Schützende Wirkung von Djulis-Extrakt (Chenopodium Formosanum) gegen UV- und AGEs-induzierte Hautalterung durch Linderung von oxidativem Stress und Kollagenabbau Teil 1

Abstrakt: Hautalterung ist ein komplexer Prozess, der Lichtalterung und Glykationsstress umfasst, die einige grundlegende Mechanismen teilen und gemeinsame Mediatoren haben. Sie können Hautschäden und Kollagenabbau verursachen, indem sie oxidativen Stress und die Ansammlung reaktiver Sauerstoffspezies (ROS) auslösen. Chenopodium formosanum (CF), auch bekannt als Djulis, ist ein traditionelles Getreide in Taiwan. Diese Studie untersuchte die Schutzmechanismen von CF-Extrakt gegen ultraviolette (UV) Strahlung und durch fortgeschrittene Glykationsendprodukte (AGEs) induzierten Stress. Die Ergebnisse zeigten, dass CF-Extrakt eine starke antioxidative und freie Radikale abfangende Wirkung hatte. Es könnte die UV-induzierte intrazelluläre ROS-Erzeugung reduzieren und das antioxidative Abwehrsystem initiieren, indem es den Signalweg des Kernfaktors Erythroid 2-verwandter Faktor 2 (Nrf2)/Hämoxygenase-1 (HO-1) aktiviert in menschlichen Hautfibroblasten. CF-Extrakt modulierte die Signalwege der Mitogen-aktivierten Proteinkinase (MAPK) und des transformierten Wachstumsfaktors Beta (TGF-), um die durch oxidativen Stress verursachte Hautalterung zu lindern. Darüber hinaus zeigten die Ergebnisse, dass CF-Extrakte nicht nur die Kollagensynthese förderten, sondern auch den altersbedingten Kollagenabbau verbesserten. CF-Extrakt schwächte die durch AGEs induzierte ROS-Produktion und die Hochregulierung von Rezeptoren für AGEs (RAGE). Die Gesamtergebnisse deuten darauf hin, dass CF-Extrakt eine wirksame Anti-Aging-Strategie darstellt, indem es Hautschäden durch oxidativen Stress und Kollagenverlust mit starken antioxidativen, Anti-Photoaging- und Antiglykationsaktivitäten verhindert.

Glykosid von Cistanche kann auch die SOD-Aktivität im Herz- und Lebergewebe erhöhen und den Gehalt an Lipofuscin und MDA in jedem Gewebe erheblich reduzieren, wodurch verschiedene reaktive Sauerstoffradikale (OH-, H₂O₂ usw.) effektiv abgefangen und vor verursachten DNA-Schäden geschützt werden durch OH-Radikale. Cistanche-Phenylethanoidglykoside haben eine starke Fähigkeit, freie Radikale abzufangen, eine höhere Reduktionsfähigkeit als Vitamin C, verbessern die Aktivität von SOD in der Spermiensuspension, reduzieren den MDA-Gehalt und haben eine gewisse schützende Wirkung auf die Funktion der Spermienmembran. Cistanche-Polysaccharide können die durch D-Galaktose verursachte Aktivität von SOD und GSH-Px in Erythrozyten und Lungengewebe experimentell seneszierender Mäuse steigern, außerdem den Gehalt an MDA und Kollagen in Lunge und Plasma verringern und den Gehalt an Elastin erhöhen eine gute Abfangwirkung auf DPPH, verlängert die Zeit der Hypoxie bei seneszenten Mäusen, verbessert die Aktivität von SOD im Serum und verzögert die physiologische Degeneration der Lunge bei experimentell seneszenten Mäusen. Bei der zellulären morphologischen Degeneration haben Experimente gezeigt, dass Cistanche über eine gute antioxidative Fähigkeit verfügt und hat das Potenzial, ein Medikament zur Vorbeugung und Behandlung von Hautalterungskrankheiten zu sein. Gleichzeitig hat Echinacosid in Cistanche eine erhebliche Fähigkeit, freie DPPH-Radikale abzufangen, reaktive Sauerstoffspezies abzufangen und den durch freie Radikale verursachten Kollagenabbau zu verhindern, und hat auch eine gute Reparaturwirkung auf Schäden durch Thymin-Radikalanionen.

