Studie zur Trennung und Immunkompetenz von Wasserextrakt von Polysaccharid aus Cistanche Tubulosa

für weitere Informationen:ali.ma@wecistanche.com

Ailadan·Maimaitiaili1, LI Yang1, YAO Jun1, YUAN Jie2

(1. Fakultät für Pharmazie, Medizinische Universität Xinjiang, Urumqi 830011, China;2. Collage von Houbo, Medizinische Universität Xinjiang, Xinjiang Klamayi 834000, China）

ABSTRAKTES ZIEL:Um den Wasserextrakt von zu isolierenPolysaccharide aus Cistanche tubulosa, und ihre Immunkompetenz in vitro zu untersuchen. METHODEN: Makroporöses Adsorptionsharz AB{{{{30}}}} wurde verwendet, um C. tubulosa-Polysaccharid zu entfärben. Der Entfärbungsprozess wurde durch einen orthogonalen Test mit Retentionsrate und Entfärbungsrate des Polysaccharids als umfassende Bewertung und unter Verwendung von Adsorptionsrate, Entfärbungszeit und Probenkonzentration als Faktoren optimiert. Die Verifizierungstests wurden durchgeführt. Eine DEAE-650M-Ionenaustauschersäule wurde verwendet, um den Wasserextrakt des entfärbten C.-tubulosa-Polysaccharids abzutrennen. Der CCK-8-Assay wurde verwendet, um die Auswirkungen verschiedener Polysaccharidkonzentrationen (6,25-100 ug/ml) vor und nach der Isolierung auf die Proliferationsrate des Maus-Makrophagen RAW264.7 nachzuweisen. Die Griess-Methode und der ELISA-Assay wurden angewendet, um die Auswirkungen niedriger, mittlerer und hoher Konzentrationen von Polysacchariden (12,5, 25,5 0 ug/ml) auf die Freisetzung von NO, IL -6 und TNF- nachzuweisen. in LPS-induzierten RAW264.7-Zellen. ERGEBNISSE: Beim optimalen Entfärbungsprozess des makroporösen Adsorptionsharzes AB-8 betrug die Adsorptionsflussrate 1,2 BV/h, die Entfärbungszeit 9 h und die Probenkonzentration 25 mg/ml. Die Gesamtpunktzahl der dreifachen Verifizierungstests betrug 63,43 ％, 63,29 ％ bzw. 63,34 ％ mit einem Durchschnitt von 63,35 ％ (RSD 0.11 ％, n ＝3). Ein neutrales Polysaccharid (CTZ) und 5 Säurepolysaccharide (CT1, CT2, CT3, CT4, CT5) wurden aus dem Polysaccharid von C. cistanche isoliert, die Inhalte waren 299,2.168.0,123.2.121.6,54.4, 11,2 mg/g. Verglichen mit der Kontrollgruppe konnten 6,25-100 ug/ml CTZ (mit Ausnahme von 6,25 μg/ml), CT2, CT4, CT5 und 6,25 μg/ml CTC (das Polysaccharid vor der Trennung) die Proliferationsrate signifikant erhöhen von RAW264.7-Zellen (P＜{{80}}.05）, während 6,25-100 ug/ml CT1, CT3 und 50 ug/ml CTC die Proliferationsrate von RAW264 verringern könnten. 7 Zellen（P＜0.05）. Verglichen mit der LPS-Gruppe war die NO-Freisetzung in niedrigen, mittleren und hohen Konzentrationsgruppen von CTC, CT2, CT3 und CT5, CTZ niedriger Konzentrationsgruppe (P＜0,05) signifikant verringert, während sie in hohen Konzentrationsgruppen von CT1 signifikant erhöht war und CT4 （P＜0,05）. Die Freisetzung von IL-6 (mit Ausnahme der CT1-Gruppe mit hoher Konzentration und der CT5-Gruppe mit niedriger Konzentration) und TNF- (mit Ausnahme der CT1-Gruppe mit mittlerer Konzentration) war in den Gruppen mit niedriger, mittlerer und hoher Konzentration signifikant verringert (P＜0,05). ）. SCHLUSSFOLGERUNGEN: Die optimierte Entfärbungstechnologie von makroporösem Adsorptionsharz ist stabil und in der Studie durchführbar. Aus dem Wasserextrakt von C. tubulosa-Polysacchariden können ein neutrales Polysaccharid und 5 saure Polysaccharide isoliert werden, von denen das CT2-Polysaccharid die stärkere entzündungshemmende Wirkung hat.

