Teil 2: Cistanche Tubulosa Phenylethanoid-Glykoside induzieren die Apoptose von hepatozellulären Karzinomzellen durch Mitochondrien-abhängige und MAPK-Wege und verstärken die Antitumorwirkung durch Kombination mit Cisplatin

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Wir untersuchten weiter die immunstimulatorische Wirkung von CTPG (Cistanche Tubulosa Phenylethanoidglykoside) bei Mäusen. Nach ip-Injektion, sc-Injektion und ig-Verabreichung von CTPG (200 und 400 mg/kg) gab es keine signifikante Veränderung im Zustand der Mäuse im Vergleich zur unbehandelten Gruppe. Das Körpergewicht der Mäuse hatte auch keinen signifikanten Unterschied zwischen den mit CTPG behandelten Gruppen und den unbehandelten Gruppen (Fig. 7A). Die Herz-, Leber-, Milz-, Lungen-, Nieren- und Thymus-Indizes von Mäusen waren bei allen Gruppen ähnlich, mit Ausnahme der Milz-Indizes von Mäusen in der Gruppe mit 400 mg/kg CTPG ip-Injektion (Tabelle 1). Die Ergebnisse legten nahe, dass die ausgewählten Dosen von CTPG bei Mäusen keine Nebenwirkungen hatten. Die Milz ist ein wichtiges Immunabwehrorgan bei Säugetieren, und ihre Entwicklung beeinflusst direkt die Immunfunktion des Individuums und die Fähigkeit, Krankheiten zu widerstehen. Der Immunorganindex spiegelt die Entwicklung und Immunfunktion von Immunorganen wider. Die Milz enthält eine Vielzahl von Immunzellen, darunter T-Zellen, B-Zellen, natürliche Killerzellen (NK-Zellen), Makrophagen, dendritische Zellen (DCs) und andere, die eine wichtige Rolle im Immunsystem spielen.30 Es wurde berichtet dass Polysaccharide die Anzahl der Immunzellen erhöhen können, um die des Körpers zu verbessernImmunität0,31 Da die ip-Injektion von CTPG den Milzindex signifikant erhöhte (erhöhte sich 0,55-fach), analysierten wir weiter die Anzahl verschiedener Immunzellen in der Milz. Die Ergebnisse zeigten, dass die ip-Injektion von CTPG die Anzahl der T-Zellen (CD3 plus CD19-Zellen) (erhöht um das 0,49-fache), der B-Zellen (CD3-CD19 plus Zellen) (erhöht um 0) signifikant erhöhte. 0,49-fach) und NK-Zellen (CD3-CD19-CD49b plus Zellen) (1,63-fach erhöht) im Vergleich zur unbehandelten Gruppe. CD4-plus- und CD8-plus-T-Zellen spielen als Hauptsubtypen von T-Zellen eine wichtige Rolle bei der antigenspezifischen zellulären Immunantwort.32 Daher haben wir die Anzahl und den Aktivierungsstatus von CD4-plus- und CD8-plus-T-Zellen weiter analysiert Milz. Die Ergebnisse zeigten, dass die ip-Injektion von CTPG nicht nur die Anzahl der CD4-plus- und CD8-plus-T-Zellen signifikant erhöhte (erhöhte sich 0,55- bzw. 0,34-fach), sondern verbesserte auch den Aktivierungszustand von CD4 plus T-Zellen (CD4 plus CD44 plus Zellen) (erhöht um das 0 0,84-fache) (Fig. 7B), diese Ergebnisse legen nahe, dass CTPG eine Immunverstärkungsfunktion hatte.

Die Kombination von CTPG(Cistanche Tubulosa Phenylethanoidglykoside) und Cisplatin zeigten eine starke Antitumorwirkung im H22-Tumor-Mausmodell

Es ist allgemein anerkannt, dass Chemotherapie oder Strahlentherapie zu einer schlechten Prognose führen und zahlreiche unerwünschte Ereignisse hervorrufen können, die auf die Unterdrückung des Immunsystems und Schäden an normalen Geweben und Organen zurückzuführen sein können. Polysaccharide aus der TCM haben immunverstärkende Wirkungen und lindern die durch Chemotherapie verursachte Schädigung von Immunorganen und Immunzellen, z. B. Chitosan33 und Lycium barbarum-Polysaccharide.34 Das obige Ergebnis zeigte, dass CTPG(Cistanche Tubulosa Phenylethanoidglykoside) könnte die Nebenwirkungen von Cisplatin auf das Immunsystem lindern. Daher wurde die Antitumorwirkung von CTPG in Kombination mit Cisplatin im H22-Tumor-Mausmodell bewertet. Wie in 8A gezeigt, unterdrückten CTPG allein, Cisplatin allein und die Kombination von CTPG und Cisplatin (CTPG plus Cisplatin) signifikant das H22-Tumorwachstum im Vergleich zur Kontrollgruppe. CTPG plus Cisplatin zeigte eine stärkere inhibitorische Wirkung als CTPG und Cisplatin allein. Am 20. Tag betrugen die Tumorvolumina in der Kontrollgruppe, Cisplatin allein, CTPG allein und CTPG plus Cisplatin-Gruppen etwa 1707,8, 722,5, 1033,8 bzw. 367,5 mm3. Am selben Tag wurden die Tumore zur visuellen Beobachtung (Fig. 8B) und zum Gewichtsvergleich (Fig. 8C) gesammelt. CTPG plus Cisplatin zeigte bessere therapeutische Wirkungen auf das H22-Tumor-Mausmodell als CTPG oder Cisplatin allein. Das Tumorgewicht in der CTPG plus Cisplatin-Gruppe war niedriger als das in anderen Gruppen. Diese Ergebnisse legen nahe, dass die Antitumoraktivität von CTPG und Cisplatin zu synergistischen Wirkungen führt.

