Epigallocatechin-3-Gallat-beladene Liposomen begünstigen die entzündungshemmende Wirkung von Mikrogliazellen und fördern die Neuroprotektion

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Abstrakt

Es ist bekannt, dass Mikroglia-vermittelte Neuroinflammation hauptsächlich zum Fortschreiten neurodegenerativer Erkrankungen beiträgt. Epigallocatechin-3-gallat (EGCG), bekannt als natürliches Antioxidans in grünem Tee, kann Mikroglia-vermittelte Entzündungen hemmen und Neuronen schützen, hat aber Nachteile wie hohe Instabilität und geringe Bioverfügbarkeit. Wir haben eine liposomale EGCG-Formulierung entwickelt, um ihre Bioverfügbarkeit zu verbessern, und die neuroprotektive Aktivität in In-vitro- und In-vivo-Neuroinflammationsmodellen bewertet. EGCG-beladene Liposomen wurden aus Phosphatidylcholin (PC) oder Phosphatidylserin (PS), beschichtet mit oder ohne Vitamin E (VE), durch Hydratations- und Membranextrusionsverfahren hergestellt. DasAntiphlogistikumDie Wirkung wurde gegen die durch Lipopolysaccharid (LPS) induzierte Aktivierung von BV-2-Mikrogliazellen und die Entzündung in der Substantia nigra von Sprague-Dawley-Ratten bewertet. Im zellulären Entzündungsmodell änderten murine BV-2-Mikrogliazellen ihre Morphologie von normaler Sphäroid- zu aktivierter Spindelform nach 24 h Induktion von LPS. Im In-vitro-Test auf freie Radikale 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH) fängt EGCG 80 % von DPPH innerhalb von 3 Minuten ab. EGCG-beladene Liposomen konnten von BV-2-Zellen nach 1 h Zellkultur aus Zellaufnahmeexperimenten phagozytiert werden. Mit EGCG beladene Liposomen verbesserten die Produktion von BV-2-Mikroglia-abgeleitetem Stickoxid und TNF-nach LPS. Im In-vivo-Rattenmodell mit Parkinson-Syndrom schwächte die gleichzeitige intranigrale Injektion von EGCG-beladenen Liposomen LPS-induzierte entzündungsfördernde Zytokine ab und stellte die motorische Beeinträchtigung wieder her. Wir haben gezeigt, dass EGCG-beladene Liposomen eine neuroprotektive Wirkung ausüben, indem sie die Mikroglia-Aktivierung modulieren. Aus grünem Tee extrahiertes EGCG und beladene Liposomen könnten ein wertvoller Kandidat für eine krankheitsmodifizierende Therapie seinParkinson-Krankheit (PD).

Schlüsselwörter:Neuroprotektion; Neuroinflammation; Parkinson-Krankheit; Catechin; L- -Phosphatidylcholin;Phosphatidylserin

verhindernParkinsonErkrankungWirkungen von Cistanche mitZistanche

Chun-Yuan Cheng 1,2, Lassina Barro 2, Shang-Ting Tsai 2,3, Tai-Wei Feng 2,3, Xiao-Yu Wu 2, Che-Wei Chao 4, Ruei-Siang Yu 2, Ting-Yu Chin 4,* und Ming Fa Hsieh 2,3,*

1 Division of Neurosurgery, Department of Surgery, Changhua Christian Hospital, 135 Nanxiao St., Changhua City, Changhua County 500, Taiwan; 83998@cch.org.tw

2 Department of Biomedical Engineering, Chung Yuan Christian University, No. 200, Zhongbei Rd., Zhongli Dist., Taoyuan City 320314, Taiwan;

3 Zentrum für minimalinvasive medizinische Geräte und Technologien, Chung Yuan Christian University, Nr. 200, Zhongbei Rd., Zhongli Dist., Taoyuan City 320314, Taiwan

4 Department of Bioscience Technology, Chung Yuan Christian University, Nr. 200, Zhongbei Rd., Zhongli Dist., Taoyuan City 320314, Taiwan.

