Nano-Milchprotein-Schleim-Komplexe: Charakterisierung und Antikrebswirkung Teil 2

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3. Materialien und Methoden

3.1. Materialien

Plantago ovata (Unterziel)-Schale und die reifenden Früchte von Ziziphus Spina-Christi (Nabeq) wurden von Gizeh, Ägypten, gekauft; Milchproteinkonzentrat (MP, 81,3 Prozent Protein) wurde von Fonterra Company (Auckland, Neuseeland) gekauft. Die Kasein- und Molkenproteine ​​in MPC liegen größtenteils in ihrer nativen und mizellaren Form vor, die denen in Milch ähnlich sind. Alle verwendeten Chemikalien waren von analytischer Reinheit.

3.2.Herstellung von Isabgol-Hülsenschleim (IHM) und Nabeg-Schleim (NabM)

Isabgol-Hülsenschleim (IHM) und Nabeq-Schleim (NabM) wurden gemäß dem von El-Maksoud et al. [5]. Kurz gesagt wurde eine Suspension von Isabgolschalen hergestellt, indem 1,2 g in 100 ml destilliertem Wasser gelöst und mit Acetonlösung gereinigt wurden. Das resultierende Gel wurde bis zur Verwendung im Kühlschrank (4-5 Grad) gelagert.

Für NabM wurden die gereiften Nabeq-Früchte gründlich mit Leitungswasser gewaschen, um Schmutz zu entfernen. Die frischen Früchte wurden von den Kernen getrennt und nach dem Schneiden in kleine Stücke mit destilliertem Wasser im Verhältnis 1:10 (w/v) gemischt. Die Mischung wurde unter Verwendung eines Labormischers (Toshiba Mixie, Japan) gemischt und 12 h im Kühlschrank stehengelassen.

Der schleimige Extrakt wurde dann 30 min lang bei 2000 U/min zentrifugiert und durch ein Musselintuch filtriert. Der resultierende viskose lösliche Schleim wurde mit Aceton ausgefällt. Der erhaltene Rohschleim wurde bis zur Verwendung im Kühlschrank aufbewahrt.

Für analytische Zwecke wurde der Schleim in einem Luftofen bei 40 Grad getrocknet und unter Verwendung einer Kugelmühle MM400 (Retsch, Deutschland) gemahlen. Die chemische Zusammensetzung von Flohsamenschalen-Schleimpulver (PHMP) und Nabeq-Schleimpulver (NabMP) wurde gemessen. Die Feuchtigkeits-, Protein-, Fett-, Asche-, Rohfaser- und Gesamtkohlenhydratgehalte waren 8,49, 0,34, 0,21, 2,13, 1,53 und 87,44 Prozent für PHMP und 9,18, 4,72, 2,05, 2,69, 1,70 und 78,26 Prozent für NabMP , beziehungsweise. Das resultierende Pulver wurde bis zur weiteren Analyse bei einer kühlen Temperatur (4-5 Grad) gelagert.

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3.3. Herstellung von Milchprotein-Schleim-Komplexen (MPMC)

Milchprotein (MP)-Komplexe mit IHM und NabM wurden nach Morr et al. mit einigen Modifikationen hergestellt [44]. Milchproteinkonzentrat wurde in destilliertem Wasser (1 0 Prozent) rekonstituiert. Das resultierende Milchproteinkolloid wurde mit IHM und NabM in einem Verhältnis von 1:3 (o/o) gemischt. Der pH-Wert der Mischung wurde auf 1 0 eingestellt und 10 min stehengelassen. Danach wurde der pH-Wert mit 0,1 N HCl auf 3,5 abgesenkt und weitere 10 min belassen. Der pH wurde dann unter Verwendung von 0,5 M NaOH auf pH 4,6 eingestellt, um MPMC durch Filtration auf einem Filterpapier zu sammeln: MP sowie das resultierende MPMC wurden durch Gefriertrocknung bei -45 Grad C für 24 h unter Verwendung des Novalyphe-NL500-Gefriertrockners getrocknet , Savant Instruments, Holbrook, NY, USA.

