Auswirkungen von Saponin aus dem Samen von Litchi Chinensis Sonn auf TGF- 1, FN und SOCS-1 in tubulären Epithelzellen der Niere unter hoher Glukose

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Hai-Yang Nie, Rui Chen, Hong-Na Zhang, Zhi Pan

1 Changchun-Universität für chinesische Medizin, Changchun, China.

2 Shunyi Hospital of Beijing Chinese Medicine Hospital, Peking, China.

Höhepunkte

Saponin aus dem Samen von Litchi chinensis Sonn reduziert die Apoptose von renalen tubulären Epithelzellen und die Sekretion von TGF- 1 und FN.

Abstrakt

Ziel: Untersuchung der Wirkung von Saponin aus dem Samen von Litchi chinensis Sonn (SLS) auf das Wachstum und die Apoptose vonMenschNiereEpithelzellen (HKC), die in hoher Glukose kultiviert wurden. Methoden: HKC wurden in DMEM/F12-Medium, ergänzt mit 30 mmol/l Glucose, kultiviert und mit oder ohne SLS behandelt. In der Normalgruppe wurde ein isometrisches DMEM/F12-Medium mit 5,5 mmol/L Glucose hinzugefügt. Die Sekretion von TGF- 1 und Fibronektin (FN) wurde durch ELISA nachgewiesen. Die Zellapoptose wurde durch das Verfahren der Annexin V-FITC/PI-Doppelfärbung nachgewiesen. Western Blot wurde verwendet, um die Konzentration des Suppressors der Zytokin-Signalgebung-1 (SOCS-1) ​​nachzuweisen.

Ergebnisse: Das Ergebnis des ELISA zeigte, dass die Sekretion von TGF{{0}} und FN in den SLS-Gruppen im Vergleich zu denen in den mit 30 mmol/L Glukose behandelten Gruppen verringert war (P < {{="" 9}}.05).="" es="" gab="" mehr="" zellapoptose="" in="" der="" mit="" 30="" mmol/l="" glukose="" behandelten="" gruppe="" als="" in="" der="" normalen="" gruppe="" (p="">< 0,01).="" verglichen="" mit="" der="" mit="" 30="" mmol/l="" glukose="" behandelten="" gruppe="" war="" die="" apoptose="" von="" hkc="" in="" sls-gruppen="" signifikant="" verringert="" (p="">< 0,01).="" der="" western="" blot="" zeigte,="" dass="" der="" socs-1-spiegel="" in="" der="" gruppe="" mit="" hoher="" glukose="" plus="" sls="" im="" vergleich="" zu="" der="" gruppe="" mit="" hoher="" glukose="" verringert="" war="" (p=""><>

Schlussfolgerung: SLS kann die Sekretion von TGF- 1 und FN in HKC reduzieren, indem es die Ablagerung der extrazellulären Matrix reduziert. SLS reduzierte auch signifikant die Apoptose von HKC, indem es den Spiegel von SOCS-1 hemmte. Diese Ergebnisse legen die Rolle von SLS bei der Verhinderung des Fortschreitens der Glomerulären Sklerose nahe.

Schlüsselwörter: Saponin, Samen von Litchi chinensis Sonn, Glukose,NiereEpithelzellen, TGF- 1, Fibronektin, Apoptose