1. Einleitung

Wenn das Nervensystem geschädigt oder infiziert ist, werden Mikrogliazellen aktiviert und zu Verzweigungen transformiert, was zu einer übermäßigen Expression einer großen Menge entzündungsfördernder Zytokine wie Tumornekrosefaktor- (TNF-), Interleukin-1 ( IL-1 ), Interleukin 6 (IL-6) und Entzündungsmediatoren wie Stickoxid (NO) und reaktive Sauerstoffspezies (ROS). Schließlich werden Nervenzellen durch diese Entzündungsmediatoren geschädigt, degeneriert oder sterben ab. Kürzlich wurde festgestellt, dass im Gehirn von Patienten mit neurodegenerativen Erkrankungen wie der Parkinson-Krankheit (PD), der Alzheimer-Krankheit ({8}), der Huntington-Krankheit (9) und der Creutzfeldt-Jakob-Krankheit werden große Mengen an Mikrogliazellen aktiviert und überexprimiert [1–3]. Epidemiologisch ist die Ursache der Parkinson-Erkrankung meist mit der neuroinflammatorischen Reaktion verbunden. Die resultierenden Entzündungsmediatoren wie TNF-, IL-1, IL-6, NO und ROS werden im Striatum des Gehirns gefunden [1,4–7]. Der Abbau von dopaminergen Neuronen kann durch Mikrogliazellen reguliert werden [8].

Dem neuroinflammatorischen Prozess, der PD verursacht, geht eine primäre Schädigung von Neuronen voraus, die durch Umweltgifte verursacht wird, einschließlich Rotenon [9], Lipopolysaccharid (LPS) [5,7] und die Auswirkungen einer abnormalen Proteinakkumulation [10]. Der Schaden wird Läsionen und sogar Apoptose von dopaminergen Neuronen verursachen. Dann werden Mikrogliazellen aktiviert, um Zytokine freizusetzen, was zu einer Entzündung und zum Tod der Neuronen und schließlich zu PD führt.

Wenn die Mikrogliazellen durch LPS stimuliert werden, bindet LPS an die Bindungsstelle des Oberflächenrezeptors CD14 von Mikrogliazellen. Der LPS-CD14-Komplex ist mit dem MD2-Linker durch Transmembranproteine ​​des Toll-like-Rezeptors -4 (TLR4) verknüpft und dann an mehreren Signalübertragungswegen beteiligt, die durch Mitogen-aktivierte Proteinkinasen (MAPK) und aktivierende Transkriptionsfaktoren (Kernfaktor) erzeugt werden -kappa B, NF-κB). Nach Gentranskription [5,11,12] setzen Mikrogliazellen Zytokine wie TNF- und IL-1 frei oder exprimieren Gene der induzierbaren Stickoxidsynthase (iNOS) und Cyclooxygenase-2 (COX{ {17}}), was zur Freisetzung von Prostaglandinen oder NO führt. Darüber hinaus werden zerstörerische freie ONOO-Radikale erzeugt, indem Superoxid-Anionen, die von Nicotinamid-Adenin-Dinukleotid-Phosphat (NADPH)-Oxidase produziert werden, mit NO, das von iNOS produziert wird, kombiniert werden, was zum Tod von dopaminergen Neuronen führt [13]. Daher wurde LPS in dieser Studie als In-vitro-Modell für PD verwendet, um eine Neuroinflammation von Mikrogliazellen zu induzieren.

Catechine sind natürliche Antioxidantien, die Zellschäden verhindern können und viele pharmakologische Vorteile bieten, wie Anti-Tumor, Anti-Krebs, Anti-Aging, Anti-pharmakologische Strahlung und Abfangen freier Radikale [14]. Grüner Tee enthält etwa 10 Gewichtsprozent Polyphenole, darunter große Mengen eines Catechin namens Epigallocatechingallat (EGCG). EGCG hat die höchste antioxidative Aktivität und Radikalfängerkapazität aller Grüntee-Catechine und kann ROS einfangen, um die Zellen vor Schäden durch oxidativen Stress zu schützen [15]. EGCG hat auch eine hohe entzündungshemmende Wirksamkeit, die die Sekretion von Zytokinen (TNF-, IL-2 und IL-8) durch Makrophagen [16], die Phosphorylierung von Akt-Signalproteinen und IκB-Proteinen wirksam hemmen kann Entzündungswege zur Verringerung der NF-κB-Expression oder der AP-1-Transkription durch Hemmung der Phosphorylierung vorgeschalteter MAPK-Proteine, um die COX-2-Expression auszugleichen und die Produktion entzündungsfördernder Zytokine zu reduzieren [17].

