Auswirkungen der Gesamtglykoside von Cistanche auf Lernen und Gedächtnis bei Ratten mit vaskulärer Demenz und deren Mechanismus
Mar 15, 2023
Gao Cong 1, Wang Chuanshe 2,3, Wu Guanzhong 1, Hu Mei 1, Tu Pengfei 2,4
(1. Department of Pharmacology, China Pharmaceutical University, Nanjing 210009, Jiangsu; 2. Modern Research Center of Traditional Chinese Medicine, Peking University, Beijing 100083; 3. School of Basic Medicine, Peking University, Beijing 100083; 4. School of Pharmacy , Universität Peking, Peking 100083)
Die Alterung der Bevölkerung hat die Suche nach sicheren und wirksamen Medikamenten zur Vorbeugung und Behandlung vonAlzheimer-Erkrankungein Hot Spot in der Arzneimittelforschung. In den letzten Jahren wurden große Fortschritte in der Behandlung der Alzheimer-Krankheit mit der Methode der Tonisierung von Niere und Mark sowie von Herz und Milz erzielt.Cistanche Deserticola wurde ursprünglich in Shennong's Classic of Materia Medica veröffentlicht und hat die Wirkung, das Nieren-Yang zu tonisieren, die Blutessenz zu fördern, den Darm zu befeuchten und Verstopfung zu lindern. Es wird heute häufig zur Behandlung von Altersdemenz, Impotenz, gewohnheitsmäßiger Verstopfung und anderen Krankheiten eingesetzt [1,2]. Studien haben gezeigt, dass es die Wirkung von Anti-Demenz, Anti-Oxidation, Anti-Hypoxie, Anti-Strahlung und Stärkung der Immunfunktion hat, und seine Hauptbestandteile sind Phenylethanolglykoside [3-6].
Cistanche deserticola ma – Anti-Alzheimer-Krankheit
Die Gesamtglykoside vonCistanche deserticola mawerden aus den getrockneten fleischigen Stängeln von Cistanche deserticola (Schrenk) R. Wight extrahiert und raffiniert und enthalten 90,7 Prozent Phenylethanoidglykoside, darunter 44,3 Prozent des HauptbestandteilsEchinacosid. In diesem Experiment wurden die Wirkungen von Gesamtglykosiden von Cistanche auf Lern- und Gedächtnisstörungen bei Ratten mit vaskulärer Demenz und Thrombose und Blutplättchenaggregation bei normalen Ratten untersucht, um Beweise für seine Entwicklung als neues Medikament zur Förderung der Intelligenz und Vorbeugung zu liefernBehandlung der Alzheimer-Krankheit.
Was macht cistanche – AAnti-Alzheimer-Krankheit
1. Materialien
1.1 Tiere:
SD-Ratten, männlich, mit einem Gewicht von 470 bis 570 g, wurden von Shanghai Xipuma-Bikai Experimental Animal Co., Ltd. mit der Zertifikatsnummer HDQZ Nr. 152 bereitgestellt.
1.2 Medikamente und Reagenzien:
Die Gesamtglykoside vonCistanche Deserticola, CIstanche-Extraktpulver, enthält 90,7 Prozent der gesamten Glykoside von Phenylethanol, 44,3 Prozent derEchinacosid, und dunkelbraunes Pulver, das vom Chemical Office des Modern Research Center of Traditional Chinese Medicine der Peking University mit der Chargennummer 980601 bereitgestellt wird. Piracetam-Tabletten, hergestellt von der Yixing Pharmaceutical Factory, Chargennummer 980521. Aspirin magensaftresistent beschichtet Tabletten, hergestellt von Nanjing No. 2 Pharmaceutical Factory, Chargennummer 000402. Jedes Arzneimittel wird mit destilliertem Wasser zubereitet. Heparinnatrium, ein Produkt von Shanghai Chemical Reagent Co., Ltd. von China Pharmaceutical (Group), Chargennummer F000128. Pentobarbitalnatrium, importiert von China Pharmaceutical (Group) Shanghai Chemical Reagent Co., Ltd., ist unterverpackt, mit Chargennummer 971104. Adenosindinatriumdiacetat (ADP), ein Produkt von Dongfeng Biochemical Technology Co., Ltd., Shanghai Institute of Biochemistry, Chinese Academy of Sciences, mit der Chargennummer 9305122, wurde vor der Verwendung in einer 1 mg/ml Stammlösung zubereitet und in einem Kühlschrank aufbewahrt. Wenn es verwendet wurde, wurde es dreimal mit Phosphatpuffer verdünnt.
