Hochsensible und ökologisch nachhaltige Umkehrphasen-HPTLC-Methode zur Bestimmung von Hydrochinon in handelsüblichen Aufhellungscremes

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Mohammed H. Alqarni 1, Prawez Alam 1, Faiyaz Shakeel 2, Ahmed I. Foudah 1 und Sultan Alshehri 2,*

Abstrakt: Hydrochinon(HDQ) ist ein natürliches Depigmentierungsmittel, das üblicherweise in Hauttonisierungspräparaten verwendet wird. Die Sicherheit und Ökologie analytischer Methoden zur HDQ-Quantifizierung wurde in der bisherigen Literatur nicht berücksichtigt. Daher wurde ein hochempfindlicher und ökologisch umweltfreundlicherer Umkehrphasen-Hochleistungs-Dünnschichtchromatographie (RP-HPTLC)-basierter Assay für die HDQ-Abschätzung in vier verschiedenen kommerziellen Anwendungen etabliertAufhellungCremes (CWCs). Als grünes Lösungsmittelsystem wurde das binäre Ethanol-Wasser-Gemisch (60:40, v·v−1) verwendet. Die Schätzung von HDQ wurde bei 291 nm durchgeführt. Der vorliegende RP-HPTLC-basierte Assay war im Bandbereich von 20–2400 ng −1 linear. Basierend auf den Nachweis- und Quantifizierungsdaten war das vorliegende Analyseverfahren hochempfindlich. Auch die anderen Validierungsparameter wie Genauigkeit, Präzision und Robustheit waren für die HDQ-Bestimmung geeignet. Maximale HDQ-Mengen wurden in CWC A (1,23 Prozent w·w – 1) erhalten, gefolgt von CWC C (0,81 Prozent w·w – 1), CWC D (0,43 Prozent w·w – 1) und CWC B (0,37 Prozent w· w−1). Der analytische GREEnness (AGREE)-Score für das vorliegende Analyseverfahren wurde auf 0,91 geschätzt, was auf die hervorragenden umweltfreundlicheren Eigenschaften des vorliegenden RP-HPTLC-Assays hinweist. Diese Ergebnisse legen nahe, dass das vorliegende Analyseverfahren für die Quantifizierung von HDQ in seinen kommerziellen Formulierungen hochempfindlich und ökologisch nachhaltig ist.

Schlüsselwörter:zustimmen;Hydrochinon; ökologisch nachhaltiges RP-HPTLC; Validierung

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1. Einleitung

Hydrochinon(HDQ) ist eine natürliche Verbindung, die in mehreren hauttonisierenden kommerziellen Formulierungen zur Behandlung von Melasma (einer Krankheit, die durch die übermäßige Ansammlung von Melanin in der menschlichen Haut verursacht wird) enthalten ist [1,2]. Es ist ein starkes Depigmentierungsmittel und wird als Alternative zu Tyrosinase verwendet [3]. Es ist eines der am häufigsten verwendeten Mittel bei der Behandlung von Hyperpigmentierung der menschlichen Haut [4,5]. Die wirksame HDQ-Konzentration in handelsüblichen Hauttonisierungsformulierungen variiert zwischen 1,5 und 2,0 Prozent w·w−1[6]. Die hohe Konzentration von HDQ (über 5 Prozent w·w−1) verursacht lokale Reizungen und Leukodermie auf der menschlichen Haut [5,6]. Aufgrund seiner umstrittenen Nebenwirkungen haben viele Länder HDQ als Medikament verbotenAufhellungWirkstoff in topischen Formulierungen [7]. Nichtsdestotrotz haben mehrere klinische Untersuchungen verschiedene Schutzwirkungen nahegelegtHDQbei der Behandlung verschiedener hyperpigmentärer Hauterkrankungen wie Melasma, Sommersprossen, Lentigines usw. [8,9]. Unter Berücksichtigung sowohl der Vorteile als auch der Risiken von HDQ ist seine quantitative Analyse in verschiedenen kommerziellen Hauttonisierungsformulierungen erforderlich.

