Echinacosid hemmt die maligne Progression von Brustkrebs-MCF-7-Zellen durch Modulation der AKR1B10/ERK-Signaltransduktion

Zusammenfassung: Diese Studie analysiert die Auswirkungen vonEchinacosid(ECH) bei der Proliferation, Metastasierung und Adriamycin (ADR)-Resistenz vonBrustkrebs(BC) MCF{{0}}-Zellen über die Modulation des Signalwegs der Aldo-Keto-Reduktase-Familie 1, Mitglied 10 (AKR1B10)/extrazelluläre signalregulierte Kinase (ERK). Die chemische Struktur von ECH wurde zunächst bestätigt. MCF-7-Zellen wurden mit verschiedenen Konzentrationen (0, 10, 20, 40 ug·mL -1) von ECH für 48 h behandelt. Western-Blotting wurde verwendet, um die Expression von mit dem AKR1B10/ERK-Signalweg assoziierten Proteinen zu analysieren, und der Assay des Zellzählungskits -8 (CCK-8) zur Bestimmung der Zelllebensfähigkeit. MCF-7-Zellen wurden gesammelt und in Kontrollgruppe, ECH-Gruppe, ECH plus Ov-NC-Gruppe und ECH plus OvAKR1B10-Gruppe eingeteilt. Dann wurde Western Blotting eingesetzt, um die Expression von AKR1B10/ERK-Weg-assoziierten Proteinen zu analysieren. CCK-8- und 5-Ethinyl-2'-desoxyuridin (EdU)-Assay wurden verwendet, um die Zellproliferation zu untersuchen. Die Zellmigration wurde mit Scratch-Assay, Transwell-Assay und Western-Blotting bewertet. Schließlich wurden MCF-7-Zellen 48 h lang mit ADR behandelt, um eine ADR-Resistenz zu induzieren. Die Lebensfähigkeit der Zellen wurde mit dem CCK-8-Assay getestet, und die Zellapoptose wurde basierend auf dem Terminal-Desoxynucleoitidyl-Transferase-vermittelten Nick-End-Labeling (TUNEL)-Assay und Western Blotting abgeschätzt. Basierend auf Protein Data Bank (PDB) und molekularem Docking wurde die Bindungsaffinität von ECH zu AKR1B10 bewertet. Verschiedene ECH-Dosen verringerten dosisabhängig die Expression von mit dem AKR1B10/ERK-Signalweg assoziierten Proteinen und verringerten die Lebensfähigkeit der Zellen im Vergleich zur Kontrollgruppe. Verglichen mit der Kontrollgruppe blockierten 40 ug·ml -1 ECH den AKR1B10/ERK-Weg in MCF-7-Zellen und hemmten die Proliferation, Metastasierung und ADR-Resistenz der Zellen. Verglichen mit der Gruppe ECH plus Ov-NC zeigte die Gruppe ECH plus Ov-AKR1B10 die Wiederherstellung einiger biologischer Verhaltensweisen von MCF-7-Zellen. ECH zielte auch auf AKR1B10 ab. ECH kann die Proliferation, Metastasierung und ADR-Resistenz von BC-Zellen hemmen, indem es den AKR1B10/ERK-Signalweg blockiert.

Schlüsselwörter:Echinacosid; AKR1B10/ERK-Signalisierung; Brustkrebs; Adriamycin-Resistenz

