Wie fördert der Wasserextrakt von Cistanche die Darmperistaltik und verbessert die Verstopfung?

Shuai Yan, 1, 2 Yin-zi Yue, 1 Xiao-peng Wang, 1 Hong-li Dong, 1 Shu-guang Zhen, 1 Ben-sheng Wu, 1 und Hai-hua Qian3

Es wurde berichtet, dass die traditionelle chinesische Medizin gute Wirkungen bei der Behandlung von funktioneller Verstopfung hat. In dieser Arbeit wurde versucht, die Wirkung wässriger Extrakte von Herba nachzuweisenCistanche(AEHC) zur STC-Behandlung und um die möglichen Mechanismen durch ein Loperamid-induziertes Slow-Transit-Obstipationsmodell (STC) zu bestimmen. Zur Identifizierung und Bestätigung der bioaktiven Komponenten im AEHC wurde HPLC durchgeführt. Es wurde festgestellt, dass AEHC die STC-Antworten basierend auf erhöhter Stuhlmenge, Feuchtigkeitsgehalt und Darmpassage sowie Serumspiegeln von GAS, MTL, SS und CGRP abschwächte. Die Protein- und mRNA-Spiegel des c-kit, die Markierung interstitieller Zellen von Cajal (ICC), stiegen ebenfalls an. Unterdessen stieg nur der Proteinspiegel von SCF, einem Liganden von ckit, an. Die Analyse unserer Daten deutete darauf hin, dass AEHC offensichtlich die Funktion von ICC über einen Signalweg verbessern könnte, an dem PI3K, SCF und c-kit beteiligt sind, und die Kolonmotilitätsindizes wie GAS, MTL, SS und CGRP verbessern könnte. Es ist interessant festzustellen, dass AEHC bei Verstopfung wirksam zu sein schien, so dass weitere Experimente notwendig sind, um die genauen beteiligten Mechanismen zu klären.

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Acteoside in Cistanche haben gute Wirkungen auf Antioxidantien

1. Einleitung

Verstopfung ist eine häufige funktionelle Magen-Darm-Erkrankung und ein Problem der öffentlichen Gesundheit, das durch eine anhaltend schwierige, seltene oder unvollständige Stuhlentleerung gekennzeichnet ist [1]. Die Prävalenz von Obstipation variiert weltweit zwischen 0,7 Prozent und 81 Prozent, insbesondere bei älteren Menschen [2, 3]. Slow Transit Obstipation (STC) ist eine häufige gastrointestinale Beschwerde bei 13–37 Prozent der Patienten mit chronischer behandlungsresistenter Obstipation [4, 5]. Epidemiologische Daten weisen auf eine höhere Inzidenz von STC bei jungen Frauen als bei Männern hin [6]. STC verursacht hartnäckige Obstipation, zeigt wenig Ansprechen auf eine konservative Behandlung und eine Tendenz zu neurodegenerativen Erkrankungen. Es ist nicht so einfach wie eine funktionelle Krankheit, sondern erfordert eine invasive und aggressive Behandlung [7].

Eine Reihe aktueller chemischer Medikamente, wie osmotische oder sekretorische Abführmittel und Füllstoffe, werden allgemein verwendet

Behandlung von Verstopfung [8], obwohl ihre Anwendung aufgrund hoher Ausgaben und abdominaler Nebenwirkungen wie Schmerzen, Krämpfe und Blähungen begrenzt ist [9]. Gegenwärtig steht die Regulation des Gastrointestinaltrakts im Vordergrund der Obstipationstherapien. Cisaprid wurde zunächst als Promotilitätswirkstoff zur Behandlung von Magenerkrankungen entwickelt, später jedoch wegen des Risikos von Herzrhythmusstörungen zurückgezogen [10].

Tegaserod ist ein selektiver 5--Hydroxytryptamin-Rezeptorantagonist, der die Darmperistaltik und -sekretion stimulieren kann [11, 12]. Prucaloprid ist ein neuartiges Dihydrobenzofurancarboxamid-Derivat und 5-HT-Rezeptoragonist mit hoher Selektivität und Spezifität, das die Magen-, Dünndarm- und Dickdarmmotilität verbessern kann und in der Dynamik schneller wirkt [13–15]. Als Prostaglandin-E1-Derivat kann Lubiproston selektiv den CIC-Kanal aktivieren, um die gastrointestinale Sekretion zu fördern und die Auswirkungen der intestinalen Übertragung zu verstärken [16].

Motilität bei Verstopfung ist ein weit verbreitetes Problem, aber seine Ätiologie ist noch nicht klar. Dennoch haben überzeugende Beweise den Beitrag von interstitiellen Zellen von Cajal (ICC) zur Pathogenese von Obstipation gezeigt [17]. ICC wird zwischen den Nervenenden und den glatten Muskelzellen im Gastrointestinaltrakt gefunden. Die ICC gelten allgemein als Schrittmacherzellen für die gastrointestinale Aktivität und als Mediatoren der neuromuskulären Übertragung [18]. Studien haben gezeigt, dass die ICC-Dichte im Dickdarm von Patienten mit Slow-Transit-Obstipation deutlich geringer ist als bei normalen Patienten [19]. Dementsprechend kann eine abnehmende Anzahl von ICC zu einem Mangel an Slow-Wave-Aktivität führen, wodurch die kontraktile Reaktion beeinträchtigt und ein verzögerter Transit bei Patienten mit Slow-Transit-Obstipation induziert wird. Aus diesem Grund kann die Linderung von ICC mit Arzneimitteln entscheidend sein, um Verstopfung durch langsamen Transit zu heilen.

Verschiedene pflanzliche Arzneimittel und traditionelle chinesische Rezepturen haben in letzter Zeit als neuartige Therapeutika zur Behandlung chronischer Verstopfung durch verbesserte Stuhlproduktion Aufmerksamkeit erregt [20, 21]. KräuterCistancheist ein traditionelles pflanzliches Arzneimittel, das zur Behandlung von chronischer Nierenerkrankung, weiblicher Unfruchtbarkeit, starker Menorrhagie und Impotenz verwendet wird [22, 23]. KräuterCistancheverhindert die Apoptose von Gehirnneuronen, indem Apoptose-bezogene Faktoren und neurotrophe Faktoren in MES23.5-Zellen exprimiert werden [24]. Herba Cistanche hat auch pharmazeutisches Potenzial bei der Behandlung des Yang-Qi-Nieren-Yang-Mangelsyndroms gezeigt. Eine kürzlich durchgeführte Studie hat gezeigt, dass HerbaCistancheerhöht die mitochondriale Atmung und den antioxidativen Status von Glutathion in H9c2-Kardiomyozyten [25].

