Wirkungen von Echinosid auf Monoamin-Neurotransmitter in der extrazellulären Flüssigkeit des Striatum bei Ratten mit zerebraler Ischämie

Wei Lili1, Chen Hong1, Jiang Yong2, Tu Pengfei 2, Zhong Ming1, Du Juan1, Liu Fei1, Liu Chunyang1, Wang Lei1

(1. School of Pharmacy, Shihezi University, Xinjiang Key Laboratory of Special Plant Medicine, Bildungsministerium, Shihezi, Xinjiang 832002;2. Modern Research Center of Traditional Chinese Medicine, Peking University, Beijing 100083)

Klassifikationsnummer des chinesischen Buches: R-332; R284．1; R322．81; R338．14; R743.310.531

Dokument Identifikation: A Artikel Nr.: 1001-1978 (2011) 02-0174-04

Abstrakt: Ziel Untersuchung der Wirkung vonEchinosid(ECH) zu Monoamin-Neurotransmittern in der extrazellulären Flüssigkeit des Striatums bei Ratten mit fokaler zerebraler Ischämie und zur Erforschung des möglichen Mechanismus der neuroprotektiven Wirkung von ECH auf das Gehirn. Methoden SD-Ratten wurden zufällig in eine Kontrollgruppe, eine Modellgruppe, ECH-Gruppen mit hoher und niedriger Dosis und eine Ligustrazin (CXQ)-Gruppe eingeteilt. Den Ratten in jeder Gruppe wurden 7 Tage lang einmal täglich entsprechende Arzneimittel oder physiologische Kochsalzlösung intraperitoneal verabreicht. Am dritten Verabreichungstag wurde die Sondenhülle in das Striatum des Gehirns eingebettet. Eine Stunde nach der letzten Verabreichung wurde das Rattenmodell der fokalen zerebralen Ischämie (MCAO) hergestellt. Nachdem das Modell hergestellt war, wurde sofort eine Mikrodialyse durchgeführt. Das Dialysat wurde in den Hochleistungsflüssigkeitschromatographie-elektrochemischen Detektor (HPLC-ECD) injiziert, um den Gehalt an Norepinephrin (NE), Dopamin (DA), 5-Hydroxytryptamin (5-HT), 3, zu bestimmen ,4-Dihydroxyphenylessigsäure (DOPAC), Homovanillinsäure (HVA), 5-Hydroxyindolessigsäure (HIAA) in der extrazellulären Flüssigkeit des Striatums jeder Gruppe. Ergebnisse Im Vergleich zur Kontrollgruppe stiegen die Spiegel von NE, DA und 5-HT in der Modellgruppe an, und die sauren Metaboliten DOPAC, HVA und HIAA nahmen ebenfalls zu. Im Vergleich zur Modellgruppe nahmen die Gehalte von sechs Substanzen in den Hoch- und Niedrigdosisgruppen der ECH- (30, 15 mg · kg - 1 · d - 1) und CXQ-Gruppen ab. Schlussfolgerung Die neuroprotektive Wirkung von ECH kann mit dem Anstieg von Monoamin-Neurotransmittern nach zerebraler Ischämie zusammenhängen.

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Schlüsselwörter: Echinosid; zerebrale Ischämie; Striatum; HPLC-ECD; Monoamin-Neurotransmitter und Metaboliten

Echinaceosid(ECH) ist ein wirksamer Bestandteil von Phenylethanoidglykosiden, isoliert und gereinigt ausCistanche Deserticola, ein spezielles Werk in Xinjiang. Studien haben gezeigt, dass ECH neuroprotektive Wirkungen wie Antioxidation [1-2], Nervenschutz [3-4], Anti-Aging [5] und Verbesserung von Lernen und Gedächtnis [6-8] hat. Die Ergebnisse von Chen Hong et al. bestätigten, dass ECH eine schützende Wirkung auf DA-Neuronen bei der Parkinson-Krankheit hat [9]. Monoamin-Neurotransmitter sind eine Art wichtige Substanzen, die die physiologischen Aktivitäten des Körpers regulieren.Der Gehalt im Gewebe kann die Prozesse der Neurotransmitter-Biosynthese, Freisetzung, Aufnahme und Inaktivierung widerspiegeln [10-11]. Derzeit gibt es keinen relevanten Bericht über die Wirkung von ECH auf Monoamintransmitter im Gehirn von Ratten mit zerebraler Ischämie. In dieser Studie wurde die Wirkung von ECH auf den Gehalt an Monoamin-Neurotransmittern in der extrazellulären Flüssigkeit des Striatums von Ratten mit zerebraler Ischämie unter Verwendung von Gehirn-Mikrodialyse-Technologie untersucht, und der mögliche Mechanismus von ECH auf die Neuroprotektion des Gehirns wurde vorläufig untersucht.