3.4. Physikalisch-chemische und funktionelle Eigenschaften

3.4.1.pH-Messung

Der pH-Wert der resultierenden Produkte bei 10-prozentiger Lösung wurde unter Verwendung eines kalibrierten pH-Meters (HANNA, HI 902 m, Deutschland) gemessen.

3.4.2.Bestimmung der Schüttdichte (BD), der Stampfdichte (TD) und des Carr-Index

MPMC-Pulver wurde in einen 50-ml-Messzylinder bis zu 25 ml gegossen, entsprechend dem ungezapften Volumen, und dann 5-10 Mal geklopft, bis keine weitere Änderung des Volumens des Pulvers entsprechend dem gezapften Volumen festgestellt wurde.

Schüttdichte, Stampfdichte und Carr-Index wurden nach folgenden Gleichungen bestimmt [45]:

(1)BD=Masse/ ungezapftes Volumen

(2)TD=Masse/gezapftes Volumen

(3)Carr-Index (Prozent)= (TD-BD)/TD×100

3.4.3. Wasserabsorptionsindex (WAI) und Wasserlöslichkeitsindex (WSD)

Wasserlöslichkeit und Wasserabsorptionsindizes von MP und MPMC wurden nach der von Yagc und Gogus beschriebenen Methode mit einigen Modifikationen untersucht [46]. Die Proben (0,5 g) wurden in 10 ml destilliertem Wasser bei 25 Grad in einem Zentrifugenröhrchen dispergiert. Nach 30-minütigem Stehenlassen, wobei das Röhrchen alle 5 Minuten umgedreht wurde, wurden die Proben 15 Minuten lang bei 3500 U/min zentrifugiert. Das Filtrat wurde auf eine Aluminiumplatte übertragen und 3 Stunden bei 105 Grad getrocknet . Das Gewicht des verbleibenden Gels wurde aufgezeichnet und WSI und WAI wurden wie folgt bestimmt:

(4)WAI(g/g)= Gewichtszunahme des Gels/Trockengewicht der Probe

(5) WSI-Prozent=Gewicht der Trockensubstanz im Überstand × 100/Trockengewicht der Probe

3.4.4. Verdaulichkeit von Milcheiweiß

Die Proteinverdaulichkeit wurde nach Abd El-Ghany et al. [47]. Kurz gesagt, MP- und MPMC-Proben wurden in destilliertem Wasser bei einer Konzentration von 6,38 mg/ml dispergiert und der pH wurde auf 8,0 eingestellt. Ein Milliliter frisch zubereitete Enzym-Stammlösung (1,6 mg/ml Trypsin, 3,1 mg/ml Chymotrypsin und 1,3 mg/ml ER-Aminopeptidase1

(ERAP1) wurde mit Proteinsuspension bei 37 Grad gemischt. Der pH-Wert wurde nach 10 min aufgezeichnet und die Enzymaktivität wurde unter Verwendung von Casein als Referenz bestimmt. Zur Berechnung der Proteinverdaulichkeit wurde folgende Gleichung verwendet [47]:

(6) Prozent Verdaulichkeit=210.46-18.10 (pH)