Die TCM glaubt, dass Verstopfung eine enge Beziehung zu den Nieren hat. Die Niere öffnet sich an den äußeren Genitalien und am Anus und regelt das Wasserlassen und den Stuhlgang. Der Transport des Abfalls beruht auf der Förderung des Nieren-Qi und der Ernährung des Nieren-Yin. Wenn das Nieren-Yang mangelhaft ist oder das Feuer des Lebenstors erlischt, führt eine kalte Verstopfung des Dickdarms zu einer Stagnation der Abfallstoffe. Verstopfung wird auch durch trockenen Stuhlgang verursacht, da ein Mangel an Nierenessenz nicht genügend Flüssigkeit erzeugt [26].

KräuterCistancheist ein gemeinsames vereinigendes Kraut, das süß und salzig im Geschmack und warm in der Natur ist. Dem Dickdarm und den Nierenmeridianen zugeschrieben, kann es das Nieren-Yang tonisieren und den Darm befeuchten, um Verstopfung zu lindern. Dieses einzelne Kraut und seine chinesischen pharmazeutischen Präparate wurden weithin zur Behandlung von Verstopfung mit bemerkenswerter Wirksamkeit eingesetzt [27].

In China sind die Wirkungen von HerbaCistancheWurzeln bei Verstopfung wurden aufgezeichnet [28, 29] und in Shen Nongs chinesischer Materia Medica als die „getrockneten saftigen Stängel derCistancheSpezies" [30]; jedoch wissenschaftlicher Nachweis der Wirkung von HerbaCistancheWurzeln bei Verstopfung hat es bisher nicht gegeben, die klinisch wirksame Dosis beträgt im Chinesischen Arzneibuch 20 g pro Tag, und die klinische Wirkung nimmt mit der Dosierung nicht weiter zu.

Seit HerbaCistancheist so knapp [31], dass die Standardisierung seiner klinischen Dosierung für die Behandlung von STC durch experimentelle Studien nicht nur ein Fehlschlagen der Behandlung aufgrund einer unzureichenden Dosierung verhindert, sondern auch die Patienten vor wirtschaftlichen Verlusten und sogar Medikamentenmissgeschicken durch übermäßigen Gebrauch bewahrt. Wir hoffen

Die Ergebnisse könnten eine wissenschaftliche Grundlage für neue Medikamente gegen Verstopfung bilden. Daher ist es wichtig, das wässrige Herba zu untersuchenCistanchesFunktion der Darmförderung und ihre Wirkung auf ICC in der vorliegenden Studie.

2. Materialien und Methoden

2.1. Zubereitung von wässrigem Extrakt von Herba Cistanche.

Alles HerbaCistanchewurden von der Nanjing Haichang Chinese Medicine Group Co., Ltd. (Nanjing, China) gekauft, die gemäß ethnobotanischer Standardpraktiken von den Plantagen im Sinkiang-Gebiet in China geerntet, gesammelt und verarbeitet wurden. Die Identität der Pflanze wurde morphologisch von Professor Tu Lin Lu von der Nanjing University of Chinese Medicine, Nanjing, China, festgestellt. Ein Belegexemplar (NUCMCHS-2015628) wurde am College of Health Sciences, Nanjing University of Chinese Medicine, Nanjing, China, hinterlegt.

Scheiben von HerbaCistanchemit einem Gewicht von 500 g wurden unter Verwendung eines elektrischen Mixers pulverisiert und in 5000 ml destilliertem Wasser extrahiert, wonach der wässrige Extrakt bei 100°C für 2 h unter Verwendung einer zirkulierenden Extraktionsausrüstung gereinigt wurde

Membranpore (Millipore, Billerica, MA, USA), und der aus den Extrakten erhaltene Rückstand wurde in 4000 ml Wasser gelöst. Nach der Rückflussextraktion wurden die Extrakte gesammelt und eingedampft, um das endgültige Probenprodukt zu erhalten. Wässrige Extrakte wurden unter Verwendung von a. zu trockenen Pellets (1 g/ml) konzentriert

für die spätere Verwendung. Feste Proben wurden in destilliertem Wasser rekonstituiert, um die erforderlichen Dosen von 10, 20 und 40 mg/kg Körpergewicht für das Experiment zu ergeben.

2.2. Tiere.

Das in dieser Studie verwendete Versuchsprotokoll wurde auf der Grundlage ethischer Verfahren und wissenschaftlicher Betreuung durch das Suzhou Hospital of Traditional Chinese Medicine-Institutional Animal Care and Use Committee, Suzhou, China (SHTCM-IACUC; Genehmigungsnummer: PNU{{2}) überprüft und genehmigt. }). Alle männlichen Ratten (Stamm Sprague Dawley) mit ag wurden vom Shanghai Laboratory Animal Research Center gemäß den Richtlinien der National Institutes of Health gekauft. Die Tiere hatten freien Zugang zu einer Standarddiät (AIN-93 M) und Leitungswasser nach Belieben und wurden einzeln in Edelstahl mit prozentualer relativer Luftfeuchtigkeit gehalten und täglich 12 h natürlichem Licht und 12 h Dunkelheit ausgesetzt.

2.3 Experimentelles Design.

Das Loperamid wurde verwendet, um Verstopfung bei Ratten in Übereinstimmung mit früheren Studien zu induzieren [32, 33]. Insgesamt 60 Ratten wurden zufällig in 5 Gruppen eingeteilt (pro Gruppe): A: Normalgruppe (NG), B: Modellgruppe (Lop plus Vehikel-behandelte Gruppe), C: eine Gruppe von Verstopfungsratten, behandelt mit niedrigem wässrigem Extrakt von Herba Cistanche (Lop plus LAEHC-behandelte Gruppe), D: eine Gruppe von Obstipationsratten, die mit einem mittelwässrigen Herba Cistanche-Extrakt behandelt wurden (Lop plus MAEHC-behandelte Gruppe), und E: eine Gruppe von Obstipationsratten, die mit einem stark wässrigen Herba-Extrakt behandelt wurden Cistanche (Lop plus HAEHC-behandelte Gruppe). Gruppe A wurde mit normaler Kochsalzlösung (10 ml/kg) behandelt; Gruppe B wurde mit Loperamid behandelt