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Schlüsselwörter: Chenopodium formosanum; Djulis; UV-Strahlung; Advanced Glycation End-Produkte; Glykationsstress; reaktive Sauerstoffspezies

1. Einleitung

Unter Alterung versteht man die fortschreitende Verschlechterung der physiologischen Funktion von Zellen und Geweben im Körper. Während des Alterns beeinträchtigt die Ansammlung beschädigter Produkte allmählich die Organisation und Reparaturfähigkeit des Gewebes. Als Schutzbarriere des Körpers ist die Haut häufig intrinsischen und extrinsischen Alterungsfaktoren ausgesetzt [1]. Der wichtigste äußere Faktor, der zur Hautalterung beiträgt, ist die Einwirkung von UV-Strahlung im Sonnenlicht, die als Photoalterung bezeichnet wird [2]. Neben Umweltreizen wird die Akkumulation von AGEs als interner Faktor der chronologischen Alterung angesehen, der den Hautalterungsprozess durch Glykationsstress auslöst [3].

Sowohl durch UV-Licht erzeugte Umwelt-ROS als auch durch oxidativen Stoffwechsel gebildete endogene ROS regulieren den zellulären oxidativen Stress und zerstören die kollagenreiche extrazelluläre Matrix (ECM), die nicht nur das Kennzeichen der Alterung des Hautbindegewebes, sondern auch die Hauptursache für die Verschlechterung der Haut ist [ 4]. Schäden an Kollagenvernetzungen schwächen die strukturelle Integrität der Haut und erhöhen die Steifheit und Sprödigkeit des Kollagennetzwerks, wodurch Faltenbildung, Elastizitätsverlust und Trockenheit der Haut begünstigt werden [5].

UVB-Strahlen sind das schädlichste Wellenband der Sonnenstrahlung, das die Erde erreicht, was zu oxidativem Stress führt, indem es die ROS-Bildung stimuliert und an Hyperpigmentierung, Hautentzündungen, Immunsuppression, Lichtalterung und Karzinogenese beteiligt ist [6,7]. Es ist bekannt, dass Nrf2 als wichtiger Regulator der zellulären antioxidativen Abwehr gegen durch UV-Strahlung verursachte kutane Lichtschäden fungiert. Zellen können oxidativen Stress beseitigen und Verletzungen vorbeugen, indem sie den Nrf2/Kelch-ähnlichen ECH-assoziierten Protein 1 (Keap1)-Signalweg regulieren [8,9]. Nach UV-Exposition aktiviert eine übermäßige ROS-Produktion MAPK und den Kernfaktor Kappa B (NF-κB), was wiederum die Hochregulierung von Matrixmetallopeptidasen (MMPs) induziert, was im Abbau von Kollagen und Elastin gipfelt. Darüber hinaus hemmt das Aktivatorprotein 1 (AP-1) die TGF-Signalisierung und führt zu einer Verringerung der Prokollagensynthese [10,11].

AGEs sind eine heterogene Gruppe von Molekülen, die durch Glykierung entstehen, einer spontanen nichtenzymatischen Reaktion zwischen reduzierenden Zuckern und Aminogruppen von Proteinen [3]. Die Interaktion zwischen AGEs und einem spezifischen AGE-Rezeptor (RAGE) löst die Bildung von ROS aus und verändert die Genexpression bei AGE-bedingten Erkrankungen wie Diabetes und Nierenversagen [12,13]. AGEs reichern sich mit zunehmendem Alter in ECM-Proteinen an, und Nε -(1-Carboxymethyl)-L-Lysin (CML), das durch oxidative Modifikation produziert wird, ist das wichtigste glykierte Protein beim Menschen [14,15]. Während der intrinsischen Alterung werden AGEs in der Epidermis und Dermis exprimiert, und es kann eine deutlich erhöhte Anreicherung von AGEs in den sonnenexponierten Hautbereichen beobachtet werden [16]. Darüber hinaus verstärkt UV die Ablagerung von AGEs durch Glykierung des elastischen Fasernetzwerks [17].