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Hintergrund

Diabetische Nephropathie (DN) ist eine der schwerwiegendsten Komplikationen von Diabetes mellitus mit hoher Inzidenz und Letalität, gekennzeichnet durch Glomeruläre Sklerose und interstitielle Nierenfibrose. MenschlichNiereEpithelzellen (HKC) sind die Hauptziele bei DN und sie sezernieren eine große Anzahl von Zytokinen, wie TGF- 1 und Fibronektin (FN), die zum Auftreten von Glomerulosklerose und interstitieller Nierenfibrose führen. Inzwischen wurde berichtet, dass eine hohe Glukose die HKC-Apoptose beschleunigen kann, indem der Spiegel des Suppressors der Zytokin-Signalübertragung -1 (SOCS-1) erhöht wird[1,2]. Daher ist die Hemmung des Spiegels von TGF- 1, FN und SOCS-1 wichtig, um das Fortschreiten der Glomerulären Sklerose zu verhindern. Der Samen von Litchi chinensis Somm (SLS) ist ein chinesisches Kraut, das hauptsächlich in Guangdong verbreitet wird. Die chinesischen Provinzen Fujian und Guangxi wurden erstmals in Bencaogangmu in der Ming-Dynastie von China (1518 n. Chr. -1593 n. Chr.) aufgezeichnet. Saponin ist der Wirkstoff des Samens von Litchi chinensis Sony. Basierend auf unserer vorherigen Studie untersucht diese Studie weiter die Wirkung von SLS auf den TGF- 1- und FN-Spiegel in HKC, die mit hoher Glukose kultiviert wurden, die Apoptose von HKC und den zugrunde liegenden Mechanismus auf die Prävention und Therapie von Glomerulosklerose [ 3].

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Materialien und Methoden Materialien

SLS mit einer Reinheit von mehr als 98 Prozent wurde von Xianqingle Biological Co., LTD (Xi'an, China) bezogen. HKC wurde von Shanghai Fuxiang Biotechnology Co., Ltd (Shanghai, China) bezogen. DMEM/F12-Medium, Standardfötus Rinderserum und Trypsin stammten von Hyclone (USA). Die Dimethyl-Unterfamilie war von Sigma (USA). Das ELISA-Kit wurde von der Shanghai Longton Biotechnology Company (Shanghai, China) bezogen. Annexin V-FITC/PI Apoptose-Nachweiskit war von Nanjing Kaiji Biotechnology Co., Ltd (Nanjing, China).

Zellkultur

HKC wurden in DMEM/F12 mit 1 0 Prozent fötalem Kälberserum gehalten und bei 37 Grad in einer befeuchteten Atmosphäre mit 95 Prozent Luft und 5 Prozent CO kultiviert. Die Zellen wurden nach 2-3 mit 0,25 Prozent Trypsin verdaut. Tage zum Einsatz.

Enzyme-linked Immunosorbent Assay

HKC wurden in sechs Gruppen eingeteilt, einschließlich Kontrollgruppe (DMEM mit 5,5 mmol/l Glukose), Gruppe mit hoher Glukose (DMEM mit 30 mmol/l Glukose), SLS-Gruppe mit niedriger Dosis (5 mg/ml, S1 plus 30 mmol/l Glukose), SLS Gruppe mit mittlerer Dosis (10 mg/ml, S2 plus 30 mmol/L Glucose), Gruppe mit hoher SLS-Dosis (20 mg/ml, S3 plus 30 mmol/L Glucose) und Gruppe mit leerem Ton (DMEM ohne Zellen).

48 Stunden später wurde der Überstand jeder Gruppe gesammelt und der Gehalt an TGF- 1 und FN wurde durch ELISA nachgewiesen. Die Operation wurde gemäß der Anleitung durchgeführt. Der OD-Wert wurde bei 450 nm von einem Mikroplatten-Lesegerät abgelesen. Die Konzentrationen von TGF- 1 und FN wurden gemäß der Standardkurve bestimmt.

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Durchflusszytometrie

Die Versuchsgruppen waren die gleichen wie oben. Die Apoptosezellen wurden durch Durchflusszytometrie mit Annexin V-FITC/PI-Doppelfärbung nachgewiesen. Der obere linke Quadrant stellte den Prozentsatz nekrotischer Zellen dar, der obere rechte Quadrant stellte den Prozentsatz später Apoptosezellen dar, der untere linke Quadrant stellte den Prozentsatz lebensfähiger Zellen dar und der untere rechte Quadrant stellte den Prozentsatz früher Apoptosezellen dar.

Western-Blot-Analyse

HKC wurde mit 10*mol/l Angiotension (Ang)Ⅱ, 20mg/l SLS und 10*mol/l AngⅡ, DMEM/F12-Medium, 20mg/l SLS und 25mmol/l Glucose und 25mmol/l Glucose behandelt , beziehungsweise.