3.5.Phenolische Fraktionen von PHM und NabM

Phenolverbindungen von Schleimproben mittels HPLC-Analyse wurden nach dem von Elsayed et al. [48]. Kurz gesagt wurde der Schleimextrakt unter Verwendung eines HPLC-Systems der Reihe Agilent 126 0 (Agilent Technologies Inc., Santa Clara, CA, USA) analysiert. Die Trennung wurde unter Verwendung der C18-Säule (100 mm × 4,6 mm ID, 5 um) durchgeführt. Die mobile Phase enthielt (A) Wasser 0,2 % H3PO4, (B) Methanol und (C) Acetonitril bei einer Flussrate von 0,6 ml/min. Gradienteneluierung war gemäß dem nächsten Schema: 0-11 min (96 Prozent A., 2 Prozent B);11-13 min (50 Prozent A, 25 Prozent B);13-17 min (40 Prozent A, 30 Prozent B), 17-20,5 Minuten (50 Prozent B, 50 Prozent C) und 20,5-30 Minuten (96 Prozent A, 2 Prozent B). Die Detektionswellenlänge (UV Detektor, 284 nm) wurde auf 284 nm eingestellt. Die Injektionsgröße betrug 20 &mgr;l und die Säulentemperatur wurde bei 30 Grad gehalten. Die Verbindungen wurden durch den Vergleich ihrer Retentionszeit mit denen von authentischen Standards bekannt. Kalibrierungskurven wurden verwendet, um die Verbindungsmengen zu bewerten.

3.6.Gesamtphenol- und Flavonoidgehalt von MP und MPMC

Der Polyphenolgehalt wurde nach der Folin-Ciocalteu-Methode mit einigen Modifikationen bestimmt [5]. Kurz gesagt, 2,8 ml Milli-Q-Wasser, das 10 mg MP oder MPMC enthielt, wurden mit 2 ml 2-prozentigem Natriumcarbonat und 0,1 ml 50-prozentigem Folin-Ciocalteau-Reagenz gemischt. Nach 30-minütiger Inkubation bei Raumtemperatur wurde die Extinktion der Reaktionsmischung bei 750 nm gegen entionisiertes Wasser als Blindwert unter Verwendung eines Spektrophotometers (Hitachi, Modell 100-20) gemessen. Gallussäure (GA) wurde als Standard-Phenolverbindung verwendet und eine 7-Punkte-Standardkurve (0-200 mg/l) wurde konstruiert. Die Ergebnisse wurden als Milligramm Gallussäureäquivalente pro Gramm Protein (GAE/g) ausgedrückt.

FlavonoideDer Gehalt wurde unter Verwendung des Aluminiumchloridverfahrens bestimmt, wie zuvor von Abedelmaksoud et al. beschrieben. mit einigen Modifikationen [5]. Kurz gesagt wurden 2,8 ml Milli-Q-Wasser, das 1 0 mg MP oder MPMC enthielt, mit 0,1 ml 10-prozentigem Aluminiumchlorid-Hexahydrat und 0,1 ml 1 M Kaliumacetat gemischt. Nach 40-minütiger Inkubation bei Raumtemperatur wurde die Extinktion der Reaktionsmischung bei 415 nm gegen deionisiertes Wasser als Blindwert gemessen. Quercetin wurde als Standard unter Verwendung einer 7-Punkte-Standardkurve (0-50 mg/l) verwendet. Der Gesamtflavonoidgehalt wurde als Milligramm Quercetin-Äquivalente (QE/g) ausgedrückt.

3.7. Antioxidative Aktivität von MP und MPMC

Die Gesamtkapazität zum Abfangen freier Radikale von MP und MPMC wurde mit drei verschiedenen Antioxidans-Assays bewertet: stabiles 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl(DPPH), Azino-bis(3-ethylbenzothiazoline{{5 }}Sulfonsäure(ABTS)- und Hydroxylradikal(HS)-Radikale, wie zuvor von El-Maksoud et al.[5] beschrieben.

3.8. Aminosäureprofil von MP und MPMC

Proteinproben wurden unter Verwendung von 6 N HCl gemäß Peksa et al. säurehydrolysiert. [49. Zur Bestimmung der Aminosäuren wurde ein automatisierter Aminosäureanalysator (AAA 400, INGOs Ltd.) verwendet.