Verschiedene pharmazeutische Assays werden zur Quantifizierung von HDQ entweder allein oder in Kombination mit anderen verwendetAufhellungWirkstoffe in handelsüblichen Aufhellungscremes (CWCs). Eine Vielzahl von UV-Spektrometrie-basierten Tests wurde für die quantitative Analyse von HDQ in kommerziellen Aufhellungsprodukten (CWPs) und pharmazeutischen Präparaten dokumentiert [10–13]. Für die Bestimmung von HDQ zusammen mit seinen Ethern in einer Vielzahl von CWCs und CWPs wurde eine breite Palette von Assays auf Basis von Hochleistungsflüssigkeitschromatographie (HPLC) dokumentiert [14–23]. Auch zur simultanen Bestimmung von HDQ und seinen Etherderivaten in CWPs haben sich verschiedene voltametrische Methoden etabliert [24–29]. Einige andere analytische Assays wie die elektrochemische Durchflussinjektion [30], die mizellare elektrokinetische Chromatographie [31], die Kapillarelektrochromatographie [32] und auf Nanokompositen [33] basierende Assays wurden ebenfalls für die etabliertHDQAnalyse zusammen mit seinen Etherderivaten und anderenAufhellungAgenten in CWPs. Einige Nanosensoren auf elektrochemischer Basis wurden auch für die HDQ-Analyse beschrieben [34,35]. Eine einzelne Normalphasen-Hochleistungs-Dünnschichtchromatographie (HPTLC)-basierte Methode wurde auch von unserer Forschungsgruppe zur qualitativen und quantitativen Analyse von HDQ in CWCs angewendet [1].

Nach einer umfassenden Analyse der veröffentlichten Essays zur HDQ-Analyse wurde festgestellt, dass die Sicherheit und ökologische Nachhaltigkeit der pharmazeutischen Methoden in der Literatur nicht bewertet oder für eine Bewertung in Betracht gezogen wurden. Darüber hinaus wurden die umweltfreundlichen/ökologisch nachhaltigen Umkehrphasen-HPTLC (RP-HPTLC)-basierten Assays noch nicht zur Schätzung von verwendetHDQin seinen CWCs. Ökologisch nachhaltige/grüne HPTLC-basierte Assays bieten gegenüber HPLC und anderen Analysemethoden viele Vorteile wie Einfachheit, Wirtschaftlichkeit, niedrige Betriebskosten, kurze Analysezeit, parallele Analyse mehrerer Proben, Klarheit der Detektion und Verringerung der Umwelttoxizität [36–39]. Dementsprechend wurde für diese Studie ein RP-HPTLC-Verfahren zur Bestimmung von HDQ ausgewählt. Für die Bewertung des Greenness-Profils der pharmazeutischen Assays werden verschiedene Ansätze verwendet [38–43]. Dennoch wendet nur der analytische GREEnness (AGREE) metrische Ansatz alle 12 Prinzipien der grünen analytischen Chemie (GAC) für die Ökobilanzierung an [42].

Der metrische AGREE-Ansatz wurde für die Bewertung der Grünheit der vorliegenden RP-HPTLC-Methode angewendet [42]. Daher wurde die vorliegende Arbeit durchgeführt, um ein hochempfindliches und grünes/ökologisch nachhaltiges RP-HPTLC-Verfahren zur Bestimmung von zu entwickelnHDQin vier verschiedenen CWCs. Das Grünheitsprofil des vorliegenden RP-HPTLC-Verfahrens wurde von AGREE: The Analytical Greenness Calculator erhalten. Der vorliegende analytische Assay für die HDQ-Analyse wurde gemäß den Q2 (R1)-Richtlinien des International Council for Harmonization (ICH) validiert [44].

2. Materialien und Methoden

2.1. Materialien

Der Referenzstandard von HDQ (Reinheit: 99 Prozent) wurde von Fluka Chemica (Darmstadt, Deutschland) bezogen. Methanol (MeOH) und Ethanol (EtOH) in HPLC-Qualität wurden von Alfa Aesar (Tewksbury, MA, USA) bezogen. Wasser in HPLC-Qualität (H 2 O) wurde aus einem Milli-Q-Wasserreinigungssystem (E-Merck, Darmstadt, Deutschland) gesammelt. Andere verwendete Lösungsmittel und Reagenzien waren von analytischer Qualität. Vier verschiedene CWCs von HDQ wurden im Juni 2021 von einem Pharmamarkt in Al-Kharj, Saudi-Arabien, bezogen. Die CWCs vonHDQwurde vor Versuchsbeginn kühl und dunkel bei 22 ◦C gelagert. Die CWCs wurden vor Versuchsbeginn etwa einen Monat gelagert.