Cistanche-Extraktpulver

1.Material

1.1 Versuchstiere

SD-Ratten, ♂, Körpermasse 250–300 g (bezogen vom Xinjiang Experimental Animal Center, Lizenznummer: 2009-0053).

1.2 Medikamente und Reagenzien

ECH wird gestiftet von Professor Tu Pengfei, School of Pharmacy, Peking University (Reinheit über 95 Prozent); Norepinephrin (NE), Dopamin (DA), 5-Hydroxytryptamin (5-HT), 3,4-Dihydroxyphenylessigsäure (DOPAC), Homovanillinsäure (HVA)

5-Hydroxyindolessigsäure (HIAA) ist Sigma; Tetramethylpyrazinhydrochlorid zur Injektion (CXQ, Harbin Sanlian Pharmaceutical Co., Ltd.); Zinkphosphatzement (Produkt von Shanghai Medical Instruments Co., Ltd., zusammengesetzt aus Flüssigkeit und Pulver, gemischt mit der Zeit); Natrium1-alkylsulfat (DIKMA); Zitronensäurehydrat (Tianjin Jinke Fine Chemical Research Institute); Trinatriumcitrat (Acros); Dinatriumethylendiamintetraessigsäure (JTTakerChemicalco); Methanol (DIKMA); Acetonitril (DIKMA); Zerebrale Mikrodialyse-Perfusionsflüssigkeit ist eine zusammengesetzte Natriumchlorid-Injektion (Beijing Shuanghe Pharmaceutical Co., Ltd.); Das gesamte verwendete Wasser ist wieder aufgedampftes Wasser.

1.3 Instrument

American BAS4100 stereotaktisches Rattengehirngerät; CMA/12 Sonde und Sondenhülse; CMA/120 bewusstseinsfähiges Tiergerät; CMA/402 Mikropumpe; CMA/150 Automatischer Niedertemperatur-Probensammler. Esa 5600A Infusionspumpe; Esa 5600A Infusionspumpe; Automatisches Probeninjektionsgerät Esa 542; elektrochemischer Detektor CoulArray von Esa; Glaskohlenstoff-Arbeitselektrode und Ag/AgCl-Referenzelektrode; C18-Säule (DIKMA, ODS5 μm, 150 mm × 4,6 mm); Chromatographie-Workstation CoulArraywin (Firma Esa); Wirbelmischer (Typ QL-861); Desktop-Säuretester (HANNA-211); Desktop-Hochgeschwindigkeitszentrifuge (Typ XYJ-2).

2.Methode

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2.1 Gruppierung und Verwaltung von Tieren

Dreißig Ratten wurden zufällig in fünf Gruppen eingeteilt: ① Kontrollgruppe: 1 ml · kg-1 · d-1 normale Kochsalzlösung; ② Modellgruppe: Kochsalzlösung 1ml · kg-1 · d-1; ③ Modell plus Ligustrazin (CXQ) 30 mg · kg-1 · d-1; ④ - ⑤ Modell plus ECH Hoch- und Niedrigdosisgruppen (ECHB, ECHS): 30, 15 mg · kg-1 · d-1; Alle Tiere in jeder Gruppe wurden 7 Tage lang intraperitoneal injiziert.

2.2 Modellierungsmethode und Mikrodialyse

Jede Ratte wurde am dritten Tag der Verabreichung mit einer Kanüle begraben: Die Ratten wurden mit 10 Prozent Chloralhydrat (3,5 ml · kg-1), fixiert auf dem BAS4100, anästhesiert stereotaktischen Apparat des Gehirns, und der Sondenkatheter wurde in das linke Striatum (Koordinaten AP: plus 0,2 mm; ML: - 3,0 mm; DV: - 3,5 mm) entsprechend GeorgePaxinos' "Stereotaktische Karte des Rattenhirns" implantiert ". Nach der letzten Verabreichung wurden die Ratten 1 Stunde später anästhesiert, und die Ratten wurden unter Verwendung der verbesserten Longa-Nahtmethode von Yang Zanzhang [12] zu einem fokalen zerebralen Ischämiemodell (MCAO-Modell) gemacht. Die Angelschnur in der Kontrollgruppe wurde nur 10 mm eingeführt, und die anderen Schritte waren die gleichen wie in der Operationsgruppe. Führen Sie nach dem Modellieren die Mikrodialysesonde im Zustand der bewussten und freien Bewegung ein und verwenden Sie Ringer-Lösung für μ. Das zerebrale Mikrodialysat wurde bei 4 Grad gesammelt und ein Röhrchen mit Dialysat wurde bei 20 Minuten gesammelt. Nachdem jedes Dialysatröhrchen entnommen wurde, muss es sofort in einem - 20-Grad-Kühlschrank gelagert und nach der Dialyse in einen - 70-Grad-Kühlschrank überführt werden. Die Wiederfindungsrate der Sonde wurde vor der Verwendung gemessen, was zur Umrechnung der Konzentration von Monoamin-Neurotransmittern im Dialysat verwendet wurde.

