Zellen transfiziert und eine unspezifische siRNA wurde als Negativkontrolle (sinc) verwendet. Alle drei TreM2-Sirnas haben die endogene Expression von TreM2 in HK-2-Zellen erfolgreich unterdrückt (Abb. 3a und B). Die niedrigsten relativen TreM2 mrna- und Proteinexpressionsniveaus wurden jedoch in siTreM2-1- und siTreM2-2--transfizierten Zellen beobachtet (Fig. 3a und B), daher siTreM2-1 und siTreM{{13). }}transfizierte Zellen wurden für nachfolgende Experimente ausgewählt. Für die Überexpressionsexperimente wurde ein Plasmid, das die vollständige humane TreM2cdna-Sequenz enthält, konstruiert und anschließend in HK-2-Zellen (oeTreM2) transfiziert. a

mock-Plasmid diente als Negativkontrolle (oenc). Das Niveau der TREM2-Expression war in oeTREM2-Zellen im Vergleich zu oenc-Zellen signifikant erhöht (Abb. 3c und d). Daher wurden oeTreM2-Zellen für nachfolgende Experimente verwendet.

TREM2 zum Schweigen bringen sinkt das Apoptose von oeHBX Zellen.Das Apoptoseprofil von mit siTREM2 oder sinc transfizierten oeHBX-Zellen wurde bewertet. Die Apoptoserate von oeHBX plus sinc-Zellen war signifikant höher im Vergleich zu offenen Zellen. Die Apoptoserate war jedoch in oeHBX plus siTreM2-1- oder siTreM2-2-Zellen im Vergleich zu oeHBX plus sinc-Zellen signifikant verringert (Abb. 4a). Die Ergebnisse legten nahe, dass TreM2-Knockdown die Funktion von HBX während der Apoptose von HK-2-Zellen hemmte.

Survivin gehört zu den Inhibitoren einer Apoptose-Proteinfamilie, die die apoptotische Aktivität hemmt und den Zelltod unterdrückt (25). Das Targeting von Survivin wurde als neuer Ansatz für die Behandlung des Nierenzellkarzinoms identifiziert (26). nF-κB ist auch ein Apoptose-Inhibitor, der bei antiapoptotischen Tumorprozessen eine Rolle spielt (27). Darüber hinaus ist die Caspase3-Aktivierung eng mit der Apoptose verbunden (28). In der vorliegenden Studie wurde der Proteingehalt von TreM2, Survivin und gespaltener Caspase3 in HK-2-Zellen quantifiziert. Das Niveau der TREM2-Expression war in oeHBX plus siTreM2-1/2-Zellen im Vergleich zu oeHBX plus sinc-Zellen signifikant verringert (Fig. 4B). Das Niveau der Survivin-Expression war in oeHBX plus siTreM2-1/2-Zellen im Vergleich zu oeHBX-Zellen signifikant erhöht. außerdem war das Niveau der gespaltenen Caspase3-Expression in oeHBX-plus-siTreM2-1/2-Zellen im Vergleich zu oeHBX-plus-sinc-Zellen signifikant verringert (Fig. 4B). Darüber hinaus verringerte oeHBX signifikant die Translokation von NF-κB in den Zellkern, und die siTREM2-1/2-Transfektion erhöhte signifikant die nF-κB-Kerntranslokation (Abb. 4B). Zusammengenommen legen die Ergebnisse nahe, dass TreM2 ein nachgeschalteter Faktor von HBX in HK-2-Zellen ist, daher könnte HBX die Apoptose fördern, indem es die TreM2-Expression in menschlichen rTecs reguliert.

TREM2 Überexpression unterdrückt das Translokation vonNF‑κB zu das Kern in HK-2 Zellen.Die Wirkung von ecH(Echinacosid aus Cistanche)auf oeTreM2--transfizierten Zellen analysiert. TreM2-Überexpression förderte die Apoptose von HK-2-Zellen (Fig. 5a). Die Apoptose von oeTREM2-Zellen wurde durch die ECH-Behandlung signifikant verringert (E10; Abb. 5A). Darüber hinaus verringerte ECH signifikant die Expression von TreM2 in oeTreM2-Zellen. TREM2-Überexpression verringerte die Expressionsniveaus von Survivin signifikant, jedoch wurde diese Abnahme der Expression durch ecH umgekehrt. zusätzlich waren die Proteinexpressionsniveaus von gespaltener Caspase3 in oeTreM2-Zellen im Vergleich zu oenc-Zellen signifikant erhöht; ein Effekt, der durch die ECH-Behandlung signifikant verringert wurde. Darüber hinaus förderte ecH die Translokation von nF-κB in den Zellkern in oeTreM2-Zellen (Fig. 5B). Zusammengenommen zeigten die Ergebnisse, dass ecH auch die Funktion von TreM2 in menschlichen rTec-Zellen unterdrückte.

HBX-Funktionen sind unterdrückt durch das NF‑κB Inhibitor PDTCin Mensch RTECs.Um die Beziehung zwischen weiter zu beurteilen

HBX- und nF-κB, HK-2-Zellen wurden mit einem spezifischen nF-κB-Inhibitor, PdTc (10 µmol/l; P10), kultiviert. Die Zellapoptoserate von oeHBX-Zellen war im Vergleich zu oenc-Zellen signifikant erhöht (Abb. 6a). oeHBX plus PdTc-Zellen zeigten jedoch eine signifikant erhöhte Apoptoserate im Vergleich zu oeHBX-Zellen. Darüber hinaus sind die relativen mRNA- und Proteinexpressionsniveaus von TreM2 in oeHBX plus PdTc-Zellen im Vergleich zu oeHBX-Zellen gesunken ( 6B ). Daher die Ergebnisse

legten nahe, dass nF-κB die TreM2-Expression in oeHBX-transfizierten Zellen negativ regulierte.

