Bleaching- und Anti-Falten-Wirkung von Spirodela Polyrhiza-Extrakten
Mar 25, 2022
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Dong Hee Kim 1 · Tae Soon Park 1 · Se Gie Kim 2
Abstrakt
Die antioxidative, aufhellende und Anti-Falten-Aktivität von Spirodela polyrhiza-Extrakten und -Fraktionen wurde bewertet, um ihre Wirksamkeit als funktionelles kosmetisches Material zu bestimmen. 1,1-Diphenyl-2-picrylhydrazyl und 2,2'-Azinobis-3-ethylbenzothiazolin-6-sulfonsäure-Radikalfängeraktivitäten waren 44,2 bzw. 74,3 Prozent bei 1{{42 }}0 µg/ml SE-E (die Ethylacetatfraktion von 70 % Ethanolextrakt). Zur Messung der Anti-Falten-Wirkung wurden die Prokollagen-Biosynthese und die Hemmaktivität der Matrix-Metalloproteinase-1 (MMP-1) bestimmt. Bei 25 µg/ml SE (70 Prozent Ethanolextrakt) betrug die Biosyntheseaktivität 48,5 Prozent, und SE-E zeigte die beste Aktivität (57,8 Prozent) bei der gleichen Konzentration. Die MMP-1-Inhibitionsaktivität von SE und SE-E betrug 13,4 bzw. 28,5 Prozent bei 25 ug/ml. Schließlich wurde die Hemmung der zellulären Melaninsynthese und der zellulären Tyrosinase gemessen, um den Aufhellungseffekt zu bestimmen; bei 25 ug/ml betrugen die Hemmungsaktivitäten von SE 9,6 bzw. 13,8 Prozent und die von SE-E 15,4 bzw. 22,0 Prozent. Unsere Ergebnisse bestätigten die Möglichkeit von SE und SEE als wirksame funktionelle Materialien. Weitere Forschungen zur Untersuchung der antimikrobiellen, entzündungshemmenden und krebsbekämpfenden Aktivitäten von S. Polyrhiza ist notwendig, um seine potenzielle Verwendung in der Lebensmittel-, Kosmetik- und Arzneimittelindustrie zu bestätigen.
Antioxidative, Anti-Falten- und Aufhellungsaktivitäten wurden bewertet, um die Wirksamkeit des Bupyeongcho-Extrakts und der Bupyeongcho-Fraktion als funktionelles kosmetisches Material zu messen. Die DPPH- und ABTS- plus Radikalfängeraktivitäten betrugen 44,2 bzw. 74,3 Prozent bei einer Konzentration von 100 ug/ml der Ethylacetatfraktion (SE-E) des 70-prozentigen Ethanolextrakts von Bupyeongcho. Um die Anti-Falten-Aktivität zu messen, wurden die Prokollagen-Biosynthese-Aktivität und die MMP-1-Hemmaktivität in Zellen gemessen. Als Ergebnis zeigte Bupyeongcho 70-prozentiger Ethanolextrakt (SE) die höchste biosynthetische Aktivität von 48,5 Prozent bei 25 µg/ml und SE-E bei der gleichen Konzentration von 57,8 Prozent. Die MMP-1-Inhibitoraktivität von SE und SE-E betrug 13,4 bzw. 28,5 Prozent bei 25 µg/ml. Schließlich wurden zur Verifizierung des Aufhellungseffekts die Hemmaktivität der Melaninbiosynthese und die Hemmaktivität der intrazellulären Tyrosinase gemessen. Bei 25 ug/ml zeigte SE 9,6 bzw. 13,8 Prozent inhibitorische Aktivität und SE-E betrug 15,4 bzw. 22,0. Der Prozentwert wird angezeigt. Die Ergebnisse dieser Studie bestätigten die hohe Anti-Falten- und Aufhellungsaktivität von SE und SE-E, und das Potenzial für die Entwicklung als hervorragendes Funktionsmaterial wird erhöht. Es wird davon ausgegangen, dass es als wirksames Material für z
Schlüsselwörter: Antioxidans · Anti-Falten · Funktionelle Kosmetik · Spirodela polyrhiza · Whitening
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Einführung
Die heimische funktionelle Lebensmittel- und Kosmetikindustrie entwickelt sich im 21. Jahrhundert stark, und der Entwicklungstrend der Kosmetikindustrie ist umweltfreundliche und hypoallergene Kosmetik. In einigen Kosmetika werden hautreizende organische synthetische Inhaltsstoffe verwendet, um billige Rohstoffe in großen Mengen zu erhalten, und Hautprobleme sind häufig umstritten [1,2]. Daher bemühen sich führende in- und ausländische Kosmetikunternehmen aktiv darum, Inhaltsstoffe mit starker Hautreizung durch hypoallergene und natürliche Materialien zu ersetzen. Darüber hinaus nimmt der Verkauf von funktioneller Kosmetik mit Aufhellungs-, Faltenverbesserungs- und UV-Schutzfunktionen deutlich zu, sodass die Entwicklung