Das Körpergewicht der Mäuse wurde gemessen, um den Gesundheitszustand der Mäuse widerzuspiegeln. Das Körpergewicht nahm nach der Behandlung mit Cisplatin bemerkenswert ab, was auf eine durch Cisplatin induzierte schwere systemische Toxizität hindeutet.35 Im Vergleich dazu verbesserte CTPG in Kombination mit Cisplatin den durch Cisplatin induzierten Körpergewichtsverlust signifikant, während CTPG(Cistanche Tubulosa Phenylethanoidglykoside) allein hatte keine signifikante Wirkung auf das Körpergewicht der Mäuse (Fig. 8D). Die Organe einschließlich Milz, Herz, Leber, Lunge, Niere und Thymusdrüse wurden ebenfalls isoliert, um Organindizes zu berechnen. Verglichen mit der unbehandelten Gruppe waren die Milz-Indizes durch Cisplatin bzw. CTPG signifikant verringert bzw. erhöht. CTPG plus Cisplatin erholte sich im Vergleich zu Cisplatin allein zu Milz-Indizes. Andere Organindizes zeigten keinen signifikanten Unterschied zwischen allen Gruppen (Tabelle 2).CTPG(Cistanche Tubulosa Phenylethanoidglykoside) Kombiniert mit Cisplatin Enhanced dieImmunitätvon Tumormäusen.

Die obigen Ergebnisse zeigten, dass CTPG(Cistanche Tubulosa Phenylethanoidglykoside) erhöhte die Immunitätvon Mäusen und hemmte die durch Cisplatin induzierte Apoptose von Splenozyten. Wir untersuchten weiter, ob die Antitumorwirkung von CTPG plus Cisplatin mit einer verbesserten Immunität korrelierte. Im Prozess des Auftretens und der Entwicklung von Tumoren spielt das körpereigene Immunsystem eine wichtige Immunüberwachungsfunktion, und die T-Zell-vermittelte zelluläre Immunität spielt eine Schlüsselrolle. CD4-plus-T-Zellen haben die Funktion, die zelluläre Immunität und die humorale Immunantwort zu unterstützen, und CD8-plus-T-Zellen sind die Haupteffektorzellen einer Immunantwort, die Zielzellen spezifisch töten können und eine wichtige Rolle bei der Tumorimmunität und der antiviralen Immunität spielen.32 Die Milz von Tumor-tragenden Mäusen wurde gesammelt, um die Anzahl von T-Zellen und B-Zellen durch Durchflusszytometrie nachzuweisen. Die Häufigkeit und Anzahl von T-Zellen, einschließlich CD4-plus- und CD8-plus-T-Zellen, in der CTPG-plus-Cisplatin-Gruppe war signifikant höher als in der Kontrollgruppe (um 0,55- bzw. 0,7-fach erhöht) und Cisplatin-Gruppen (erhöht 0,92- bzw. 1,16-fach) (Abbildung 9A und B). Im Vergleich zur Kontrollgruppe erhöhte CTPG allein teilweise auch die Anzahl der CD4-plus- und CD8-plus-T-Zellen, obwohl es keinen signifikanten Unterschied gab. Die Frequenzen und Anzahlen von B-Zellen hatten keinen signifikanten Unterschied zwischen allen Gruppen.

Vom Myeloid abgeleitete Suppressorzellen (MDSCs) und regulatorische T-Zellen (Tregs) vermehren sich in Tumoren und hemmen Antitumor-Immunantworten; sie unterdrücken die Aktivierung und Expansion von CD4 plus T-Zellen, die Funktion von Effektor-T-Zellen, die Aktivierung und/oder Proliferation und Zytokinbildung von CD4 plus und CD8 plus T-Zellen, die B-Zell-Proliferation und die Immunglobulinproduktion und den Klassenwechsel, die zytotoxischen Funktionen von NK und natürlichen Killer-T-Zellen (NKT) und die Funktion und Reifung von DCs.36-38 Die Häufigkeit und Anzahl von MDSCs (CD11b plus Gr-1 plus ), Makrophagen (CD11b plus Gr -1-) und Tregs (natürliche Tregs: CD4 plus CD25 plus Foxp3 plus ; induzierte Tregs: CD4 plus CD25-Foxp3 plus ) in der Milz von Tumormäusen wurden durch Durchflusszytometrie analysiert. Verglichen mit der Kontrollgruppe nahmen die Häufigkeit und Anzahl von MDSCs nach Injektion mit Cisplatin allein (1,56-fach verringert) oder in Kombination mit CTPG signifikant ab(Cistanche Tubulosa Phenylethanoidglykoside) (um 0,62 Mal verringert). Die Anzahl der CD11b-plus-Gr-1–-Makrophagen nahm ebenfalls signifikant ab, obwohl es keine signifikante Änderung ihrer Häufigkeit gab (Abbildung 9C). Außerdem CTPG(Cistanche Tubulosa Phenylethanoidglykoside) allein und die Behandlung mit CTPG plus Cisplatin verringerte signifikant die Häufigkeit von induzierten Tregs (verringerte das {{0}}-0,33- bzw. 0,37-fache) (Fig. 9D). Diese Ergebnisse legten nahe, dass die Antitumorwirkung von CTPG plus Cisplatin mit der verbesserten Immunität korreliert sein könnte, die durch die erhöhte Anzahl von T-Zellen und die verringerte Anzahl von MDSCs und Tregs gekennzeichnet ist.