(4 mg/kg); Gruppe C wurde mit Loperamid (4 mg/kg) und schwach wässrigem Extrakt von Herba Cistanche (1 g/kg) behandelt; Gruppe D wurde mit Loperamid (4 mg/kg) und mittelwässrigem Extrakt von Herba Cistanche (2 g/kg) behandelt, und Gruppe E wurde mit Loperamid (4 mg/kg) und hochwässrigem Extrakt von Herba Cistanche (4 g/kg) behandelt. kg). Allen Ratten aus der normalen Gruppe wurde 0,9 Prozent Natriumchlorid injiziert, während den anderen an 3 aufeinanderfolgenden Tagen zweimal täglich Loperamid in 0,9 Prozent Natriumchlorid injiziert wurde, um Verstopfung hervorzurufen. Der wässrige Extrakt von Herba Cistanche wurde in Wasser suspendiert und einmal täglich von Tag 4 bis Tag 18 in Gruppe C, Gruppe D und Gruppe E oral verabreicht, während die Gruppen A und B ein gleichbleibendes Volumen an Wasser über eine Sonde erhielten.

2.4. Chromatographischer Zustand.

Die HPLC-Profilierung wurde im Shimadzu Liquid Chromatographic System (Tokio, Japan) durchgeführt, das aus einer LC-20AT-Pumpe und a

wurden bei 330 nm bei 30 C überwacht. Die isokratische mobile Phase bestand aus Methanol 0,1 Prozent Ameisensäure (80:20, v/v) und lief mit einer Flussrate von 1,0 ml/min . Chromatographische Trennung war

Partikelgröße 5 µm, Beijing Dikma Science and Technology Co., Ltd., Beijing, China).

2.5. Analyse von Bewegung, Nahrungsaufnahme, Wasseraufnahme, Körper

Ackergummi (eine wässrige Suspension aus 20 Prozent Aktivkohle und 10 Prozent Ackergummi) wurde jedem Tier oral in einem Volumen von 25 ml/kg verabreicht. Nach 30 min wurden die Tiere human durch Genickbruch getötet und seziert. Der Dünndarm vom Pylorus bis zum Blinddarm wurde durchquert und die von der Holzkohlemehl zurückgelegte Strecke und die Gesamtlänge des Dünndarms gemessen. Für eine einzelne Ratte wurde der Prozentsatz der Darmpassage als Prozentsatz der von der Holzkohlemehl zurückgelegten Strecke relativ zur Gesamtlänge des Dünndarms berechnet. Die folgende Gleichung berechnet die intestinale Transitrate (Prozent): Entfernung, die von der Holzkohle zurückgelegt wird/Entfernung vom Pylorus zum Blinddarm 100 Prozent.

2.6. Blutentnahme und Gewebeentnahme. Am Ende des Versuchszeitraums wurden die Ratten 12 Stunden lang fasten gelassen, hatten aber freien Zugang zu Wasser. Alle Ratten wurden dann 30 Minuten später durch intraperitoneale Injektion von Natriumpentobarbital (50 mg/kg) anästhesiert und auf einen temperaturregulierten Tisch gesetzt. Blutproben wurden gesammelt und bei 3500 U/min für 15 min zentrifugiert, um Serum zu erhalten. Der Dickdarm wurde sofort geteilt und mit normaler Kochsalzlösung bei 4°C gespült und dann in zwei Teile geteilt. Ein Fragment wurde in 10 Prozent Formalin fixiert und in gespaltenem Paraffin für die anschließende immunhistochemische (IHC) Analyse verarbeitet, während das andere Gewicht und Haar war. Änderungen in Bewegung, Nahrungsaufnahme, Wasser

bis zur Prüfung bei 80°C gelagert. Nahrungsaufnahme, Körpergewicht und Haare wurden täglich während der gesamten Versuchsdauer beobachtet und aufgezeichnet. Wir beobachteten "Änderungen in der Übung" nach den spezifischen Schritten: Die selbstgebaute Box (60 cm hoch, 50 cm lang und 80 cm breit mit dunkler Umfangswand) wird für den Freilandtest verwendet; der weiße Grund wurde in einem dunklen und ruhigen Raum durch die schwarze Linie in Rauten (12 cm) unterteilt; eine 100-W-Glühbirne hing 1 m über der Mitte der Box; die Ratten wurden am 4., 6., 12. und 18. Tag der Modellierung in die Mitte der Box gesetzt. Die Anzahl der Quadrate, die die Ratten innerhalb von 5 Minuten passierten, wurde als Bewertung für die horizontale Bewegung verwendet, und die Aufrichtzeit der Ratten innerhalb von 5 Minuten wurde als Bewertung für die vertikale Bewegung verwendet. Horizontale und Bewegungswerte plus vertikale Bewegungswerte zeigen den Bewegungsumfang der Ratten an. Jede Ratte wurde einmal gemessen [34, 35].

2.7. Kotparametermessung.

Am letzten Tag der oralen Verabreichung wurden frische Stuhlpellets von jeder SD-Ratte 6 h lang in Röhrchen mit Rundbodenstopfen gesammelt und das Gesamtgewicht jeder Gruppe aufgezeichnet. Zur Bestimmung der Stuhlfeuchte haben wir die Stuhlpellets mit einer elektrischen Waage bis zur Gewichtskonstanz getrocknet und das Trockengewicht gemessen. Der Feuchtigkeitsgehalt

2.8. Bewertung von GAS, MTL, SS und CGRP.

Die Konzentrationen von Gastrin (GAS), Motilin (MTL), Somatostatin (SS) und Calcitonin Gene-Related Peptide (CGRP) im Serum wurden durch ELISA unter Verwendung kommerziell erhältlicher Kits bestimmt.

2.9. Histologische Analyse.

Von SD-Ratten gesammelte transversale Colons wurden mit 10 % Formalin für 12 h fixiert und eingebettet

m dicke Scheiben, die mit Hämatoxylin und Eosin gefärbt wurden (H&E, Sigma-Aldrich, MO, USA). Morphologische Merkmale dieser Schnitte wurden unter Lichtmikroskopie beobachtet, wonach die Zottenlänge, Kryptendicke und Muskeldicke unter Verwendung der Leica Application Suite (Leica Microsystems, Schweiz) gemessen wurden.