3.9. Rheologische Eigenschaften

Die Proben wurden mit einigen Modifikationen wie von Barnes [50] beschrieben hergestellt. Die Viskosität einer 2,5-prozentigen (w/w) Lösung bei pH 7 wurde bei 25 ± 1 Grad unter Verwendung eines Brookfield-Viskosimeters (DV-II plus Pro, Rheocalc Software, Deutschland) bestimmt. Spannung （σ） und Viskosität （n） wurden als Funktion der Scherrate aufgetragen. Der Konsistenzindex (K) und der Fließverhaltensindex (n) des Potenzgesetzmodells wurden berechnet:

Der Wert von n ist gleich 1 für Newtonsche Flüssigkeiten und variiert von 0 bis 1 für scherverdünnende Flüssigkeiten und größer als 1 für scherverdickende Flüssigkeiten [51].

3.10. Differentialscanningkalorimetrie (DSC)

Die thermischen Eigenschaften von MP und MPMC wurden unter Verwendung eines Differentialscanningkalorimeters (PerkinElmer, USA) gemessen. Proben (4-6 mg) wurden in eine Aluminiumplatte gegeben und versiegelt. Jede Pfanne wurde dann auf 350 Grad mit einem Strom von trockenem Stickstoffgas bei 20 ml/min bei einer Heizrate von 10 Grad/min -1 erhitzt. Aus dem endothermen Peak des DSC-Thermogramms wurden die Temperatur des Denaturierungsbeginns, die maximale Übergangstemperatur und der Abbaupunkt abgeschätzt [52]. Der Übergangsenthalpiewert (AH) aus der Fläche unter dem endothermen Peak in der DSC-Kurve wurde bestimmt, und die leere Aluminiumpfanne wurde als Referenz verwendet.

3.11. Fourier-Transformations-Infrarotspektroskopie (FTIR)

Infrarotspektren zwischen 600 und 3500 cm-I wurden bei 25 Grad unter Verwendung eines FTIR-Spektrophotometers (QFA Flex, USA) durch das abgeschwächte Totalreflexionsverfahren unter Verwendung einer Auflösung von 4 cm-I und Erfassen von 10 Scans pro Sekunde gemessen.

3.12. Transmissionselektronenmikroskopie

Die Mikrostruktur von MP und MPMC wurde unter Verwendung eines Transmissionselektronenmikroskops (JEOL, JEM 1400 Flash, Japan) bei 80 kV sichtbar gemacht. Der Kryo-Stadium im Negativ-Färbeverfahren wurde angewendet [53].