Brustkrebs (BC) ist mit Abstand die häufigste bösartige Erkrankung bei Frauen mit einem mittleren Diagnosealter von etwa 60 Jahren [1]. Der Anteil neuer BC-Fälle in China macht 12,2 Prozent des weltweiten Anteils aus, und der Anteil der BC-Todesfälle weltweit macht 9,6 Prozent aus [2]. Genetische und Umweltfaktoren wie fettreiche Ernährung, Alkoholkonsum und unzureichende körperliche Aktivität sind Risikofaktoren für Brustkrebs [3-4]. Moderne Behandlungen umfassen immer noch Chirurgie, Strahlentherapie und medikamentöse Therapie [1]. Gängige klinische Arzneimittel umfassen Cyclophosphamid, 5- Fluorouracil, Pirarubicin, Tamoxifencitrat usw. [5], und das Vorhandensein einer Arzneimittelresistenz in BC-Zellen führt bis zu einem gewissen Grad auch zur Behandlung von BC. große Herausforderung [6]. Gleichzeitig metastasiert BC als heterogener Tumor eher in Organe wie Knochen, Lunge, Leber und Gehirn, was metastasierten Brustkrebs weitgehend unheilbar macht [7]. Cistanche ist ein traditionelles medizinisches Material in meinem Land. Er gehört zur Pflanzenfamilie und ist als „Wüstenginseng“ bekannt[8].Echinacosid(ECH) ist ein Phenylethanoidglykosid, das aus Cistanche deserticola extrahiert wird. Neuere Studien haben das betontEchinacosidhat starke antioxidative, entzündungshemmende und krebshemmende Eigenschaften. Durch die Hemmung des mTOR/STAT3-Signalwegs kann ECH beispielsweise die Entzündungsreaktion und den oxidativen Stress bei Paracetamol-induzierten Leberschäden lindern [9]. Mehrere Beweise haben bestätigt, dass ECH hauptsächlich eine Tumorsuppressorrolle bei BC spielt, und sein Mechanismus kann mit der Herunterregulierung der Expression von miR-4306 und miR-4508 [10] oder der Blockierung von Wnt/-catenin zusammenhängen Signalisierung [11].

Die Aldo-Keto-Reduktase 1B10 (AKR1B10), ein Mitglied der Aldo-Keto-Reduktase-Superfamilie, kann toxische Substanzen durch Redoxreaktionen in ungiftige Substanzen umwandeln und entsprechende Alkohole produzieren und so eine schützende Wirkung auf Wirtszellen ausüben [12]. Studien deuten darauf hin, dass AKR1B10 hauptsächlich in normalen menschlichen Geweben wie Dickdarm und Dünndarm exprimiert wird [13]. Weitere Studien zeigten, dass AKR1B10 hauptsächlich als Onkogen bei Brustkrebs wirkt und ein potenzieller Biomarker für Brustkrebs werden könnte [14-16]. Als ein Schlüsselmitglied der MAPK-Familie kontrollieren extrazellulär regulierte Proteinkinasen (ERKs) verschiedene evolutionär konservierte zelluläre Prozesse in Metazoen, und eine ERK-Dysregulation kann zu verschiedenen Krankheiten führen [17]. LI J et al. [18] zeigten, dass AKR1B10 das Fortschreiten von Brustkrebs fördern kann, indem es die ERK-Signalgebung aktiviert. Interessanterweise sagte die SwissTargetPrediction-Website AKR1B10 als potenzielles Ziel von Echinacea voraus. Ob ECH jedoch an der Progression von Brustkrebs beteiligt ist, indem es die AKR1B10/ERK-Signalgebung vermittelt, ist unbekannt.

Diese Studie konzentrierte sich auf die Erforschung der spezifischen Wirkungen von ECH auf den Phänotyp von bösartigen BC-Zellen und die Aufklärung der Beziehung zwischen ECH und dem AKR1B10/ERK-Weg in BC-Zellen.

1 Stoff

Menschliche normale Brustepithelzelllinie MCF-10A und menschliche Brustkrebszelllinie MCF-7 wurden vom Cell Resource Center der Shanghai Institutes for Biological Sciences, Chinese Academy of Sciences, bereitgestellt; MCF-7-ADR-resistente Zellen wurden von Shanghai Huzhen Industrial Co., Ltd. erworben. DMEM/F1-Medium (Chargennummer PM150310), Pferdeserum (Chargennummer 164215) und fötales Rinderserum (Chargennummer 164210) wurden gekauft von Wuhan Proceeds Life Technology Co., Ltd.; ECH (Chargennummer 07668) wurde von Sigma-Aldrich, USA bezogen; ADR (Chargennummer KGA8181) wurde von Jiangsu Kaiji Biotechnology Co., Ltd. bezogen; RIPA-Lyselösung (Chargennummer R0020) wurde von Beijing Soleibao Technology Co., Ltd. bezogen; Quantitatives BCA-Proteinreagens (Chargennummer CX0013S) wurde von Kangwei Century Biotechnology Co., Ltd. bezogen; CCK-8-Reagenz (Chargennummer C0037) wurde von Shanghai Biyuntian Biotechnology Co., Ltd. bezogen; Lipofectamine 2000-Transfektionsreagenz (Chargennummer 11668019) wurde von Thermo Fisher Scientific Co., Ltd. erworben.