2.10. Immunhistochemische Analyse.

Wir folgten den Methoden von Zhu et al. (2016) [36]; ungefärbte 5-m-Abschnitte waren

gefärbt mit Kaninchen-anti-c-Kit (1:100) bei 4°C über Nacht. Das Sekundärantikörper- und Avidin-Biotin-Peroxidase-Komplex-Verfahren wurde gemäß den Anweisungen des Herstellers verwendet. Eine Immunglobulin-negative Kontrolle wurde verwendet, um unspezifische Bindungen zu eliminieren. Expressionsniveaus von c-kit

2.11. Analyse der Darmpassage.

Das Darmtransitverhältnis wurde gemäß zuvor berichteten Protokollen durchgeführt [36]; kurz nach 14 Behandlungstagen wurden alle SD-Ratten 12 Stunden lang fasten gelassen, hatten aber freien Zugang zu Wasser.

Polymerase-Kettenreaktion in Echtzeit. Genexpressionsniveaus von c-kit-, SCF- und PI3K-mRNAs im Dickdarm wurden unter Verwendung eines Gesamt-RNA-Extraktionskits (TIANGEN Biotech,

Peking, China) gemäß den Protokollen des Herstellers. Die Echtzeit-PCR wurde mit dem ABI StepOnePlus Real-Time PCR System (ABI) durchgeführt. SYBR Green I Real-Time PCR Master Mix (QPK201, Toyobo, Japan) wurde zum Nachweis von PCR-Produkten verwendet. Die Reaktionen wurden in dreifachen Läufen durchgeführt. Anschließend wurde frisches Dickdarmgewebe der Ratte mit einem Gewicht von 0,5 g homologisiert.

l) wurde nach Herstellerangaben mit dem TRIzol-Reagenz (Invitrogen, USA) extrahiert. Ein reverse Transkriptions-PCR-Kit (Takara Biotechnology Co., Inc.) wurde verwendet, um den ersten cDNA-Strang gemäß dem Protokoll des Herstellers zu synthetisieren. Alle Zielparameter sind in Tabelle 1 aufgeführt. Das Zyklusprotokoll wurde unter den folgenden Bedingungen durchgeführt: 95 °C für 5 min (DNA-Denaturierung), gefolgt von 40 Zyklen von 95 °C für 15 s, 60 °C für 20 s und 72 °C für 40 Sek. Am Ende der Amplifikationszyklen wurde eine Schmelzkurvenanalyse durchgeführt.

2.12. Western-Blot-Analyse.

Die Proteingehalte von c-kit und SCF in Dickdarmproben-Homogenaten wurden durch Western Blot bewertet. Kurz gesagt, die Gesamtproteine ​​der Homogenate wurden unter Verwendung eines Bicinchoninsäure-Assays (Pierce Biotechnology, Rockford, IL, USA) bestimmt. Natriumdodecylsulfat-Polyacrylamidgel (SDS-PAGE) wurde verwendet, um Proteine ​​in dem BioRad-Elektrophoresesystem (BioRad Laboratories, Hercules, CA, USA) zu trennen. Proteine ​​wurden dann auf Polyvinylidendifluorid (PVDF)-Membranen übertragen. Nach 2-stündiger Behandlung mit Blockierungspuffer in TBS mit 5 % fettarmer Milch bei Raumtemperatur wurden PVDF-Membranen über Nacht mit 1 : 1000 verdünntem Anti-c-Kit (Santa Cruz, CA, USA), 1 : 500 verdünntem Anti-c-kit (Santa Cruz, CA, USA) inkubiert. SCF (Sigma, MO,

USA) bzw. 1:8000 verdünnte Anti-Aktin (Kangchen, Shanghai, China) Antikörper. Die Bindung des Primärantikörpers wurde mit dem entsprechenden HRP-konjugierten Sekundärantikörper (Beyotime, Jiangsu, China) nachgewiesen. Für den Chemilumineszenznachweis wurden ein Enhanced-Chemilumineszenz-Kit (Pierce Biotechnology Inc., Rockford, IL, USA) und das Odyssey Infrared Imaging System (Gene Company Ltd., Hong Kong) verwendet. Housekeeping-Prolaktin wurde als Ladekontrolle verwendet. Die Menge der Proteinexpression wird relativ zu den Aktinspiegeln dargestellt.

2.13. Statistische Analyse.

Die Messdaten wurden als mittlerer Standardfehler des Mittelwerts (SEM) angegeben und von SPSS analysiert

16.0-Software (SPSS, Chicago, IL, USA). Eine Einweg-Varianzanalyse (ANOVA), gefolgt von Duncans Mehrfachbereichstests, wurde verwendet, um signifikante Unterschiede in allen Parametern zu bestimmen. Die Werte wurden bei als statistisch signifikant angesehen

3. Ergebnisse

3.1. Zusammensetzung und funktionelle Komponenten von Herba Cistanche.

Wie in Abbildung 1 gezeigt, enthalten die Wurzeln von Herba Cistanche hohe Konzentrationen mehrerer bioaktiver Komponenten, die mit abführenden Wirkungen in Verbindung stehen. Die Konzentrationen der gesamten Echinacoside und der gesamten Verbacoside betrugen 0,64 mg/g bzw. 0,16 mg/g. Zwei Peaks, die auf hohe Echinacosid- und Verbascosid-Spiegel hindeuten, wurden im LP bei einer geeigneten Retentionszeit durch Hochleistungs-Flüssigkeitschromatographie (HPLC) nachgewiesen.

3.2. Allgemeine Beobachtung.

SP-Ratten starben im Laufe des Experiments nicht, was auf eine bessere Sicherheit und Funktionsfähigkeit des Tiermodells hindeutet. Verglichen mit Gruppe A zeigten Ratten in der Modellgruppe flauschiges Fell, Mattigkeit, trockenen Stuhlgang und

verschlechterte sich mit der Verlängerung der Modellierungszeit.

3.3. Wirkung von AEHC auf Stuhlzahl und Feuchtigkeitsgehalt bei Ratten mit Loperamid-induzierter Obstipation.

Verglichen mit normalen Fäkalien waren die Fäkalien in den Gruppen B, C, D und E trocken, klein und hart und waren vor der Behandlung nicht poliert.

schließlich wurde Ratten Loperamid injiziert (mit Medizin behandelte Symptome wie Körper und 3(b) gelindert).

das Gewicht unterschied sich nicht signifikant zwischen allen experimentellen Gruppen, obwohl Gruppe E ein etwas geringeres Körpergewicht aufwies als die anderen Gruppen (Abbildung 2(a)). Darüber hinaus aßen SD-Ratten mit Verstopfung signifikant weniger Nahrung als Gruppe A ( ), während die Unterschiede zwischen den Gruppen B, C, D und E ( 2(b) ) nicht signifikant waren. Auch der Wasserverbrauch änderte sich nicht zwischen Gruppe A und Gruppe B. Außerdem wurde kein signifikanter Anstieg des Wasserverbrauchs festgestellt

dass die Behandlung mit dem AEHC keine Veränderung hervorrief. Obwohl die Darmpassage in den Gruppen C, D und E ebenfalls signifikant höher war, hatten die Gruppen C, D und E signifikant niedrigere Raten als Gruppe A.

