Verbesserung des Extinktionsgedächtnisses durch pharmakologische und verhaltensbezogene Interventionen, die auf seine Reaktivierung abzielen

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Verstärkung der ExtinktionErinnerungdurch pharmakologische und verhaltensbezogene Interventionen, die auf seine Reaktivierung abzielen

Josué Haubrich, Adriano Machado, Flávia Zacouteguy Boos, Ana P. Crestani, Rodrigo O. Sierra, Lucas de Oliveira Alvares & Jorge A. Quillfeldt

Extinktion ist ein Prozess, der neues Lernen beinhaltet, das den Ausdruck zuvor erworbener Erinnerungen hemmt. Obwohl vorübergehend wirksam, löscht die Auslöschung eine ursprüngliche Angstassoziation nicht aus. Da die Löschspur mit der Zeit zum Verblassen neigt, ist das OriginalErinnerungkann wieder aufleben. Andererseits wurden stärkende Effekte in mehreren Rekonsolidierungsstudien unter Verwendung verschiedener Verhaltens- und pharmakologischer Manipulationen beschrieben. Um zu wissen, ob ein Extinktionsgedächtnis durch reaktivierungsbasierte Interventionen in der kontextuellen Angstkonditionierungsaufgabe gestärkt werden kann, begannen wir mit der Replikation des klassischen Phänomens der spontanen Erholung, um zu zeigen, dass kurze Reexpositionssitzungen den Verfall der Extinktionsspur im Laufe der Zeit verhindern können ein langanhaltender Weg. Es wurde gezeigt, dass diese Angstdämpfung sowohl von den L-Typ-Calciumkanälen als auch von der Proteinsynthese abhängt, was auf einen Rückverfestigungsprozess hinter dem reaktivierungsinduzierten Stärkungseffekt hindeutet. Die Extinktionsspur war auch anfällig für eine Verstärkung durch eine Infusion von a nach der ReaktivierungErinnerung-verstärkendes Medikament (NaB), das auch eine schnelle Wiedererlangung der Angst verhindern konnte (Einsparung). Diese Ergebnisse weisen auf neue reaktivierungsbasierte Ansätze hin, die in der Lage sind, ein Extinktionsgedächtnis zu stärken, um seine Persistenz zu fördern. Die konstruktiven Wechselwirkungen zwischen Extinktion und Rekonsolidierung könnten einen vielversprechenden neuen Ansatz im Bereich der Behandlung von angstbedingten Störungen darstellen.

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ErinnerungRetrieval ist ein dynamisches Phänomen, das unter den richtigen Bedingungen zwei unterschiedliche Prozesse auslösen kann: Rückverfestigung oder Aussterben. Nach einer kurzen Retrieval-Session im selben Trainingskontext wird eine zuvor gefestigteErinnerungkann in einen labilen Zustand übergehen, der eine De-novo-Proteinsynthese erfordert, um sich wieder zu stabilisieren und fortzubestehen, ein Prozess, der Rekonsolidierung genannt wird1. Längere, nicht verstärkte Abrufsitzungen können jedoch zum Aussterben führen2. Obwohl die Rekonsolidierung von Angsterinnerungen ausführlich untersucht wurde3, 4, haben bisher nur sehr wenige Studien die Möglichkeit untersucht, dass eine Extinktionsspur nach dem Abrufen rekonsolidiert wird5–7, und ihre möglichen Ergebnisse und klinischen Anwendungen sind derzeit unerforscht8.

Extinktion verringert konditionierte Reaktionen durch einen Prozess, der die Konsolidierung einer neuen Hemmung mit sich bringtErinnerung; Es wird angenommen, dass es sich nicht um ein Verlernen oder Löschen der ursprünglichen Spur handelt9, 10. Extinktionsbasierte Therapien werden häufig eingesetzt, um aversive Reaktionen bei Patienten mit angstbedingten Störungen wie der posttraumatischen Belastungsstörung zu verhindern11, 12. Obwohl es sich um eine wirksame Intervention handelt, tritt der Rückfall auf von Angstsymptomen wird oft berichtet13, was zeigt, dass das Aussterben im Vergleich zu robusten Angsterinnerungen weniger dauerhaft und anfällig für Verfall ist. Angstreaktionen können sich aufgrund mehrerer Rückfallprozesse leicht erholen, wie z. B. spontane Genesung, Wiederherstellung, Erneuerung und schnelle Wiederakquisition14, 15. Dementsprechend ist es von großer Bedeutung, bessere Ansätze zu finden, um die Extinktionsstärke und -persistenz zu verbessern.

Obwohl sowohl die Rückverfestigung als auch das Aussterben durch das Abrufen ausgelöst werden, handelt es sich um unterschiedliche Prozesse. In Bezug auf das Verhalten wird die Rekonsolidierung normalerweise durch kurze Expositionen gegenüber dem konditionierten Stimulus (CS) ausgelöst, während die Extinktion längere erfordert. Darüber hinaus wird die Induktion der Rückverfestigung durch andere kontextuelle und kognitive Faktoren moduliert, die zusammenfassend als Randbedingungen bekannt sind16. Durch Variation der CS-Expositionsdauer wird das Anamnesemittel selektiv entweder die Rückverfestigung der ursprünglichen Spur oder die Verfestigung beeinträchtigen.

Labor für Psychobiologie und Neurocomputation und Neurobiologie vonErinnerungLabor. Graduiertenprogramm für Neurowissenschaften, Universidade Federal do Rio Grande do Sul, Porto Alegre, Brasilien. Korrespondenz und Materialanfragen sind an JH (E-Mail: biohaubrich@gmail.com) oder JAQ (E-Mail: quillfe@ufrgs.br) der Extinktionsspur zu richten17–23. Die Tatsache, dass beide Prozesse nicht gleichzeitig stattfinden, deutet auf einen Spurdominanzeffekt hin, indem die dominante Spur die erste, wenn nicht die einzige ist, die von einer Interferenz betroffen ist. Spurendominanz tritt auch auf, wenn zuvor konsolidierte Angst- und Extinktionsspuren koexistieren und deren Abruf beeinträchtigen. Unter solchen Bedingungen führt eine erneute Exposition gegenüber dem CS, das möglicherweise sowohl Angst- als auch Extinktionsspuren aktivieren kann, zum Ausdruck der dominanten Erinnerung und zur Hemmung der anderen2. Wie oben diskutiert, ist anfänglich die Auslöschung dominant und unterdrückt leicht die Angst. Mit der Zeit überwindet jedoch die ursprüngliche Angstspur die Hemmung durch Erlöschen und wird wieder dominant ausgedrückt14. Darüber hinaus gibt es eine doppelte Dissoziation zwischen den beiden Prozessen in Bezug auf molekulare Marker wie Zif26824, Calcineurin19, 25 und BDNF26, was darauf hindeutet, dass beide Prozesse nicht parallel ablaufen.