SCHLÜSSELWÖRTER:Cistanche tubulosa-Polysaccharid; Entfärbung;Trennung;Immunkompetenz

Cistanche tubulosaist ein trockener, fleischiger Stängel mit SchuppenblätternCistanche tubulosa (Schenk) Wightaus der Familie der Lidanaceae. Moderne Studien haben gezeigt, dass Cistanche Tubula Phenethylalkoholglykoside, Iridoidglykoside, Lignane, Polysaccharide, Alkaloide und andere biologisch aktive Substanzen enthält, die aphrodisierende, abführende, leberschützende und Anti-Aging-Eigenschaften haben. , Anti-Müdigkeit, verbesserte Immunität und nootropische Wirkungen [1-4], kann zur klinischen Behandlung von Nieren-Yang-Mangel, Essenz- und Blutmangel, Impotenz und Unfruchtbarkeit, Taillen- und Knieschwäche, Muskelschwäche und verwendet werden Knochen, trockener Darm und Verstopfung [5].

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Der Wasserextrakt derCistanche tubulosa-Polysaccharidist bräunlich-gelb. Das vorherige Experiment unserer Forschungsgruppe fand heraus, dass zusätzlich zu denCistanche tubulosa Polysaccharidenthält der Wasserextrakt auch Nicht-Zielkomponenten wie wasserlösliche Pigmente und Proteine. Dies trägt zur Trennung und Reinigung von Polysacchariden bei. Die biologische Aktivitätsforschung hat große Schwierigkeiten bereitet. Die herkömmliche Entfärbungsbehandlung mit organischen Lösungsmitteln zerstört die chemische Struktur der Zielkomponente im Rohextrakt und verringert die pharmakologische Aktivität der Person sowie die Einführung schädlicher Inhaltsstoffe in den menschlichen Körper [6]. Makroporöses Adsorptionsharz ist ein gängiges Material zur Entfärbung von Polysacchariden in Extrakten der chinesischen Medizin. Es ist ein kostengünstiges Polymeradsorptionsmaterial mit stabilen physikalischen und chemischen Eigenschaften. Es kann durch seine selektive Adsorptions- und Siebleistung für Pigmentkomponenten gezielt eingesetzt werden. Um die Pigmente in den Extrakten der traditionellen chinesischen Medizin zu entfernen, kann es außerdem durch Beizen und alkalisches Waschen regeneriert werden, sodass es weit verbreitet ist [7]. Diese Studie beabsichtigt, makroporöses Adsorptionsharz zu verwenden, um den Wasserextrakt von Cistanche Tubula-Polysaccharid zu entfärben, und ein orthogonales Experiment zu verwenden, um die Entfärbungsbedingungen zu optimieren; nach der Entfärbung des Extrakts, entsprechend der unterschiedlichen Natur der Gruppe, die von dem Polysaccharid getragen wird, ist es geplant, das Verfahren der Ionenaustausch-Säulenchromatographie zu verwenden, um die neutralen und sauren Polysaccharidkomponenten in dem Polysaccharid weiter zu trennenCistanche tubulosa.