3.4. Wirkung von AEHC auf die Dünndarmpassage bei Ratten mit Loperamid-induzierter Obstipation.

Wie aus Fig. 4 ersichtlich, wurden zwischen den fünf Gruppen keine Unterschiede in der Basislinie der Dünndarmpassagezeit festgestellt. Gruppe B hat im Vergleich zu Gruppe A (𝑃 < 0.01)="" ein="" deutlich="" niedrigeres="" holzkohlepulver-antriebsverhältnis.="" obwohl="" die="" darmpassage="" in="" den="" gruppen="" c,="" d="" und="" e="" ebenfalls="" signifikant="" höher="" war="" als="" die="" in="" gruppe="" b="" (𝑃="">< 0,05),="" hatten="" die="" gruppen="" c,="" d="" und="" e="" signifikant="" niedrigere="" verhältnisse="" als="" gruppe="">

3.5. Die Intervention mit AEHC verbessert teilweise die Funktion des Kolonmotilitätsindex.

Die Serumspiegel von GAS und MTL, die von Ratten der Gruppe B erhalten wurden, nahmen im Vergleich zu denen von Gruppe A signifikant ab (𝑃 < {{0}}.01,="" bzw.).="" andererseits="" haben="" die="" gruppen="" c,="" d="" und="" e="" (𝑃="">< 0.05,="" bzw.)="" effektiv="" höhere="" gas-="" und="" mtl-werte="" aus="" der="" verabreichung="" von="" herba="" cistanche-extrakten="" im="" vergleich="" zu="" gruppe="" b="" die="" ss-werte="" bei="" ratten="" der="" gruppe="" b="" waren="" höher="" im="" vergleich="" zu="" gruppe="" a="" (𝑃="">< 0.01);="" die="" gruppen="" c,="" d="" und="" e="" haben="" abgeschwächte="" ss-werte="" (𝑃="">< 0,05)="" (abbildung="" 5).="" verglichen="" mit="" ratten="" mit="" verstopfung="" waren="" die="" cgrp-spiegel="" bei="" normalen="" ratten="" der="" gruppe="" a="" (𝑃="">< 0,01)="" und="" bei="" den="" mit="" herba="" cistanche="" verabreichten="" gruppen="" c,="" d="" und="" e="" konstant="" (𝑃=""> 0,05).

3.6. Histologische Veränderung des Dickdarms.

Um zu untersuchen, ob die AEHC-Behandlung eine strukturelle Veränderung des Dickdarmgewebes induzieren kann, wurden die Zottenlänge, die Kryptenschichtdicke und die Muskeldicke im Querkolon von Ratten in den fünf Gruppen nach H&E-Färbung gemessen. Beim Vergleich der Pathologie des Dickdarms der Ratten in jeder Gruppe war die Dickdarmschleimhaut glatt und enthielt kleine Arterien und kleine Venen in der Submukosa und eine große Anzahl von Fettzellen. Außerdem bestand die Muskelschicht aus glatten Muskelzellen und die Subserosa war vollständig. Die durchschnittliche Zottenlänge war in Gruppe B signifikant kürzer als in Gruppe A (𝑃 < {{0}}.01).="" die="" durchschnittliche="" länge="" der="" zotten="" in="" gruppe="" c="" nahm="" jedoch="" im="" vergleich="" zu="" gruppe="" b="" (abbildungen="" 6="" und="" 7)="" um="" mehr="" als="" 30="" prozent="" stark="" zu="" (𝑃="">< 0,05).="" unterdessen="" nimmt="" die="" durchschnittliche="" länge="" der="" zotten="" in="" den="" gruppen="" d="" und="" e="" im="" vergleich="" zu="" gruppe="" b="" (abbildungen="" 6(a)="" und="" 6(b))="" stark="" zu="" (𝑃="">< 0,01).="" darüber="" hinaus="" war="" die="" veränderung="" der="" muskeldicke="" der="" zottenlänge="" sehr="" ähnlich.="" in="" gruppe="" b="" die="">

war dramatisch dünner im Vergleich zu Gruppe A. Allerdings stieg die Muskeldicke in den Gruppen C, D und E im Vergleich zu Gruppe B um 30–35 Prozent (Abbildungen 6 und 7). Insgesamt deuten diese Befunde darauf hin, dass AEHC die Zottenlänge und Muskeldicke im Dickdarm von verstopften Ratten erhöhen kann.