Cistanche 200 mg – AAnti-Alzheimer-Krankheit
1.3 Instrumente:
MG-3 Elektrolabyrinth vom Y-Typ, hergestellt von der Zhangjiagang Teaching and Experimental Equipment Factory. SPA-4 multifunktionaler Thrombozytenaggregator, hergestellt von der Shanghai Keda Test Instrument Factory.
2. Methode
2.1 Vaskuläres Demenzmodell, induziert durch fokale zerebrale Ischämie-Reperfusion bei Ratten
Vorbereitung und Nachweis
2.1.1 Gruppierung und Verwaltung:
Die Ratten wurden gemäß ihrem Körpergewicht zufällig in 6 Gruppen eingeteilt, darunter eine Scheinoperationsgruppe, eine Modellgruppe, eine positive Kontrollgruppe (Piracetam 300 mg/kg) und hohe, mittlere und niedrige Dosen (200.100, 50 mg/kg) der Gesamtglykoside von Cistanche. Jede Gruppe erhielt einmal täglich 0,5 ml/100 g ig. Die Scheinoperationsgruppe und die Modellgruppe erhielten 30 Tage lang gleiche Mengen an destilliertem Wasser.
2.1.2 Modellvorbereitung[7]:
Am 16. Tag der Verabreichung wurden die Ratten mit Chloralhydrat 36 0 mg/kg IP anästhesiert. Die Halshaut in der Mitte durchtrennen, den rechten Halsmuskel durchtrennen, die A. carotis communis und die A. carotis externa freilegen und die Äste der A. carotis externa abbinden und abschneiden. Trennen Sie die A. carotis interna, bis die A. pterygopalatina Processus freigelegt ist. Klemmen Sie die gemeinsame Halsschlagader auf dieser Seite mit einer Arterienklemme, schneiden Sie die äußere Halsschlagader, führen Sie eine stumpfe Kohlenstoff-Angelschnur mit einem Durchmesser von 0,28 mm von der äußeren Halsschlagader der Ratte in die innere Halsschlagader ein und geben Sie die intrakranielle bis ein es gibt einen leichten Widerstand, und dann wird die gesamte Blutversorgung der mittleren Hirnarterie blockiert. Nach 40 Minuten Ischämie wurde die Angelschnur herausgezogen, die äußere Halsschlagader abgebunden, die gemeinsame Halsschlagader geöffnet, desinfiziert und genäht, und Im-Penicillin wurde verwendet, um eine Infektion zu verhindern. In der Scheinoperationsgruppe wurde nur die äußere Halsschlagader isoliert und ligiert, und die gemeinsame Halsschlagader wurde nicht abgeschnitten.