von funktionellen kosmetischen Materialien auf pflanzlicher Basis sehr aktiv ist [3,4]. Reaktive Sauerstoffspezies (ROS) greifen die Dermis oder das epidermale Gewebe an und aktivieren Elastase, ein Enzym, das Elastin abbaut [ 5 ]. Aktivierte Elastase modifiziert die Tertiärstruktur des Elastinproteins, um die Flexibilität der Dermis zu verringern und Hautfalten zu erzeugen [ 6 ]]. Die Hautalterung kann nach den Faktoren in intrinsische und extrinsische Alterung unterteilt werden. Extrinsische Alterung wird durch äußeren Stress verursacht, und Lichtalterung durch UV-Strahlen ist die Hauptursache. Wenn sie ultravioletten Strahlen ausgesetzt werden, werden Matrixproteine wie Kollagen- und Elastinfasern beschädigt, die Menge an Kollagen in der Haut ist unzureichend, elastische Fasern werden denaturiert, wodurch Falten, Flecken, Sommersprossen und Altersflecken zunehmen. [7,8]. Darüber hinaus werden bei Bestrahlung mit ultraviolettem Licht Signalstoffe wie das -melanozytenstimulierende Hormon ( -MSH) und das adrenocorticotrope Hormon in die Melanozyten sezerniert [ 9 ]. Melanin wird innerhalb des Melanosoms produziert und die Aminosäure L-Tyrosin wird durch das Enzym Tyrosinase in Dopachinon umgewandelt. Eine übermäßige Melanogenese kann jedoch erhebliche Probleme bei Erkrankungen wie Melanose, postinflammatorischer Pigmentierung, Sommersprossen oder Samen verursachen [ 10 ]. In der Forschung im Zusammenhang mit der Entwicklung funktioneller Kosmetik wird aktiv an verschiedenen Materialien mit hautaufhellender und faltenverbessernder Wirkung geforscht, und insbesondere liegt der Schwerpunkt auf der Entwicklung natürlicher Materialien mit sicheren und hervorragenden Wirkungen aufgrund der Verbreitung von Wohlfühltrends [11,12].
Spirodelae Herba ist eine mehrjährige Wasserpflanze, die zur Familie der Lemnaceae gehört. Spirodela polyrhiza (L.) Schneider) und Cheongpyeong (Lemna minor L.), Reis-Anglerfisch (Lemna paucicostata Hegelm) ist ein getrocknetes Kraut, das zwischen Juni und September gesammelt und gewaschen wird, um Verunreinigungen zu entfernen , dann getrocknet und zur Behandlung verwendet. Als Studie über die Inhaltsstoffe von Bupyeongcho, Froschreis (S. polyrhiza) aus Sterolen wie Campesterol, -sitosterol und Stigmasterol [ 13 ] und Flavonoiden wie Apigenin-7-O- -D-Glucosid, Cynarosid, Hypocretin-8-O- -D-Glucosid, Vitexin, Orientin und Anthocyanin und Tannin wurden berichtet [14,15]. Seit der Antike wird getrockneter Bupyeongcho in der orientalischen Medizin und Folklore als Medizin für Hautkrankheiten wie Ödeme, Ödeme, Durst, Spannkraft, Schwitzen, Entgiftung, Vergiftung, Wasservergiftung, Wolle, Diabetes, Geschwüre und Verbrennungen verwendet [16,17]. Es wird angenommen, dass es als Biomaterial verwendet werden kann, indem die atopische Wirksamkeit, die Hautregenerations-bezogene Wirksamkeit, die entzündungshemmende Wirksamkeit, die Hautberuhigungs-bezogene Wirksamkeit und die Hautaufhellungs-bezogene Wirksamkeit objektiv verifiziert werden. Als Studie zur Wirksamkeit von Bupyeong wurde außerdem angenommen, dass Bupyeong eine Wirkung auf die Ursachen von Fettleibigkeit wie Eiterung, Damnum und Yangheo hat. , Immunität, Atopie-bezogene Wirksamkeit und Antikrebsaktivität [19,20] sowie Studien zu chemischen Komponenten und antioxidativen Wirkungen von Bupyeongcho wurden berichtet, sodass angenommen wird, dass es das Potenzial hat, als Gesundheitsbiomaterial verwendet zu werden oder Diätmaterial. In dieser Studie wurde die Wirksamkeit verschiedener Wasserpflanzen untersucht und bewertet, um nach natürlichen Materialien zu suchen, die antioxidative, Anti-Falten- und Aufhellungsaktivitäten von Wasserpflanzen aufweisen.S. Polyrhiza) Um die starke Radikalfänger-Aktivität, Anti-Falten- und Aufhellungs-Aktivität von 70-prozentigem EtOH-Extrakt und jeder Fraktion zu verifizieren und die Ergebnisse zu berichten.