Ov-AKR1B10- und Ov-NC-Plasmide wurden von Chongqing Youbao Biotechnology Co., Ltd. bereitgestellt; EdU-Reagenz (Chargennummer C00003) und TUNEL-Kit (Chargennummer C11026-1) wurden von Guangzhou Ribo Biotechnology Co., Ltd. bezogen; DAPI (Chargennummer 40727ES10) wurde von Guangzhou Ribo Biotechnology Co., Ltd. von Shanghai Yisheng Biotechnology Co., Ltd. erworben; Matrigel (Charge Nr. 354230) und Transwell-Kammer (Charge Nr. 3450) wurden von Corning Company, USA, bezogen; Paraformaldehyd (Charge Nr. 158127), Crystal Violet (Charge Nr. C0775) und Triton X-100-Lösung (Charge Nr. T8787) wurden von Sigma Company in den Vereinigten Staaten bereitgestellt; Kaninchen AKR1B10 (Chargennummer ab192865), phosphoryliertes ERK1/2 (p-ERK1/2, Chargennummer ab278538), ERK1/2 (Chargennummer ab184699), E-Cadherin (E-Cadherin, Charge ab212059), N-Cadherin (N -Cadherin, Charge ab76011), Schnecke (Charge ab216347), B-Zell-Lymphom-2 (Bcl-2, Charge ab182858), Bcl-2-verwandtes X-Protein (Bcl-2- zugehöriger Antikörper X, Bax, Chargennummer ab182733) und HPR-markierter sekundärer Ziegen-anti-Kaninchen-Antikörper (Chargennummer ab6702) wurden von Abcam, USA, erworben; ECL-Lumineszenzkit (Chargennummer SL1350) wurde von Beijing Cool Lamb Technology Co., Ltd. erworben. Image-Pro Plus-Software wurde von Media Cybernetics, USA, erworben; das Fluoreszenzmikroskop Leica DM1000 und das inverse Mikroskop Leica DM ILLED wurden von Leica Microsystems, Deutschland, erworben; Die SPSS 22.0-Software wurde von IBM, USA, erworben.

2 Methoden

2.1 Zellkultur und Handhabung

MCF{{0}}A-Zellen wurden in DMEM/F12 kultiviert, das 5 % Pferdeserum, 20 ng·mL -1 epidermalen Wachstumsfaktor, 0,5 ug·mL -1 Cortisol, 10 ng enthielt ·mL-1-Insulin, 100 ng·mL-1-Choleratoxin-Kulturmedium; MCF-7- und MCF-7/ADR-Zellen waren

Kultiviert in DMEM/F12-Medium mit 1 0 Prozent FBS. Alle Medien wurden mit 1 Prozent Doppelantikörper ergänzt und bei 37 Grad in einer befeuchteten Atmosphäre mit 5 Prozent CO2 gelagert. Anschließend wurden MCF-7-Zellen mit ECH in verschiedenen Konzentrationen (0, 10, 20, 40 ug·mL-1) für 48 h interveniert; und 1,0 mg·L -1 ADR wurde angewendet, um die Arzneimittelresistenz von MCF-7/ADR-Zellen aufrechtzuerhalten. Sex. 2.2 Western-Blot-Verfahren Das Protein in MCF-7-Zellen wurde durch RIPA-Lysat extrahiert, und die Proteinkonzentration wurde durch BCA-Reagenz bestimmt. Durch 10 % SDS-PAGE getrennte Proteine ​​wurden unter Verwendung einer PVDF-Membran transferiert; nach Blockierung mit 5-prozentiger Magermilch für 2 h bei Raumtemperatur war die Membran /10 000), E-Cadherin (1/10 000), N-Cadherin (1/5 000) , Schnecke (1/1 000), Bcl-2 (1/1 000), Bax (1/1 000) Der primäre Antikörper wurde über Nacht bei 4 Grad inkubiert, gefolgt von die Zugabe von HPR-markiertem Ziegen-anti-Kaninchen-Sekundärantikörper (1/2 000) für 1 h bei Raumtemperatur. Das Zielprotein wurde durch Zugabe des ECL-Lumineszenzkits nachgewiesen, und die Proteinhäufigkeit wurde mit der Image-Pro Plus-Software analysiert.