2.2. Chromatographie

Die densitometrische RP-HPTLC-Quantifizierung von HDQ in seinem Referenzstandard und vier verschiedenen CWCs wurde unter Verwendung eines HPTLC-Instruments (CAMAG, Muttenz, Schweiz) durchgeführt. Die quantitative Analyse von HDQ wurde auf 10 × 20 cm2 großen Platten mit Glasrückseite durchgeführt, die mit RP-Kieselgel 60 F254S-Platten (E-Merck, Darmstadt, Deutschland) vorbeschichtet waren. Die Proben auf den TLC-Platten wurden als 6-mm-Banden aufgetupft unter Verwendung eines Automaticsampler 4 (ATS4)-Applikators (CAMAG, Genf, Schweiz). Der Probenapplikator wurde mit einer CAMAG-Mikroliterspritze (Hamilton, Bonaduz, Schweiz) ausgestattet. Die Auftragsrate für die quantitative Analyse vonHDQwurde konstant bei 150 nL s−1 gehalten. Die Platten wurden in einer automatischen Entwicklungskammer 2 (CAMAG, Muttenz, Schweiz) bei 80 mm Abstand entwickelt. Das grüne Lösungsmittelsystem für die HDQ-Analyse war EtOHH2O (60:40, v·v−1). Die Entwicklungskammer wurde zuvor für 30 min bei 22 ◦C mit den Dämpfen der mobilen Phase gesättigt. Das HDQ wurde bei 291 nm nachgewiesen. Die Spaltabmessungen betrugen 4 × 0,45 mm2 und die Abtastrate 20 mm s−1. Jedes Experiment wurde dreifach durchgeführt. Die für die Datenverarbeitung verwendete Software war WinCATs (v. 1.4.3.6336, CAMAG, Muttenz, Schweiz).

2.3. HDQ-Kalibrierkurve und Vorbereitung von Qualitätskontrollproben

Die angegebene Menge HDQ (10 mg) wurde in 100 ml EtOH-H2O (60:40, v·v−1) grünes Lösungsmittelsystem dispensiert, um die Stammlösung mit einer Konzentration von 100 µg ml−1 zu erhalten. Die unterschiedlichen Volumina der Stammlösungen wurden unter Verwendung von EtOH-H2O-Systemen (60:40, v·v−1) weiter verdünnt, um HDQ-Konzentrationen im Bereich von 20–2400 ng Band−1 zu erreichen. Die erhaltenen Lösungen vonHDQmit unterschiedlichen Konzentrationen wurden auf HPTLC-Platten getüpfelt. Die HPTLC-Peakfläche für HDQ wurde für jede HDQ-Lösung unter Verwendung des vorliegenden pharmazeutischen Assays erhalten. Die Kalibrierungskurve von HDQ wurde durch Auftragen der HDQ-Konzentrationen gegen seine HPTLC-Fläche erstellt. Zusätzlich drei verschiedene Qualitätskontrollproben (QC), wie Proben mit niedriger QC (LQC; 20 ng Band – 1), mittlerer QC (MQC; 600 ng Band – 1) und Proben mit hoher QC (HQC; 2400 ng Band – 1). , wurden separat erhalten, um verschiedene Validierungsparameter für den vorliegenden pharmazeutischen Assay zu bestimmen.

2.4. Probenverarbeitung für die HDQ-Bestimmung in CWCs

Der HDQ wurde aus vier verschiedenen CWCs extrahiert, indem das in der Literatur beschriebene Verfahren übernommen wurde [1]. Die genau abgewogenen (5,0 g) Mengen von vier verschiedenen CWCs, darunter A, B, C und D, wurden getrennt in den Scheidetrichter überführt. Jedes CWC wurde im Scheidetrichter mit MeOH (3 × 70 ml) für einen Zeitraum von 30 min bei 22 °C geschüttelt. Die MeOH-Extrakte von jedem CWC wurden vereinigt und separat unter reduziertem Druck mit einem Rotationsvakuumverdampfer zur Trockne eingedampft. Die erhaltenen Rückstände wurden mit 10 ml MeOH rekonstituiert und bis zur weiteren Auswertung in einem Kühlschrank aufbewahrt. Die erhaltenen Proben wurden einer HDQ-Analyse unter Verwendung des vorliegenden Analyseverfahrens bei 291 nm unterzogen.