NF‑κB Inhibitor PDTC unterdrückt TREM2 Promoter Aktivität in oeHBX Zellen.ein Luciferase-Reporter (pGl3-enhancer-luc2), der die Wildtyp-Promotorsequenz von TreM2 (pGl3-enhancer-luc2-pTreM2) enthält, wurde konstruiert und anschließend in oenc, oeHBX und transfiziert oeHBX plus P10 kultivierte Zellen.

Die Luciferase-Aktivität des Reportervektors, der den Wildtyp-TREM2-Promotor enthielt, war in oeHBX-Zellen im Vergleich zu oenc-Zellen signifikant erhöht. PdTc unterdrückte jedoch signifikant die Luciferase-Aktivität des Reporters in oeHBX-Zellen (Fig. 7). Insgesamt zeigten die Ergebnisse, dass PdTc die Transkription von TreM2 durch Unterdrückung der Promotoraktivität von TreM2 in oeHBX-Zellen hemmte.

Diskussion

HBX wird hauptsächlich in rTecs von Patienten mit HBV-Gn exprimiert und fungiert als Determinante der viralen Pathogenese (11, 29). Daher ist die Verbesserung des Wissens über die Funktion des HBX-Molekülnetzwerks ein entscheidender Schritt bei der Entwicklung eines neuen Ansatzes für die Behandlung von HBV-Gn. Das Ziel der vorliegenden Studie war es, die Funktion von HBX weiter zu untersuchen und sein potenzielles molekulares Netzwerk in menschlichen rTecs zu erforschen.

HBX hemmt die Proliferation von rTecs (11). In der vorliegenden Studie wurden Antiproliferations- und Pro-Apoptose-Funktionen von HBX in menschlichen RTECs identifiziert, was darauf hindeutet, dass HBX die Entwicklung von menschlichen rTecs unterdrückt. Eine frühere Studie zeigte, dass ecH(Echinacosid aus Cistanche)hemmt die HBV-Replikation und Antigenexpression (19). in der vorliegenden studie hat die eCH(Echinacosid aus Cistanche)Die Behandlung störte die Funktion von HBX in HK-2-Zellen, daher kann HBX durch ecH in HK-2-Zellen beeinträchtigt werden.

Molekularmedizin-Berichte 22: 1137-1144, 2020 1143

Darüber hinaus deuteten die Ergebnisse darauf hin, dass ecH(Echinacosid aus Cistanche)kann als potenzielles therapeutisches Mittel für HBV-Gn dienen.

TreM2 ist ein angeborener Immunrezeptor, der bei der Entzündungsreaktion eine Rolle spielt (30). In der vorliegenden Studie war die HBX-Expression positiv mit der TreM2-Expression in humanen RTECS assoziiert. Darüber hinaus verringerte der TREM2-Knockdown die Apoptoserate von oeHBX-Zellen und ecH signifikant(Echinacosid aus Cistanche)Behandlung reduzierte die Wirkung von oeTreM2 auf die Zellapoptose. Zusammengenommen legten diese Ergebnisse nahe, dass TreM2 von HBX in HK-2-Zellen angegriffen wurde. Daher eCH(Echinacosid aus Cistanche)kann die Apoptose von humanen rTecs hemmen, indem es die Aktivität des HBX/TreM2-Signalwegs blockiert.

Ein früherer Bericht zeigte, dass nF-κB nicht nur eine Rolle bei der Zellapoptose spielt, sondern auch an der Regulation von Immunantworten und Entzündungen beteiligt ist (31). Darüber hinaus wird TreM2 während der Alzheimer-Krankheit und der Makuladegeneration durch die nF-κB-sensitive microRNA-34a vermittelt (32,33). in der vorliegenden Studie war die Apoptoserate von oeHBX-Zellen in Gegenwart von PdTc signifikant erhöht. Nach unserem besten Wissen deutet die vorliegende Studie erstmals darauf hin, dass der NF-κB-Inhibitor PdTc die Promotoraktivität von TreM2 unterdrückt. Darüber hinaus legten die Ergebnisse nahe, dass TreM2 die Translokation von nF-κB in den Zellkern in HK-2-Zellen negativ regulierte, aber positiv mit gespaltenen Caspase3-Expressionsniveaus assoziiert war. TreM2 spielte in HK-2-Zellen eine entgegengesetzte Rolle zu seiner Rolle in humanen degenerativen Nucleus pulposus- und Gliomzellen (22, 23). Daher legte die vorliegende Studie nahe, dass TreM2 in verschiedenen Arten menschlicher Zellen unterschiedliche Funktionen haben könnte.

Zusammengenommen weist die vorliegende Studie nicht nur darauf hin, dass nF-κB eine neue Komponente des HBX/TreM2-Signalwegs ist, sondern legt auch nahe, dass nF-κB die TreM2-Expression in menschlichen rTecs negativ reguliert. Die größten Einschränkungen der vorliegenden Studie waren jedoch das Fehlen vonin lebendigExperimente und klinische Daten. Daher weiterin lebendigund klinische Studien sind erforderlich, um die Ergebnisse der vorliegenden Studie zu bestätigen.

in der vorliegenden studie wird die funktion der eCH(Echinacosid aus Cistanche)wurde untersucht und die Ergebnisse legten die möglichen Wirkungen von ecH nahe(Echinacosid aus Cistanche)über die Signalwege in menschlichen rTecs. Darüber hinaus erweiterte die vorliegende Studie das vorhandene Wissen über die biologische Funktion von ecH in menschlichen rTec-Zellen und schlug auch sein Potenzial als neuartiges therapeutisches Mittel für HBV-Gn vor.

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