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2.3 HPLC-ECD-Analyse

Konfiguration der mobilen Phase: Die mobile Phase enthält 829 ml 0,15 mol · L-1 Zitronensäure-Natriumcitrat-Puffer pro Liter; 0,1 mol · L-1 Dinatrium-EDTA 1 ml; Methanol 150ml; Natrium-{{10}}alkylsulfat 0,283 g. Stellen Sie die Flussrate der mobilen Phase auf 0,7 ml · min-1 und die Temperatur des Säulenofens auf 28 Grad ein. Die Arbeitsspannung des elektrochemischen Detektors beträgt 200mV, 400mV und 600mV, jeweils mit 2, 3 und 4 Kanälen; Der Gewinn beträgt 2 nA. Das Injektionsvolumen beträgt 25 μl. Die Standardkurve wird mit 0,025, 0,05, 0,1, 0,2, 0,5 mg · L -1 Gradient gemischter Standardlösung gezeichnet.

2.4 Statistische Verarbeitung

Die experimentellen Daten werden in x-Feld ± s ausgedrückt, und die wiederholten Messdaten werden mit der statistischen Software SPSS13.0 analysiert.

Abb. 1-6 zeigt die Veränderungen der NE-, DA-, DOPAC-, HIAA-, HVA- und 5-HT-Spiegel in der extrazellulären Flüssigkeit des Striatums der Ratte. Aus der Figur ist ersichtlich, dass Monoamin-Neurotransmitter in der extrazellulären Flüssigkeit des Striatums nach zerebraler Ischämie eine Stoffwechselstörung aufweisen und der Gehalt jedes Neurotransmitters zugenommen hat. Innerhalb eines bestimmten Bereichs ist der Anstieg deutlicher mit der Verlängerung der Ischämiezeit. Bei 90 min Ischämie war die Konzentration von DA und NE in der extrazellulären Flüssigkeit des Striatums mehr als dreimal so hoch wie in der Kontrollgruppe. Die NE-, DA-, DOPAC-, HIAA-, HVA- und 5-HT-Spiegel in der Kontrollgruppe sanken von hoch auf niedrig, was möglicherweise mit der vorübergehenden Ischämie der linken Gehirnhälfte nach Unterbindung der linken Halsschlagader zusammenhängt und die Schäden, die durch das Einführen der Sonde verursacht werden. Aus der Änderungskurve können ECH und CXQ die Spitzenkonzentration von DA, DOPAC, HIAA, HVA und 5-HT nach zerebraler Ischämie reduzieren, und CXQ und Hochdosis-ECH sind offensichtlicher. Die Verschiebung der Zeitverlaufskurve jedes Neurotransmitters nach unten weist darauf hin, dass ECH den Anstieg von Neurotransmittern und ihren Metaboliten im Gehirn von Ratten mit zerebraler Ischämie hemmen kann.

                                                                           Abb. 2 Wirkung von Echinosid auf den extrazellulären DA-Spiegel im Striatum von Ratten

Abb. 3 Wirkung vonEchinosidauf extrazellulärem Niveau von DOPAC im Striatum von Ratten Fig4Effect ofEchinosidein extrazellulärer HIVV-Spiegel im Striatum von Ratten

Abb. 5 Wirkung vonEchinosidauf extrazellulärem Niveau von HVA im Striatum von Ratten Fig6 Wirkung vonEchinosidauf dem extrazellularen Stand 5-HT instriatum der Ratten