Materialen und Methoden
Herstellung von experimentellen Materialien und Extrakten
Bupyeongcho (S. polyrhiza) wurde am 2. September {{2{0}} 16 von einem Pharmaunternehmen in Gyeongsan-si gekauft, und das Ursprungsland ist China. Beweisproben werden im Probenraum des Korea Institute of Oriental Medicine aufbewahrt. Für den Bupyeongcho-Wasserextrakt (SW) wurden 200 g der Probe unter Rückfluss gekühlt, gefolgt von einer zweimaligen Heißwasserextraktion für 3 Stunden. Dann wurde der Heißwasserextrakt filtriert, konzentriert und gefriergetrocknet, um ein Trockengewicht von 23,5 g zu erhalten, und die Ausbeute betrug 11,8 %. Bupyeongcho 70-prozentiger Ethanolextrakt (SE) wurde zweimal durch Eintauchen von 4 kg Bupyeongcho unter Verwendung von 30 l 70-prozentigem Ethanol bei Raumtemperatur für 2 Tage extrahiert. Der Extrakt wurde filtriert, unter vermindertem Druck bei 40°C oder darunter vollständig eingeengt und gefriergetrocknet, um ein Trockengewicht von 480,29 g zu erhalten, und die Ausbeute betrug 12,0 %. Davon werden 457,2 g in destilliertem Wasser suspendiert und dann je nach Polarität des Lösungsmittels Hexan, EtOAc und n-BuOH durch sequentielle Fraktionierung mit n-Hexan-Fraktion (SE-H) 94,05 g, EtOAc-Fraktion (SE-E) 68,80 g n-BuOH50,26 g einer Fraktion (SE-B) wurden erhalten. Der Rest war die H 2 O-Fraktion (SE-W), und es wurden 212,09 g erhalten, und die jeweiligen Ausbeuten waren 20,6, 15,0, 11,0 und 46,4 Prozent in dieser Reihenfolge.
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Radikalfängeraktivität von DPPH
Die Radikalfängeraktivität von 1,1-Diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH) von Bupyeongcho-Extrakten und -Fraktionen wurde nach der Blois-Methode gemessen [ 21 ]. Geben Sie 5 0 μl DPPH-Lösung, verdünnt mit 0,02 mM in 100 μl, zu jeder Probenlösung hinzu, rühren Sie und lassen Sie es 10 Minuten lang stehen und messen Sie dann die Extinktion bei 517 nm mit einem Mikroplatten-Lesegerät (Sunrise TM, Tecan Group Ltd. , Männedorf, Schweiz). Zu diesem Zeitpunkt wurde Butylhydroxyanisol (BHA) als Kontrollmaterial verwendet, und die DPPH-Radikalfängeraktivität wurde aus dem Absorptionsverhältnis der Gruppe mit und ohne Zugabe der Probenlösung berechnet.
ABTS plus Radikalfänger-Aktivitätsmessung
Die Radikalfängeraktivität von 2,2'-Azinobis-3-ethylbenzothiazolin-6-sulfonsäure (ABTS) von Bupyeongcho-Extrakten und -Fraktionen wurde wie folgt gemessen, indem das Verfahren von Re et al. [22]. Nach Mischen gleicher Mengen von 7 mM ABTS (in Wasser) und 2,4 mM K 2 O 8 S 2 wurde die Mischung bei Raumtemperatur und an einem dunklen Ort für 12 Stunden belassen, um die Erzeugung von Radikalen zu induzieren. Dann war der Extinktionswert bei 734 nm 0.6- durch Verdünnen der ABTS plus Radikallösung. Es wurde auf etwa 0,7 verdünnt und verwendet. 100 &mgr;l verdünnte ABTS plus Radikallösung und 50 &mgr;l Kräuterextrakt wurden gemischt und bei Raumtemperatur 7 Minuten lang umgesetzt, und die Extinktion wurde bei 734 nm gemessen. In diesem Fall wurde BHA als Kontrollmaterial verwendet, und das Ergebnis wurde aus dem Extinktionsverhältnis für die nicht mit der Probe behandelte Gruppe berechnet.