Chenopodium formosanum (CF), auch bekannt als Djulis, ist eine essbare Pflanze in Taiwan und wird normalerweise mit Reis oder Hirse als Grundnahrungsmittel gekocht. CF gilt als Lebensmittel mit hohem Nährwert und als Quelle bioaktiver Verbindungen für die menschliche Gesundheit [18]. Neben reichlich Ballaststoffen, Stärke, getreidebeschränkten essentiellen Aminosäuren und Polyphenolen [19,20] enthält CF auch eine Klasse von Verbindungen mit einer langen Geschichte medizinischer Verwendung, die sogenannten Phytoecdysteroide [21–24]. Frühere Studien haben berichtet, dass CF mehrere biologische Aktivitäten aufweist, darunter Anti-Adipositas [21], blutdrucksenkend [22], antihyperglykämisch [25,26], hepatoprotektiv [27–29], antikarzinogen [23,24,30,31], und Anti-Aging-Eigenschaften [19,32]. Dennoch wurden bisher weder die detaillierten Hautschutzwirkungen von CF-Extrakt noch die zugrunde liegenden Mechanismen gegen die intrinsische und extrinsische Hautalterung im Zusammenhang mit oxidativem Stress und Glykationsstress aufgeklärt. Der Zweck dieser Studie bestand darin, die antioxidativen Wirkungen von CF-Extrakt zu klären und die zugrunde liegenden Anti-Aging-Abwehrmechanismen von CF-Extrakt gegen den Kollagenabbau durch UV-Strahlung und AGEs in menschlichen Hautfibroblasten zu untersuchen.

2. Ergebnisse

2.1. Quantitative HPLC-ESI-MS/MS- und MRM-Analyse

Die Gehaltsanalyse der bioaktiven Zielverbindungen im CF-Extrakt wurde mittels Hochleistungsflüssigkeitschromatographie (HPLC)-Mass/MS und den Methoden der Mehrfachreaktionsüberwachung (MRM) durchgeführt. Das MRM-Ionenchromatogramm und das Massenspektrum im positiven Modus der Elektrospray-Ionisation (ESI) von 20-Hydroxyecdyson und Rutin-Standard wurden in den ergänzenden Materialien gezeigt. Der Übergang vom Vorläuferion bei m/z 481 zur Produktion bei m/z 371 für 20-Hydroxyecdyson (Abbildung S1a) und der Übergang vom Vorläuferion bei m/z 611 zur Produktion bei m/z 3 03 für Rutin (Abbildung S1b) werden angezeigt. Abbildung S2 zeigt das Gesamtionenchromatogramm (TIC) und das extrahierte Ionenchromatogramm (EIC) von 20-Hydroxyecdyson (m/z 481) und Rutin (m/z 611) in CF-Extrakt. Der Gehalt an Rutin und 20-Hydroxyecdyson im CF-Extrakt betrug 14,5 ± 0,4 mg/g bzw. 19,5 ± 0,6 mg/g.

2.2. Antioxidative Aktivität und freie Radikale abfangende Wirkung von CF-Extrakt

2.2.1. DPPH-Aktivität zum Abfangen freier Radikale

DPPH ist ein häufig verwendetes Reagenz zur Abschätzung der gesamten Radikalfängeraktivität von Antioxidantien durch den Nachweis der Fähigkeit von Extrakten, Wasserstoffprotonen bereitzustellen. Das Ergebnis zeigte, dass CF-Extrakt eine starke Abfangaktivität von 40,2 Prozent ± 3,3 Prozent bei 50 µg/ml und 89,1 Prozent ± 2,6 Prozent bei 500 µg/ml aufwies, während die Abfangaktivität von Ascorbinsäure 96,6 Prozent betrug ± 2,3 Prozent bei 10 µg/ml (Abbildung 1a). Die halbmaximale Hemmkonzentration (IC50) des CF-Extrakts beim DPPH-Radikalfänger betrug 84,7 ± 13,0 µg/ml.