4.Diskussion

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Der Mechanismus der durch zerebrale Ischämie verursachten Hirnschädigung ist komplex. Im Fall einer zerebralen Ischämie sind die Monoamin-Neurotransmitter im Gehirn gestört und die Gehalte an NE, DA und 5-HT sind signifikant reduziert. Je schwerer die zerebrale Ischämie ist, desto geringer sind die Gehalte an NE, DA und 5-HT im Hirngewebe [13]. Das Verfahren der intrazerebralen Mikrodialyse bewies, dass der Gehalt an Monoamin-Neurotransmittern in der extrazellulären Flüssigkeit während der zerebralen Ischämie zunahm, während der gesamten ischämischen Periode andauerte und mit der Verlängerung der ischämischen Zeit weiter zunahm. Die experimentellen Ergebnisse stimmten mit dem Bericht [14] überein.Echinosidist ein wirksamer Bestandteil von Phenylethanoidglykosiden, isoliert und gereinigt aus Cistanche deserticola, einer speziellen Pflanze in Xinjiang. Es hat viele neuroprotektive Wirkungen wie Anti-Aging, Verbesserung von Lernen und Gedächtnis und anti-neuronale Apoptose. In dieser Studie wurde die inländische fortschrittliche Mikrodialyse des Gehirns in Kombination mit der HPLC-ECD-Erkennungstechnologie verwendet, um die Wirkung vorläufig zu untersuchenEchinosidauf Monoamin-Neurotransmitter und ihre Metaboliten in der extrazellulären Flüssigkeit des Striatums von Versuchsratten mit zerebraler Ischämie. Die Ergebnisse zeigten, dass ECH den durch zerebrale Ischämie verursachten Anstieg von Monoamin-Neurotransmittern in der extrazellulären Flüssigkeit des Striatums reduzieren kann und eine bessere Wirkung auf die Verbesserung der Schädigung von zerebralem ischämischem Gewebe hat.

Referenz:

［1］ Pellati F., Benvenuti S., Magro L. usw.． Analyse von Phenolverbindungen und Radikalfängeraktivität von Echinacea spp［J］． JPharm Biomed Anal, 2004, 35(2): 289．

［2］ Kuang R, Sun YG, Deng TL, Zheng XX． Die Schutzwirkung und Mechanismen von Echinacosid auf H2O2 -geschädigte PC12-Zellen［J］． Chin Pharmacol Bull,2009,25(4): 515 － 8．

［3］ Zhao X,Pu XP,Geng XC． Wirkungen von Echinacosid auf die Proteinexpression aus substantiellem Anigra- und Striatum-Gewebe im Maus-MPTP-Modell der Parkinson-Krankheit unter Verwendung von dimensionaler Elektrophoreseanalyse［J］． Chin Pharmacol Bull, 2008,24(1): 28 － 32．

［4］ Koo KA,Sung SH,Park JH,et al． Neuroprotektive Aktivitäten in vitro von Phenylethanoidglykosiden aus Callicarpa dichotoma［J］． Planta Med, 2005, 25(4): 356．

［5］ Li Y,Song YY,Zhong HQ． Wirkung von Echinacosid auf die Immunfunktion und den relativen Gehalt an mitochondrialer DNA bei alternden Mäusen ［J］． Chin Pharmacol Bull,2010,26(6): 810 － 3．

［6］ GLNE,Lei L,Tu PF,et al． Studie zum molekularen Mechanismus von Echi Nacosid gegen Alterung［J］． Acta Biophysica Sitica, 2004, 20 (3): 184．

［7］ Gao C,Wang CS,Wu GZ,et al． Wirkung von Cistanche-Glykosiden auf Lern- und Gedächtnisstörungen bei Ratten mit vaskulärer Demenz［J］． Chin Tradit Herb Drugs, 2005, 36(12): 1852．

［8］ Tian F, Zhang K, Kang AJ usw.． Die Wirkung und der Mechanismus von Echinacosid auf die Lern- und Gedächtnisfähigkeit von SAM-P /8［J］． Lab orat Anim Sci Manag,2006,2(23): 510．

［9］ Chen H,Jing FC,Li CL,et al． Echinacosid verhindert, dass die striatalen extrazellulären Spiegel von Monoamin-Neurotransmittern bei Ratten mit 6-Hydroxydopamin-Läsionen［J］． J Ethnopharmacol, 2007,114(3): 285．

［10］ Amara SG． Jüngste Fortschritte bei Neurotransmitter-Transportern［J］． Annu Rev Neurosci, 1993, 16(1): 73 － 93．

［11］ Wu GX,Su RB,Li J． Die Rolle des Dopamintransporters bei der Abhängigkeit von Psychostimulanzien［J］． Chin Pharmacol Bull,2010,26 (2): 141 － 3．

［12］ Yang ZZ, Chen H． Verbesserung und Erfahrung mit Nahtmethoden für das Rattenmodell der fokalen zerebralen Ischämie［J］． Lishlzhen Med Mat Med Res,2008,19(9): 2189 － 90．

［13］ Tanaka K., Wada N., Ogawa N.． Chronische zerebrale Hypoperfusion bei Duces transienten reversiblen monoaminergen Veränderungen im Rattengehirn ［J］． Neurochem Res,2000,25(2): 313．

［14］ Li H． Wirkung von Puerarin auf Monoamin-Neurotransmitter im Striatum von Ratten［J］． J Zhejiang Univ Sci Technol, 2005,17(1): 13 – 7．