Zellkultur- und Zellviabilitätsmessung
Jede in diesem Experiment verwendete Zelle wurde in Dulbecco's modifiziertem Eagle's Medium (DMEM) (Invitrogen Carlsbad, CA, USA) Medium, ergänzt mit 1 0 Prozent fötalem Rinderserum und 1 Prozent Penicillin (100 U/ml), bei 37 kultiviert Grad , 5 Prozent CO 2 An einen Inkubator angepasst und subkultiviert. Die Zelllebensfähigkeit wurde gemäß dem Verfahren von Park et al. [23]. Jede Zelllinie [Melanom (B16F10) (ATCC, Rockville, MD, USA), Fibroblast (CCD-986sk) (ATCC, Rockville, MD, USA)] wurde in einer 96-Well-Platte bei 0,6–8 × platziert 10 3 Zellen/Vertiefung 180 Nach dem Aliquotieren von ul wurden 20 ul Proben durch Konzentration vorbereitet und bei 37 Grad C, 5 % CO 2 in einem Inkubator für 24 Stunden inkubiert. Die Kontrollgruppe wurde unter denselben Bedingungen inkubiert, indem dieselbe Menge an destilliertem Wasser wie die Probe zugegeben wurde. 20 &mgr;l MTT-Lösung, hergestellt mit einer Konzentration von 5 mg/ml, wurden dazugegeben, für 4 Stunden inkubiert, das Kulturmedium wurde entfernt, 200 &mgr;l DMSO wurden zu jeder Vertiefung gegeben und bei Raumtemperatur für 15 Minuten umgesetzt, gefolgt von ein Mikroplattenlesegerät (Sunrise TM, Tecan Group Ltd.), Männedorf, Schweiz), um die Extinktion bei 540 nm zu messen.
Prokollagen-Typ-I-Biosynthese und MMP-1-Inhibitoraktivitätsmessung
CCD-986sk-Zellen wurden in eine Platte mit 12 Vertiefungen in einer Konzentration von 5 × 10 4-Zellen/Vertiefung inokuliert, mit UVB (20 mJ/cm2) bestrahlt, und die Proben wurden durch Konzentration behandelt und in CO inkubiert 2 Inkubator für 48 Stunden. Der Überstand der so getesteten Zellen wurde gesammelt und für das Experiment verwendet. Für den Grad der Kollagenbiosynthese in der Zellkultur wurde die Menge an Propeptid unter Verwendung des EIA-Kits Prokollagen Typ-IC-Peptid (PIP) (Takara, Shiga, Japan) gemessen, und die MMP-1-Inhibitionsaktivität wurde mit gemessen Matrix-Metalloproteinase-1-ELISA-Kit (Abcam, Cambridge, MA, USA) verwendet.
Messung der Melaninbiosynthese und der inhibitorischen Aktivität der zellulären Tyrosinase
Die Hemmung der Melaninbiosynthese aus Hautmelanomzellen wurde gemäß dem Verfahren von Hosoi et al. gemessen. [24]. Melanomzellen, die in DMEM-Medium kultiviert wurden, wurden auf 2 × 10 6 Zellen/Schale in einer 1{{10}}0 mm Kulturschale aliquotiert, für 24 Stunden kultiviert, behandelt mit a- MSH, hergestellt durch Konzentrieren, und 2 ml Proben wurden zugegeben und nach 48 Stunden mit Phosphatpuffer (pH 7,4) gewaschen. Dann, nach dem Ablösen der Zellen mit 0,25 M Trypsin-EDTA-Lösung, wurden die geernteten Zellen mit 1 ml 5-prozentiger TCA pro 1 × 10 6-Zellen behandelt, zweimal bei 2.500 U/min zentrifugiert, und das abgetrennte Melanin wurde als a verwendet Phosphatpuffer. Nach dem Waschen 1 ml Ether:Ethanol (1:3) zugeben, zweimal zentrifugieren und mit 1 ml Ether waschen und trocknen. 1 ml 1 N NaOH wurde zu dem getrockneten Melanin gegeben, bei 80 Grad für 1 Stunde umgesetzt und die Extinktion wurde bei 405 nm mit einem Spektrophotometer gemessen. Die inhibitorische Aktivität der zellulären Tyrosinase wurde in 5 × 10 B16F10-Melanomzellen in 6 Vertiefungen gemessen. 4 Zellen wurden inokuliert und kultiviert, und nach 24 Stunden wurden Proben in jeder Vertiefung 48 Stunden lang behandelt. Nach der Behandlung wurde nach zweimaligem Waschen mit PBS Lysepuffer (1 Prozent Triton X-100, 0,1 M Natriumphosphatpuffer, 50 mM PMSF, pH 6,8) zu den Zellen in jeder Vertiefung gegeben. Die Zellen wurden auf Eis aufgeschlossen, zentrifugiert und nur der Überstand gesammelt und als Enzymlösung verwendet. Bereiten Sie ein Substrat vor, indem Sie L-DOPA in 0,1 M Natriumphosphatpuffer (pH 6,8) bei einer Konzentration von 2 mg/ml auflösen. Fügen Sie 40 l Enzymlösung zu 160 l des Substrats hinzu und erhitzen Sie sie 1 Stunde lang bei 37 Grad. Gemessen in Nm. Die Hemmung der Melaninbiosynthese und die Aktivität der zellulären Tyrosinase wurden aus dem Absorptionsverhältnis der Probenlösung und der Gruppe ohne Zugabe berechnet.