2.1.3 Lern- und Gedächtnistest [8]:
Am 7. Tag nach der Operation wurde ein elektrisches Labyrinth vom Y-Typ zum Lernen und Gedächtnistraining und zum Testen verwendet. Das Experiment wurde in einer ruhigen und dunklen Umgebung durchgeführt. Die Ratten wurden in einen Arm (den fixierten Startbereich) gelegt, 2 Minuten lang an das Licht angepasst und dann einem Elektroschock unterzogen. Am linken Arm wird ein Lichtsignal gesetzt, was ein sicherer Bereich ist, und der rechte Arm ist ein gefährlicher Bereich mit Strom und ohne Licht. Die Stromschlagintensität hängt von der Fähigkeit der Ratten ab, dem Stromschlag nachzulaufen, und die Spannung beträgt 50-60 V. Es ist richtig, dass Ratten nach einem Schock in einen sicheren Bereich fliehen, und es ist falsch, in einen gefährlichen Bereich zu fliehen. Nach jedem Training bleiben sie für die 30er im sicheren Bereich, um ihr Gedächtnis zu festigen. Wenn Sie wieder trainieren, ruhen Sie sich 10 Sekunden lang unter dem Licht des Startbereichs aus, wiederholen Sie 10 Mal, notieren Sie die richtigen und falschen Zeiten und berechnen Sie die richtige Antwortrate. Jedes Training wurde 1 h nach der Verabreichung durchgeführt und 4 Tage lang kontinuierlich gemessen. Nehmen Sie dann für weitere 4 Tage abwechselnd den linken und den rechten Arm als Sicherheitszone, notieren Sie die richtigen und falschen Zeiten und berechnen Sie die richtige Reaktionsgeschwindigkeit.
Richtige Reaktionsrate Anzahl richtiger Reaktionen/Trainingszeiten
2.2 Arteriovenöse Bypass-Thrombose bei Ratten und Nachweis[8]:
Die Ratten wurden gemäß ihrem Körpergewicht zufällig in 5 Gruppen eingeteilt, nämlich die Modellgruppe, die positive Kontrollgruppe (Aspirin 100mg/kg), hohe, mittlere und niedrige Dosen von Gesamtglykosiden von Cistanche ( 200, 100, 50 mg/kg) Gruppen. Jede Gruppe erhielt 0,5 ml/(100 g) in, und die Modellgruppe erhielt 7 Tage lang das gleiche Volumen destilliertes Wasser. Nach der letzten Verabreichung ip Pentobarbital-Natrium 45 mg/kg Anästhesie, Fixierung in Rückenlage, Trennung der rechten Halsschlagader und der linken äußeren Jugularvene. Wiegen Sie einen 7 cm langen chirurgischen Seidenfaden Nr. 4 und legen Sie ihn in die Mitte des 3--Segment-Polyethylenschlauchs, sodass die Länge des Seidenfadens in Kontakt mit Blut 6 cm beträgt, und füllen Sie den gesamten Polyethylenschlauch mit 50 U /ml Heparin physiologische Kochsalzlösung. Nach dem Einführen des venösen Endes in die linke externe Jugularvene 50 U/kg Heparin-Kochsalzlösung vom arteriellen Ende zur Antikoagulation genau injizieren und dann das arterielle Ende in die rechte Arteria carotis communis einführen. Der arteriovenöse Bypass wurde 1 Stunde nach der Verabreichung geöffnet und der Blutfluss wurde 15 Minuten nach dem Öffnen unterbrochen. Der Seidenfaden wurde schnell herausgenommen und auf das Wägepapier gelegt. Die nasse Masse wurde mit einer elektronischen Analysenwaage gewogen und die Thrombushemmungsrate wurde berechnet.
Thrombosehemmungsrate=(Thrombusmasse in der Modellgruppe – Thrombusmasse in der Verabreichungsgruppe)/Thrombusmasse in der Modellgruppe × 100 Prozent
2.3 Nachweis der Thrombozytenaggregation bei Ratten in vitro [8]:
Die Ratten wurden gemäß ihrem Körpergewicht zufällig in 5 Gruppen eingeteilt, die die normale Kontrollgruppe, die positive Kontrollgruppe (Aspirin 100 mg/kg) und die Gesamtglykoside der Cistanche-Verabreichungsgruppe (die Dosis war die gleiche wie oben) war. Die Verabreichungsmethode ist die gleiche wie unter Punkt 2.2. Nach 12-stündigem Fasten vor der letzten Verabreichung wurde 1 Stunde nach der letzten Verabreichung Blut aus der abdominalen Aorta entnommen, mit 3,8 Prozent Natriumcitrat (1:9) antikoaguliert, vorsichtig gemischt, bei 1000 U/min für 3 Minuten zentrifugiert und dann obere Schicht aus plättchenreichem Plasma (PRP) wurde abgesaugt. Das verbleibende Blut wurde 10 Minuten bei 3000 U/min zentrifugiert, und der Überstand war anämisches Kleinplattenplasma (PPP). Fügen Sie 200 in das turbidimetrische Röhrchen μ LPRP hinzu, stellen Sie den Nullpunkt mit PPP ein, erhitzen Sie es 5 Minuten lang vor und fügen Sie dann 50 μ LADP-lösungsinduzierte Thrombozytenaggregation, gemessene Thrombozytenaggregationsintensität und berechnete Thrombozytenaggregationsinhibitionsrate hinzu.