Reich an Echinacosid-Cistanche-Kaffee zur Behandlung von Brustkrebs

2.3 CCK-8-Assay für die Zelllebensfähigkeit

MCF{0}}A- und MCF-7-Zellen wurden in 96-Well-Platten zur Kultur (5 × 103 Zellen/Well) und nach 24 Stunden ausgesät wurden unterschiedliche Konzentrationen (0, 10, 20, 40 ug·mL-1) von ECH appliziert. Nach dem Eingriff wurden sie 48 Stunden später mit 10 % Volumenanteil von CCK-8-Reagenz und Zelle behandelt Lebensfähigkeit wurde 2 Stunden später festgestellt. Um die Wirkung von ECH auf die Lebensfähigkeit von MCF-7-Zellen weiter zu untersuchen, wurden transfizierte oder untransfizierte MCF-7-Zellen für 24 h und in verschiedenen Konzentrationen (0, 10, 20, 40 ug·) kultiviert. mL-1) von ECH wurden zur Intervention verwendet. wurde eine 10-prozentige Volumenfraktion von CCK-8-Reagenz nach 24, 48 bzw. 72 h zugegeben, und das Zelllebensfähigkeits-Nachweisverfahren war das gleiche wie oben. Um die Wirkung von ECH auf die Doxorubicin-Resistenz von MCF-7-Zellen zu untersuchen, wurden MCF-7/ADR-resistente Zellen mit ECH für 48 h co-kultiviert und dann CCK-8-Arbeitslösung wurde hinzugefügt, um die Zelllebensfähigkeit nachzuweisen.

2.4 Plasmidtransfektion

MCF-7-Zellen wurden ausgesät und in 6-Well-Platten (5 × 104/Well) kultiviert. Als die Zellen eine Konfluenz von 60 % bis 70 % erreichten, wurden Ov-AKR1B10 und Ov-NC in strenger Übereinstimmung mit den Anweisungen des Transfektionsreagens Lipofectamine 2000 transient transfiziert. Die Zellen in jeder Gruppe wurden transfiziert, und die Transfektion war nach 48 h abgeschlossen.

2.5 EdU-Färbung zum Nachweis der Zellproliferation

Nachdem MCF{0}}-Zellen mit ECH behandelt und mit Plasmiden transfiziert worden waren, wurden 20 µmol·L -1 EdU zu jeder Vertiefung gegeben und bei 37 Grad für 2 Stunden inkubiert. Anschließend wurden die Zellen fixiert und mit 4 % Paraformaldehyd bzw. 0,5 % Triton X-100 permeabilisiert. Schließlich wurden die mit DAPI gefärbten EdU-positiven Zellen unter einem Fluoreszenzmikroskop nachgewiesen.

2.6 Wundheilungsassay zum Nachweis von Zellmigration

MCF{{0}}-Zellen in der log-Wachstumsphase wurden zu 6--Well-Platten hinzugefügt, und wenn die Zellen eine Konfluenz von 90 % erreichten, verwenden Sie eine sterile 200 µl-Pipettenspitze, um einen Ausstrich zu machen und zu waschen 3 Mal mit PBS. Die Wundbreite wurde bei 0 und 48 h unter einem inversen Mikroskop gemessen und die Anzahl übertragener Zellen bestimmt.