Messung der Proteinexpression durch Western Blot
Um die inhibitorische Aktivität von MMP-1, MMP-9, Tyrosinase, TRP-1, TRP-2 und Mikrophthalmie-Transkriptionsfaktor zu überprüfen, wurde jede Zelle in eine 60 mm Gewebekulturschale und 24 Stunden kultiviert, um die Zellen zu stabilisieren. Nach dem Entfernen des Mediums wurde es mit UVB (20 mJ/cm2) bestrahlt und der Extrakt wurde 24 bis 48 Stunden lang in einem mit jeder Konzentration behandelten Medium inkubiert, dann wurde das Medium erneut entfernt und zweimal mit PBS gewaschen. Complete Mini 1 Tab wurde zu 10 ml RIPA-Puffer gegeben, in 100 μl gelöst und 20 Minuten lang bei 4 Grad und 12 000 U/min zentrifugiert. Der durch Zentrifugation erhaltene Überstand wurde durch Bradford-Assay quantifiziert, und 20 &mgr;l Protein wurden durch Elektrophorese unter Verwendung von 10 % SDS-PAGE getrennt. Das abgetrennte Protein wurde auf eine PVDF-Membran (EMD Millipore, Billerica, MA, USA) unter Verwendung einer halbtrockenen Transferzellenvorrichtung (Hofer, Holliston, MA, USA) übertragen und dann bei Raumtemperatur für 1 Stunde in Blockierungspuffer (5 Prozent Magermilch in TBST) wurde in Verdünnen des primären Antikörpers und über Nacht bei 4 Grad inkubiert, dann 3 Mal mit TBST in 10--Minuten-Intervallen erneut gewaschen, Maus-Anti-Kaninchen-IgG HRP (Santa Cruz Biotechnology Inc, Dallas, TX , USA), Rinder-Anti-Ziege-IgG HRP Jeder sekundäre Antikörper von (Santa Cruz Biotechnology Inc) wurde 1:1 verdünnt 000 und bei Raumtemperatur für 2 Stunden inkubiert.
Statistische Verarbeitung
Alle Experimente wurden dreimal oder öfter wiederholt und als Mittelwert und Standardabweichung ausgedrückt. Zur Signifikanzüberprüfung wurden Duncans Multiple-Range-Test und t-Test unter Verwendung des Softwarepaketprogramms SPSS Statistics 20 (IBM, Armonk, NY, USA) durchgeführt. Statistisches Signifikanzniveau p<0.05, 0.01="" was="">
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Resultate und Diskussion
Das Messergebnis von DPPH und ABTS plus Radikalfängeraktivität
Abb. Ergebnisse der Radikalfängeraktivität von DPPH für Bupyeongcho-Heißwasserextrakt (SW), Ethanolextrakt (SE) und lösungsmittelspezifische Fraktionen von Ethanolextrakt. 1 wird angezeigt. SE zeigte eine Abfangaktivität von 36,1 Prozent bei einer Konzentration von 100 ug/ml und SW zeigte eine Abfangaktivität von 24,7 Prozent bei einer Konzentration von 100 ug/ml, so dass SE eine überlegene Abfangaktivität für DPPH-Radikale als SW hatte. Im Fall der lösungsmittelspezifischen Fraktionen des 70-prozentigen Ethanolextrakts von Bupyeongcho zeigten SE-E und SE-B bei Konzentrationen von 100 ug/ml 44,2 bzw. 42,6 Prozent DPPH-Radikalfängeraktivität. Diese Ergebnisse bestätigten, dass die Ergebnisse der hohen DPPH-Radikalfängeraktivität von EtOAc- und BuOH-Fraktionen in den Fraktionen für jedes Lösungsmittel im Perikarp [ 25 ] und Seonhakcho [ 26 ] bestätigt wurden.