Aggregationshemmungsrate=(maximale Aggregationsrate der normalen Gruppe – maximale Aggregationsrate der Verabreichungsgruppe)/maximale Aggregationsrate der normalen Gruppe × 100 Prozent
2.4 Statistische Verarbeitung:
Die Ergebnisse wurden in x ± s ausgedrückt, und die Daten wurden mit dem t-Test des Vergleichs zwischen den Gruppen statistisch verarbeitet.
3. Ergebnisse
3.1 Wirkung auf die Lern- und Gedächtnisfunktion von Modellratten für vaskuläre Demenz, induziert durch fokale zerebrale Ischämie-Reperfusion:
Cistanche-Ergänzung in meiner Nähe – AAnti-Alzheimer-Krankheit
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Die Ergebnisse sind in Tabelle 1 gezeigt. Die durchschnittliche Rate richtiger Antworten jeder Gruppe stieg von Tag zu Tag in den ersten 4 Tagen des Tests, und die durchschnittliche Rate richtiger Antworten jeder Gruppe erreichte am vierten Tag mehr als 90 Prozent. Die durchschnittliche richtige Ansprechrate jeder Dosisgruppe und positiven Gruppe der Gesamtglykoside von Cistanche war in den ersten drei Tagen signifikant höher als die der Modellgruppe (P<0.05, 0.01), indicating that the administration of total glycosides of cistanche at 50, 100, and 200 mg/kg could significantly improve the correct response rate of maze training in rats with vascular dementia caused by focal cerebral ischemia-reperfusion, that is, total glycosides of cistanche had a significant protective effect on the learning and memory dysfunction caused by the model. There was no significant difference in the average correct response rate of each group on the 4th day, and the average correct response rate of each group decreased significantly after using the left and right arm alternately as the safety zone on the 5th day, but there was no significant difference between the groups. Then the average correct response rate of each group gradually increased, but there was no significant difference between the groups. Die Ergebnisse zeigten, dass Gesamtglykoside von"Wüstenginseng"Cistanche Deserticolakonnte nurdie Lern- und Gedächtnisfunktion von Ratten mit Hirnverletzung bis zu einem gewissen Grad wiederherstellen, und die Änderung des Lernstils hatte keinen Einfluss auf die erworbene Lern- und Gedächtnisfähigkeit.
Tabelle 1 Wirkung von Cistanchis-Glykosiden auf die Lern- und Gedächtnisfunktion von Ratten mit vaskulärer Demenz, die durch fokale zerebrale Chemiämie induziert wurde-Reperfusion
*P<0.05 ** P<0.01 vsModell Gruppe
3.2 Wirkung auf arteriovenöse Bypass-Thrombose bei Ratten:
Die Ergebnisse sind in Tabelle 2 dargestellt. Im Vergleich zur Modellgruppe konnten Gesamtglykoside von Cistanche deserticola 200 und 100 mg/kg die Bildung von arteriovenösen Bypass-Thrombosen bei Ratten signifikant hemmen, aber ihre Wirkung war signifikant schwächer als die von Aspirin 100 mg/kg. kg. Die Gesamtglykoside von Cistanche deserticola 50 mg/kg hatten keine Wirkung auf die Bildung von arteriovenösen Bypass-Thrombosen bei Ratten. Es zeigt, dass die Gesamtglykoside von Cistanche deserticola die Bildung von arteriovenösen Bypass-Thrombosen in ganzen Tieren hemmen können.