Es wird oft vorgeschlagen, dass die funktionelle Rolle des Destabilisierungs-Restabilisierungsprozesses hinter der Rekonsolidierung zuzulassen istErinnerungzu aktualisieren, um seine prädiktive und adaptive Relevanz zu bewahren3, 27–29. Zum Beispiel,ErinnerungInhalte können durch die Aufnahme neuer Informationen30–34 aktualisiert werden. Darüber hinaus berichteten mehrere Studien, dass eine Rückverfestigung vermitteln kannErinnerungVerstärkung und Verstärkung30, 35–39 sowie Gedächtnisdämpfung (ohne Auslöschung) von aversiven Erfahrungen34, 40 . Interessanterweise gibt es Studien, die zeigen, dass bei manchen Aufgaben eine Rückverfestigung nur stattfindet, wenn das Gedächtnis noch nicht auf einem asymptotischen Niveau ist41–43, was seine Rolle bei der Stärkung der Gedächtnisspur weiter unterstreicht. Bisher ist jedoch nicht bekannt, ob eine konsolidierte Extinktionsspur durch Rekonsolidierung modifiziert werden kann.

Die Rekonsolidierung kann ein Fenster öffnen, um die pharmakologische Modulation des Reaktivierten zu ermöglichenErinnerung. Dies würde klassischen Experimenten entsprechen, bei denen die Infusion von Amnesika nach der Reaktivierung das Gedächtnis beeinträchtigt1 oder zumindest die Angstreaktionen bei Phobien effektiv verringert44. Auch Interventionen nach der Reaktivierung, die die Rekonsolidierung fördern, können zu einer Leistungssteigerung führen45–47. Daher werden bestimmte Verbindungen während des Zeitfensters von verabreichtErinnerungLabilität während der Rückverfestigung ermöglicht eine positive oder negative Modulation vonErinnerungStärke.

Angesichts seiner klinischen Relevanz besteht ein erhebliches Interesse an der Entwicklung effizienterer Extinktions-basierter Ansätze48. Extinktionserinnerungen sind wirksam bei der vorübergehenden Unterdrückung von Angstreaktionen, aber die Angst kehrt leicht zurück2. Hervorgegangen aus der Tatsache, dass der abrufgetriebene Prozess zu einer Rückverfestigung führen kannErinnerungStärkung, entweder verhaltensmäßig30, 35–39 oder pharmakologisch45–47, nehmen wir an, dass es zu einer Auslöschung kommtErinnerungreaktiviert wird, kann es einen Rekonsolidierungsprozess durchlaufen und durch Verhaltens- und pharmakologische Interventionen positiv moduliert werden, was zu einer erhöhten Rückfallresistenz führt.

Um dies zu verifizieren, haben wir die Wirkung von kurzen erneuten Expositionen gegenüber dem konditionierten Kontext bei Tieren bewertet, die zuvor in kontextueller Angstkonditionierung (CFC) trainiert und dem Aussterben unterzogen wurden. Wir fanden heraus, dass eine spontane Erholung 2 Wochen nach dem Aussterben beobachtet wurde, aber regelmäßige Reaktivierungssitzungen konnten das Wiederaufleben von Angstspuren um mindestens 4 Wochen verzögern. Es wurde gezeigt, dass dieser Effekt von spannungsgesteuerten Calciumkanälen vom L-Typ (L-VGCC) abhängt, und es wurde gezeigt, dass eine Reaktivierung einen Tag nach der Extinktionssitzung dazu führt, dass die Extinktionsspur in einer von der Proteinsynthese abhängigen Weise vorübergehend labil wird. Alles in allem deuten die Daten stark auf einen Rückverfestigungsprozess hin, der auf die Extinktionsspur einwirkt. Auch in einem Protokoll, das zur Untersuchung der schnellen Reakquisition von Angst eingesetzt wurde – ein weiterer Rückfallprozess nach dem Aussterben49 -, konnte eine einzelne Post-Reaktivierungs-Infusion von Natriumbutyrat (NaB), einem HDAC-Inhibitor, der die neuronale Plastizität positiv reguliert,50, verstärkt werden AussterbenErinnerungbis zum Widerstand gegen die Erholung der Angst. Die Beweise zeigen, dass die Extinktionsspur durch reaktivierungsbasierte Interventionen effektiv verstärkt werden kann.

Versuch 1: AussterbenErinnerunghemmt nur vorübergehend den Ausdruck von Angst. Extinktion ist neues Lernen, das ein zuvor Erlerntes vorübergehend unterdrücktErinnerung. Somit existieren nach dem Erlöschen zwei gegensätzliche Erinnerungen nebeneinander und konkurrieren um ihren Ausdruck. Zunächst dominiert die Extinktionserinnerung die Angstspur und kann so deren Ausdruck hemmen. Diese Unterdrückung ist jedoch nicht dauerhaft. Im Laufe der Zeit überwindet das Angstgedächtnis die Extinktionshemmung und aversive Verhaltensreaktionen kehren zurück. Dieser Vorgang wird spontane Erholung genannt15. Zuerst bewerteten wir das zeitliche Profil der Spontanerholung in unserem CFC-Protokoll. Dementsprechend wurden die Tiere angstkonditioniert und 24 Stunden später einem Extinktionstraining unterzogen. Am nächsten Tag wurde eine Testsitzung durchgeführt, um die Extinktionsretention zu bewerten. Ein zweiter Test wurde 7, 14, 21 oder 28 Tage später durchgeführt, um die spontane Genesung zu beurteilen (Abb. 1A).

Während der Extinktionssitzung fielen die Gefrierwerte in allen Gruppen mit der Zeit ab, was auf eine Extinktionserfassung hinweist (ANOVA mit wiederholten Messungen, F(5.140)=13.625, P=0.001; Abb. 1B) . Bei Test 1 zeigten die Tiere niedrige Gefrierwerte, was auf Extinktionsretention hinweist (Fig. 1C). Um die spontane Erholung zu beurteilen, wurde die Leistung bei Test 1 und Test 2 mit einer ANOVA mit wiederholten Messungen verglichen, die eine signifikante Interaktion zwischen Gruppe und Sitzung ergab (ANOVA mit wiederholten Messungen, F(3,27)=8.085, P { {18}}.0005). Tukeys Post-hoc zeigte, dass es nur in Gruppen, in denen Test 2 entweder 21 (P=0.013) oder 28 Tage (P=0.0002) nach Test 1 durchgeführt wurde, eine signifikante Wiederherstellung der Angstreaktionen gab, aber nicht früher (7 Tage: P=0.999; 14 Tage: P=0.969; Abb. 1C).