Das haben Studien gezeigtCistanche-PflanzePolysaccharide haben immunmodulatorische Wirkungen und sind natürliche Immunmodulatoren, die das Komplementsystem und Immunzellen wie T/B-Lymphozyten, Makrophagen, natürliche Killerzellen (NK) aktivieren und auch eine Vielzahl von Zytokinfreisetzungen und die Produktion von Antikörpern fördern können usw. [8-11]. Lipopolysaccharid (LPS) kann den Entzündungssignalweg von Makrophagen aktivieren, Stickstoffmonoxid (NO) und entzündungsfördernde Zytokine wie Interleukin 6 (IL-6) und Tumornekrosefaktor-alpha (TNF-) induzieren. Synthese und Freisetzung, wodurch eine Reihe von Entzündungsreaktionen im Körper ausgelöst werden [12]. Diese Studie beabsichtigt, ein LPS-induziertes Maus-RAW264.7-Makrophagen-Entzündungsmodell zu etablieren, ausgehend von den Wirkungen des Cistanche-Tubula-Polysaccharids auf die Makrophagen-Proliferation, die Sekretion von Entzündungsfaktoren und die NO-Produktion und eine vorläufige Bewertung seiner Wirkung auf die Immunaktivität des Körpers Es zielt darauf ab, eine theoretische Grundlage für eine eingehende Untersuchung der entzündungshemmenden Wirkstoffbasis zu schaffenCistanche tubulosaPolysaccharid und die Entwicklung seiner Polysaccharid-Ressourcen.

Vorläufige Studien haben ergeben, dass beim Extrahieren der Polysaccharide in Cistanche cistanche mit Wasser mehr wasserlösliche Substanzen zusammengelöst werden, was die Reinheit der Cistanche beeinträchtigtZistanche Cistanche-Polysaccharide. Daher kann eine weitere Trennung und Reinigung von ihnen die Grundlage für die Untersuchung der Polysaccharidmaterialbasis und der biologischen Aktivität legen. Das makroporöse Adsorptionsharzverfahren ist ein häufig verwendetes Entfärbungsverfahren [17-19]. Da noch unklar ist über die Pigmentzusammensetzung inCistanche tubulosa, so verwendete die Forschungsgruppe statische Adsorptionsexperimente, um aus makroporösen Adsorptionsharzen unterschiedlicher Polarität das am besten geeignete makroporöse Adsorptionsharz AB-8 zu screenen. Das Polysaccharid von Cistanche deserticola hat eine gute Retentionsfähigkeit. Um einen besseren Entfärbungseffekt zu erzielen, basiert diese Forschung auf der vorherigen Forschung und verwendete orthogonale Experimente zur Bestimmung des Entfärbungsprozesses (Waschen, Desorptionsflussrate, Entfärbungszeit und Probenmassenkonzentration) wurden optimiert. Als Ergebnis war das optimale Entfärbungsverfahren für das Polysaccharid von Cistanche tubulosa eine Elutionsflussrate von 1,2 BV/h, eine Entfärbungszeit von 9 h und eine Probenmassenkonzentration von 25 mg/ml. Die Ergebnisse des Verifizierungsexperiments zeigen, dass das Entfärbungsverfahren durchführbar ist.