2.5. Validierungsparameter

Der vorliegende RP-HPTLC-Assay für die HDQ-Analyse wurde anhand der ICH-Q2 (R1)-Richtlinien für verschiedene Validierungsparameter validiert [44]. DasHDQDie Linearität wurde bewertet, indem die HDQ-Konzentrationen gegen die gemessene Peakfläche aufgetragen wurden. Die HDQ-Linearität wurde bei 11 verschiedenen QC-Proben mit Banden von 20, 40, 60, 100, 200, 300, 400, 500, 600, 1200 und 2400 ng –1 für den vorliegenden pharmazeutischen Assay bewertet. Die Parameter der Systemeffizienz für das vorliegende Analyseverfahren wurden hinsichtlich des Verzögerungsfaktors (Rf), des Asymmetriefaktors (As) und der Anzahl der theoretischen Böden pro Meter (N m – 1) bewertet. Rf, As und Nm-1 wurden bei MCQ (600 ng Band-1) erhalten, wie zuvor in der Literatur berichtet [45].

Die Genauigkeit der vorliegenden RP-HPTLC-Methode wurde als prozentuale Wiederfindung bestimmt. Die prozentuale Wiederfindung wurde bei LQC (20 ng Band – 1), MQC (600 ng Band – 1) und HQC (2400 ng Band – 1) für erhalten die jetzige Analysemethode.

Die Präzision für das vorliegende Analyseverfahren wurde als Intra-/Interday-Präzision bewertet. Die Intraday-Präzision wurde durch die Analyse von HDQ bei LQC, MQC und HQC am selben Tag für den vorliegenden analytischen Assay bestimmt. Die Präzision zwischen den Tagen wurde durch die Analyse von HDQ bei LQC, MQC und HQC an drei verschiedenen Tagen für den vorliegenden analytischen Assay bestimmt [44]. Jede Genauigkeit wurde sechsmal gemessen (n=6).

Die Robustheit wurde bewertet, indem einige kleine Änderungen in den grünen Lösungsmittelsystemen für das vorliegende RP-HPTLC-Verfahren eingeführt wurden. Zur Robustheitsbewertung wurde das ursprüngliche Lösungsmittelsystem EtOH H2O (60:40, v·v−1) zu EtOH-H2O (62:38, v·v−1) und EtOHH2O (58:42, v·v−1) geändert ) Lösungsmittelsysteme, und die spezifische HPTLC-Antwort und Rf-Werte wurden aufgezeichnet und interpretiert [44].

Die Empfindlichkeit für das vorliegende Analyseverfahren wurde als Nachweisgrenze (LOD) und Quantifizierungsgrenze (LOQ) unter Verwendung einer Standardabweichungsmethode bewertet. Die LOD und LOQ von HDQ für das vorliegende Analyseverfahren wurden berechnet, wie in der Literatur berichtet [44,45].

Die Spitzenreinheit/Spezifität wurde durch Vergleich der Rf-Werte und UV-Spektren von HDQ in den CWCs A, B, C und D mit denen von Standard-HDQ für den vorliegenden pharmazeutischen Assay bewertet.

2.6. Quantitative Analyse von HDQ in CWCs

Die erhaltenen Proben von CWC A, B, C und D wurden auf HPTLC-Platten aufgetragen und ihre DC-Antworten wurden notiert. Der Spitzenbereich fürHDQin CWCs wurde erfasst. Die HDQ-Gehalte in CWCs wurden unter Verwendung der Kalibrierungskurve von HDQ für das vorliegende analytische Verfahren berechnet.

2.7. Ökologische Bewertung

Die Grünheitseigenschaften für das vorliegende Analyseverfahren wurden unter Verwendung des metrischen AGREE-Ansatzes [42] erhalten. Die AGREE-Scores (0.0–1.0) der vorliegenden Analysemethode wurden unter Verwendung des AGREE: The Analytical Greenness Calculator (Version0.5, Universität Danzig) aufgezeichnet of Technology, Danzig, Polen, 2020).

3. Ergebnisse und Diskussion

3.1. Methodenentwicklung

Basierend auf literaturanalytischen Methoden wurde festgestellt, dass die ökologisch nachhaltige fähige/grüne RP-HPTLC-Methode zur Analyse von HDQ in kommerziellen Kosmetika fehlt. Daher wurde die vorliegende Studie durchgeführt, um die schnelle, hochempfindliche und ökologisch nachhaltige Methode zu entwickeln RP-HPTLC-Methode zur HDQ-Analyse in CWCs.