Die Ergebnisse veranschaulichen die gut beschriebene15 zeitabhängige spontane Wiederherstellung der AngstErinnerungnach Aussterben. In unserem Protokoll unterdrückt das Extinktionsgedächtnis Angstreaktionen für mindestens 14 Tage. Nach 14 Tagen kann eine Spontanregeneration der Angst erfolgen. Daher zerfällt das Extinktionsgedächtnis, obwohl es anfänglich dominant ist, mit der Zeit, was ein Wiederaufleben des Angstausdrucks ermöglicht.

Experiment 2: Periodische Reaktivierungen der Extinktionsspur verzögern ihren zeitabhängigen Zerfall (spontane Erholung). In Experiment 1 fanden wir heraus, dass zunächst das Extinktionsgedächtnis das Aversiv dominiertErinnerungSpur, verhindert seinen Ausdruck. Dieser Effekt lässt zu späteren Zeitpunkten nach, wenn die Extinktion den Angstausdruck nicht mehr unterdrücken kann. Es wurde berichtet, dass Reaktivierungssitzungen dazu führen könnenErinnerungStärkung30, 36, 39. Da die Extinktionsspur mit der Zeit abklingt, sagten wir voraus, dass ihre Reaktivierung möglicherweise zu ihrer Verstärkung führen würde, wodurch ihre Beständigkeit und Fähigkeit zur Unterdrückung von Angst zu entfernten Zeitpunkten verbessert würde.

Abbildung 1. AussterbenErinnerungkann die Angst nicht dauerhaft unterdrücken. (A) Schematische Darstellung der experimentellen Verfahren. Angstkonditionierte Ratten wurden einer 30--minütigen Extinktionssitzung unterzogen und 24 Stunden später getestet. Ein zweiter Test wurde 7, 14, 21 oder 28 Tage nach Test 1 durchgeführt (N=6/9 pro Gruppe). (B) Einfrierwerte während der Extinktionssitzungen. (C) Gefrierwerte während der Tests. (*) Ein signifikanter Unterschied zwischen Test 1 und 2 (S<0.05, repeated-measures="" anova="" followed="" by="" tukey="" post-hoc="">

Dementsprechend wurden angstkonditionierte Ratten einem Extinktionstraining unterzogen, einen Tag später getestet und 28 Tage später erneut auf spontane Genesung getestet. Im Intervall zwischen Test und Wiederholungstest wurde eine Gruppe von Tieren 3- min Reaktivierungssitzungen an den Tagen 7, 14 und 21 Tage nach Test 1 (Reaktivierungsgruppe) unterzogen oder blieb in ihren Heimkäfigen (Kontrollgruppe; Abb. 2A) . Eine zusätzliche Gruppe wurde Reaktivierungssitzungen unterzogen, aber keinem Extinktionstraining unterzogen (Keine Extinktion plus Reaktivierungsgruppe). Das Intervall von 7- Tagen zwischen den Reaktivierungen wurde gewählt, da zu diesem Zeitpunkt die Extinktion immer noch stark ausgeprägt ist (Experiment 1).

Während des Extinktionstrainings zeigten die Tiere effektiv eine zeitabhängige Abnahme der Angstreaktionen (F(5.110)=30.516, P=0.001; Abb. 2B). Bei Test 1 gab es einen signifikanten Unterschied zwischen den Gruppen (F(2,28)=8.11, P=0.002; Abb. 2C). Tukeys Post-Hoc zeigte, dass die Kontroll- und Reaktivierungsgruppen ähnliche Einfriergrade aufwiesen (P=0.915) und beide ein niedrigeres Einfrieren zeigten als die Gruppe ohne Extinktion plus Reaktivierung (P=0.007 und P { {21}}.001). Während der Reaktivierungssitzungen zeigte die ANOVA mit wiederholten Messungen einen signifikanten Unterschied zwischen den Gruppen „Reaktivierung“ und „Keine Extinktion plus Reaktivierung“ (F(1,19)=46.63, P=0.0001) und keinen Effekt der Sitzung (F (2,38)=2.28, P=0.116) noch Gruppe x Sitzungsinteraktion (F(2,38)=1.00, P=0.376). ; Abb. 2D). Der Vergleich zwischen Test 1 und Test 2 ergab eine signifikante Wechselwirkung zwischen Gruppe und Sitzung (ANOVA mit wiederholten Messungen, F(2,28)=3,89, P=0,03). Tukeys Post-hoc zeigte, dass sich die Angst in der Reaktivierungsgruppe und in der Gruppe „Keine Extinktion plus Reaktivierung“ von Test 1 zu Test 2 nicht veränderte (P=0.844), aber es gab eine signifikante Wiederherstellung der Angst in der Kontrollgruppe (P=0.02). Wichtig ist, dass das Einfrieren der Reaktivierungsgruppe bei Test 2 niedriger war als bei allen anderen (Reaktivierung x Kontrolle: P=0.007; Reaktivierung x keine Extinktion plus Reaktivierung: P=0.0001; Abb. 2E). Dies zeigt, dass die Reaktivierung das Aussterben verstärkteErinnerungund verhinderte so die Wiederherstellung der Angst zu einem entfernten Zeitpunkt. Bemerkenswerterweise hatten in diesem Protokoll Reaktivierungssitzungen per se keine Wirkung auf das Angstniveau, wenn kein Extinktionslernen stattfand.

Experiment 3 - Reaktivierungsinduzierte Verstärkung der Extinktion hängt von L-VGCCs ab. Um eine Rückverfestigung herbeizuführen,Erinnerungmüssen reaktiviert werden und in einen labilen Zustand übergehen. Frühere Arbeiten haben gezeigt, dass die Aktivierung von spannungsgesteuerten Calciumkanälen (L-VGCC) während der Reaktivierung für die Destabilisierung erforderlich ist und ihre Blockade durch Nimodipin verhindert, dass eine Rekonsolidierung stattfindet51. Um die Rolle von L-VGCC bei der reaktivierungsinduzierten Verstärkung der Extinktion zu beurteilen, wiederholten wir das experimentelle Design des letzten Experiments und verabreichten Nimodipin vor der Reaktivierung (Fig. 3A).

Während des Extinktionstrainings zeigten die Tiere eine zeitabhängige Abnahme der Angstreaktionen (F(5.125)=13.55, P=0.001; Abb. 3B). Bei Test 1 zeigten Tiere aus der Vehikel- und der Nimodipin-Gruppe gleich niedrige Gefrierwerte (Student's t test; t(25)=0.510, P=0.615; Fig. 3C). Während der Reaktivierungssitzungen gab es eine signifikante Interaktion zwischen Gruppe und Sitzung (F(2,50)=7.863, P=0.001; Abb. 3D) mit Nimodipin-behandelten Tieren erhöhte Angst über die Sitzungen hinweg (P=0 0,004), wohingegen es keine Veränderung im Angstausdruck bei mit Vehikel behandelten Ratten gab (P=0 0,983).