Zelllysatproteine ​​wurden durch Natriumdodecylsulfat-Polyacrylamid-Gelelektrophorese aufgetrennt und auf PVDF-Membranen übertragen. Jede Membran wurde mit einem monoklonalen Antikörper inkubiert, gefolgt von einer Inkubation mit Peroxidase-konjugierten sekundären Antikörpern und einem Chemilumineszenznachweis.

statistische Analyse

Alle statistischen Analysen wurden mit SPSS Version 19 durchgeführt.0. Der Unterschied zwischen den experimentellen Datengruppen wurde durch einfache ANOVA analysiert, und der am wenigsten signifikante Unterschied wurde zwischen den Gruppen verwendet. P<0.05 was="" considered="" to="" indicate="" statistical="">

Ergebnisse

Auswirkungen von SLS auf die Sekretion von TGF-B1 und FN Verglichen mit der Gruppe mit hohem Glukosegehalt konnte SLS die Spiegel von TGF-B1 und FN in HKC hemmen (P<0.01 or=""><0.05)(figure 1,="" figure="">

Verglichen mit der Hochglukosegruppe: * P<0.05, **=""><0.01. control="" group:="" dmem="" with="" 5.5mmol/l="" glucose,="" high="" glucose="" group:="" dmem="" with="" 30mmol/l="" glucose,="" s1="" group:="" 5mg/ml="" sls+30mmol/l="" glucose,="" s2="" group:="" 10mg/ml="" sls+30mmol/l="" glucose,="" s3="" group:="" 20mg="" l="" sls+30mmol/l="" glucose.="" sls,="" seed="" of="" litchi="" chinensis="">

Wirkung von SLS auf die HKC-Apoptose Das Ergebnis der Durchflusszytometrie zeigte, dass die Apoptose der Gruppe mit hoher Glukose signifikant höher war als die der normalen Gruppe (P < {{0}},01).="" verglichen="" mit="" der="" gruppe="" mit="" hohem="" glukosespiegel="" korrelierte="" die="" apoptoserate="" von="" hkc="" negativ="" mit="" den="" konzentrationen="" von="" sls="" (p="">< 0,01)="" (abbildung="">

Wirkung von SLS auf die Konzentration von SOCS{{0}} Die Konzentration von SOCS-1-Protein in der AngII-Gruppe war signifikant höher als in der normalen Gruppe (P < 0.{="" {8}}1).="" der="" socs-1-spiegel="" war="" in="" der="" angii-plus-sls-gruppe="" niedriger="" als="" in="" der="" angii-gruppe,="" aber="" immer="" noch="" höher="" als="" in="" der="" kontrollgruppe="" (p="">< 0.01).="" verglichen="" mit="" der="" normalen="" gruppe="" war="" der="" gehalt="" an="" socs-1-protein="" in="" der="" gruppe="" mit="" hohem="" glukosespiegel="" erhöht="" (p="">< 0,01).="" verglichen="" mit="" der="" gruppe="" mit="" hoher="" glukose="" war="" der="" proteinspiegel="" der="" gruppe="" mit="" hoher="" glukose="" plus="" sls="" verringert="" (p="">< 0,01)="" (abbildung="">

Abbildung 4 Wirkung von SLS auf die Expression von SOCS-1 a. AngII-Gruppe: 10-6 mol/L Angiotension Ⅱ, b. AngII plus SLS-Gruppe: 20 mg/L SLS und 10-6 mol/L AngⅡ, c. Kontrollgruppe: DMEM/F12-Medium, d. Hohe Glukose plus SLS-Gruppe: 20 mg/l SLS plus 25 mmol/l Glukose, z. Kontrollgruppe: DMEM/F12-Medium, f. Gruppe mit hohem Glukosegehalt: 25 mmol/L Glukose. SOCS-1, Unterdrücker der Zytokin-Signalgebung-1. SLS, Samen von Litchi chinensis Sonn.