Kürzlich wurde berichtet, dass EGCG aufgrund der Unterdrückung aktiver Oligomere von -Synuclein (S) potenziell therapeutisch oder prophylaktisch für PD ist [18]. EGCG verhindert auch die S-Aggregation in vitro [19–21], und die zytoplasmatische S-Aggregation in dopaminergen Neuronen ist eine mögliche Pathogenese von PD, die zu einer Schädigung von dopaminergen Neuronen in der Substantia nigra führt [22]. Weiterhin kann EGCG durch 1-Methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridin (MPTP) induzierte neurochemische oder funktionelle Schäden wiederherstellen und Ferroportin in der Substantia nigra regulieren und reduzieren oxidativer Stress [23]. EGCG hat auch neuroprotektive und immunprotektive Wirkungen bei MPTP-behandelten Mäusen und kann die Neuroinflammation modulieren und den Verlust dopaminerger Neuronen bei MPTP-induzierter PD schützen [24].

Die entzündungshemmenden Wirkungen von EGCG wurden untersucht. EGCG unterdrückte LPS-induzierte NO-Produktion und Expression von iNOS in BV-2-Mikrogliazellen. EGCG kann die Expression von entzündungsfördernden Zytokinen wie TNF- und IL-1 in BV-2-Zellen wirksam hemmen [25]. Die EGCG-Vorbehandlung menschlicher Makrophagen hemmte signifikant die LPS-induzierte Expression von entzündungsfördernden Zytokinen wie TNF-, IL-1 und IL-6 [26]. Darüber hinaus verringerte die Nachbehandlung von EGCG bei LPS-geschädigten Mäusen die Produktion eines entzündungsfördernden Zytokins durch Modulation des TLR4-NF-κB-Signalwegs [27]. Darüber hinaus konnten mit EGCG beladene und durch die Zugabe von -Cyclodextrin ( -CD) optimierte Poly(lactid-co-glycolid) (PLGA)-Mikrokügelchen die NO-Produktion von BV-2-Zellen im In-vitro-Modell von murinem BV wirksam unterdrücken -2 Mikrogliazellen, die durch LPS stimuliert werden, was darauf hinweist, dass die Mikrosphären die Entzündung aktivierter Mikrogliazellen unterdrücken können [28].

Obwohl grüner Tee ein tägliches Getränk ist, ist die Wirksamkeit von Katechinen aufgrund der geringen oralen Bioverfügbarkeit unwirksam; daher werden wirksame pharmazeutische Dosierungsformen benötigt. Nano-Wirkstoffträger haben die Vorteile, dass sie einen vorzeitigen Metabolismus vermeiden, die Wirkungszeit des Arzneimittels verlängern und die Arzneimittelabgabe gezielt steuern. Daher beabsichtigt diese Studie, Liposomen zu entwickeln, die Phosphatidylcholin (PC) und Phosphatidylserin (PS), ähnliche Bestandteile der Zellmembran, als entzündungshemmende Darreichungsformen enthalten. Aus Grünteeblättern extrahiertes EGCG wurde in Liposomen geladen, um durch LPS induzierte Entzündungsreaktionen in Mikrogliazellen zu verlangsamen. Die therapeutische Wirkung von EGCG-beladenen Liposomen auf das In-vivo-Modell von PD zur Neuroprotektion wurde ebenfalls bewertet.

2. Ergebnisse

2.1. Extraktion von EGCG

2.1.1. EGCG-Extrakt

Die Epigallocatechin{{0}}-Gallat-Charakterisierungsdaten finden Sie in der Supplementary File (Abbildungen S1 und S2). 2.1.2. Verschiedene Formulierungen von EGCG In Tabelle 1 waren die durchschnittlichen Partikeldurchmesser von Placebo-PS-, PS-EGCE- und PS-EGCG-VE-Liposomen kleiner als die von Placebo-PC-, PC-EGCE- und PC-EGCG-VE- Liposomen bzw. Da PC neutral und PS negativ geladen ist [29], deutet dies darauf hin, dass das additive Oberflächenpotential die Partikelgröße beeinflusst. Der Polydispersitätsindex (PDI) aller Liposomen war kleiner als 0,22, was anzeigt, dass die Struktur der Liposomen in Lösung stabil ist. Die negativen Ladungen von PS führten zu einer Abstoßungskraft auf das Oberflächenpotential zwischen PS-Liposomen, wodurch eine Aggregation vermieden und die Größe von PS-Liposomen verringert wurde.