3.13.Biologische Studien zu MP und MPMC

3.13.1.In-vitro-Antikrebsaktivität

Alle in diesem Experiment verwendeten Zelllinien wurden von der American Type Culture Collection (ATCC, Manassas, VA, USA) erhalten. In diesem Assay wurden zwei humane Krebszelllinien verwendet: Mamma-Adenokarzinom (MCF{{0}}, ATCCHTB-22TM) und hepatozelluläres Karzinom (HepG2, ATCC4 HB-8065TM). Nicht-krebsartige Hautfibroblasten-BJ-1(ATCC⑧ CRL-2522TM)- und epitheliale Brust-MCF-12F(ATCC CRL-10782TM)-Zelllinien wurden ebenfalls zum Vergleich getestet. Zelllinien wurden in Dulbeccos modifiziertem Eagle-Medium (DMEM/hohe Glukose, HyCloneTM, USA) gezüchtet, das mit 10 % fötalem Rinderserum (FBS, Gibco, Brasilien), 100 U/ml Penicillin, 100 ug/ml Streptomycin und 25 ng/ml ergänzt war. ml Amphotericin B (Sigma, Oakville, ON, Kanada) und bei 37 Grad mit 5 Prozent CO in einem befeuchteten Inkubator kultiviert. Das Kulturmedium wurde jeden zweiten Tag durch ein frisches Medium ersetzt. Als die Zellen 70 Prozent Konfluenz erreichten, wurden sie unter Verwendung von 0,25 Prozent Trypsin-EDTA(1X) Gibco, Kanada, abgelöst und in eine neue Kulturflasche überführt. Nach der zweiten Passage wurden die Zellen trypsiniert und in einer 96--Well-Platte in einer Konzentration von 2 × 10* Zellen/Well ausplattiert. Nach 24 h Inkubation wurde das Medium dekantiert und die Zellen wurden zweimal mit PBS gewaschen, dann mit 200 μl Kulturmedium behandelt, das unterschiedliche Konzentrationen von Proteinproben (1, 5, 10 und 20 ug/ml) enthielt. Doxorubicin-HCl (4 ug/ml) wurde als Positivkontrolle verwendet, während Zellen, die mit einem nicht ergänzten Medium behandelt wurden, als Negativkontrolle genommen wurden. Die Platten wurden bei 37 Grad C für 24 h inkubiert und dieAnti-KrebsDie Aktivität der Proben wurde mit einem Neutralrot-Aufnahmeassay nach Repetto et al. [54]. Kurz gesagt, nach der Inkubationszeit wurde das Medium durch 150 &mgr;l Neutralrot-Farbstoff (100 mg/ml), gelöst in einem serumfreien Medium, ersetzt, und die Zellen wurden bei 37°C für 3 h inkubiert. Als nächstes wurden die Zellen mit PBS gespült und 150 μl Elutionsmedium (EtOH/AcCOOH, 50∶1) wurden hinzugefügt, gefolgt von sanftem Schütteln für 10 Minuten, um eine vollständige Auflösung sicherzustellen. Die Absorption wurde bei 540 nm unter Verwendung eines Mikrotiterplatten-Lesegeräts (BioTek, 96 Well Plates, ELX808, USA) gemessen.

wobei Ac die Extinktion der Kontrolle und As die Extinktion der Probe ist. Der prozentuale Zelltod, dargestellt als Zytotoxizität (Prozent), und die Konzentration, die 50 Prozent der Zellen abtötet (IC50), wurde für jede Probe berechnet.

3.13.2. Bestimmung des p53-, Bax-, Caspase-3- und Bcl-2-Proteinspiegels

Die zellulären Spiegel wichtiger Apoptose-Proteinmarker wurden nach 24 h Nachbehandlung mit dem ICso von MP und MPMC bestimmt. Kurz gesagt wurden Hep G-2-, MCF-7-, Bj-1- und MCF-12-F-Zellen mit 5 × 10* Zellen/Vertiefung in 6--Vertiefung ausgesät Platten. Nach 24-stündiger Inkubation mit den Proben bei 37 Grad wurden die Zellen gesammelt und lysiert, dann bei 10 000rpm für 20 Minuten bei 4 Grad zentrifugiert. Die Proteinkonzentration wurde im Überstand durch den Bradford-Assay [55] quantifiziert. Die Caspase-3-Aktivität wurde unter Verwendung eines kolorimetrischen Assay-Kits (Abcam, ab39401) gemäß den Anweisungen des Herstellers analysiert [56]. Kurz gesagt, 10 mg Protein wurden zu 50 ul Caspase-Substrat gegeben und das Endvolumen wurde unter Verwendung des Reaktionspuffers bei 37 Grad auf 200 ul eingestellt, und die Mischung wurde 1 h im Dunkeln inkubiert, gefolgt von der Messung von Caspase {{24} } Konzentration bei 405 nm.

Die Konzentration des pro-apoptotischen Markers p53, des assoziierten X(Bax) und des anti-apoptotischen Markers B-Zell-Lymphom-2(Bcl-2) wurde im Zelllysat mit dem Enzyme-Linked Immunosorbent Assay Simple Step bestimmt ELISA nach Herstellerangaben (ab207225, ab119506 bzw. ab199080; Abcam, USA) [57,58].