3.7. Die Verabreichung der AHEC-Behandlung erhöhte die Proteinexpression von c-Kit und SCF.

Die Immunreaktivität davon wurde im Dickdarm nachgewiesen, da die Zellen in allen Gruppen positiv auf c-kit getestet wurden. Wie in Abbildung 8 gezeigt, war das Expressionsniveau von c-kit in Gruppe B niedriger als das in Gruppe A (𝑃 < 0.05).="" das="" expressionsniveau="" von="" c-kit="" in="" gruppe="" c="" war="" höher="" als="" das="" in="" gruppe="" b="" (𝑃="">< 0.{{20}}5),="" während="" in="" gruppe="" d="" und="" mehr="" c-kit="" vorhanden="" war="" e="" als="" in="" gruppe="" b="" (𝑃="">< 0.05).="" nach="" 2-wöchiger="" behandlung="" mit="" unterschiedlichen="" konzentrationen="" des="" wässrigen="" extrakts="" von="" herba="" cistanche="" wurden="" die="" proteinexpressionsniveaus="" von="" c-kit="" und="" scf="" durch="" western-blot-analyse="" nachgewiesen.="" die="" western-blot-analyse="" zeigte,="" dass="" die="" c-kit-="" und="" scf-expressionsniveaus="" nach="" der="" behandlung="" mit="" loperamid="" im="" dickdarm="" von="" ratten="" bemerkenswert="" niedriger="" waren="" (="" 9="" ).="" abbildung="" 8(e)="" zeigt,="" dass="" das="" verringerte="" c-kit="" bei="" ratten="" mit="" verstopfung="" signifikant="" um="" 31,2="" prozent="" anstieg,="" nachdem="" die="" ratten="" mit="" 500="" 𝜇g/ml="" aehc="" behandelt="" wurden="" (𝑃="">< 0,05).="" darüber="" hinaus="" erhöhte="" die="" behandlung="" mit="" 100="" und="" 200="" g/ml="" aehc="" die="" c-kit-proteinexpressionsspiegel.="" die="" scf-proteinexpression="" stieg="" signifikant="" um="" 20,1,="" 24,7="" und="" 8,4="" prozent="" bei="" der="" behandlung="" mit="" 100,="" 200="" bzw.="" 500="" 𝜇g/ml="" aehc="" (abbildung="" 9).="" 3.8.="" wirkung="" von="" aehc="" auf="" die="" mrna-expression="" von="" c-kit,="" scf="" und="" pi3k.="" um="" zu="" untersuchen,="" ob="" die="" aehc-behandlung="" die="" regulation="" von="" mrna="" im="" zusammenhang="" mit="" der="" muskelkontraktion="" beeinflussen="" kann,="" wurden="" veränderungen="" der="" c-kit-,="" scf-="" und="" pi3k-expressionsniveaus="" im="" dickdarm="" von="" ratten="" mit="" obstipation="" unter="" verwendung="" spezifischer="" primer="" beobachtet.="" die="" ergebnisse="" zeigten,="" dass="" die="" mrna-spiegel="" von="" c-kit="" in="" gruppe="" b="" im="" vergleich="" zu="" gruppe="" a="" signifikant="" niedriger="" waren="" (𝑃="">< 0,05),="" während="" die="" mrna-spiegel="" in="" den="" gruppen="" c,="" d="" und="" e="" höher="" waren="" als="" in="" gruppe="" b="" (𝑃="">< 0,05).="" (abbildung="" 10).="" wir="" haben="" auch="" die="" mrna="">

Expression von SCF, einem Liganden des Kits. Die mRNA-Expression von SCF in Ratten der Gruppe B war signifikant niedriger als in Gruppe A, wohingegen die Behandlung mit AEHC in den Gruppen C, D und E die SCF-mRNA-Expression erhöhte (Abbildung 10). Darüber hinaus untersuchten wir die Wirkung von AEHC auf die PI3K-Genexpression. An Tag 14 war das PI3K-Genexpressionsniveau in den Gruppen C, D und E signifikant höher als in Gruppe B (𝑃 <>

4. Diskussion

Verstopfung ist eine sehr häufige Erkrankung, die durch schlechten Stuhlgang gekennzeichnet ist. Sie schränkt die Lebensqualität stark ein und bringt sowohl für die Patienten als auch für die gesetzliche Krankenversicherung enorme wirtschaftliche Belastungen mit sich [32]. Naturprodukte und Arzneinahrung finden heute aufgrund ihres Potenzials, neue Medikamente zur Behandlung von Obstipation zu werden, immer mehr Beachtung [37, 38]. Daher untersuchten wir die therapeutischen Wirkungen des AEHC auf Ratten mit Loperamid-induzierter Obstipation. Loperamid, Atropindiphenoxylat und Morphin werden häufig verwendet, um Verstopfung bei Labortieren auszulösen. Unter den drei Medikamenten induziert Loperamid eine verlängerte Dauer der Stuhlentleerung und eine Verzögerung der intestinalen luminalen Passage, da es sowohl die Wassersekretion als auch die reibungslose Bewegung in der Darmwand hemmt [39]. Die Analyse des Körpergewichts in dieser Studie ergab keinen Unterschied innerhalb der beiden Gruppen. Auch nach dem Versuch wurde kein Unterschied festgestellt. Die niedrig dosierte AEHC-Gruppe wies immer noch das niedrigste Körpergewicht auf, die Modellgruppe und die Normalgruppe jedoch das höchste Körpergewicht. Verstopfung ist im Allgemeinen eine funktionelle Erkrankung. Die in dieser Studie induzierte langsame Verstopfung beeinflusste die Nährstoffaufnahme der Ratten und ihr Körpergewicht während des Experiments nicht. Unterschiede in der Kotmenge der Ratten und ihrem Feuchtigkeitsgehalt bestanden zwischen den Gruppen vor der Modellierung nicht; beide nahmen jedoch nach der Modellierung deutlich ab, und der Feuchtigkeitsgehalt der Fäkalien stieg nach der Verwendung von AEHC in unterschiedlichen Dosierungen an. Nach dem Studium der Treibladung von Kohlenstoffpulver des Dickdarms.