Beim zweiten Test zeigten mit Nimodipin behandelte Ratten höhere Gefrierwerte als Kontrollen (t(25)=5.44, P=0.0001; Fig. 3E). Beim Vergleich der Leistung beider Testsitzungen fand eine ANOVA mit wiederholten Messungen eine signifikante Interaktion zwischen Gruppe und Sitzung (F(1,20)=7.75, P=0.006). Tukey's Post hat gezeigt, dass die Leistung der mit Nimodipin behandelten Tiere bei Test 2 höher war als die Leistung aller anderen Gruppen und Sitzungen (P < 0,001).="" dies="" zeigt,="" dass="" die="" extinktionsverstärkung="" durch="" reaktivierungen="" eine="" l-vgcc-aktivierung="">

Experiment 4: Eine einzelne Extinktionsspurenreaktivierung öffnet ein proteinsynthesesensitives Fenster. Nach Reaktivierung,Erinnerungkann eine Phase durchlaufen, die eine erneute Konsolidierung und Fortdauer der De-novo-Proteinsynthese erfordert. Daher ist es in diesem labilen Zustand anfällig für Störungen durch Proteinsynthesehemmer1. In früheren Arbeiten wurde gezeigt, dass das AussterbenErinnerungist anfällig für eine Rückverfestigung

Abbildung 2. Periodische Reaktivierungen verhindern die spontane Wiederherstellung der ExtinktionErinnerung. (A) Schematische Darstellung der experimentellen Verfahren. Angstkonditionierte Ratten wurden 30- min Extinktionssitzungen unterzogen oder blieben in ihren Heimkäfigen (Keine Extinktion plus Reaktivierungsgruppe: N=7). Am nächsten Tag wurde ein Test durchgeführt und 28 Tage später ein erneuter Test. Im Intervall zwischen den Tests wurden die Tiere an den Tagen 7, 14 und 21 nach Test 1 um 3- min reaktiviert oder blieben in ihren Heimkäfigen (Extinction plus No Reaktivierungsgruppe: N=10; Extinction plus Reaktivierungsgruppe: N=10) N=14). (B) Einfrierwerte während der Extinktionssitzungen. (C) Gefrierwerte während des Tests. (D) Gefrierniveaus während Reaktivierungen. (E) Gefrierwerte während des Wiederholungstests. (*) Signifikante Unterschiede zwischen den Gruppen (S<0.05, two-way="" or="" repeated-measures="" anova="" followed="" by="" tukey="" post-hoc="">

Unterbrechung durch Interferenzen nach der Reaktivierung im Paradigma der Hemmungsvermeidung5, 6. Nachdem wir in früheren Experimenten Reexpositionssitzungen eingesetzt hatten, bewerteten wir hier, ob diese Reexpositionssitzungen tatsächlich Reaktivierungssitzungen waren, die die Rekrutierung der Proteinsynthese beinhalteten. Dementsprechend wurden die Tiere angstkonditioniert und am nächsten Tag wurde eine Gruppe einem Extinktionstraining unterzogen (Extinktionsgruppe), während andere in ihren Heimkäfigen blieben (Nicht-Extinktionsgruppe). Am Tag 2 nach dem Training wurden alle Tiere einer kurzen 3-minütigen Reaktivierungssitzung unterzogen und unmittelbar danach wurde ihnen der Proteinsynthesehemmer Cycloheximid (CHX) oder sein Vehikel injiziert. Am folgenden Tag wurden die Tiere getestet (Abb. 4A).

Während der Extinktionssitzung ergab eine ANOVA mit wiederholten Messungen eine Extinktionserfassung (F(5,75)=24.08, P=0.001; Fig. 4B). Während der Reaktivierung zeigte eine zweifache ANOVA, dass Tiere, die zuvor ausgestorben waren, im Vergleich zur Gruppe ohne Aussterben niedrigere Gefrierwerte aufwiesen (F(1,43)=23.32, P=0). 001, Abb. 4C). Beim Test zeigte eine zweifache ANOVA eine signifikante Gruppe-x-Arzneimittelwechselwirkung (F(1,43)=22.64, P=0.001). Tukeys Post-hoc ergab, dass mit Cycloheximid behandelte Tiere in der Gruppe ohne Extinktion niedrigere Gefrierwerte zeigten als mit Vehikel behandelte (P=0.01), was auf diese Angst hinweistErinnerungwar beeinträchtigt. In der Extinktionsgruppe

Abbildung 3. Reaktivierungsinduzierte Verstärkung der Extinktion beruht auf spannungsgesteuerten Calciumkanälen vom L-Typ. (A) Schematische Darstellung der experimentellen Verfahren. Angstkonditionierte Ratten wurden einer 30--minütigen Extinktionssitzung unterzogen. Am nächsten Tag wurde ein Test durchgeführt und 28 Tage später ein erneuter Test. Im Intervall zwischen den Tests wurden die Tiere an den Tagen 7, 14 und 21 nach Test 1 um 3- min reaktiviert. Nimodipin (N=15) oder sein Vehikel (N=12) wurden sc 30 Minuten vor jeder Reaktivierung infundiert (B) Gefrierwerte während der Extinktionssitzung. (C) Gefrierwerte während des Tests. (D) Gefrierniveaus während Reaktivierungen. (E) Gefrierwerte während des Wiederholungstests. (*) Signifikante Unterschiede zwischen den Gruppen (S<0.05, two-way="" or="" repeated-measures="" anova="" followed="" by="" tukey="" post-hoc="" test).="" chx-treated="" animals="" showed="" higher="" freezing="" levels="" than="" vehicle-treated="" ones="" (p="0.001)," indicating="" that="" extinction="">Erinnerungwar gestört.

Dementsprechend wird, wenn kein Extinktionstraining durchgeführt wurde, die Angstspur durch Reaktivierung destabilisiert und durch CHX gestört. Wenn die Extinktions- und Angsterinnerungen koexistieren, findet ein Spurendominanzeffekt statt und die ExtinktionErinnerungist derjenige, der unter Destabilisierung leidet, was die De-novo-Proteinsynthese erfordert, um fortzubestehen. Dieser Befund zeigt, dass die Extinktionsspur effektiv reaktiviert wurde, was darauf hindeutet, dass die Rekonsolidierung der Mechanismus ist, der die Stärkung des Extinktionsgedächtnisses vermittelt.