3.13.3. DNA-Schäden durch Schutz vor oxidativem Stress

Der DNA-Schadensassay wurde wie zuvor von Leba et al. beschrieben durchgeführt. [59] mit leichter Modifikation. Kurz gesagt, 3 μl Ribonuclease-Inhibitor-Plasmid RNH1 (NM_203387) humaner markierter ORF-Klon 1 0 ug/μl wurden mit Fentons Reagenz (5 mM H2O2 und 0,3 mM) gemischt FeSO4 und 0,6 mM EDTA）, und das Endvolumen wurde mit Phosphatpuffer (H2POA, 8,3 mM, pH 7,4) auf 25 μL eingestellt. Dann wurde die Lösung für 20 min bei 37 Grad inkubiert. Um die antioxidative Schutzkapazität von MP und MPMC gegen durch Fentons Reagenz induzierte DNA-Schäden zu bewerten, wurden 5 ug/ml MP/NabM, MP/IHM und MP vor der Inkubation zugegeben. RNH1-Plasmid-DNA (3 μl, 10 μg/μl) wurde als DNA-Schutzkontrolle verwendet.

3.13.4.PCR-basierter genomischer DNA-Schäden-Assay

Das Homo-sapiens-Methylentetrahydrofolat-Reduktase (MTHFR)-Gen wurde unter Verwendung von PCR aus genomischem Blut amplifiziert, das zuvor aus gesunden Blutproben unter Verwendung eines Standard-DNA-Extraktionskits extrahiert wurde [60]. Die DNA wurde für 10 min mit oder ohne Fenton's Reagenz, ergänzt mit MP oder MPMC, inkubiert. Ein 198-bp-Fragment wurde unter Verwendung von forward5'-TGAAGGAGAAGGTGTCTGCGGGA-3'- und reversen 5'-AGGACGGTGCGGTGAGAGTG-3'-Primern amplifiziert. Unter Verwendung von 50 ng behandelter DNA wurde die PCR-Amplifikation nach dem nächsten Thermocycler (94 Grad für 5 Minuten, gefolgt von 25 Denaturierungszyklen, die 30 Sekunden bei 94 Grad; Annealing, 30 Sekunden bei 60 Grad; und Extension, 30 Sekunden bei 72 Grad) durchgeführt 25 Zyklen und 1 abschließender Verlängerungszyklus bei 72 Grad für 5 Minuten. Die PCR-Reaktionsproben wurden für die Agarose-Gelelektrophorese (2 Prozent) verwendet.

3.13.5. Genexpressionsprofilierung durch RT-qPCR

Analysen der Genexpression wichtiger Pro- und Anti-Apoptose-Markergene wurden mit erhaltenen IC50-exponierten HepG-2-, MCF-7-, Bj-1- und MCF-12-F-Zellen durchgeführt Daten (Tabelle 3) für 72 h. Kurz gesagt, Gesamt-RNA wurde unter Verwendung des Gesamt-RNA-Reinigungskits (QIAGEN., Thorold, ON, Kanada) gemäß den Anweisungen des Herstellers extrahiert. cDNA

die Synthese wurde wie zuvor von Aboul-Sound et al. beschrieben durchgeführt. [61]. Amplifikationsprogramme und PCR-Amplikon-Spezifität wurden unter Verwendung eines Rotor-Gene O 5- Plex HRM Thermocyclers (Qiagen, Deutschland) mit dem Quanti-Tect SYBR-Green PCR Kit (Qiagen, Deutschland) wie zuvor dokumentiert durchgeführt und bewertet folgenden Standardprotokollen [61]. Die folgenden Primer wurden verwendet: Hs_P53_1 SG QuantiTect Primer Assay (QT00060235); Hs_CASP3_1_SG Quantitect Primer Assay (QT00023947); B-Zell-Lymphom 2 Hs_BCL2_1_SG QuantiTect Primer Assay (QT00025011);Bcl-2-like Protein Hs_BAX_1_SG QuantiTect Primer Assay ( QT00031192); und 18S rDNA Housekeeping (HK)-Gen Hs_RRN18S_1_SGQuantiTect Primer Assay(QT00199367). Das PCR-Thermocycling-Programm und die Genexpressionsanalyse zur Bestimmung der Faltungsänderung relativ zum 18S-Gen wurden im Wesentlichen wie zuvor berichtet durchgeführt [61].