Für die RP-HPTLC-Analyse von HDQ, verschiedene Anteile von EtOH und H2O, einschließlich EtOH-H2O (50:50, v·v−1), EtOH-H2O (60:40, v·v−1), EtOH-H2O (70:30, v·v−1), EtOH H2O (80:20, v·v−1) und EtOH-H2O (90:10, v·v−1) wurden als grüne Lösungsmittelkombinationen für die bewertet Entwicklung eines zuverlässigen Bandes für die HDQ-Analyse. Die Lösungsmittelgemische wurden unter Kammersättigungsbedingungen entwickelt. Aus den aufgezeichneten Daten geht hervor, dass EtOH-H2O (50:50, v·v−1), EtOH-H2O (70:30, v·v−1), EtOH-H2O (80:20, v·v− 1) und EtOH-H2O (90:10, v·v−1) grüne Lösungsmittelgemische boten ein schlechtes Chromatogramm vonHDQmit einem nicht akzeptablen As-Wert (As {{0}}.29). Allerdings hatte die grüne Lösungsmittelkombination EtOH-H2O (60:40, v·v−1) gezeigt, dass sie ein gut aufgelöstes Chromatogramm von HDQ bei Rf=0,83 ± 0,02 mit einem akzeptablen As-Wert (As {{ 12}}.03) (Abbildung 1). Daher wurde EtOH H2O (60:40, v·v−1) als grüne Lösungsmittelgemische für die HDQ-Analyse in den CWCs optimiert. Die UV-Spektralbanden für das vorliegende RP-HPTLC-Verfahren wurden densitometrisch aufgezeichnet, und die maximale HPTLC-Antwort wurde bei 291 nm für das vorliegende RP-HPTLC-Verfahren gefunden. Daher wurde die gesamte HDQ-Analyse bei 291 nm durchgeführt.

3.2. Validierungsparameter

Der vorliegende pharmazeutische Assay für die HDQ-Quantifizierung wurde gemäß den ICH-Empfehlungen auf Linearitätsbereich, Systemeffizienzparameter, Genauigkeit, Präzision, Robustheit, Empfindlichkeit und Spitzenreinheit/Spezifität validiert [44]. Die Ergebnisse für die Regressionsanalyse der kleinsten Quadrate der Kalibrierungskurve von HDQ für das vorliegende RP-HPTLC-Verfahren sind in Tabelle 1 dargestelltHDQDie Kalibrierkurve war im Bereich der 20-2400-ng-Bande linear mit einem Bestimmungskoeffizienten von 0,9997 für die vorliegende Analysemethode. diese Daten deuteten auf eine gute Linearität zwischen der HDQ-Konzentration und ihrer Reaktion hin.

Die Systemeffizienzparameter des vorliegenden pharmazeutischen Verfahrens wurden bei MQC (600 ng-Band – 1) untersucht, und die Ergebnisse sind in Tabelle 2 enthalten. Die Rf-, As- und N m –1-Werte für die vorliegende Analysemethode wurden als 0,83 ± 0,02, 1,03 ± 0,03 bzw. 4987 ± 2,87 vorhergesagt. Diese Ergebnisse zeigten, dass das vorliegende Analyseverfahren für die HDQ-Analyse in den CWCs zuverlässig war.

Die Ergebnisse der Genauigkeitsanalyse für das vorliegende Analyseverfahren sind in Tabelle 3 aufgeführt. Die prozentuale Wiederfindung von HDQ für das vorliegende RP-HPTLC-Verfahren wurde mit 101,80 Prozent, 98,16 Prozent und 99,38 Prozent bei LQC, MQC bzw. HQC bestimmt . Die hohen Werte der prozentualen Wiederfindung zeigten die Genauigkeit des vorliegenden RP-HPTLC-Verfahrens für die HDQ-Analyse in den CWCs.