Experiment 5 – Ein weiterer Rückfallprozess von Extinktionsspuren, Rapid Reacquisition, kann pharmakologisch mit einer Nachreaktivierungsbehandlung aufgehalten werden. Es wurde berichtet, dass die Rekonsolidierung durch die Verabreichung von Verbindungen wie HDAC-Inhibitoren nach der Reaktivierung verstärkt werden kann, was zu einer erhöhten Leistung bei einer langfristigen Nachreaktivierung führtErinnerungtest45, 52–54. Hier fragten wir, ob die Extinktion durch eine Nachreaktivierungsbehandlung mit dem HDAC-Inhibitor Natriumbutyrat (NaB) positiv moduliert werden könnte. Wir haben daher ein Rekonditionierungsprotokoll verwendet, das die Erkennung relativer Veränderungen in der Stärke der Angst und des Extinktionsgedächtnisses gemäß dem Verhältnis der Angstreakquisition ermöglicht. Zum Beispiel ist die Reakquisition normalerweise nach Standard-Extinktionsverfahren schnell32, 34, kann aber unter bestimmten Umständen wie umfangreichem Extinktionslernen oder schwacher anfänglicher Konditionierung langsam sein14.

Angstkonditionierte Ratten wurden 24 Stunden später einem Extinktionstraining und einer Reaktivierungssitzung unterzogen. Unmittelbar nach der Reaktivierung wurde NaB oder sein Vehikel infundiert (ip). In den nächsten vier Tagen wurden die Tiere einem gemischten Test- und schwachen Rekonditionierungsverfahren unterzogen, um den Wiedererwerb von Angst zu beurteilen. Jede Sitzung bestand aus einem 4-minütigen Test, gefolgt von einem schwachen Fußschock und einer zusätzlichen 30-sekündigen Periode in der Box (Abb. 5A). Während des Extinktionstrainings werden Tiere angezeigt

Abbildung 4. AussterbenErinnerungerfordert die De-novo-Proteinsynthese nach ihrer Reaktivierung, um bestehen zu bleiben. (A) Schematische Darstellung der experimentellen Verfahren. Angstkonditionierte Ratten wurden 30- min Auslöschungssitzungen unterzogen oder blieben in ihren Heimkäfigen. 7 Tage später wurde eine Reaktivierungssitzung durchgeführt, gefolgt von einem Test am nächsten Tag. Unmittelbar nach der Reaktivierung erhielten die Tiere eine ip-Infusion von Cycloheximid (Extinktionsgruppe: N=10; Nicht-Extinktionsgruppe: N=14) oder dessen Vehikel (Extinktionsgruppe: N=9; Nicht-Extinktion Gruppe: N=11). (B) Gefrierwerte während der Extinktionssitzung. (C) Gefrierwerte während der Reaktivierungssitzung. (D) Einfrierwerte während Testsitzungen. (*) Signifikante Unterschiede zwischen den Gruppen (S<0.05, repeated-measures="" or="" two-way="" anova="" followed="" by="" tukey="" post-hoc="">

eine zeitabhängige Abnahme der Angstreaktionen (F(5.110)=32.89, P=0.001; Abb. 5B). Bei der Reaktivierung gab es keinen Unterschied zwischen den Gruppen, die später mit NaB oder Veh infundiert wurden (t(22)=0.59, P=0.56; Fig. 5C). Während der 4 Testsitzungen (die mit einer schwachen Rekonditionierung endeten, deren Wirkung im folgenden Test analysiert wurde; Fig. 5D), zeigte eine ANOVA mit wiederholten Messungen eine signifikante Wechselwirkung zwischen Medikament und Sitzung (F(3,66)=4,82). , P=0.004). Tukeys Post-hoc ergab, dass während des ersten Tests die Veh- und NaB-Gruppen den gleichen Gefrierpunkt hatten (P=0.99). Nach einer Rekonditionierungssitzung zeigten die mit Veh behandelten Patienten jedoch sofort eine Wiedererlangung der Angst (P=0.0002), wohingegen die mit NaB behandelten Patienten dies nicht taten (P=0.99). Die mit NaB behandelte Gruppe zeigte nur nach drei Rekonditionierungssitzungen bei Test 4 (P=0.002) eine signifikante Reakquisition.

Diese Ergebnisse zeigen, dass die Behandlung mit NaB nach der Reaktivierung die Extinktion bewirkteErinnerungresistent gegen schnelle Reakquise. Tiere aus der Vehikelgruppe zeigten nach einer einzigen schwachen Umschulungssitzung leicht Einsparungen.

Abbildung 5. Infusion nach der Reaktivierung von aErinnerung-verstärkendes Medikament, stärkt auch die Extinktionsspur, indem es eine schnelle Wiedererlangung der Angst verhindert. (A) Schematische Darstellung der experimentellen Verfahren.

Angstkonditionierte Ratten wurden einer 30--minütigen Extinktionssitzung unterzogen. Eine Reaktivierung wurde 24 Stunden später durchgeführt, gefolgt von der sofortigen Verabreichung von Natriumbutyrat (NaB; N=12) oder seinem Vehikel (N=12). In den nächsten 3 Tagen wurden die Tiere Testsitzungen unterzogen, die mit der Abgabe eines schwachen Fußschocks endeten, plus weitere 30 Sekunden kontextbezogener Exploration (schnelles Reakquisitionsprotokoll). Einen Tag später wurde ein Standardtest durchgeführt. (B) Gefrierwerte während der Extinktionssitzung. (C) Gefrierwerte während der Reaktivierung. (D) Gefrierwerte während der Tests. (*) Signifikante Unterschiede zwischen den Gruppen (S<0.05, independent-samples="" t-test="" or="" repeated-measures="" anova="" followed="" by="" tukey="" post-hoc="">

NaB-behandelte Tiere zeigten wiederum nur nach 3 Rekonditionierungssitzungen Einsparungen. Dies zeigt, dass die Extinktionsspur durch pharmakologische Eingriffe nach der Reaktivierung verstärkt werden kann.