3.14.Statistische Analyse

Die erhaltenen Ergebnisse wurden als Mittelwert ± Standardabweichung ausgedrückt. Statistiken wurden mit SPSSsoftware 11.5 (SPSS, Inc. Chicago, IL, USA) erstellt. Der Multiple-Range-Test von Duncan wurde verwendet, um die signifikanten Unterschiede zwischen allen Proben zu bestimmen, und die Unterschiede wurden bei p als signifikant angesehen<>

4. Schlussfolgerung

Zusammenfassend ergab diese Studie, dass das Mischen von Milchprotein mitPolysaccharidedurch die Differenzierung des Lösungs-pH ist eine geeignete Technik zur Komplexierung. Die resultierenden Milcheiweißschleimkomplexe (MPMC) haben deutlich höhere phenolische undFlavonoideGehalte als das Milchprotein (MP). Die DSC-Ergebnisse zeigten, dass die Komplexierung von MP mit Polysacchariden die thermische Stabilität mit einer Verschiebung der Denaturierungstemperatur signifikant erhöhte. Zur Identifizierung der funktionellen Gruppen wurden FTIR-Analysen durchgeführt und das Fließverhalten der hergestellten Komplexe untersucht. Die WSI und WAI von Milchprotein wurden durch Komplexierung mit NabM oder IHM erhöht. TEM wurde verwendet, um die Mikrostruktur der hergestellten Komplexe sichtbar zu machen. Andererseits wird erwartet, dass die resultierenden Milchproteinkomplexe mit Isabgol-Schalenschleim (HM) oder Nabeq-Schleim (NabM) die nativen Milchproteine ​​in der antioxidativen und Antikrebswirkung übertreffen. Zusammenfassend lässt sich sagen, dass das MPMC einzigartige krebsbekämpfende Eigenschaften gegen Modell-Brustkrebs- und Leberkarzinom-Zelllinien (MCF7 bzw. HEPG2) zeigt, wie durch einen Neutralrot-Aufnahme-Assay nachgewiesen wurde.

MPMC hat beides verbessertAntioxidansund Anti-Proliferations-Aktivität. Caspasen sind Schlüsselregulatorproteine, die an der Induktion der Apoptose beteiligt sind. Die Hochregulierung des Caspase-3-Proteins und der mRNA-Transkripte (Abbildung 9A, B) kontrollieren andere Proteine ​​im Weg der Apoptose, die durch den Kollaps der Mitochondrienmembran mit Bax-induzierter Cytochrom-c-Freisetzung und Aktivierung von Caspase 9 gekennzeichnet ist, was zum anschließenden Eingriff von Caspase 9 führt Caspase 3. Die Hochregulierung von Casp3, p53 und Bax zusammen mit der Reduktion der Bcl-2-Expression zeigte, dass MPMC die Apoptoseinduktion induzierte, wobei die Hochregulierung von p53 die Expression von Bax stimulieren wird, was wiederum Cytochrom c induzieren wird Release, gefolgt von Caspase-9 und -3-Aktivierung. Darüber hinaus ist bekannt, dass Bcl-2 die Cytochrom-c-Freisetzung hemmt. In unserer Studie wurde gezeigt, dass die MPMC-induzierte Bcl-2-Herunterregulierung die ungehinderte Bax-induzierte Cytochrom-c-Freisetzung und die anschließende Apoptose erleichtert.

Die Antikrebswirkung von Protein-Polysaccharid-Komplexen liefert weitere Erkenntnisse über die Anwendbarkeit dieser Komplexe zur Verwendung bei der Entwicklung erschwinglicher und effizienter Krebstherapien mit minimalen Nebenwirkungen.