Die Ergebnisse der ABTS plus Radikalfänger-Aktivität von Bupyeongcho-Extrakten sind in Abb. 2 gezeigt und wurden bestätigt. Im Fall von SE war die Radikalfängeraktivität von ABTS plus der des Heißwasserextrakts bei einer Konzentration von 100 ug/ml mit 91,0 % überlegen. Unter den Fraktionen für jedes Lösungsmittel von SE zeigte SE-E 74,3 Prozent Abfangaktivität bei einer Konzentration von 100 ug/ml, was die beste ABTS plus Radikalabfangaktivität unter den Fraktionen zeigt. Dies ist ein Ergebnis, das mit der hohen ABTS plus Radikalfänger-Aktivität von 99,2 Prozent bei einer Konzentration von 500 ug/ml in der EtOAc-Fraktion unter den Lösungsmittelfraktionen des Meerrettichs verglichen werden kann [ 27 ].
Abb. 1.DPPH und ABTSPlusRadikalfängeraktivität von Extrakten und Fraktionen aus
MTT-Messergebnisse für CCD-986sk-Fibroblastenzellen
Als Ergebnis der Messung der Zelllebensfähigkeit von Bupyeongcho gegen CCD-986sk-Zellen zeigten Bupyeongcho-Ethanol, Heißwasserextrakt und Lösungsmittelfraktionen im Vergleich zur Kontrollgruppe eine Zelllebensfähigkeit von mehr als 80 % bei einer Konzentration von 25 ug/ ml oder weniger. Im Vergleich dazu wurde bestätigt, dass alle eine Überlebensrate von 80 Prozent oder höher bei einer Konzentration von 25 ug/ml oder weniger aufwiesen ( Fig. 2 ). Daher wurden die Fraktionen für jedes Lösungsmittel von SW, SE und 70 Prozent Ethanol auf Prokollagen-Biosynthese, MMP-1-Hemmaktivität, Melanin-Biosynthese-Hemmaktivität und Tyrosinase-Hemmaktivität bei einer Konzentration von 25 ug/ml basierend auf verifiziert die Zelllebensfähigkeit resultiert.
Messergebnis des Prokollagen-Typ-I-Biosynthese-Kits und Messergebnis des MMP-1-Hemmaktivitäts-Kits
Prokollagen enthält eine als Propeptid bezeichnete Peptidsequenz am Aminoterminus und am Carboxyterminus. Es ist bekannt, dass Propeptid die Faltung von Prokollagenmolekülen im endoplasmatischen Retikulum unterstützt und von Kollagenmolekülen gespalten und getrennt wird, wenn gleichzeitig eine Kollagenpolymerisation auftritt. Daher kann durch Messen der Propeptidmenge der Grad der Kollagenbiosynthese in der Zelle erfasst werden [ 28 ]. Das Ergebnis der Messung der Menge an Kollagenbiosynthese durch Prokollagen-Typ-I-C-Peptid-Enzymimmunoassay für Fibroblasten ist in Fig. 6 gezeigt. SW und SE zeigten 35,4 bzw. 48,5 Prozent Prokollagenbiosynthese bei einer Konzentration von 25 ug/ml. Für jede Lösungsmittelfraktion von Bupyeongcho wurde die Prokollagen-Biosyntheseaktivität in der Reihenfolge SE-E (57,8 Prozent) > SE-W (43,8 Prozent) > SE-B (41,5 Prozent) > SE-H (32,3 Prozent) gezeigt. Laut einem Bericht von Koo et al. [ 29 ] wurde im Falle der Fraktionen für jedes Lösungsmittel eine Zunahme der Kollagenbiosynthese in der Reihenfolge BuOH > EtOAC > Wasser > Hexanfraktion bestätigt. In den Ergebnissen dieses Experiments zeigte SE-W eine etwas höhere Aktivität als SE-B, aber der Unterschied war nicht groß, so dass die gesamte Prokollagen-Biosyntheseaktivität der EtOAC- und BuOH-Fraktionen beibehalten wurde.