Diskussion

Die Ablagerung der extrazellulären Matrix und die Apoptose des tubulären Nierenepithels sind die wichtigsten pathologischen Veränderungen bei der Entwicklung von DN. Unter normalen Umständen blieben die Morphologie und die Anzahl der HKC relativ stabil. Aber in einer Vielzahl von stimulierenden Faktoren wie Entzündungen kann sich HKC signifikant vermehren [4]. Hohe Glukose führt zu einer hohen Sekretion von TGF- 1 und FN von HKC und beschleunigt die Apoptose von HKC, was ein direkter Faktor bei der Förderung des Auftretens von DN ist. In diesem Experiment wurde eine hohe Glukose als Stimulus verwendet. Es wurde festgestellt, dass SLS die Sekretion von TGF- 1, FN hemmen und die HKC-Apoptose reduzieren kann, indem es den Spiegel von SOCS-1 senkt.

Litchi chinensis Sonn ist hauptsächlich in den chinesischen Provinzen Guangdong, Fujian und Guangxi verbreitet. Es wurde berichtet, dass das SLS antihyperglykämische, antihyperlipidämische, gerinnungshemmende und antivirale Aktivitäten besitzt [5]. Nach den Aufzeichnungen von Bencaogangmu in der Ming-Dynastie in China (1518 n. Chr. - 1593 n. Chr.) Kann die SLS "durstig lindern". In den letzten Jahren haben viele Gelehrte viel über seine pharmakologischen Wirkungen und seine chemische Zusammensetzung geforscht. Die wichtigsten chemischen Bestandteile des SLS sind Verbindungen wie Litschi-Saponine, Flavonoide, Polyphenole, Meißel, Aminosäuren, Fettsäuren und flüchtige Komponenten. SLS ist der Hauptwirkstoff. Das SLS wird häufig bei Diabetes und diabetischer Nephropathie mit hypoglykämischen, hypolipidämischen, Hemmung von Immunentzündungseffekten eingesetzt [6]. Moderne experimentelle Studien haben auch bestätigt, dass SLS eine hypoglykämische Wirkung hat [7]. Der Mechanismus dieses Effekts ist jedoch nicht klar.

In dieser Studie war der TGF- 1- und FN-Spiegel in HKC nach Stimulation mit hoher Glukose signifikant erhöht, und der TGF- 1- und FN-Spiegel war nach SLS-Behandlung dosisabhängig signifikant erniedrigt . Der SOCS-1-Proteinspiegel war nach der SLS-Behandlung signifikant verringert. Diese Studie lieferte eine theoretische Grundlage für die klinische Anwendung von SLS.

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Verweise

1 Zhang AH, Huang SM, Ding GX, et al. JNK-c-Jun/AP-1-Signalweg regulierte AngiotensinⅡ-induzierte menschliche mesangiale Zellproliferation. Acta Nanjing Med Univ. 2004, 24(1): 4-8.

2. N. Nishimoto, T. Kishimoto, Yoshizakik. Anti-Interleukin6-Rezeptor-Antikörper-Behandlung bei rheumatischen Erkrankungen. Ann Rheum Dis 2000, 59(supple1): 121.

3. Lou ZM, Tian XJ, Wang WX, et al. Wirkung von Gesamtsaponinextrakt aus Litschikern auf den Blutzuckerspiegel von diabetischen Mäusen. Zhejiang Med J 2007, 29(6): 548-550.

4. Kolset SO, Reinholt FP, Jenssen T. Diabetische Nephropathie und extrazelluläre Matrix. J Histochem Cytochem 2012, 60(12): 976-986.

5. LiJW. Chinesisches medizinisches Wörterbuch (zweite Ausgabe). Peking: People's Med Publishing House 2013, 1184. 6. Zhang YJ, Zhang C. Fortschritt von Litschisamen zu den wichtigsten Wirkstoffen und pharmakologischen Wirkungen. J Guangdong Pharm Univ. 2014, 30(6):792-797. 7. Jiang ZG, Ren K, Lin Z, et al. Studie über den wirksamen Teil von Litchi chinensis, der den Blutzucker senkt. J Changchun Univ Tradit Chin Med 2011, 27(1):14-16.