Tabelle 2 Wirkung von Cistanchis-Glycosiden auf arteriovenöse Shunt-Thrombose von Ratten(n=10)
*P<0.05 ** P<0.01vsModell Gruppe
3.3 Wirkung auf die ADP-induzierte Thrombozytenaggregation bei Ratten in vitro:
Die Ergebnisse sind in Tabelle 3 gezeigt. Verglichen mit der normalen Gruppe konnten die Gesamtglykoside von Cistanche deserticola 200, 100 und 50 mg/kg die durch ADP in vitro induzierte Blutplättchenaggregation und die Hemmungsrate von 200 mg/kg signifikant hemmen Gruppe war die höchste und erreichte 59,48 Prozent.
Tabelle 3 Wirkung von Cistanchis-Glykosiden auf die Blutplättchenaggregationin-vitrodurch ADP induziert
*P<0.05 ** P<0.01 vsnormale Gruppe
4. Diskussion
Die Alzheimer-Krankheit kann im Allgemeinen in vier Typen eingeteilt werden, nämlich Alzheimer-Krankheit (AD), vaskuläre Demenz (VD), gemischte Demenz (die ersten beiden koexistieren) und senile Demenz, die durch systemische Erkrankungen verursacht wird. Epidemiologische Untersuchungen zeigen, dass die Inzidenzrate von AD in westlichen Ländern höher ist als die von VD, in China jedoch anders. Laut der allgemeinen Umfrage in 11 Städten ist die Prävalenz von VD höher als die von AD [9]. VD ist der allgemeine Name des Demenzsyndroms, das durch Hirngewebeschäden verursacht wird, die durch zerebrovaskuläre Faktoren verursacht werden. Die traditionelle chinesische Medizin glaubt, dass diese Krankheit hauptsächlich auf einen Mangel an Essenz und einen Überschuss an Essenz zurückzuführen ist. Mit zunehmendem Alter wird die Essenz in der Niere des Körpers allmählich erschöpft, das Markmeer wird allmählich erschöpft, die Funktion der Eingeweide wird allmählich geschwächt und ein viszerales Versagen führt zu einer Störung der Verteilung von Wasser und Blut im Körper des Körpers, die Bewegung von Qi und Blut, und dann die Ansammlung pathologischer Produkte wie Schleim und Blutstauung im Körper, die Störung von Schleim und Blutstauung führt zur Schädigung der Gehirnkollateralen, dem Mangel an Infiltration von Qi und Blut, das nachteilige Steigen und Fallen der Körperöffnungen und Kollateralen, die Unordnung göttlicher Macht. Daher ist das Merkmal dieser Krankheit, dass sie durch Mangel verursacht wird und mit Mangel und Überschuss vermischt ist. Niereninsuffizienz ist die grundlegende Ursache für das Auftreten und die Entwicklung der Alzheimer-Krankheit. Die Stagnation von Schleim und Blut-Stase und die Zerstörung von Kollateralen sind die grundlegenden pathologischen Verbindungen in der Pathogenese dieser Krankheit.
Cistanche Deserticola ist ein traditionelles Stärkungsmittel und Aphrodisiakum mit der Funktion, die Nieren zu tonisieren, die Essenz zu füllen und den Darm zu befeuchten. Der Klassiker der Materia Medica nennt es die essentielle Medizin zur Tonisierung der Blutessenz und zur Ernährung der Niere. Es hat eine gute Wirkung auf die Symptome von Müdigkeit, Vergesslichkeit, Hörverlust und Enuresis, die durch Nierenmangel verursacht werden. Zhu Zhiming und andere analysierten die Arzneimittelzusammensetzung von 46 Verbindungen zur Behandlung der Alzheimer-Krankheit und fanden heraus, dass Cistanche deserticola eines der am häufigsten verwendeten Arzneimittel ist [1].