2.2.2. Leistungsfähigkeit reduzieren

Die in der vorliegenden Studie beobachtete Reduktionsfähigkeit des CF-Extrakts ist in Abbildung 1b dargestellt. Die Reduktionskapazität des CF-Extrakts betrug 51,3 Prozent ± 1,0 Prozent bei 100 µg/ml und 66,9 Prozent ± 1,7 Prozent bei 1000 µg/ml. Die Reduktionskapazität der Vergleichskontroll-Ascorbinsäure (100 µg/ml) betrug 79,7 Prozent ± 1,2 Prozent.

2.2.3. Radikalfängeraktivität für Superoxidanionen (O2 −).

Die Radikalfängeraktivität für Superoxidanionen betrug 82,2 Prozent ± 6,1 Prozent für 250 µg/ml BHA (Vergleichskontrolle) und reichte von 59,6 Prozent ± 3,5 Prozent bis 73,1 Prozent ± 2,6 Prozent für 100–1000 µg/ml CF-Extrakt (Abbildung 1c).

2.2.4. Wasserstoffperoxid (H2O2)-Fängeraktivität

Die Wasserstoffperoxid-Fängeraktivität reichte von 10,3 Prozent ± 1,1 Prozent bis 61,1 Prozent ± 2,3 Prozent für 200–1500 µg/ml CF-Extrakt und betrug 96,3 Prozent ± 2,0 Prozent für BHA (250 µg/ml) ( Abbildung 1d). Der IC50-Wert des CF-Extrakts betrug 956,5 ± 59,2 µg/ml für die Wasserstoffperoxid-Fängeraktivität.

2.2.5. Aktivität zum Abfangen von Hydroxylradikalen (· OH).

Die Hydroxylradikalfängeraktivitäten des CF-Extrakts (100–1000 µg/ml) und der Vergleichskontrolle Mannitol (µg/ml) sind in Abbildung 1e dargestellt. Die Hydroxylradikalfängeraktivität von 1000 µg/ml CF-Extrakt betrug 63,3 Prozent ± 3,5 Prozent und die von Mannitol (2500 µg/ml) betrug 69,7 Prozent ± 2,2 Prozent. Die Fängerwirkung des CF-Extrakts war ähnlich der der Vergleichskontrolle, und der IC50 von CF für die Hydroxylradikalfängeraktivität betrug 240,7 ± 24,3 µg/ml.

2.2.6. Chelatbildende Aktivität von Eisenionen (Fe2 plus).

Abbildung 1f zeigt die metallchelatbildende Aktivität des CF-Extrakts und der Vergleichskontrolle EDTA. Die Aktivität reichte von 6,5 Prozent ± 1,4 Prozent bis 67,6 Prozent ± 2,5 Prozent für 100–1000 µg/ml CF-Extrakt und 97,5 Prozent ± 2,0 Prozent für 100 µM EDTA. Der IC50-Wert des CF-Extrakts betrug 625,5 ± 46,0 µg/ml für die Metallchelatbildung.

2.3. CF-Extrakt linderte UV-induzierte Zytotoxizität in Hs68-Zellen

Um die zytotoxische Wirkung von CF-Extrakt in menschlichen Hautfibroblasten (Hs68-Zellen) zu bewerten, wurde die Lebensfähigkeit von mit CF-Extrakt behandelten Zellen mittels MTT-Assay bewertet. Wie in Abbildung 2a gezeigt, induzierte der CF-Extrakt in Hs68-Zellen im Konzentrationsbereich von 50–250 µg/ml keine Zytotoxizität; Daher wurden diese Konzentrationen für die folgenden Experimente ausgewählt.