Die Einkapselungseffizienz/Größe der in Tabelle 1 beschriebenen PS-enthaltenden Liposomen war größer/kleiner als die der entsprechenden PC-enthaltenden Liposomen [30]. Die Einkapselungseffizienz von PC-EGCG-VE-Liposomen und PS-EGCG-VE-Liposomen war größer als die von PC-EGCG-Liposomen bzw. PS-EGCG-Liposomen. Dies liegt daran, dass Vitamin E fettlöslich ist, in eine Phospholipid-Doppelschichtmembran eingebettet ist und einen antioxidativen Schutz für EGCG bietet.

2.2. In-vitro-Zellanalyse

2.2.1. Zellengesundheit

Die Zelllebensfähigkeit von Zellen, die mit EGCG von 50 bis 400 µM behandelt wurden, war im Vergleich zur Kontrollgruppe signifikant verringert (Abbildung 1A). Im Gegensatz dazu ist die Lebensfähigkeit von Zellen, die 5 bis 25 &mgr;M erhalten, ähnlich der Lebensfähigkeit der Zellen der Kontrollgruppe. Die in dieser Studie verwendete EGCG-Konzentration wurde auf 25 &mgr;M bestimmt. In ähnlicher Weise wurde die zur Induktion der Zellentzündung verwendete LPS-Konzentration gemäß Fig. 1B auf 50 ng/ml bestimmt. In Fig. 1C war die Zelllebensfähigkeit von Zellen, die mit Placebo-Liposomen aller Konzentrationen kokultiviert wurden, im Vergleich zur Kontrollgruppe statistisch nicht signifikant. Daher sind Placebo-Liposomen für Mikrogliazellen nicht zytotoxisch.

2.2.2. Zellmorphologie

Die Zellmorphologie der Kontrollgruppe (Abbildung 2A) und die Morphologie der mit 25 μM EGCG behandelten Zellen (Abbildung 2B) waren kugelförmig, während die Morphologie der mit 50 ng/ml LPS behandelten Zellen (Abbildung 2C) spindelförmig war. Die Morphologie der mit 25 uM EGCG behandelten und durch LPS aktivierten Zellen (Fig. 2D) war jedoch kugelförmig. Dies deutet darauf hin, dass EGCG die durch LPS induzierte Aktivierung hemmen kann. Daher hat die Vorbehandlung mit EGCG eine hemmende Wirkung auf die Neuroinflammation und schützt die Mikrogliazellen vor einer Aktivierung.

2.2.3. Keine Veröffentlichung

In Abbildung 3A war die NO-Freisetzung aus BV-2-Zellen, die mit 5–1000 ng/ml LPS während einer 24-stündigen Inkubation induziert wurde, im Vergleich zur NO-Freisetzung aus der Kontrollgruppe statistisch signifikant. Die LPS-Konzentration, die zur Aktivierung der Zellentzündung zum Arbeiten verwendet wurde, wurde mit 50 ng/ml bestimmt.

Die NO-Freisetzung aus BV-2-Zellen, die mit 25 µM EGCG behandelt wurden, war im Vergleich zur Kontrollgruppe statistisch nicht signifikant, wie in Abbildung 3B gezeigt. Die mit LPS für 24 h induzierte Zellentzündung zeigte jedoch einen signifikanten Anstieg im Vergleich zur Kontrollgruppe. Diejenigen Zellen, die 1 h lang mit 25–200 µM EGCG behandelt und dann mit LPS aktiviert wurden, zeigten eine statistisch signifikante Abnahme im Vergleich zu der Gruppe von Zellen, die nur mit LPS aktiviert wurden. Die NO-Freisetzung nahm nicht ab, wenn EGCG von 50 auf 200 µM anstieg, da die Zelllebensfähigkeit abnahm, wenn EGCG von 50 auf 200 µM angestiegen war, gemäß Abbildung 1A.