Unter den verschiedenen MMPs, die im Körper produziert werden, ist MMP-1 eine Protease, die spezifisch auf Kollagen einwirkt. Durch die Hemmung der Aktivität von MMP-1 und die Verringerung des Kollagenabbaus ist es möglich, die Elastizität des Hautgewebes zu erhalten und der Faltenbildung vorzubeugen. Es ist bekannt [ 30 ]. Die Messergebnisse der MMP-1-Inhibitoraktivität von Bupyeongcho sind in Fig. 3 gezeigt. Als Ergebnis zeigte SE 13,4 Prozent bei einer Konzentration von 25 ug/ml, was SW überlegen war, das 2,3 Prozent Hemmaktivität aufwies. Im Fall von SE-E zeigte sich eine Hemmrate von 28,5 Prozent im Vergleich zur Kontrollgruppe, und die MMP-1-Hemmaktivität war die beste unter den Fraktionen. Es wurde bestätigt, dass SE-E im Vergleich zu den Ergebnissen der Studie von Koo et al. [ 29 ] zeigt die MMP-1-Hemmaktivität der toten EtOAC-Fraktion von 3 bis 12 Prozent im Vergleich zur Kontrollgruppe. Zusammenfassend zeigten SE und seine Fraktionen positive Aktivität im Vergleich zur Kontrolle sowohl in den Messergebnissen der Prokollagen-Typ-I-Biosynthese als auch in den Messergebnissen der MMP-1-Hemmaktivität, was ein Potenzial als Material zur Verbesserung der Hautfalten zeigt. Insbesondere SE-E zeigte die beste Aktivität.
Abb. 2.Zelllebensfähigkeit von CCD-986sk- und B16F10-Zellen nach Behandlung mit Extrakten und Fraktionen von S. polyrhiza.
Das Messergebnis der Hemmaktivität der Proteinexpression von MMP-1 und MMP-9
Der Faktor, der am stärksten von MAPK beeinflusst wird, einem Faktor, der mit dem Altern zusammenhängt, ist c-fos, das von p38 beeinflusst wird. Wenn diese Faktoren aktiviert sind, regulieren sie stark die Expression von MMPs [ 31 ]. In dieser Studie wurde die Proteinexpression von MMP-1 und MMP-9 der MMP-Familie gemessen. In der SE-E-Behandlungsgruppe wurde die Proteinexpression von MMP-1 und MMP-9 konzentrationsabhängig bei Konzentrationen von 5, 10 und 25 ug/ml gehemmt ( 4 ). Insbesondere bei der Messung des Proteins von MMP-1 zeigte es eine expressionshemmende Aktivität von 58,2 % bei einer Konzentration von 25 ug/ml. Dieses Ergebnis zeigt einen ähnlichen Trend im Vergleich mit der EtOAc-Fraktion des Bergspiegelextrakts [ 32 ], und die EtOAc-Fraktion des Bergspiegels zeigte eine 60-prozentige Hemmaktivität der MMP-1-Expression bei einer Konzentration von 100 ug/ml. Es wurde bestätigt, dass SE-E eine ausgezeichnete inhibitorische Aktivität aufweist.
Ergebnis der Messung der Hemmaktivität der Melaninbiosynthese und der Messung der Aktivität der zellulären Tyrosinase
Die Hautschwärzung liegt daran, dass in der Haut vorhandene Melanozyten die Produktion von Melanin als Reaktion auf äußere Umgebungen wie UV-Exposition erhöhen. Um die aufhellende Wirkung von Rohmaterialien und Substanzen zu bestätigen, wurde hauptsächlich nach der Hemmung der Enzymaktivität von Tyrosinase, einem melaninproduzierenden Enzym, gesucht. Es gab viele Berichte über die Untersuchung von Mechanismen, die die Ergebnisse der Messung der Melanin-Biosynthese-Hemmaktivität von SW und SE stören, wie in Fig. 5 gezeigt ist. Im Fall von SE betrug die inhibitorische Aktivität 9,6 Prozent bei einer Konzentration von 25 ug/ml, und im Fall von SE-E war die inhibitorische Aktivität der Melaninbiosynthese die beste unter den Fraktionen bei einer Konzentration von 25 ug/ml bei 15,4 Prozent. Laut dem Forschungsbericht von Cho [ 35 ] war die EtOAc-Fraktion die beste unter den Fraktionen, indem sie eine 15-prozentige Verringerung der Melaninbiosynthese bei einer experimentellen Konzentration von 100 ug/ml der EtOAc-Fraktion des Grünalgenextrakts zeigte. Dies ist ein ähnliches Versuchsergebnis wie die EtOAc-Fraktion mit der besten Aktivität unter den Bupyeongcho-Fraktionen.