Diskussion

In der vorliegenden Studie zeigen wir, dass eine kontextbezogene Angstlöschung bestehtErinnerungkann durch kurze Reaktivierungssitzungen verstärkt werden. Erstens haben wir gezeigt, dass nach dem Extinktionslernen eine spontane Wiederherstellung der Angst 21 Tage danach beobachtbar ist, aber nicht 14 Tage oder früher (Experiment 1). Als nächstes fanden wir das beim AussterbenErinnerungwurde periodisch reaktiviert, sein zeitabhängiger Abbau wurde verhindert und es wurde keine spontane Erholung der Angst für mindestens 28 Tage nachgewiesen (Experiment 2), eine Wirkung, die ebenfalls durch L-VGCCs vermittelt wurde (Experiment 3). Um zu überprüfen, ob die Proteinsynthese durch die Reexpositionssitzungen rekrutiert wurde, infundierten wir Cycloheximid nach der Reaktivierung und beobachteten das Auftreten eines neuen Plastizitätsfensters, was die Idee stützt, dass eine Rekonsolidierung der stattfindende Prozess ist (Experiment 4). Schließlich haben wir unter Verwendung eines anderen Protokolls, das auf einen anderen Rückfallmechanismus des Extinktionsgedächtnisses abzielt – schnelle Reakquisition (Einsparungen) – verifiziert, dass die pharmakologische Hemmung von HDAC nach der Reaktivierung auch in der Lage war, die Extinktionsspur zu verstärken, wie durch die beobachtete Resistenz gegen eine schnelle Reakquisition von bewiesen wurde Angst Antwort.

Es ist bekannt, dass der Verlust konditionierter Reaktionen nach der Auslöschung nicht dauerhaft ist55, da die Auslöschung nicht wirklich darauf angewiesen istErinnerungLöschen. Stattdessen fördert es neues Lernen, das den Ausdruck der zuvor gespeicherten Assoziation verhindert14. Daher existieren Extinktions- und Angsterinnerungen nebeneinander und konkurrieren um Ausdruck. Dies führt zu einem Spurendominanzeffekt mit Auslöschung, die den Angstausdruck hemmt. Die Auslöschung zerfällt jedoch leicht und das Angstgedächtnis überwindet seine Hemmung durch mehrere Rückfallmechanismen15, 20. Der offensichtlichste davon ist die Rückkehr der Angst durch das bloße Vergehen der Zeit, die als spontane Erholung bezeichnet wird15. Darüber hinaus kann das Angstgedächtnis durch Verhaltensphänomene wie schnelle Wiederakquisition, Wiederherstellung und Erneuerung von der Extinktionshemmung getrennt werden14. Der Verfall des AussterbensErinnerungim Laufe der Zeit ist in Experiment 1 gezeigt. Anfänglich unterdrückt Extinktion konditionierte Angstreaktionen. Zu entfernten Zeitpunkten verschwindet dieser Effekt jedoch, was zu einer spontanen Erholung führt. In Experiment 5 wird eine schnelle Reakquisition beobachtet. Kontrollratten zeigen nach einer einzigen schwachen Rekonditionierungssitzung schnell große Angst. Neue Methoden, die darauf abzielen, die schwache Persistenz der Extinktion zu umgehen, indem sie ihre Stärke verstärken, würden möglicherweise die psychiatrische Behandlung von angstbedingten Störungen verbessern48.

Seit dem AussterbenErinnerungmit der Zeit schwächer wird und seine Fähigkeit verliert, Angst zu unterdrücken15, wäre es vorteilhaft, diesen Verfall zu verhindern. In Experiment 2 fanden wir heraus, dass die Persistenz einer Extinktionserinnerung durch ihre einfache Reaktivierung positiv moduliert werden kann. Dementsprechend gab es auch 4 Wochen nach dem Extinktionstraining keine Anzeichen einer spontanen Erholung, wenn die Tiere kurzzeitig reaktiviert wurden. Interessanterweise erhöhte die Reaktivierung die Angstreaktionen bei Tieren, die nicht wie zuvor berichtet30 einem Extinktionstraining unterzogen wurden, wahrscheinlich aufgrund eines Deckeneffekts nicht. So konnten kurze Reaktivierungssitzungen den zeitabhängigen Zerfall des Aussterbens nachhaltig verhindern.

Es wird oft vorgeschlagen, dass eine Rückverfestigung stattfindet, um dies zu ermöglichenErinnerungInhalte, die aktualisiert werden müssen, wobei ihre adaptive Relevanz beibehalten wird, um zukünftiges Verhalten besser zu steuern. Berichte über rekonsolidierungsgetriebene Gedächtnisaktualisierungen zeigen, dass dies durch die Aufnahme neuer Informationen32, 34 oder durch die Stärkung bestehender Assoziationen30, 35–39 erfolgen kann. Es ist wichtig darauf hinzuweisen, dass selbst dann, wenn die Stärkung aus zusätzlichem Lernen aus einem identischen zweiten Lernversuch resultiert, der Destabilisierungs-Restabilisierungsprozess immer noch erforderlich ist36. Daher stellten wir die Hypothese auf, dass der in Experiment 2 beobachtete reaktivierungsgetriebene Verstärkungseffekt durch einen Rekonsolidierungsprozess vermittelt werden könnte, der eine reaktivierungsabhängige Destabilisierungsphase gefolgt von einer Restabilisierungsphase umfasst, die eine De-novo-Proteinsynthese erfordert. Frühere Arbeiten haben gezeigt, dass der L-VGCC-Blocker Nimodipin die Destabilisierung des Gedächtnisses und damit die Rekonsolidierung verhindert51. In Experiment 3 fanden wir heraus, dass die verstärkende Wirkung der Reaktivierung durch den L-VGCC-Blocker Nimodipin verhindert wurde, was die Beteiligung der Rekonsolidierung an der Verstärkung der Extinktionsspur unterstützt. Nimodipin wurde auch mit der Beeinträchtigung des Extinktionserwerbs sowie der Konsolidierung in Verbindung gebracht56, 57. In unserem experimentellen Protokoll wurde Nimodipin jedoch mehrere Tage nach der Extinktionssitzung injiziert, wodurch sich seine Wirkungen von denen unterschieden, die um das anfängliche Extinktionslernen herum erzielt wurden. Unabhängig davon, welcher Prozess tatsächlich blockiert wird – Rekonsolidierung oder Extinktion – zeigt Experiment 3, dass die reaktivierungsinduzierte Verstärkung der Extinktion die Aktivierung von VGCC erfordert, um stattzufinden.