von Ratten sah die Modellgruppe eine offensichtliche Abnahme der Rate, während sie in den Gruppen mit niedriger, mittlerer und hoher AEHC-Dosierung normal blieb. Die Ergebnisse zeigten, dass eine Loperamid-induzierte chronische Transitverstopfung, die mit unterschiedlichen Dosierungen von Herba Cistanche behandelt wurde, die Treibfunktion des Dickdarms in unterschiedlichem Maße wiederherstellen kann. Gastrointestinale Hormone sind hochleistungsfähige bioaktive Substanzen, die von endokrinen Zellen der Magen-Darm-Schleimhaut und der Bauchspeicheldrüse abgesondert werden und sowohl stimulierende als auch hemmende Wirkungen besitzen, um die motorische Funktion des Gastrointestinaltrakts zu regulieren [40, 41], von denen GAS, MTL und SS eine große Wirkung haben. Die ersteren beiden Hormone stimulieren die Sekretion von Verdauungssaft, verengen die glatte Muskulatur des Magen-Darm-Trakts, fördern die Bewegung des Magen-Darm-Inhalts und regen die gastrointestinale Motilität an. Im Gegensatz dazu hemmt SS die Sekretion von Verdauungssaft, die Kontraktion der glatten Muskulatur des Magen-Darm-Trakts und die Magen-Darm-Entleerung [42]. Es wurde festgestellt, dass die GAS- und MTL-Spiegel im Dickdarmgewebe der Modellgruppe am niedrigsten waren, was darauf hinweist, dass die Modellierungsmethode die Konzentration von GAS und MTL im Dickdarmgewebe sicherlich verringerte. Als wichtigste gastrointestinale Hormone der Dickdarmmotilität wurde die Konzentration von GAS und MTL durch unterschiedliche Dosierungen von AEHC erhöht und somit die Dickdarmmotilität verbessert. Im Gegensatz dazu war der SS-Gehalt im Dickdarmgewebe der Modellgruppe am höchsten, was darauf hinweist, dass das Modellierungsverfahren die Konzentration von SS im Dickdarmgewebe fördern kann. CGRP ist einer der stärksten Vasodilatatoren und sein Entspannungseffekt ist 10-mal stärker als der Kontraktionseffekt. Als wichtiger Neurotransmitter oder Neuromodulator, der die Verdauungsfunktionen reguliert, kann CGRP einen Großteil der gastrointestinalen Motilität und die Sekretion verschiedener Verdauungssäfte hemmen [43]. Die Konzentration von CGRP in der Modellgruppe war höher als in Gruppe A, was darauf hindeutet, dass das Modellierungsverfahren die CGRP-Konzentration im Dickdarmgewebe erhöhen kann, was auch einer der Faktoren für eine verringerte Darmperistaltik sein kann, die zu Verstopfung führt. Die CGRP-Konzentration im Dickdarmgewebe der AEHC-Gruppen war niedriger als in der Modellgruppe, was darauf hindeutet, dass AEHC eine relativ schwache hemmende Wirkung auf die Dickdarmbewegung hatte. c-Kit ist ein Transmembranprotein. Der Stammzellfaktor (SCF) seines Liganden wird von Neuronenzellen und glatten Muskelzellen produziert. Es fördert die Entwicklung und Differenzierung von ICC und behält seine normale physiologische Funktion bei. Die c-Kit-Kennzeichnung spiegelt indirekt die Menge und Dichte von ICC wider [44, 45]. Darüber hinaus spielt die ICC-Zelle eine Schlüsselrolle bei der Regulierung der gastrointestinalen Motilität und fungiert als Schrittmacher der gastrointestinalen Bewegung. So können einige Störungen der Magen-Darm-Motilität eine Abnahme der Menge und Funktion von ICC-Zellen feststellen. Früheren Studien zufolge waren die Zellzahlen im Dickdarm von Patienten mit chronischer Transitobstipation reduziert. Daher beobachtete die vorliegende Studie die Dickdarmzellen von Ratten unter Verwendung spezifischer Expressions- und immunhistochemischer Techniken. Verglichen mit der Normalgruppe nahm die Anzahl der Zellen in der Modellgruppe bemerkenswert ab, stieg jedoch nach der Behandlung an. Die Studie zeigte, dass ICC-Zellen und Stammzellfaktoren (SCF) eng mit dem c-kit/SCF-Signalweg verwandt sind. SCF ist der natürliche Ligand von c-kit, der in verschiedenen Geweben des Körpers aber hauptsächlich exprimiert wird

wird von den Stromazellen im Knochenmark produziert. Jedes c-kit-Monomer verbindet sich mit einem SCF über die extrazellulären Domänen 1–3. Nach der SCF-Dimerisierung ändert sich die Struktur des c-kit-Monomers und erzeugt eine Homodimerisierung, die dann zur Autophosphorylierung von Aminosäureresten in der Zellmembran führt und verschiedene zweite Signalmoleküle stimuliert, um die Zellfunktionen von ICC zu regulieren. Das zweite Signalmolekül ist Phosphatidylinositol-3--Kinase (PI3K), ein Apolipoprotein, das 4,5--Diphosphoinositid in 3,4,5--Triphosphoinositid durch die Kombination mit Tyrosin 721 von c-kit umwandelt. Frühere Untersuchungen zeigten, dass die PI3K-Inhibitoren Wortmannin und LY294002 zu einer abnormalen Entwicklung von ICC führten, indem sie das Signal blockierten [46]. Unser Experiment ergab, dass die c-kit- und SCF-Protein- und mRNA-Expressionen in der Modellgruppe zunächst abnahmen, dann aber in AEHC-Gruppen mit unterschiedlichen Dosierungen zunahmen, wenn auch auf unternormalen Niveaus. Die mRNA-Expression von PI3K nahm bemerkenswert zu. Daher kann SCF/c-kit über PI3K wirksam werden. Die Ergebnisse zeigten, dass AEHC die glatte Muskulatur des Gastrointestinaltrakts regulieren konnte, indem es die Menge an ICC-Zellen erhöhte. Eine niedrige Dosierung von AEHC hatte keine signifikante Wirkung auf Verstopfung, während seine mittlere Dosierung und hohe Dosierung die erste Defäkationszeit der Ratten verkürzten, den Feuchtigkeitsgehalt des Kots erhöhten, die Treibmittelrate des Dickdarms verbesserten, die Menge des Kots verfeinerten, GAS erhöhten , MTL- und CCK-Spiegel und stärkte die Dickdarmkontraktilität. Die effektive Dosierung von AEHC beträgt initial 20 g/d nach Umstellung, was in dieser Studie der mittleren und hohen Dosierung entspricht.

5. Schlussfolgerungen

AEHC fördert die Darmmotilität durch Verbesserung der ICC-Funktion und Regulierung von Neurotransmittern in dieser Studie, die bewies, dass AEHC das Potenzial hat, Verstopfung zu behandeln und zu verhindern. Die Extrakte verbesserten die Slow-Wave-Produktion des Dickdarms und regulierten den Rhythmus der Kontraktionsaktivität SCF mRNA-Menge PI3K mRNA-Menge c-Kit mRNA-Menge12 Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine der glatten Muskulatur durch Erhöhung der ICC-Menge durch PI3K/SCF/ c-kit-Signalweg. Darüber hinaus könnten jedoch detaillierte experimentelle Studien das Verständnis der anderen molekularen Wege von AEHC bei der Heilung von STC verbessern und dazu beitragen, prospektive klinische Studien zur Bewertung seiner Wirkungen und Sicherheit zu leiten.

Interessenskonflikte

Die Autoren erklären, dass keine Interessenkonflikte bestehen.

Autorenbeiträge

Shuai Yan und Yin-Zi Yue haben gleichermaßen zu dieser Arbeit beigetragen. Alle Autoren haben die Abschlussarbeit genehmigt.

Danksagungen

Diese Arbeit wurde durch ein Stipendium der National Natural Science Foundation of China (NSFC) unterstützt und von der chinesischen Regierung finanziert (81573979). Die Studie wurde auch unterstützt durch das Technologieprojekt der Jiangsu Provincial Administration of Traditional Chinese Medicine, China (Nr. YB2017061), das Suzhou Scientific and Technological Development Program, China (Nr. SYSD2015172), das Project of Suzhou Industrial Technology Innovation, China ( Nr. SYSD2016136, Nr. SYS201775 und Nr. SYS201776) und das College Project des Suzhou Hospital of Traditional Chinese Medicine, China (YQN2015007). Die Autoren bedanken sich für die finanzielle Unterstützung durch ein von der China Postdoctoral Science Foundation (2017M620220) finanziertes Projekt.