Abb. 3.Prokollagen-Synthese und MMP-1-Inhibitionsaktivität auf menschliche dermale Fibroblasten, behandelt mit Extrakten und Fraktionen aus
Tyrosinase ist das wichtigste Enzym für die Produktion von Melanin aus Tyrosin, wenn die Haut ultraviolettem Licht ausgesetzt wird. Es ist bekannt, dass die Melaninproduktion durch Hemmung der Tyrosinase-Aktivität gehemmt werden kann, wodurch die Induktion von Flecken, Sommersprossen und altersbedingtem Erythem verhindert wird [ 36 ]. Um die intrazelluläre Tyrosinaseaktivität zu messen, wurden B16F10-Melanomzellen mit Bupyeongcho-Ethanol und Heißwasserextrakt behandelt, um die Tyrosinaseaktivität zu messen. 13 gezeigt. SW und SE zeigten 2,7 bzw. 13,8 Prozent intrazelluläre Tyrosinase-Hemmaktivität bei 25 ug/ml. Im Falle der Fraktion betrug SW-E 22,0 Prozent, was die beste inhibitorische Aktivität zeigt.
Das Messergebnis der Hemmaktivität der Proteinexpression von MITF, TRP-1, TRP-2 und Tyrosinase
Von B16F10-Melanomzellen ist bekannt, dass sie die Expression der Melaninsynthese durch den Melanocortin-1-Rezeptor (Mc1R) induzieren, der in der Melanozyten-Zellmembran vorhanden ist [ 37 ]. In diesem Prozess bewegt sich der Mikrophthalmia-Transkriptionsfaktor (MITF) in den Zellkern und bindet an DNA-Promotoren von Tyrosinase, TRP-1 und TRP-2 und ist dafür bekannt, dass er die Melanogenese induziert, indem er die Expression von jedem erhöht Gen [7]. Unter ihnen sind TRP-1 und TRP-2 Proteine, die als Tyrosinase-verwandte Proteine bekannt sind, die 5,6-Dihydroxyindol-2-carbonsäure (DHICA) zu Indol{{14} oxidieren },6-Chinon-2-carbonsäure, die dunkelbraun ist. TRP-2, auch DCT genannt, ist ein Enzym, das DOPA-Chrom zu DHICA isomerisiert [ 38 ]. Die Hemmung von MITF kann die Produktion von Melaninpigment durch Hemmung der Expression von Tyrosinase, TRP-1 und TRP-2 unterdrücken. Die Auswirkungen von SE-E auf die Expression von MITF-, Tyrosinase-, TRP-1- und TRP-2-Proteinen im Zusammenhang mit der Melaninsynthese wurden bei Konzentrationen von 5, 10 und 25 ug/ml gemessen, und Abb. 6gezeigt in Insbesondere im Fall von MITF wurde bestätigt, dass SE-E im Vergleich zur Kontrolle bei einer Konzentration von 25 ug/ml um 18,0 Prozent gehemmt wurde. Außerdem wurde bei einer Konzentration von 25 ug/ml die Expression von Tyrosinase, TRP-1 und TRP-2 um 21,6 %, 6,3 % bzw. 10,4 % reduziert. Diese Ergebnisse weisen darauf hin, dass SE-E das Potenzial hat, als aufhellendes Material entwickelt zu werden, das die Expression von Tyrosinase, TRP-1 und TRP-2 durch MITF-Hemmung hemmt und infolgedessen das Melaninpigment unterdrückt Formation.
Obwohl Bupyeongcho, eine Wasserpflanze, die in einer armen Umgebung lebt, als pflanzliches Arzneimittel im privaten Sektor verwendet wurde, wurde bisher nicht ausreichend geforscht. In dieser Studie wurden antioxidative, Anti-Falten- und Aufhellungsaktivitäten bewertet, um die Wirksamkeit von Bupyeongcho-Extrakt und Bupyeongcho-Fraktion als funktionelles kosmetisches Material zu messen. Als Ergebnis waren 70-prozentiger Ethanolextrakt (SE) von Bupyeongcho und seine Ethylacetatfraktion (SE-E) DPPH und ABTS sowie Radikalfängeraktivität, intrazelluläre Prokollagenbiosyntheseaktivität, MMP-1-Hemmaktivität, Melaninbiosynthese-Hemmaktivität, intrazelluläre Tyrosinase-Hemmaktivität etc. wurden als ausgezeichnete physiologische Aktivitäten bestätigt. Insbesondere wurde in SE-E eine hohe Anti-Falten- und Aufhellungsaktivität bestätigt, was die Möglichkeit der Entwicklung als hervorragendes Funktionsmaterial erhöht.