Die Präzision wurde als Prozentsatz des Variationskoeffizienten (Prozent CV) bestimmt, und die Ergebnisse sind in Tabelle 4 gezeigt. Die prozentualen CVs von HDQ für das vorliegende Analyseverfahren wurden als 0,91, 0 vorhergesagt. 59 und 0,26 Prozent bei LQC, MQC bzw. HQC für die Intraday-Präzision. Die prozentualen CVs von HDQ für die vorliegende RP-HPTLC-Methode wurden als 0,98, {{10}},69 und 0,32 Prozent bei LQC, MQC bzw. HQC für die vorhergesagt zwischentägige Präzision. Die niedrigen Werte des prozentualen CV zeigten die Präzision des vorliegenden RP-HPTLC-Verfahrens für die HDQ-Analyse in CWCs.

Die Ergebnisse der Robustheitsanalyse für das vorliegende Analyseverfahren sind in Tabelle 5 gezeigt. Die prozentualen CVs für die Robustheitsanalyse wurden für das vorliegende Analyseverfahren mit 0,59–0,66 Prozent vorhergesagt. Die Rf-Werte von HDQ wurden im Bereich von 0,82–0,84 für die vorliegende analytische Methode gefunden. Die geringen Änderungen in den Rf-Werten von HDQ und CVs mit niedrigerem Prozentsatz zeigten die Robustheit des vorliegenden Analyseverfahrens für die HDQ-Quantifizierung in CWCs.

Die Empfindlichkeit für das vorliegende Analyseverfahren wurde als „LOD und LOQ“ aufgezeichnet, und ihre physikalischen Werte sind in Tabelle 1 aufgeführt. Die „LOD und LOQ“ für das vorliegende Analyseverfahren wurden mit 6,91 ± 0 vorhergesagt.23 und 2 0,73 ± 0,68 ng Bande-1, bzw. fürHDQQuantifizierung. Diese physikalischen Werte von "LOD und LOQ" für das vorliegende Analyseverfahren zeigten die Empfindlichkeit für die HDQ-Analyse in CWCs an.

Die Peak-Reinheit/Spezifität für das vorliegende Analyseverfahren wurde bewertet, indem die überlagerten UV-Spektren von HDQ in vier verschiedenen CWCs mit denen von Standard-HDQ verglichen wurden. Die überlagerten UV-Spektren von Standard-HDQ und HDQ in vier verschiedenen CWCs sind in Abbildung 2 dargestellt. Die höchste chromatographische Reaktion für HDQ in Standard-HDQ und untersuchten CWCs wurde bei 291 nm für das vorliegende Analyseverfahren beobachtet. Die identischen UV-Spektren, Rf-Werte und Wellenlängen von HDQ in Standard-HDQ und CWCs zeigten die Spitzenreinheit/Spezifität für das vorliegende Analyseverfahren.