Rekonsolidierung ist ein Prozess, bei dem eine zuvor etablierteErinnerungwird reaktiviert und labil, sodass die De-novo-Proteinsynthese bestehen bleiben muss. Um die Frage weiter zu beantworten, ob eine Reaktivierungssitzung die erneute Konsolidierung der Extinktionsspur induziert, untersuchten wir die Wirkung der Proteinsynthesehemmung nach der Reaktivierung bei Tieren, die zuvor einem Extinktionstraining unterzogen wurden oder nicht (Experiment 4). Bei Tieren, die nicht ausgestorben waren, störte die Hemmung der Proteinsynthese nach der Reaktivierung die erneute Konsolidierung der kontextuellen AngstErinnerung, was zu niedrigen Gefrierwerten führt. Das gegenteilige Verhaltensergebnis trat in der Gruppe auf, die vom Aussterben betroffen war: Im Test zeigten die mit CHX behandelten Tiere hohe Gefrierwerte, was darauf hinweist, dass das Aussterbegedächtnis gestört war. Da in diesem Experiment die Extinktion durch die Hemmung der Proteinsynthese nach einer einzigen Reexposition unterbrochen wurde (wie in einem Test am folgenden Tag bestätigt wurde), wurden keine zusätzlichen Reexpositionssitzungen untersucht. Die Ergebnisse dieses Experiments deuten darauf hin, dass die Extinktionsspur bis zu einem Punkt behindert wurde, an dem sie die Angst nicht mehr unterdrücken konnte. Frühere Arbeiten5, 7 weisen darauf hin, dass die Reaktivierung nicht nur das „zusätzliche Extinktionslernen“ förderte, sondern die Extinktionsspur dazu veranlasste, in einen labilen Zustand einzutreten, der eine Rückverfestigung erforderte, um bestehen zu bleiben. Man muss beachten, dass zum Zeitpunkt der Reaktivierung entweder die Extinktionserinnerung oder die Angsterinnerung zum Ausdruck kam. Dementsprechend wurde die durch die Reaktivierung dominant aktivierte Spur durch die Proteinsynthesehemmung destabilisiert und somit beeinträchtigt.

Schließlich bewerteten wir, ob die Extinktionsspur durch eine Nachreaktivierungsbehandlung mit a positiv moduliert werden könnteErinnerung-Verstärkendes Medikament. Es wurde gezeigt, dass mehrere pharmakologische Mittel eine Verstärkung bewirkenErinnerungKonsolidierung und Rekonsolidierung, einschließlich HDAC-Inhibitoren wie Natriumbutyrat45, 52, 53. In Experiment 5 stellten wir fest, dass die NaB-Behandlung nach der Reaktivierung die Extinktionsspur verstärkte und es ihr ermöglichte, einem Rückfall durch ein schnelles Reakquisitionsprotokoll zu widerstehen. Mit NaB behandelte Tiere zeigten eine bemerkenswerte Resistenz gegenüber Einsparungen nach einem schnellen Reakquisitionsverfahren. Vehikel-behandelte Tiere zeigten Einsparungen nach einer einzigen schwachen Rekonditionierungssitzung, wohingegen NaB-behandelte Ratten 3 Rekonditionierungssitzungen benötigten, um den gleichen Erholungseffekt zu zeigen. Dies zeigt, dass selbst eine kurze Reaktivierungssitzung eine Extinktionsspur einer Verstärkung durch positive Interferenz zugänglich macht. Die Extinktionsverstärkung durch HDAC-Hemmung nach der Reaktivierung, wie hier berichtet, legt nahe, dass der gleiche positive Effekt mit anderen gedächtnisverbessernden Medikamenten erzielt werden könnte, um den Ausdruck von Angst im Laufe der Zeit zu hemmen.

Die Möglichkeit, dass die reaktivierungsbedingte Verstärkung des Aussterbens durch zusätzliches Aussterben anstelle einer Rückverfestigung vermittelt worden sein könnte, muss in Betracht gezogen werden. Es wurde berichtet, dass selbst kurze erneute Expositionen gegenüber einem Kontext zum Aussterben führen können, wenn sie zu entfernten Zeitpunkten durchgeführt werden35. Obwohl sich das experimentelle Protokoll dieses Papiers in einer erheblichen Anzahl von Aspekten von unserem unterscheidet, haben wir eine zusätzliche experimentelle Gruppe aufgenommen, um dieses spezielle Problem zu kontrollieren: In Experiment 2 unterzog sich die Gruppe „Keine Auslöschung plus Reaktivierung“ denselben drei Reaktivierungssitzungen, aber wurde keiner Löschungssitzung unterzogen. Diese Gruppe zeigte keine Angstdämpfung, weder während der Reaktivierungen noch während des Tests, anders als beim Aussterben zu erwarten wäre. Zusätzliche Beweise stammen aus Experiment 4. Wenn eine kurze Exposition eine zusätzliche Extinktion induzierte, dann hätte die Cycloheximidbehandlung nur das inkrementelle Lernen dieser Sitzung unterbrochen und das, was zuvor gespeichert war, verschont gelassen. Allerdings hat Cycloheximid nach der Reaktivierung die Extinktionsspur gestört und die Angsthemmung in einem 24 Stunden später durchgeführten Test aufgehoben. Die Unterbrechung einer zuvor gespeicherten Spur durch die Proteinsynthesehemmung nach der Reaktivierung stimmt mit der Rekonsolidierungsinterpretation überein. Unter Berücksichtigung der Konvergenz aller Verhaltens- und pharmakologischen Beweise, die mit dem vorliegenden experimentellen Design erhalten wurden, weisen unsere Ergebnisse darauf hin, dass das, was während der Reaktivierungssitzungen stattfand, ein Rückverfestigungsprozess war, der die Verstärkung der Extinktion vermittelteErinnerung.

Die Angstwiederherstellung nach extinktionsbasierten Ansätzen ist entscheidend zu verstehen, um die Verhaltens- und pharmakologischen Behandlungen von Angststörungen zu verbessern. Tatsächlich könnte die Extinktionsverstärkung als ein Markenzeichen der psychiatrischen Forschung angesehen werden. Hier fanden wir heraus, dass kurze Reaktivierungssitzungen wirksam waren, um die spontane Wiederherstellung erloschener Angst zu verhindernErinnerung. Dieser Effekt wurde durch L-VGCCs vermittelt und beinhaltet die Proteinsynthese, was stark darauf hindeutet, dass die Rückverfestigung der Mechanismus hinter dieser Verstärkung ist. Wir fanden auch heraus, dass eine positive pharmakologische Modulation nach der Reaktivierung in der Lage war, eine schnelle Reakquisition von Angst zu verhindern. Zusammengenommen zeigen diese Ergebnisse, dass das Aussterben von reaktivierungsbasierten Interventionen profitieren kann, die darauf abzielen, seine Stärke und Persistenz zu verbessern. Es trägt auch zu der Vorstellung bei, dass Rückverfestigung und Auslöschung keine völlig getrennten Prozesse sind, wie es die aktuellen Paradigmen oft vermuten lassen58. Aufgrund der Bedeutung extinktionsbasierter kognitiver Verhaltenstherapien bringen diese Ergebnisse relevante Erkenntnisse sowohl für die Grundlagenforschung als auch für die klinische Forschung.