Hs68-Zellen wurden UVB-Strahlung ausgesetzt und die Lebensfähigkeit der Zellen wurde bestimmt, um die Schutzwirkung des CF-Extrakts gegen Lichtschäden zu bewerten. Die Ergebnisse zeigten, dass UVB-Strahlung (20–100 mJ/cm2) dosisabhängig Zytotoxizität in Hs68-Zellen induzierte (Abbildung 2b). Dennoch wurden Hs68-Zellen UVB (80 mJ/cm2) ausgesetzt und anschließend 24 Stunden lang mit CF-Extrakt (100, 150, 200 und 250 µg/ml) behandelt; CF-Extrakt linderte die UV-induzierte Zytotoxizität deutlich (Abbildung 2c).

2.4. CF-Extrakt reduzierte die UV-induzierte intrazelluläre ROS-Erzeugung in Hs68-Zellen

ROS können durch Lichtalterung der Haut bedingte Proteine ​​und eine nachgeschaltete Signaltransduktion induzieren, indem sie intrazellulären oxidativen Stress in der menschlichen Haut verursachen. Ein fluorogener Farbstoff misst die Menge an oxidativen freien Radikalen in den Zellen. Nach 2-stündiger Bestrahlung mit UVB (80 mJ/cm2) wurde die ROS-Produktion in Hs68-Zellen im Vergleich zu der nicht bestrahlten Gruppe um das 2,{6}fache induziert. Allerdings verringerte die Behandlung mit 100–250 µg/ml CF-Extrakt die ROS-Erzeugung deutlich. ROS wurden im Vergleich zur Strahlungsgruppe durch CF-Extrakt bei 250 µg/ml um das 1,64-fache herunterreguliert (Abbildung 3).

2.5. CF-Extrakt initiierte das antioxidative Abwehrsystem durch Aktivierung des Nrf2/HO-1-Signalwegs in Hs68-Zellen

2.5.1. Die Auswirkungen von CF-Extrakt auf die UV-induzierte Expression von Nrf2/HO-1

Unter normalen Bedingungen bildet Keap1 einen Komplex mit Nrf2 und fördert die Ubiquitinierung und den Abbau von Nrf2. Der Nrf2-Signalweg wird jedoch initiiert, wenn Zellen durch oxidativen Stress in der Umwelt stimuliert werden. In dieser Studie wurden Hs68-Zellen mit CF-Extrakt behandelt, um dessen Auswirkungen auf den Nrf2-Signalweg nach UV-Bestrahlung zu beobachten. Wie in Abbildung 4 gezeigt, induzierte UVB-Strahlung (40 mJ/cm2) die Nrf2-Expression und verringerte die Keap1-Expression, wohingegen CF-Extrakt (250 µg/ml) die Nrf2-Expression im Vergleich zur Strahlungsgruppe signifikant um das 2,4-fache induzierte . Nach UV-Bestrahlung und Behandlung mit CF-Extrakt bei 250 µg/ml erhöhte sich die Proteinexpression von HO-1 um das 2,5--fache. Die Ergebnisse zeigten, dass CF-Extrakt den antioxidativen Abwehrmechanismus über den Nrf2/HO-1-Signalweg initiieren und Zellen vor oxidativem Stress in einem biologischen System schützen könnte.

2.5.2. Die Auswirkungen von CF-Extrakt auf die UV-induzierte nukleare Translokation von Nrf2

UV-Strahlung fördert die Aktivierung und Translokation von Nrf2 in den Zellkern. In dieser Studie wurde der Nrf2-Immunfluoreszenz-Färbetest in menschlichen Hautfibroblasten durchgeführt, um den Grad der Nrf2-Aktivierung zu bestimmen. Die Translokation von Nrf2 vom Zytoplasma in den Zellkern nahm nach UVB-Bestrahlung zu, wohingegen die Translokation auch nach der Behandlung mit CF-Extrakt verstärkt wurde (Abbildung 5). Die Ergebnisse des Immunfluoreszenz-Färbetests stimmten mit der Nrf2-Expression in Abbildung 4 überein.