2.7 Transwell-Assay zum Nachweis der Zellinvasion

Die ECH-behandelten und Plasmid-transfizierten MCF-7-Zellen wurden in die obere Kammer eines Transwells ausgesät, das Matrigel enthielt, und 500 &mgr;l DMEM-Medium, das 10 % FBS enthielt, wurden in die untere Kammer des Transwells gegeben. Nach 24 h wurden die Oberflächenzellen mit Wattestäbchen abgewischt, und die Zellen wurden fixiert und mit Paraformaldehyd bzw. Kristallviolett gefärbt, und die invasiven Zellen wurden unter einem Mikroskop gezählt.

2.8 TUNEL-Färbung zum Nachweis von Apoptose

Nach Intervention mit 15 µmol L-1 ADR wurden ECH-behandelte und Plasmid-transfizierte MCF-7/ADR-resistente Zellen in 96-Well-Platten ausgesät und mit 4 Prozent Paraformaldehyd und {{ 8}},5 Prozent Triton X-100 Nach der Permeabilisierungsbehandlung wurde TUNEL-Nachweislösung hinzugefügt, und die Reaktion wurde bei 37 Grad für 45 Minuten unter Anleitung der Kit-Anweisungen durchgeführt, und DAPI-Zellkerne wurden gefärbt . Fünf Gesichtsfelder wurden zufällig ausgewählt, um die Zellapoptose unter einem Fluoreszenzmikroskop zu beobachten.

2.9 Molekulares Andocken

Die dreidimensionale Struktur des AKR1B10-Proteins (PDB-ID: 1ZUA) wurde der PDB-Datenbank (https://www.rcsb.org/) entnommen. Verwenden Sie die PyMOL 2.2.0-Software, um Wasser aus Wirkstoffen zu entfernen und irrelevante ursprüngliche Liganden zu entfernen, konvertieren Sie dann die chemische Struktur von ECH in das mol2-Format mit der OpenBabel 2.2.1-Software (http://openbabel.org/wiki) und verwenden Sie schließlich Autodock 4.2 führt molekulares Andocken durch und wählt die Pose mit der niedrigsten freien Energie (-10,8 kcal·mol-1) für die Visualisierung aus.

2.10 Statistische Analyse

In dieser Studie wurde SPSS 22.0-Software verwendet, um die experimentellen Daten zu analysieren und zu verarbeiten und als Mittelwert ± Standardabweichung (x ± s) ausgedrückt. Für den Vergleich zwischen den Gruppen wurde eine Einweg-Varianzanalyse verwendet. Als p<0.05, the difference was statistically significant.

3. Ergebnisse

3.1 ECH hemmt die AKR1B10/ERK-Signalübertragung in MCF-7-Zellen Zunächst zeigten die Ergebnisse des Western Blotting, dass mit zunehmender ECH-Expositionsdosis die Proteinspiegel von AKR1B10 und pERK1/2/ERK1/2 in MCF{{11 }} Zellen abgenommen, und der Abwärtstrend war dosisabhängig P<0.001) (Fig. 1). It can be speculated that ECH may participate in the malignant progression of BC by regulating AKR1B10/ERK signaling.

Abb.1 Wirkung vonEchinacosidauf AKR1B10/ERK-Signaltransduktion in MCF-7-Zellen (x̄  s, n=3)

3.2 Die Überexpression von AKR1B10 kehrte die hemmende Wirkung von ECH auf die MCF-7-Zellproliferation um

Die experimentellen Daten von CCK{{0}} zeigten, dass im Vergleich zu normalen MCF-10A-Zellen die Exposition gegenüber unterschiedlichen Konzentrationen von ECH (0, 10, 20, 40 ug·mL{{6} }) führte zu einer konzentrationsabhängigen Abnahme der Aktivität von MCF-7-Krebszellen (P< 0.05), and when the mass concentration of ECH was 40 μg·mL-1, the cell activity decreased most significantly, so 40 μg·mL-1 ECH was used for subsequent experiments. To further verify whether ECH regulates BC development by regulating AKR1B10/ERK signaling, MCF-7 cells were first transfected with the Ov-AKR1B10 plasmid. After transfection of Ov-AKR1B10, the expression level of AKR1B10 was significantly increased (P<0.001). Western blotting results showed that transfection of Ov-AKR1B10 plasmid induced ECH exposure-induced reduced AKR1B10 and p-ERK1/2 protein levels again increased (P<0.001). In addition, the experimental data of CCK-8 and EdU demonstrated that the inhibitory effect of ECH treatment on the proliferation of MCF-7 cells could be alleviated by the up-regulation of AKR1B10 (P<0.05) (Fig. 2). Thus, overexpression of AKR1B10 rescued the inhibitory effect of ECH on the proliferative capacity of BC cells.