Die NO-Produktion der mit 25 &mgr;M EGCG behandelten Zellen, gefolgt von der mit 50 ng/ml LPS induzierten Entzündung, war im Vergleich zur Kontrollgruppe statistisch nicht signifikant ( 3C ). Jedoch zeigte das freigesetzte NO in der Gruppe von Zellen, die mit PC-EGCG-Liposomen oder PC-EGCG-VE-Liposomen behandelt wurden, gefolgt von einer LPS-Aktivierung mit 50 ng/ml, eine signifikante Abnahme im Vergleich zu der Gruppe von Zellen, die nur mit LPS behandelt wurden. Die NO-Freisetzung aus mit PC-EGCG-Liposomen oder PC-EGCG-VE-Liposomen vorbehandelten Zellen war höher als die NO-Freisetzung aus der mit EGCG vorbehandelten Zellgruppe, was durch die langsame Freisetzung von EGCG aus den Liposomen erklärt werden sollte.

2.2.4. Zytokin-Analyse

In 4A zeigte die Konzentration von TNF – von mit LPS behandelten Zellen nach 24 h einen statistisch signifikanten Anstieg im Vergleich zu der Kontrollgruppe oder dem Zellkulturmedium (DMEM). Placebo-PC-Liposomen waren ähnlich denen von Zellen, die mit LPS behandelt wurden. Jedoch zeigte die TNF-Konzentration in der Gruppe von Zellen, die mit PS-EGCG-Liposomen oder PS-EGCG-VE-Liposomen vorbehandelt wurden, gefolgt von der LPS-Aktivierung, eine statistisch signifikante Abnahme im Vergleich zu der von Zellen, die mit LPS behandelt wurden. Diese abnehmende TNF-Konzentration weist darauf hin, dass mit EGCG beladene Liposomen die durch LPS induzierte Aktivierung von Mikrogliazellen verringern können. Die inhibitorische Wirkung von PS-EGCG-VE-Liposomen war besser als die von PS-EGCG-Liposomen.

Die Phospholipide auf der Zellmembran können durch zytosolische Phospholipase A2 (cPLA2) hydrolysiert werden, um Arachidonsäure zu produzieren. Cyclooxygenase (COX) ist ein Schlüsselenzym, das Arachidonsäure in Prostaglandin umwandelt. COX-2 und cPLA2 werden oft durch Entzündungen oder bösartige Erkrankungen erzeugt [31–34]. In Abbildung 4B wurde die Entzündung durch LPS von 5–50 ng/ml für 24 h induziert, und die Expression von cPLA2 nahm zu, wenn die LPS-Konzentration zunahm. Abbildung 4C zeigte die erhöhten Aktivitäten von COX-2, induziert durch LPS (5–50 ng/mL) für 24 h. Die Expression von COX-2 nahm von 5–25 ng/ml LPS zu, während sie bei 50 ng/ml abnahm. In Abbildung 4D wurde die cPLA2-Expression reduziert, wenn BV-2-Zellen mit EGCG vorbehandelt und durch LPS induziert wurden. Die Expression von COX-2 bei LPS-aktivierten BV-2-Zellen war im Vergleich zur Kontrollgruppe erhöht (Abbildung 4E). Es gab eine signifikante Abnahme von COX-2 in der Gruppe von Zellen, die mit EGCG, Placebo-PS-Liposomen, PS-EGCG-Liposomen und PS-EGCG-VE-Liposomen vorbehandelt wurden, gefolgt von LPS-Entzündungsinduktion. Insbesondere die Expression von COX-2 von mit Placebo-PS-Liposomen vorbehandelten Zellen wies einen statistisch signifikanten Unterschied zu der von durch LPS induzierten Zellen auf.

2.3. In-vivo-Tierversuch

2.3.1. Tierisches Verhalten

Test Die Anzahl der Kreise, die von den Parkinson-Ratten nach der Amphetaminverabreichung (gezeigt in Fig. 5A) vollendet wurden, war signifikant erhöht im Vergleich zu der Anzahl der Kreise, die von den Ratten der Kontrollgruppe vollendet wurden. Das Verhalten von Parkinson-Ratten0, die mit den verschiedenen Formulierungen von EGCG behandelt wurden, war ähnlich wie das der Ratten der Kontrollgruppe. Diese Daten zeigten, dass EGCG LPS-induzierte einseitige Läsionen des nigrostriatalen Systems abschwächte. 2.3.2. Analyse der Entzündungsmarker Das Verhältnis von TNF-/GAPDH in der behandelten Gruppe war signifikant niedriger im Vergleich zu dem Verhältnis, das bei syndromalen Ratten gefunden wurde. Der IL-1-Trend war dem TNF-Trend ähnlich. Die In-vivo-Ergebnisse stimmen mit den Ergebnissen von In-vitro-Studien überein. Die Expression des vom Gehirn stammenden neurotrophen Faktors (BDNF) in der behandelten Gruppe war ähnlich wie in der LPS-induzierten Gruppe (Fig. 5D). Dieses Ergebnis könnte jedoch darauf hindeuten, dass die Verbesserung der Gliedmaßenkoordination bei Parkinson-Syndrom-Ratten durch PC-EGCG-beladene Liposomen durch eine Verringerung der Neuroinflammationsreaktion verursacht wird, aber nicht durch eine erhöhte Expression von BDNF.