3.3. Analyse des HDQ-Gehalts in CWCs

Die Anwendbarkeit des vorliegenden analytischen Assays wurde bei der quantitativen Bestimmung von HDQ in CWCs verifiziert. Das Chromatogramm vonHDQvon CWCs wurde identifiziert, indem sein TLC-Fleck bei Rf {{0}},83 ± 0,02 mit denen von Standard-HDQ für das vorliegende Analyseverfahren verglichen wurde. Die Chromatogramme von HDQ in den CWCs A und B für den vorliegenden analytischen Assay sind in 3 zusammengefasst. Die HPTLC-Chromatogramme von HDQ in den CWCs waren identisch mit denen von reinem HDQ. Einige zusätzliche Peaks erschienen auch in den Chromatogrammen von CWCs, die mit verschiedenen in CWCs vorhandenen Hilfsstoffen in Verbindung gebracht werden könnten. Das ökologisch nachhaltige HPTLC-Verfahren war selektiv für die HDQ-Analyse bei Rf=0,83 ohne Störung durch die anderen Bestandteile der CWCs. Der Rf-Wert (0.83) von HDQ in CWCs war identisch mit dem von Standard-HDQ ({{20}}.83), was darauf hinweist, dass es keine Wechselwirkung zwischen HDQ und gab CWC-Inhaltsstoffe. Daher gab es keinen Einfluss der Formulierungsbestandteile auf die Qualität des HDQ-Chromatogramms, die LOD und die Effizienz des vorliegenden HPTLC-Verfahrens der HDQ-Analyse. Das Vorhandensein zusätzlicher Peaks in den Chromatogrammen von CWCs zeigte, dass das vorliegende RP-HPTLC-Verfahren für die HDQ-Abschätzung in Gegenwart von Formulierungsbestandteilen zuverlässig war. Die HDQ-Gehalte von CWCs wurden aus der Kalibrierungskurve von HDQ bestimmt, und die Ergebnisse sind in Tabelle 6 enthalten. Tabelle 6 fasst auch die gekennzeichnete Menge an HDQ und seine Formulierungsbestandteile zusammen. Die HDQ-Gehalte waren am höchsten in CWC A (1,23 Prozent w·w−1), gefolgt von CWC C (0,81 Prozent w·w−1), CWC D (0,43 Prozent w·w −1) und CWC B (0,37 Prozent w·w−1). Die aufgezeichneten Gehalte an HDQ waren viel niedriger als die angegebene Menge (2,00 Prozent w·w−1) von HDQ in untersuchten CWCs. Die HDQ-Gehalte in zwei verschiedenen CWCs (A und B) wurden mit 0,69 Prozent w·w−1 bzw. 0,34 Prozent w·w−1 unter Verwendung der Normalphasen-HPTLC-Methode in der Literatur aufgezeichnet [1]. Die angegebenen Gehalte an HDQ waren auch viel niedriger als die in der Literatur angegebene Menge (2,00 Prozent w·w−1) von HDQ [1]. Mehrere CWCs oder CWPs werden unter dem Anspruch vermarktet, vollständig natürlich zu sein. Es ist jedoch üblich, einige synthetische Chemikalien als Verfälschungsmittel mit den gleichen Effekten zu finden, die in solchen CWCs oder CWPs als Betrug zu finden sind. Die Menge an HDQ, die in dieser Arbeit und in der Literatur aufgezeichnet wurde, deutete darauf hin, dass die untersuchten CWCs eine geringe Menge an HDQ haben und nicht mit den Angaben auf dem Etikett übereinstimmen [1]. Daher wird erwartet, dass die untersuchten CWCs einige synthetische Chemikalien als Verfälschungsmittel enthalten. Insgesamt kann der vorliegende analytische Assay zur HDQ-Analyse in kosmetischen und pharmazeutischen Präparaten verwendet werden.

3.4. Ökologische Bewertung

Für die Bewertung der Grünheit der pharmazeutischen Assays werden verschiedene Methoden verwendet [38–43]. Allerdings nutzt nur der AGREE-Ansatz alle 12 GAC-Prinzipien für die Bewertung der Grünheit [42]. Daher wurde das Grünheitsprofil des vorliegenden Analyseverfahrens unter Verwendung des AGREE-Rechners erhalten. Der vorhergesagte AGREE-Score unter Verwendung von 12 verschiedenen GAC-Prinzipien für den vorliegenden analytischen Assay ist in Abbildung 4 dargestellt. Der AGREE-Score für verschiedene GAC-Prinzipien wurde wie folgt aufgezeichnet: Probenbehandlung: 0.61 Positionierung des Analysegeräts: 1. {{ 9}}Schritte zur Probenvorbereitung: 1.00Automatisierungsgrad: 0.80Derivatisierung: 1.00Menge an Abfall: 1.{{17} }Analysendurchsatz: 1.00Energieverbrauch: 1.00Probenbehandlung: 0,51Quelle des Reagenzes: 1.00Toxizität der Lösungsmittel: 1.00 Sicherheit des Bedieners: 1.00

Die Gesamtbewertung der AGREE für die vorliegende Analysemethode wurde mit 0,91 aufgezeichnet, was auf die hervorragende umweltfreundliche Analysemethode hinweistHDQQuantifizierung.

4. Fazit

Die RP-HPTLC-Densitometriemethode wurde für die HDQ-Analyse in vier verschiedenen HDQ-CWCs entwickelt. Der vorliegende RP-HPTLC-Assay wurde für verschiedene Validierungsparameter validiert. Das vorliegende Analyseverfahren war hochempfindlich, schnell und ökologisch nachhaltigHDQAnalyse. Der AGREE-Score für das vorliegende Analyseverfahren deutete auf einen hervorragenden analytischen Assay für die HDQ-Quantifizierung hin. Der jetzige RDie P-HPTLC-Methode war für die HDQ-Analyse in vier verschiedenen CWCs geeignet. Diese Ergebnisse zeigten, dass der vorliegende analytische Assay für die HDQ-Analyse in verschiedenen kosmetischen und pharmazeutischen Präparaten angewendet werden kann.