Die Reinheit und Art der natürlichen Polysaccharide sind wichtige Faktoren, die seine Aktivität beeinflussen. Daher steht die einschlägige Forschung zu den Isolierungs- und Reinigungsverfahren von Polysacchariden nach wie vor im Mittelpunkt der Forschungsarbeiten zu natürlichen aktiven Polysacchariden. Die üblicherweise verwendeten Methoden zur Trennung von Polysacchariden umfassen Fällung, Gelchromatographie, Anionenaustauschchromatographie, Säulenchromatographie mit makroporösen Harzen und Ultrafiltration [20]. Aufgrund der unterschiedlichen Zusammensetzung von Monosacchariden haben Polysaccharide unterschiedliche Ladungseigenschaften. Sie können in neutrale Polysaccharide und saure Polysaccharide unterteilt werden. Neutrale Polysaccharide sind Polymere, die aus zwei oder mehr verschiedenen Monomeren auf Zuckerbasis bestehen, die keine organischen Säuren enthalten. Saure Polysaccharide sind in Bezug auf Zusammensetzung und Struktur komplexer als neutrale Polysaccharide, außer dass sie mehr als zwei Monomere auf Zuckerbasis enthalten. , Enthält auch Uronsäure Mono Body [21]. Die Anionenaustauschsäulenchromatographie nutzt den Ladungsunterschied von Polysacchariden, um neutrale Polysaccharide von sauren Polysacchariden zu trennen [22]. Aus diesem Grund wurde in dieser Studie eine DEAE-650M-Ionenaustauschsäulen-Chromatographiesäule verwendet, um Cistanche Tubula-Polysaccharide zu trennen, und insgesamt wurden 1 neutrales Polysaccharid und 5 saure Polysaccharide getrennt. Makrophagen sind immunkompetente Zellen, die die Immunität regulieren können, indem sie pathogene Mikroorganismen verschlingen und töten. Studien haben gezeigt, dass, wenn der menschliche Körper durch pathologische oder mechanische Schäden stimuliert wird, ein medikamentöser Eingriff Makrophagen aktivieren kann, um die durch LPS induzierte Phagozytenkapazität von Makrophagen zu erhöhen, wodurch die Produktion von NO und einer Reihe von Entzündungszellen wie IL gehemmt wird{{ 9}} und TNF-Faktor-Sekretion, wodurch der Wirt vor Krankheitserregern geschützt wird [23]. Zu diesem Zweck testete diese Studie die Wirkungen verschiedener Cistanche-tubulosa-Polysaccharide auf die Proliferationsrate von RAW264.7-Zellen sowie die Wirkungen auf LPS-induzierte Makrophagen zur Freisetzung von NO, IL-6 und TNF- . Als Ergebnis förderte es im Massenkonzentrationsbereich von 12,5, 25 und 50 ug/ml nicht nur die Proliferation von RAW264.7-Zellen, sondern hemmte auch signifikant die Proliferation von RAW264.7-Zellen.

DasPolysaccharid von Cistanche tubulosain RAW264.7-Zellen, die durch LPS zur Freisetzung von NO, IL-6 und TNF- induziert werden, sind CT2. Relevante Studien haben gezeigt, dass die Monosaccharidzusammensetzung und das Molekulargewicht von Polysacchariden dessen beeinflussenimmunmodulatorischAktivität. Monosaccharide wie Galactose, Arabinose, Mannose und Glucose sind positiv mit der Immunaktivität von Polysacchariden korreliert [24]. Polysaccharide mit größeren Molekulargewichten können eine höhere Struktur mit mehreren hoch repetitiven Knoten enthalten, können Plasmamembran-Oberflächenrezeptoren in mehreren Richtungen und spezifisch querverbindenverbessern die immunmodulatorischeWirkung [25]. Daher kann die Monosaccharid-Zusammensetzung des sauren Polysaccharids CT2 in dieser Studie spezielle Monosaccharide oder multiple Monosaccharide enthalten, die in positiver Beziehung zur Immunaktivität stehen, und das Molekulargewicht kann größer sein als bei neutralen Polysacchariden und anderen sauren Polysacchariden, aber zur Bestätigung sind weitere Untersuchungen erforderlich . Zusammenfassend lässt sich sagen, dass der optimierte Entfärbungsprozess für makroporöse Adsorptionsharze in dieser Forschung stabil und durchführbar ist; Aus dem Wasserextrakt von Cistanche cistanche können 1 neutrales Polysaccharid und 5 saure Polysaccharide getrennt werden, darunter die immunologische Aktivität des sauren Polysaccharids CT2 Stronger. Diese Studie kann die experimentelle Grundlage für die Entwicklung und Nutzung von Cistanche Tubula-Polysacchariden legen.