Es passt auch zu früheren Berichten, dass die Verringerung der TNF- und NO-Produktion durch Vorbehandlung von Ratten mit EGCG (10 mg/kg) für 24 h und Induktion mit LPS nach 7 Tagen im Vergleich zu der von LPS-behandelten Ratten abnahm, und schlussfolgerte, dass EGCG dies getan hat eine potenzielle therapeutische Wirkung für LPS-induzierte Neurotoxizität aufgrund einer Verringerung der TNF- und NO-Freisetzung.

3. Diskussion

In dieser Studie wurde festgestellt, dass die Reinheit von aus grünem Tee extrahiertem EGCG 90,5 Prozent beträgt, und die Radikalfängeraktivität von EGCG war innerhalb von 3 Minuten größer als 80 Prozent. Sie stieg mit höherer EGCG-Konzentration oder längerer Reaktionszeit an. Die Partikelgröße von PC-EGCG-VE- und PS-EGCG-VE-Liposomen betrug 161,5 und 142,9 nm, was kleiner war als die von EGCG, das in PLGA-Mikrosphären [28] mit zusätzlichem -Cyclodextrin (im Bereich von 1–14 µm) beladen war. . Die Verkapselungseffizienz von PC-EGCG-VE- und PS-EGCG-VE-Liposomen betrug 60,2 Prozent bzw. 76,8 Prozent. Diese Ergebnisse zeigten, dass PS-enthaltende Liposomen kleiner und stabiler waren und aufgrund der Ladung auf PS eine höhere Einkapselungseffizienz aufwiesen und zu einer Abstoßungskraft zwischen den Liposomen führten, um eine Aggregation zu vermeiden.

Die Expression von TNF – in Zellen, die mit PS-EGCG- und PS-EGCG-VE-Liposomen vorbehandelt und dann durch LPS induziert wurden, wies statistisch signifikante Unterschiede im Vergleich zu der von Zellen auf, die mit LPS induziert wurden, und ähnliche Ergebnisse wurden bei der Vorbehandlung von EGCG auf LPS beobachtet -induzierte TNF-Expression in BV-2-Zellen [25] und menschlichen Makrophagen [26]. Zusammenfassend zeigten die Zellmorphologie und die Expression von TNF – der mit EGCG behandelten Gruppe eine Hemmwirkung auf die durch LPS induzierte Entzündung.

In der vorliegenden Studie kann die EGCG-Vorbehandlung die Freisetzung von NO reduzieren. Die Unterdrückung der NO-Produktion von LPS-induzierten BV-2-Zellen durch Vorbehandlung von EGCG-beladenen PLGA-Mikrokügelchen wurde auch in unserer früheren Studie untersucht [28].

In der vorliegenden Studie wird das Parkinson-Syndrom bei Ratten durch die durch LPS induzierte Schädigung der einseitigen Substantia nigra-Region erzeugt. Ein weiteres wichtiges Ergebnis ist, dass durch statistische quantitative Analyse EGCG-beladene Liposomen das Syndrom aufgrund der durch LPS im Rotationstest induzierten Schädigung der einseitigen Mittelhirn-Nigrosinregion des Rattenhirns und der Produktion des neuroinflammatorischen Faktors TNF- in der Substantia lindern können nigra-Bereich des Rattenhirns kann auch durch EGCG-beladene Liposomen reduziert werden. Diese Studie weist darauf hin, dass die Verbesserung der Gliedmaßenkoordination und die Verringerung der Neuronenentzündung beim LPS-induzierten Parkinson-Syndrom durch die lokale Verabreichung von EGCG-beladenen Liposomen verursacht wird, aber nicht durch die Erhöhung der Expression von BDNF. Die Anti-Neuroinflammation-Ergebnisse sind jedoch für eine neuroprotektive Wirkung notwendig [35]. Die BV-2-Aktivierung setzt entzündungsfördernde Faktoren frei, die neurotoxisch sind und zu Zellschäden führen. Durch die Verhinderung der BV-2-Aktivierung bietet EGCG eine neuroprotektive Wirkung. Eine gewisse Nachbehandlung mit EGCG zur Verbesserung der Proliferation, Überlebensrate und neuronalen Differenzierung von adulten neuralen Stammzellen in durch LPS induziertem Gyrus dentatus weist darauf hin, dass EGCG ein potenzielles therapeutisches Mittel für neuroinflammatorische Erkrankungen sein könnte [27].