Abb.2 Wirkung von Echinosid auf die Proliferation von MCF-7-Zellen durch Regulierung der AKR1B10-Expression (Fluoreszenzfärbung, ×200; x̄  s, n=3)

3.3 Die Überexpression von AKR1B10 kehrte die hemmende Wirkung von ECH auf die Migration von MCF-7-Zellen um<0.001); In contrast, increased expression of AKR1B10 resulted in enhanced cell migration and invasion (P<0.05). In addition, compared with the control group, the protein levels of N-cadherin and Snail were significantly decreased after ECH treatment, while the level of E-cadherin was significantly increased (P<0.001); The protein levels of cadherin and Snail increased, while the level of E-cadherin decreased (P<0.001) (Fig. 3). In conclusion, up-regulation of AKR1B10 expression rescued the inhibitory effect of ECH administration on BC cell migration and invasion.

Abb.4 Wirkung von Echinosid auf die ADR-Resistenz von MCF-7-Zellen durch Regulierung der AKR1B10-Expression (Fluoreszenzfärbung, ×200; x̄  s, n=3)

4. Diskussion

Brustkrebs bezeichnet die unkontrollierte Vermehrung von Brustepithelzellen unter Einwirkung verschiedener krebserregender Faktoren und ist auch die Hauptursache für den Krebstod bei Frauen [1]. Tumormetastasierung ist eines der bedrohlichsten Merkmale von Tumoren und auch die Hauptursache für die langfristige Heilung von Tumoren [19]. Die Chemotherapie ist eine gängige Methode zur klinischen Behandlung von Brustkrebs [20]. Mit der kontinuierlichen Weiterentwicklung und Aktualisierung von Brustkrebsbehandlungsmethoden und -konzepten wurde die Prognose von Brustkrebs deutlich verbessert [20]. Das Auftreten von Arzneimittelresistenzen schränkt jedoch die klinische Wirksamkeit von Arzneimitteln stark ein [21]. Studien haben ergeben, dass etwa 90 Prozent der Patienten mit metastasiertem Brustkrebs und 50 Prozent der Patienten mit fortgeschrittenem Brustkrebs eine Arzneimittelresistenz entwickeln [22]. ADR ist ein Anthracyclin-Antibiotikum, das in der klinischen Behandlung von metastasiertem oder rezidivierendem Brustkrebs weit verbreitet ist, indem es auf die chemische Struktur der DNA einwirkt und die Rezidivrate und Mortalität von Brustkrebspatientinnen wirksam reduzieren kann [23]. Daher konzentrierte sich diese Studie auf die Proliferation, Metastasierung und ADR-Resistenz von BC-Zellen, um den regulatorischen Mechanismus der BC-Progression gründlich aufzudecken und nach potenziellen molekularen Angriffszielen zu suchen.