Cistanche deserticola – Anti-Alzheimer-Krankheit
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In diesem Experiment wurden am 16. Tag der ig-Verabreichung Ratten mit einem VD-Modell, das durch fokale cerebrale Ischämie-Reperfusion induziert wurde, präpariert, und am 7. Tag der kontinuierlichen Verabreichung wurden sie trainiert und auf Lernen und Gedächtnis getestet. In den ersten drei Tagen des Tests war die durchschnittliche richtige Reaktionsrate der Modellgruppe signifikant niedriger als die der scheinoperierten Gruppe, was anzeigt, dass eine Verletzung der zerebralen Ischämie-Reperfusion eine Lern- und Gedächtnisstörung der Modellratten verursachte; Die durchschnittliche richtige Antwortrate von Ratten in jeder Dosisgruppe von Cistanche-Glykosiden war signifikant höher als die in der Modellgruppe, was dem Niveau von Ratten in der Scheinoperationsgruppe entsprach, was darauf hindeutet, dass Cistanche Deserticola eine präventive und therapeutische Wirkung auf das Lernen hatte und Gedächtnisstörungen bei VD-Ratten, und Cistanche-Glykoside waren seine wirksame Anti-Demenz-Komponente. Die Ätiologie und Pathogenese von VD sind ziemlich komplex und derzeit nicht sehr klar. Jüngste Studien haben gezeigt, dass die Risikofaktoren von VD diejenigen umfassen, die mit Schlaganfall zusammenhängen, und solche, die nicht mit Schlaganfall zusammenhängen, die als Bluthochdruck, Herzerkrankungen, Hyperlipidämie, Diabetes, Blutvolumenverhältnis, Bildungsniveau, Alter, Geschlecht usw. zusammengefasst werden Die Pathogenese hängt mit multiplen Infarkten, einzelnen Infarkten in wichtigen Teilen, zerebraler Ischämie der weißen Substanz usw. zusammen [10,11]. In diesem Experiment war die Feuchtmasse des arteriovenösen Bypass-Thrombus bei Ratten, denen 7 Tage lang Gesamtglykoside von Cistanche deserticola verabreicht wurden, signifikant niedriger als die in der Modellgruppe, d. h. Gesamtglykoside von Cistanche deserticola können die Thrombose im ganzen Tier signifikant hemmen Körper;Die Ergebnisse zeigten auch, dass die Gesamtglykoside vonCistanche Deserticolakonnten die durch ADP in vitro induzierte Blutplättchenaggregation signifikant hemmen. Kombiniert man die beiden Versuchsergebnisse,Es kann festgestellt werden, dass der Mechanismus der Vorbeugung und Behandlung von VD durch Gesamtglykoside von Cistanche mit der Hemmung der Blutplättchenaggregation zusammenhängen kann.
Verweise:
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[3] Liang MH, Sun PY, Cao Y. Wirkung von Glycosiden von Cistenanche auf die Lipidperoxidation bei hämorrhagischem Schock/Reperfusion bei jury-Kaninchen [J]. J Ch in Microcirc, 2000, 4(4): 230-231.
[4] Shang XY, Wang XW, Wang XF, et al. Schützende Wirkung von Glycosiden von Cist Anche auf die Immunfunktion von 60 Co-ray-bestrahlten Mäusen [J]. Ch in Trad it Herb Drugs, 2001, 32(2): 139-142.
[5] Wu LY, Wang XW, Zao R M. Die protektive Wirkung der Glykoside von Cistanche auf die zerebrale Hypoxie bei Mäusen [J]. J Xinjiang Med Uni v, 2003, 26 (6): 561-562.
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[8] Xu SY, Bi an RL, Chen X. Methodology in Pharm acological Ex erimen t [M]. 3. Aufl. Beijing: People's M edical Publishing House, 2002.
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[11] Loeb C. Mentale Verschlechterung im Zusammenhang mit lakunären Infarkten [J]. Heart Dis Stroke, 1994, 23: 75-81.