Methoden

Themen. Männliche Wistar-Ratten aus unserer Zuchtkolonie mit einem Gewicht von 300–350 g und einem Alter von 60–70 Tagen wurden verwendet. Die Tiere wurden in Plastikkäfigen gehalten, vier bis fünf pro Käfig, wobei Wasser und Futter nach Belieben verfügbar waren. Alle Experimente wurden gemäß den nationalen Tierschutzgesetzen und -richtlinien (brasilianisches Gesetz 11794/2008) durchgeführt und von der Ethikkommission der Universität genehmigt.

Kontextuelle Angstkonditionierung. Die CFC-Kammer bestand aus einer beleuchteten Plexiglasbox (25,0 × 25,0- cm Raster aus parallelen 0,1- cm Kalibern Edelstahlstangen im Abstand von 1,{{ 7}} cm auseinander). In der Konditionierungssitzung wurden die Ratten für 3- Minuten in die Kammer gesetzt und erhielten dann zwei 2- Sekunden 0, 7 mA-Fußschocks, die durch ein Intervall von 30- Sekunden getrennt waren. Die Tiere wurden weitere 30 Sekunden lang in der Konditionierungsumgebung gehalten, bevor sie in ihre Heimkäfige zurückkehrten.

ErinnerungLöschung, Reaktivierung und Testsitzungen. Kurze oder lange Kontext-Wiederbelichtungen wurden verwendet, um eine Gedächtnisreaktivierung bzw. ein Extinktionslernen zu induzieren. Das Extinktionstraining bestand aus 30- min erneuter Exposition gegenüber dem konditionierten Kontext und fand immer 24 Stunden nach CFC statt. Sitzungen zur Reaktivierung des Gedächtnisses bestanden aus einer 3--minütigen erneuten Konfrontation mit dem konditionierten Kontext. In den Experimenten 2 und 3 wurden Reaktivierungen an den Tagen 7, 14 und 21 nach Test 1 durchgeführt. In den Experimenten 4 und 5 wurden sie 24 Stunden nach dem Extinktionstraining durchgeführt.

Testsitzungen bestanden aus einer 4--minütigen erneuten Konfrontation mit dem Kontext. Bei den Experimenten 1, 2 und 3 wurde der erste Test 24 Stunden nach dem Extinktionstraining durchgeführt, und ein zweiter Test wurde 7, 14, 21 oder 28 Tage später durchgeführt, um die Angst vor spontaner Genesung zu beurteilen. In den Experimenten 4 und 5 wurde die Testsitzung 24 Stunden nach der Reaktivierung durchgeführt, um die Wirkung der pharmakologischen Manipulationen nach der Reaktivierung zu bewerten.

Um eine schnelle Neuerfassung (oder "Einsparungen"; Experiment 5) zu erreichen, wurden die Tiere einem 4--Minuten-Test unterzogen, gefolgt von einem schwachen Fußschock (eine 2- Sekunde 0,4 mA). Nach weiteren 30 Sekunden kehrten sie in ihre Heimkäfige zurück. Diese Prozedur wurde täglich dreimal wiederholt, gefolgt von einem zusätzlichen Test einen Tag später. Bei diesem Verfahren wurde das Einfrieren immer vor dem Fußschock (der aus einer Standardtestsitzung bestand) bewertet. Dies ermöglichte es uns, sowohl die Leistung zu messen als auch die Tiere einer schwachen Rekonditionierungssitzung zu unterziehen.

Drogen. Der Proteinsynthese-Inhibitor Cycloheximid (CHX; Sigma) wurde in steriler isotonischer Kochsalzlösung mit 1 Prozent Dimethylsulfoxid auf eine Konzentration von 2,2 mg/ml gelöst. Cycloheximid oder sein Vehikel wurde unmittelbar nach der Reaktivierung intraperitoneal (ip) injiziert. Das injizierte Gesamtvolumen betrug 1 ml/kg.

Der Antagonist der spannungsgesteuerten Calciumkanäle vom L-Typ (LVGCCs) Nimodipin (Sigma) wurde in steriler isotonischer Kochsalzlösung mit 8 Prozent Dimethylsulfoxid auf eine Konzentration von 16 mg/ml gelöst. Nimodipin oder sein Vehikel wurde 30 Minuten vor den Reaktivierungssitzungen subkutan injiziert. Das injizierte Gesamtvolumen betrug 1 ml/kg.

Natriumbutyrat (NaB; Sigma), ein Histon-Deacetylase (HDAC)-Inhibitor, wurde in steriler isotonischer Kochsalzlösung auf eine Konzentration von 0,6 g/ml gelöst. Das injizierte Gesamtvolumen betrug 1 ml/kg ip unmittelbar nach der Reaktivierung.

Datenanalyse.Erinnerungwurde durch Quantifizierung des Einfrierverhaltens gemessen und als Prozentsatz der gesamten Sitzungszeit ausgedrückt. Das Einfrieren wurde von einem Beobachter bewertet, der gegenüber den experimentellen Bedingungen blind war. Homoskedastizität und Normalität der Datenverteilung wurden mit dem Levene-Test bzw. dem Kolmogorov-Smirnov-Test bestätigt. Extinktionssitzungen wurden mit Repeated-Measures ANOVA analysiert. Reaktivierungssitzungen wurden unter Verwendung von Student's t-Test, Zweiweg-ANOVA oder Repeated-Measures ANOVA, gefolgt von Tukey-Post-Hoc-Test, analysiert. Testsitzungen wurden unter Verwendung von Student's t-Test, Two-way ANOVA oder Repeated-Measures ANOVA, gefolgt von Tukey Post-Hoc-Test, analysiert.

Bezug

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Danksagungen

Wir danken Frau Zelma Regina V. de Almeida für ihre freundliche und professionelle technische Unterstützung und M.Sc. Jane Zhang für ihre großzügige und kompetente Sprachrevision. Diese Arbeit wurde durch Stipendien und Zuschüsse von CAPES (MEC), CNPq (MCT) und PROPESQ (UFRGS) unterstützt. Alle Autorinnen und Autoren erklären, dass sie neben der Finanzierung durch die Primärinstitution und den Bund keine andere Vergütungsquelle haben.

Autorenbeiträge

JH entwarf die Studie, führte die Experimente durch, analysierte die Daten und schrieb das Manuskript. AM, FZB, APC und ROS halfen bei den Experimenten und steuerten Ideen bei. LOA und JAQ halfen beim Entwurf der Studie und beim Schreiben des Manuskripts. Alle Autoren haben das Manuskript geprüft.

zusätzliche Information

Interessenkonflikte: Die Autoren erklären, dass keine Interessenkonflikte bestehen.

Hinweis des Herausgebers: Springer Nature bleibt neutral in Bezug auf Zuständigkeitsansprüche in veröffentlichten Karten und institutionellen Zugehörigkeiten.

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