Echinacea ist eine Phenylethanoidverbindung, die aus den Rhizomen der natürlichen Kräuter Cistanche deserticola und Echinacea purpurea gewonnen wird. Es hat verschiedene pharmakologische Wirkungen wie Antioxidans, Antidepressivum, entzündungshemmende, antivirale, Antitumor- und antibakterielle [24-25]. Jüngste Studien haben berichtet, dass ECH die Proliferation, Metastasierung und Angiogenese von Eierstockkrebszellen hemmen kann, indem es den PI3K/Akt-Signalweg reguliert [26]; ECH kann seine Antikrebsaktivität bei Leberkrebs ausüben, indem es den TGF-1/Smad-Weg aktiviert [27]. ECH kann das BC-Tumorwachstum hemmen, indem es den Wnt/-catenin-Signalweg inaktiviert [11]. In dieser Studie wurde AKR1B10 erstmals von SwissTargetPrediction als potenzielles Ziel von ECH vorhergesagt. Daher spekulieren die Autoren, dass ECH am Fortschreiten der BC-Krankheit beteiligt sein könnte, indem es AKR1B10--bezogene Signalwege reguliert. Bisher wurde festgestellt, dass AKR1B10 bei verschiedenen Krebsarten vermehrt exprimiert wird und eine krebsfördernde Rolle spielt [28]. Darüber hinaus kann AKR1B10 die Entwicklung von Blasenkrebs, Lungenadenokarzinom und BC verschlimmern, indem es die ERK-Signalgebung aktiviert [18, 29-30]. Die ektopische Expression von AKR1B10 in Brustkrebszellen fördert die Phosphorylierung von ERK 1/2 zur Aktivierung des ERK-Signalwegs [18]. Der ERK-Signalweg fördert den Abbau der extrazellulären Matrix durch Aktivierung von MMPs, insbesondere MMP2, wodurch die Tumorzellinvasion und Tumormetastasierung gefördert werden [31-33]. Die Ergebnisse dieses Experiments zeigten auch, dass die Expression von Proteinen, die mit dem AKR1B10/ERK-Signalweg in Verbindung stehen, nach der Behandlung mit unterschiedlichen Konzentrationen von ECH dosisabhängig abnahm, was darauf hindeutet, dass ECH möglicherweise am Regulationsmechanismus von BC durch Hemmung von AKR1B10/ERK beteiligt ist Weg. Darüber hinaus führte die ECH-Exposition auch zu einer Verringerung der Lebensfähigkeit von BC-Zellen in unterschiedlichem Ausmaß. Um diesen Punkt weiter zu beweisen, transfizierte diese Studie das AKR1B10-Überexpressionsplasmid in MCF-7-BC-Zellen und stellte fest, dass die hemmenden Wirkungen der ECH-Behandlung auf den AKR1B10/ERK-Signalweg und die Zellproliferation, Migration und Invasion sowie den epithelial-mesenchymalen Übergang überexprimiert wurden durch AKR1B10 gerettet. Darüber hinaus führte die ECH-Exposition bei MCF-7/ADR-resistenten Zellen zu einer Abnahme der IC50 und einer Zunahme der Anzahl apoptotischer Zellen; wohingegen die Überexpression von AKR1B10 in diesem Setting wiederum die IC50 erhöhte und die apoptotische Zellproduktion reduzierte. Am Ende des Experiments war auch die Targeting-Beziehung zwischen ECH und AKR1B10 vollständig verifiziert. Die obigen Versuchsergebnisse zeigen, dass

AKR1B10-Überexpression erzielt eine antagonistische Wirkung auf die ECH-supprimierte BC-Entwicklung.

Zusammenfassend lässt sich sagen, dass die ECH-Verabreichung die Proliferation, Migration, Invasion, EMT- und ADR-Resistenz von BC-Zellen abschwächen kann, und der Mechanismus kann mit dem Targeting von AKR1B10 und der Hemmung des AKR1B10/ERK-Signalwegs zusammenhängen. Diese Studie klärte zunächst den potenziellen Mechanismus von ECH bei BC und lieferte wertvolle experimentelle Grundlagen und theoretische Unterstützung für die Anwendung von ECH in Anti-BC-Medikamenten. Allerdings weist diese Studie noch einige Mängel auf. Erstens umfasste dieses Experiment nicht die Analyse des Einflusses von ECH auf die Überlebensrate und Prognose von BC-Patienten; zweitens fehlten dieser Studie in vivo-Tierversuche, um die Rolle von ECH beim Wachstum von BC-Tumoren weiter zu verifizieren. In zukünftigen Studien soll die klinische Bedeutung von ECH bei der Behandlung von Brustkrebs weiter untersucht werden.

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