2.6. CF-Extrakt moduliert den mit Hautalterung verbundenen zellulären Signalweg in Hs68-Zellen

2.6.1. Die Auswirkungen von CF-Extrakt auf die UV-induzierte Expression von MMP-1, -3, -9 und TIMP-1

UV-Strahlung induziert die Phosphorylierung von MAPK, die eine nachgeschaltete Signaltransduktion auslöst, um den Transkriptionsfaktor AP{{0}} zu aktivieren und die MMP-Expression zu steigern. Wenn die Haut oxidativem Stress ausgesetzt ist, werden MMPs hochreguliert, was dann den Kollagenabbau und die Faltenbildung induziert. Wie in Abbildung 6 dargestellt, erhöhte UVB-Strahlung die MMP-1-, -3- und -9-Expression signifikant (2.2-fach, 1.3-fach und 1,5-fach im Vergleich zur Kontrollgruppe), wohingegen CF-Extrakt die Expression von MMPs abschwächte. Die Behandlung mit CF-Extrakt bei 250 µg/ml unterdrückte die Werte der UVB-induzierten Expression von MMP-1, MMP-3 und MMP-9 signifikant um das 1,1-fache, also 0 .9-fach bzw. 1.1-fach im Vergleich zur Kontrollgruppe.

Gewebeinhibitoren von Metalloproteinasen (TIMPs) sind Inhibitoren von MMPs, die im Hautbindegewebe exprimiert werden. Die TIMP-1-Expression wurde nach UVB-Bestrahlung verringert und durch CF-Extrakt (100–250 µg/ml) verstärkt (Abbildung 6). Diese Ergebnisse zeigten, dass die Behandlung mit CF-Extrakt die UV-induzierte Erhöhung der MMP-1-, -3- und -9-Spiegel und die Verringerung von TIMP-1 verhinderte; Daher kann CF-Extrakt den UV-induzierten Abbau der extrazellulären Matrix der Haut verringern und die strukturelle Integrität in der Dermis aufrechterhalten.

2.6.2. Die Auswirkungen von CF-Extrakt auf die UV-induzierte Expression von AP-1 und MAPK

UVB-Strahlung regulierte die Expression von pc-Jun und c-Fos (2,4-- und 1,2--fach im Vergleich zur Kontrollgruppe), wohingegen sie durch CF-Extrakt (100–250 µg/d) herunterreguliert wurden. ml). Die Behandlung mit CF-Extrakt verringerte die Expression von pc-Jun und c-Fos bei 250 µg/ml deutlich (Abbildung 7a). Abbildung 7b zeigte, dass die UVB-Exposition die Expression der Phosphorylierung von p38 und ERK auf das 2,1-- und 1,5-fache im Verhältnis zu den Gesamtproteinspiegeln in Hs68-Zellen erhöhte. Die Behandlung mit CF-Extrakt (100–250 µg/ml) hemmte jedoch die UVB-induzierte MAPK-Überexpression signifikant. Die Phosphorylierung von p38 und ERK wurde mit einer Konzentration von 250 µg/ml CF-Extrakt auf das Grundniveau unterdrückt. Darüber hinaus könnte CF-Extrakt die UV-induzierte Überexpression von AP-1 hemmen und so die Haut vor Lichtalterung schützen.

2.6.3. Die Auswirkungen von CF-Extrakt auf die UV-inhibierte Expression von TGF- und Smad3

TGF- spielt eine zentrale Rolle bei der Synthese der extrazellulären Matrix und kontrolliert die Kollagenhomöostase in der menschlichen Dermis. Erhöhte ROS in Fibroblasten beeinträchtigen die TGF-Signalisierung durch Herunterregulieren der TGF- und Smad3-Expression, was zum Verlust von Kollagen und zur Zerstörung von Hautgewebe bei gealterter Haut führt. In ähnlicher Weise regulierte UVB-Strahlung in unserer Studie die Expression von TGF- und Smad3 herunter, um die Kollagensynthese zu hemmen. Im Vergleich zur Kontrollgruppe waren die TGF- und Smad3-Expression in der UVB-bestrahlten Gruppe geringer; CF-Extrakt (100–250 µg/ml) stellte jedoch die Proteinexpression deutlich wieder her (Abbildung 8).