Verweise

[1] JY Chang, GR Locke, MA McNally, et al., "Auswirkungen funktioneller Magen-Darm-Störungen auf das Überleben in der Gemeinschaft", American Journal of Gastroenterology, vol. 105, Nr. 4, S. 822– 832, 2010. [2] SM Mugie, M. A. Bennington und C. Di Lorenzo, „Epidemiologie der Verstopfung bei Kindern und Erwachsenen: eine systematische Überprüfung“, Best Practice & Research Clinical Gastroenterology, vol. 25, Nr. 1, p. 18, 2011. [3] NC Suares und AC Ford, „Prävalenz und Risikofaktoren für chronische idiopathische Obstipation in der Gemeinschaft: systematische Überprüfung und Metaanalyse“, American Journal of Gastroenterology, vol. 106, Nr. 9, S. 1582–1591, 2011. [4] A. Lembo und M. Camilleri, „Chronic obstipation“, The New England Journal of Medicine, vol. 349, Nr. 14, S. 1360–1368, 2003. [5] S. Singh, S. Heady, E. Coss-Adame und SSC Rao, „Klinischer Nutzen der Kolonmanometrie bei langsamer Verstopfung“, Neurogastroenterology & Motility, vol. 25, Nr. 6, S. 487–495, 2013. [6] DM Preston und JE Lennard-Jones, „Schwere chronische Verstopfung junger Frauen: ‚idiopathische langsame Obstipation‘“, Gut, vol. 27, Nr. 1, S. 41–48, 1986. [7] P. Kashyap, PJ Gomez-Pinilla, MJ Pozo, et al., „Immunoreactivity for Ano1 detect depletion of Kit-positive interstitial cells of Cajal in patienten with slow-transit obstipation ," Neurogastroenterology & Motilität, vol. 23, Nr. 8, S. 760–765, 2011. [8] JD Belsey, M. Geraint und TA Dixon, „Systematische Überprüfung und Metaanalyse: Polyethylenglykol bei Erwachsenen mit nichtorganischer Verstopfung“, International Journal of Clinical Practice, vol . 64, Nr. 7, S. 944–955, 2010. [9] AC Ford und NC Suares, „Wirkung von Abführmitteln und pharmakologischen Therapien bei chronischer idiopathischer Verstopfung: systematische Überprüfung und Metaanalyse“, Gut, vol. 60, nein. 2, S. 209–218, 2011. [10] OM Aboumarzouk, T. Agarwal, R. Antakia, U. Shariff und RL Nelson, „Cisapride for intestinal constipation“, Cochrane Database of Systematic Reviews, vol. 19, Nr. 1, p. CD007780, 2011. [11] MA Kamm, S. Muller-Lissner, NJ Talley, et al., „Tegaserod for ¨ the treatment of chronic obstipation: A randomized, double-blind, placebo-controlled multinational study“, American Journal of Gastroenterologie, Bd. 100, nein. 2, S. 362–372, 2005. [12] A. Shin, M. Camilleri, G. Kolar, P. Erwin, CP West und MH Murad, „Systematic review with meta-analysis: Highly selected {{80} }HT4-Agonisten (Prucaloprid, Velusetrag oder Naronapride) bei chronischer Obstipation," Alimentary Pharmacology & Therapeutics, vol. 39, Nr. 3, S. 239–253, 2014. [13] J.-H. Chen, Q. Zhang, Y. Yu et al., „Neurogenic and Myogenic Properties of Pan-Colonic Motor Patterns and their Spacetemporal Organization in Rats“, PLoS ONE, vol. 8, Nr. 4, Artikel-ID e60474, 2013. [14] VL Serebruany, ME Mouelhi, H.-J. Pfannkuche, K. Rose, M. Marro und DJ Angiolillo, "Untersuchungen zur 5- HT4-Rezeptorexpression und Wirkungen von Tegaserod auf die menschliche Thrombozytenaggregation in vitro", American Journal of Therapeutics, vol. 17, Nr. 6, S. 543–552, 2010. [15] HS Winter, C. Di Lorenzo, MA Benninga, et al., „Orales Prucaloprid bei Kindern mit funktioneller Obstipation“, Journal of Pediatric Gastroenterology and Nutrition, vol. 57, Nr. 2, S. 197–203, 2013. [16] A. Bove, F. Puccini, M. Bellini, et al., „Consensus statement AIGO/SICCR: Diagnosis and treatment of chronic obstipation and obstructed defecation (part I: Diagnosis )," World Journal of Gastroenterology, Bd. 18, Nr. 14, S. 1555–1564, 2012. [17] GL Lyford, C.-L. He, E. Soffer, et al., "Pan-Kolon Abnahme der interstitiellen Zellen von Cajal bei Patienten mit langsamer Verstopfung" Gut. vol. 51, Nr. 4, S. 496–501, 2002. [18] J.-P. Wang, G.-F. Ding und Q.-Z. Wang, "Interstitielle Zellen von Cajal vermitteln exzitatorische sympathische Neurotransmission in Meerschweinchen-Prostata", Cell and Tissue Research, vol. 352, Nr. 3, S. 479–486, 2013. [19] W.-D. Tong, B.-H. Liu, L.-Y. Zhang, S.-B. Zhang und Y. Lie, "Verringerte interstitielle Zellen von Cajal im Sigma von Patienten mit langsamer Verstopfung", International Journal of Colorectal Disease, vol. 19, Nr. 5, S. 467–473, 2004. [20] D. Wu, X. Wang, J. Zhou, et al., „Traditionelle chinesische Formel, schmierende Darmpille, verbessert Loperamid-induzierte Verstopfung bei Ratten, die an der Verstärkung von Cl- beteiligt ist. Sekretion über das distale Kolonepithel", Journal of Ethnopharmacology, vol. 130, Nr. 2, S. 347–353, 2010. [21] D.-Y. Er und S.-M. Dai, "entzündungshemmende und immunmodulatorische Wirkungen von Paeonia lactiflora Pall., eine traditionelle chinesische Kräutermedizin", Frontiers in Pharmacology, vol. 2, Artikel 10, 2011. [22] Z. Li, H. Lin, L. Gu, J. Gao und C.-M. Tzeng, „Herba Cistanche (Rou Cong-Rong): Eines der besten pharmazeutischen Geschenke der traditionellen chinesischen Medizin“, Frontiers in Pharmacology, vol. 7, Artikel 41, 2016.