Frühere pharmakokinetische Studien zeigten, dass exogenes PS die Blut-Hirn-Schranke (BBB) ​​passieren kann, in der es eine Affinität zum Hypothalamus zu haben scheint [6], und die orale Verabreichung zu Spitzenwerten in 1–4 Stunden führt. Darüber hinaus wurde festgestellt, dass PS-haltige Liposomen apoptotische Zellen imitieren, um die Sekretion von entzündungshemmenden Mediatoren wie dem transformierenden Wachstumsfaktor - 1 (TGF- 1) zu fördern (um das von Makrophagen produzierte NO herunterzuregulieren). [36] und Prostaglandin E2 (PGE2) durch Makrophagen und Mikrogliazellen in vitro [6,37] und fördern auch die Linderung von Entzündungen in vivo [38]. Dementsprechend haben PS-enthaltende, mit EGCG beladene Liposomen, die in dieser Studie gezeigt wurden, den Vorteil einer kleineren Partikelgröße, einer höheren Verkapselungseffizienz und einer Hemmung der Aktivierung des Parkinson-Syndroms sowohl in Mikrogliazellen als auch im Vivo-Rattenmodell, was eine verbesserte entzündungshemmende Funktion und zeigt Neuroprotektion.

Die Einschränkung besteht darin, dass unsere Studie mit einigen fehlenden Analysen durchgeführt wurde, wie zum Beispiel im Fall der neuroprotektiven Wirkung, und die NeuN-Färbung nicht untersucht wurde. Wir haben auch nur BDNF als neurotrophen Faktor analysiert. FGF2 und IGF2 sind ebenfalls zu berücksichtigende neurotrophe Faktoren [39].

5. Schlussfolgerungen

Um die geringe orale Bioverfügbarkeit von Catechinen zu verbessern, wurde EGCG in dieser Studie in Liposomen geladen. Es wurde festgestellt, dass PS-enthaltende Liposomen kleiner und stabiler waren. Es hat eine höhere Verkapselungseffizienz, und die Zugabe von Vitamin E kann EGCG vor Oxidation schützen und die Verkapselungseffizienz verbessern. In der In-vitro-Studie waren die Expressionen der TNF- und NO-Produktion von BV-2-Zellen alle nach Vorbehandlung von EGCG-beladenen Liposomen auf LPS-induzierten BV-2-Zellen reduziert. Daher haben die EGCG-beladenen Liposomen als Inhibitor eine wesentliche Rolle bei der neuroinflammatorischen Reaktion gespielt. Die vorteilhaften Wirkungen bestanden darin, Zellen bei den neuroinflammatorischen Reaktionen an der Apoptose zu hindern.

In einer In-vivo-Studie wurde das durch LPS induzierte Parkinson-Syndrom bei Ratten in der Substantia-nigra-Region des einseitigen Mittelhirns verbessert. Der neuroinflammatorische Mechanismus, einschließlich der TNF-Sekretion, wurde durch die Nachbehandlung mit EGCG-beladenen Liposomen gehemmt. Wir haben gezeigt, dass EGCG ein wertvollerer Kandidat für die Behandlung neurodegenerativer Erkrankungen wäre, indem es die Entzündung im Gehirn lindert. Die anschließende Untersuchung sollte sich auf die Entzündungswege konzentrieren, indem ein Lysosom-Tracker verwendet wird, um den Eintritt des Liposoms in die Zelle und die Freisetzung von EGCG aus dem Liposom zu verfolgen.

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