2.7. CF-Extrakt schwächte die AGEs-induzierte ROS-Produktion und RAGE-Expression in Hs68-Zellen ab

Um die Wirkung von CF-Extrakt auf Glykationsstress zu untersuchen, wurden Hs68-Zellen mit CML behandelt. Nach 6-stündiger Behandlung der Zellen mit CML (100 µg/ml) war die Menge an erzeugten ROS 1,92-fach höher als die in der nicht behandelten Gruppe. Allerdings verringerte die Behandlung mit CF-Extrakt (100–250 µg/ml) die ROS-Produktion deutlich. ROS wurde im Vergleich zur CML-behandelten Gruppe durch CF-Extrakt bei 250 µg/ml um das 1,30--Fache herunterreguliert (Abbildung 9). Darüber hinaus steigerte CML (100 µg/ml) die RAGE-Expression signifikant auf das 2,2-fache im Vergleich zur Kontrollgruppe, wurde jedoch durch die Behandlung mit CF-Extrakt abgeschwächt (Abbildung 10), was darauf hindeutet, dass CF-Extrakt die Induktion hauptsächlich reduzierte verursacht durch CML.

2.8. CF-Extrakt förderte die Kollagensynthese und verbesserte den altersbedingten Kollagenabbau in Hs68-Zellen

2.8.1. Die Auswirkungen von CF-Extrakt auf die Kollagensynthese

Hs68-Zellen wurden 24 Stunden lang mit CF-Extrakt (50–250 µg/ml) behandelt und die Prokollagenexpression vom Typ I wurde mittels Western Blot gemessen. Nach der Behandlung mit CF-Extrakt war die Expression von Typ-I-Prokollagen signifikant hochreguliert (1,7-fach im Vergleich zur Kontrollgruppe) (Abbildung 11a). Der Gesamtkollagengehalt in der Kontrollgruppe betrug 14,93 ± 1,27 µg/ml und stieg nach der Behandlung mit 250 µg/ml CF-Extrakt auf 39,{12}} ± 2,39 µg/ml (Abbildung 11b). Die Ergebnisse der Typ-I-Prokollagenexpression und des Gesamtkollagengehalts zeigten, dass CF-Extrakt die Kollagensynthese und -produktion förderte.

2.8.2. Die Auswirkungen von CF-Extrakt auf den UV- und AGE-induzierten Kollagenabbau

Hs68-Zellen, die UVB-Strahlung (40 mJ/cm2) ausgesetzt oder mit CML (100 µg/ml) behandelt wurden, wurden 24 Stunden lang mit CF-Extrakt behandelt. Wie in Abbildung 12a dargestellt, verringerte sich der Gesamtkollagengehalt nach der UVB-Bestrahlung deutlich, und die Behandlung mit CF-Extrakt stellte das Kollagen wieder her und erhöhte die Kollagenbildung bei 250 µg/ml deutlich. Ähnliche Ergebnisse wurden bei der Kollagenproduktion gezeigt, die mit CML und einer Reihe von CF-Extrakten behandelt wurde. CF-Extrakt schwächte die CML-behandelte Reduktion des Gesamtkollagens ab (Abbildung 12b).

Der Immunfluoreszenz-Färbetest wurde verwendet, um den Kollagengehalt in Fibroblastenzellen zu bestimmen (Abbildung 12c). Sowohl die UVB-Strahlung als auch die CML-Behandlung reduzierten den Kollagengehalt, während CF-Extrakte den Kollagenabbau verbesserten. Die Ergebnisse des Immunfluoreszenz-Färbetests von CF-Extrakt auf Kollagen stimmten mit dem Kollagengehalt in den Abbildungen 11b und 12a,b überein.

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